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从北京某地分离的2株犬种布氏菌的鉴定报告 被引量:10
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作者 朴东日 赵鸿雁 +2 位作者 李兰玉 崔步云 李元凯 《中国地方病防治》 北大核心 2006年第5期263-264,共2页
目的对从北京某地分离的2株布氏菌进行鉴定。方法布氏菌常规鉴定分型方法,布氏菌噬菌体裂解试验,同时辅以脉冲场电泳基因分型方法。结果2株待测菌株均为犬种布氏菌,2株待测菌的脉冲场电泳图谱与国际标准犬种布氏菌RM6/66株的图谱完全一... 目的对从北京某地分离的2株布氏菌进行鉴定。方法布氏菌常规鉴定分型方法,布氏菌噬菌体裂解试验,同时辅以脉冲场电泳基因分型方法。结果2株待测菌株均为犬种布氏菌,2株待测菌的脉冲场电泳图谱与国际标准犬种布氏菌RM6/66株的图谱完全一致。结论采用传统布氏菌分型方法同时辅以脉冲场电泳基因分型方法对布氏菌进行分型鉴定,可以增加鉴定工作的稳定性与正确性。 展开更多
关键词 布氏菌 噬菌体 脉冲场电泳
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AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的应用 被引量:83
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作者 姜海 崔步云 +2 位作者 赵鸿雁 朴东日 李兰玉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-109,共3页
目的评价AMOS-PCR方法鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法用已建立的AMOS-PCR方法在国内检测标准菌株和对国内分离的布鲁氏菌地方株种型进行检测。结果羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌1,2,4、猪种布鲁氏菌1型和绵羊附睾布鲁氏菌有特异... 目的评价AMOS-PCR方法鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法用已建立的AMOS-PCR方法在国内检测标准菌株和对国内分离的布鲁氏菌地方株种型进行检测。结果羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌1,2,4、猪种布鲁氏菌1型和绵羊附睾布鲁氏菌有特异条带。结论AMOS-PCR是一种快速、简便、特异的鉴定布鲁氏菌的方法之一。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 AMOS-PCR 鉴定
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我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究 被引量:47
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作者 周晓艳 陈燕芬 +6 位作者 崔步云 陈泽良 姜海 赵鸿雁 朴东日 李兰玉 王金桃 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期371-375,共5页
目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及... 目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与标准菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型(STS),分析与其它ST型间的遗传关系。结果 47株布鲁氏菌中,19株omp25基因与目前已有的等位基因型不同,被定义为1个新的等位基因型,即ST28。其余28株与已知的ST8型的各等位基因型一致。结论我国流行的羊种布鲁氏菌主要是羊3型菌株,国内的菌株与国外菌株遗传背景上有差异。MLST分型可以作为研究布鲁氏菌进化关系的重要手段之一。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 羊种3型 MLST
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利用多重聚合酶链反应和多色毛细管电泳分析布氏菌多位点可变数目串联重复序列 被引量:7
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作者 姜海 荣蓉 +5 位作者 田国忠 赵娜 赵鸿雁 朴东日 赵赤鸿 崔步云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期303-310,共8页
目的传统的布鲁氏菌多点可变数目串联重复序列分析方法涉及16个位点(MLVA-16),包括单重聚合酶链反应和琼脂糖凝胶电泳,一直以来都作为标准的基因分型方法,用于布病的病原监测和流行病学调查。然而,目前这种传统方法工作量较大,实验室间... 目的传统的布鲁氏菌多点可变数目串联重复序列分析方法涉及16个位点(MLVA-16),包括单重聚合酶链反应和琼脂糖凝胶电泳,一直以来都作为标准的基因分型方法,用于布病的病原监测和流行病学调查。然而,目前这种传统方法工作量较大,实验室间结果不宜比较;尤其是对大规模菌株进行基因分型或面临突发疫情时,急需一种高通量且快速的方法。方法用多重PCR和多色毛细管电泳方法建立一种可靠的,高通量的且自动化程度较高的MLVA-16改良分型系统,用82株菌进行测试。结果这种改良的MLVA-16分型系统具有很高的准确性,且具有快速和高通量的特点。结论改良的MLVA-16分型系统可用于基层布病实验室,为布病的病原监测提供高效的工具。 展开更多
关键词 多重PCR 多色毛细管电泳 布鲁氏菌 基因分型
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布鲁氏菌微滴式数字PCR方法的建立与应用 被引量:10
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作者 田国忠 姜海 +4 位作者 薛盼盼 朴东日 赵鸿雁 杨晓雯 张京云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期301-305,共5页
目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相... 目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相关血液标本的检测效果。结果ddPCR反应体系中最佳引物和探针浓度分别为0.8μmol/L和0.4μmol/L;最佳扩增条件:95℃10 min;95℃30 s,60℃1 min,循环40次;98℃酶失活10 min。布鲁氏菌核酸DNA为0.96 ng/反应~3.68 fg/反应时,ddPCR检出靶标基因拷贝数为2.00×105拷贝/反应~1拷贝/反应,ddPCR测得值的对数值与DNA浓度的对数值有线性关系。在疫情相关血液标本DNA的检测中,ddPCR阳性率远高于培养法和试管凝集法;16份人血液标本中靶标基因浓度为5~65拷贝/mL血液(平均29拷贝/mL血液),5份羊血液标本中靶标基因浓度为25~245拷贝/mL血液(平均98拷贝/mL血液)。结论ddPCR灵敏性高,可检测微量核酸DNA,适合临床血液标本的检测以及布病病原体的分子流行病学调查。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR 荧光定量PCR 布鲁氏菌
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羊种布氏菌体外药物敏感性分析 被引量:5
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作者 姜海 崔步云 +2 位作者 赵鸿雁 朴东日 李兰玉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期325-326,330,共3页
目的了解羊种布氏菌对常用抗生索的耐药情况及耐药机制。方法用微量稀释法对国内分离的69株羊种布氏菌进行12种抗生素(阿奇霉素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、多西环素、利福平、头孢曲松、复方新... 目的了解羊种布氏菌对常用抗生索的耐药情况及耐药机制。方法用微量稀释法对国内分离的69株羊种布氏菌进行12种抗生素(阿奇霉素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、多西环素、利福平、头孢曲松、复方新诺明、链霉素)的耐药检测。结果除了阿奇霉素和克拉霉素外,所有羊种布氏菌对另外10种抗生素均敏感。所有菌株23SrRNA都具有单核苷酸多态性2632 T/C。结论 23SrRNA转肽酶中心点突变是羊种布氏菌耐大环内酯类耐药的机制之一。尽管布氏菌耐药尚未对布病防控构成威胁,但还需开展耐利福平监测工作。 展开更多
关键词 羊种布氏菌 大环内酯类 耐药 23SrRNA 点突变
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内蒙古羊种布鲁氏菌传播模式调查研究 被引量:7
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作者 刘志国 王妙 +3 位作者 赵鸿雁 朴东日 崔步云 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期465-471,共7页
目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果... 目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果 60株试验菌全部为羊种布鲁氏菌。MLVA-16对菌株具有极高的分辨力,多态性指数为0.981;Panel 1,Panel 2A和Panel 2B的多态性指数分别为0.264,0.345和0.980;Panel 2B中Bru16位点的多态性指数最高,多态性指数为0.835。60株羊种布鲁氏菌聚为5大类37个基因型,其中15个共享基因型包括38株羊种布鲁氏菌,聚类率为63.3%(38/60),提示病例多为有流行病学关联的暴发流行;另外22株菌表现为独特基因型表明菌株无明显的流行病学相关性。共享基因型GT5包括2株分别分离自羊和骆驼的菌株且有相同的MLVA-16基因型,提示布鲁氏菌在羊和骆驼中循环传播;3个共享基因型(GT11、GT17和GT23)分别包含来自人和羊的菌株并呈现完全相同的MLVA-16基因型,表明羊是人间布病的传染源。GT35由3株分离自羊脾的菌株构成且共享相同的基因型,提示布病在羊中呈暴发流行。类群E由12个来自不同宿主(羊,牛,野生骆驼和人)的菌株构成,共享相同或相似的MLVA-16基因型,揭示了内蒙古羊种布鲁氏菌潜在的传播模式。结论疫羊是主要传染源,野生动物(骆驼)是贮藏宿主。羊种布鲁氏菌在羊牛(骆驼)和骆驼(羊牛)中相互循环传播,最后传染给人是内蒙古羊种布鲁氏菌的潜在传播模式。 展开更多
关键词 羊种布鲁氏菌 传播模式 内蒙古
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内蒙古布鲁氏菌临床分离株多位点序列分型研究 被引量:7
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作者 刘志国 王妙 +4 位作者 刘日宏 赵鸿雁 朴东日 崔步云 夏咸柱 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期991-996,共6页
目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析... 目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析,确定待测菌株的序列型(STs),用软件BioNumerics(Version 5.0)构建菌株的最小生成树。结果116株羊种布鲁氏菌全部为ST8型,9个MLST位点的变异完全相同,分离株种群结构单一;羊种菌的生物型与ST型无明显关联,ST8型菌系该地区的主要流行菌种,并与内蒙古地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,且有密切的亲缘关系。结论羊种布鲁氏菌的序列分型(ST)与常规生物分型存在差异,ST8型菌可能具有较强的环境适应性和致病性。MLST是一种较好的羊布鲁氏菌种群和进化关系研究方法,但更适合于具有较大时间跨度和地理分布菌株间的流行病学调查。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 临床分离株 MLST
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内蒙古乌兰察布地区布鲁氏菌体外药物敏感性及耐药机制分析 被引量:4
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作者 刘志国 王妙 +5 位作者 李晓燕 塔娜 赵鸿雁 朴东日 赵忠志 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期393-398,共6页
目的调查内蒙古乌兰察布地区分离布鲁氏菌的抗生素药物敏感(耐受)性特征。方法采用E-test法测定了85株布鲁氏菌对13种临床常用药物的敏感性;同时,对利福平和阿奇霉素的耐药机制进行了初步探讨;并采用K-B法对来自全国的149株羊种布鲁氏... 目的调查内蒙古乌兰察布地区分离布鲁氏菌的抗生素药物敏感(耐受)性特征。方法采用E-test法测定了85株布鲁氏菌对13种临床常用药物的敏感性;同时,对利福平和阿奇霉素的耐药机制进行了初步探讨;并采用K-B法对来自全国的149株羊种布鲁氏菌对复方新诺明和利福平的敏感性进行了筛查。结果试验表明布鲁氏菌对阿奇霉素、复方新诺明和利福平耐药菌株数分别为100%(85/85),7.0%(6/85)和1.0%(1/85)。所有菌株对司帕沙星、米诺环素、多西环素、四环素、链霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢吡肟及头孢哌酮舒巴坦均表现为敏感;司帕沙星、米诺环素的MIC_(90)值(0.032μg/mL)最低。所有阿奇霉素耐药菌株的23S rRNA基因的第2632位碱基表现为T→C单位点突变,布鲁氏菌23S rRNA转肽酶中心的T/C点突变可能是一种羊种布鲁氏菌对阿奇霉素耐药的分子机制。K-B法筛查结果表明所有菌株对利福平敏感,25.5%(38/149)的菌株对复方新诺明耐药,耐药菌株分布于18个省市区。结论乌兰察布地区羊种布鲁氏菌耐药较为严重,应定期进行药物敏感性监测。推荐司帕沙星和米诺环素作为一线布病治疗药物。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 药物敏感性 耐药机制
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用MLVA技术和多重PCR对犬种布氏菌基因分型 被引量:10
10
作者 姜海 崔步云 +2 位作者 李兰玉 赵鸿雁 朴东日 《生物技术通讯》 CAS 2009年第3期336-338,共3页
目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株... 目的:对犬种布氏菌的遗传关系进行不同分子分型方法的对比研究,为犬布病分子流行病溯源提供有效方法。方法:采用多重PCR和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)方法对24株犬种布氏菌的遗传关系进行比较研究。结果:多重PCR只鉴定出1株犬种布氏菌,其余23株均鉴定为猪种鲁氏菌,但不能鉴定型别;MLVA方法对已鉴定为猪种的布氏菌仍可再细分为型,87%(20/23)为猪3型,13%(3/20)为猪1型。结论:MLVA可以对布氏菌种(生物型)进行基因分型鉴定,可以作为传统表型鉴定方法的补充。 展开更多
关键词 犬种布氏菌 多重PCR 多位点可变数量串联重复序列分析 分型
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低剂量α干扰素口含片的抗病毒实验研究 被引量:2
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作者 王轶文 朴东日 +3 位作者 周丽红 姚为民 赵越 崔颖杰 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第5期23-23,20,共2页
本实验是对低剂量α干扰素口含片抗病毒实验研究。通过对各组小鼠不同的给药时间及不同的感染时间 ,取鼠肺制成悬液接种鸡胚 ,3 5℃培养 3天 ,取尿囊液作血凝滴定 。
关键词 α干扰素口含片 流感病毒 抗病毒作用 药理实验 低剂量
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干扰素口含片的研制 被引量:2
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作者 王轶文 周丽红 +2 位作者 崔颖杰 姚为民 朴东日 《生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期27-28,共2页
本文主要是干扰素口含片实验性研究 ,通过其工艺制备 ,稳定性试验 ,细菌学检查 ,急性毒性试验 ,病毒抑制实验、NK细胞活性实验、小鼠口腔粘膜SIgA实验 ,以此验证干扰素口含片在剂型改变。
关键词 干扰素口含片 抗病毒作用 免疫调节作用 剂型
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干扰素口含片剂的研制 被引量:1
13
作者 王轶文 周丽红 +2 位作者 崔颖杰 姚为民 朴东日 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期237-237,共1页
关键词 干扰素 口含片剂 研制 剂型
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宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型研究 被引量:4
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作者 马学平 高建炜 +6 位作者 韩坤 杨聪 海娥 朴东日 姜海 崔步云 赵建华 《宁夏医学杂志》 CAS 2020年第5期397-401,共5页
目的分析宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型特征。方法采用传统细菌学和分子生物学方法鉴定菌株,对16个可变数目串联重复序列位点进行PCR扩增,产物经毛细管电泳测序,生物信息学软件Bio Numerics进行聚类分析。结果经细菌学和分子生物... 目的分析宁夏布鲁氏菌多位点串联重复序列分型特征。方法采用传统细菌学和分子生物学方法鉴定菌株,对16个可变数目串联重复序列位点进行PCR扩增,产物经毛细管电泳测序,生物信息学软件Bio Numerics进行聚类分析。结果经细菌学和分子生物学方法鉴定近期宁夏人群感染分离44株布鲁氏菌均为羊种布鲁氏菌,对选取的20世纪分离的24株菌重新鉴定结果为羊种12株、牛种3株和猪种9株。多位点串联重复序列分析方法(MLVA)分型结果显示,68株菌被分为8大基因群39个基因型,并将羊种、牛种和猪种布鲁氏菌分成3个基因群,其中56株羊种菌分为33个基因型,基因型存在地域性分布特点,同一基因型的部分菌株具有流行病学关联。结论 MLVA分型方法能将布鲁氏菌在种的水平上区分,宁夏感染人体布鲁氏菌具有丰富的遗传多样性,部分菌株采用MLVA分型方法结合流行病学资料可溯源。 展开更多
关键词 布鲁氏菌分离株 宁夏 多位点串联重复序列分析 分型
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用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验检测人畜布氏菌抗体的研究 被引量:1
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作者 赵鸿雁 李兰玉 +2 位作者 崔步云 朴东日 鲁齐发 《中国地方病防治》 北大核心 2006年第4期200-202,共3页
目的摸索建立用布氏菌乳环抗原的血清学试验,以用于人畜血清中布氏菌抗体的检测。方法在制备并标化布氏菌乳环抗原的基础上,用此抗原分别做PAT、SAT、CAT、CFT、及DAgS-ELISA,同时与这些试验的常规方法对部分布氏菌感染的人畜血清及正... 目的摸索建立用布氏菌乳环抗原的血清学试验,以用于人畜血清中布氏菌抗体的检测。方法在制备并标化布氏菌乳环抗原的基础上,用此抗原分别做PAT、SAT、CAT、CFT、及DAgS-ELISA,同时与这些试验的常规方法对部分布氏菌感染的人畜血清及正常血清进行对比检测。结果5种常规血清学试验即RBPT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA与用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验即PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对部分布氏菌感染人畜血清进行对比检测,其阳性率分别为91.5%(65/71)、83.3%(60/72)、58.2%(39/67)、46.4%(26/56)、81.9%(59/72)以及94.4%(67/71)、83.3%(60/72)、56.7%(38/67)、54.5%(30/55)、80.6%(58/72)。并且对两种抗原的试验所得阳性率进行显著性差异检验,差异均无显著性。(χ2分别为0.220、0.000、0.950、0.360、0.005,P>0.05)。其所测抗体的几何平均滴度(GMT)分别为1∶121、1∶23、1∶6和1∶19以及1∶109、1∶23、1∶10和1∶19。结论用布氏菌乳环抗原不仅适用做MRT对布氏菌感染奶特异性抗体的检测,而且可用此种抗原PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对人畜血清布氏菌抗体的检测。 展开更多
关键词 布氏菌乳环抗原 布氏菌病 抗体 血清学试验
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牛羊猪种布鲁氏菌快速鉴别PCR方法的建立及评价
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作者 刘志国 塔娜 +6 位作者 李晓燕 王妙 赵鸿雁 朴东日 蔚瑞平 米景川 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期399-403,共5页
目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219... 目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219株布鲁氏菌进行鉴别,评价其在布鲁氏菌鉴别中的应用价值。最后,用该方法对临床标本中布鲁氏菌的DNA进行扩增,评价其在临床诊断中的实用性。结果 BAMS-PCR方法可在同一反应中同时鉴别布鲁氏菌及牛种(1,2,4型),羊种(1,2和3型)和猪种(1型)布鲁氏菌,并有较好的特异性和敏感性。布鲁氏菌属,牛种,猪种和羊种布鲁氏菌引物的检测灵敏度分别为10 pg/μL,100 pg/μL, 10 pg/μL和100 pg/μL。BAMS-PCR对219株临床分离菌株的鉴定结果和常规生物分型方法的鉴定符合率为100%。经BAMS-PCR检测,97份临床血清样本仅6份为阳性,全血和组织(羊脾)样本全部为阴性。结论 BAMS-PCR是一种简便、快速、高效、准确的布鲁氏菌鉴别方法,可作为临床分离菌株的首选鉴别方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 聚合酶链式反应 鉴别 评价
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多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究 被引量:28
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作者 刘志国 罗成旺 +5 位作者 张利 姜海 赵鸿雁 朴东日 田国忠 崔步云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期869-874,共6页
目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法... 目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度。利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性。通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证。结果应用多重Taq-Man荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13~24fg/μL),是常规PCR灵敏度的100倍。结论建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 荧光定量聚合酶链式反应 鉴定 评价
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布鲁氏菌鞭毛钩蛋白FlgE和融合蛋白BLS-FlgE的克隆、表达及免疫诊断研究 被引量:3
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作者 路殿英 姜海 +4 位作者 田国忠 杨晓雯 赵鸿雁 朴东日 魏俊妮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期881-885,共5页
目的分别构建含目的基因flgE和bls-flgE的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从NCBI得到布鲁氏菌鞭毛钩蛋白基因flgE和2,4二氧四氢蝶啶合酶基因(bls)序列,设计引物,利用PCR技术扩增得到目的基因,与载... 目的分别构建含目的基因flgE和bls-flgE的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从NCBI得到布鲁氏菌鞭毛钩蛋白基因flgE和2,4二氧四氢蝶啶合酶基因(bls)序列,设计引物,利用PCR技术扩增得到目的基因,与载体pET30a连接,转化E.coli BL21感受态细胞,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定,使用带His标签的蛋白纯化试剂盒纯化蛋白。纯化后的蛋白建立ELISA法检测布病阳性血清和健康人血清,收集灵敏度和特异度数据。结果成功克隆了FlgE鞭毛钩蛋白和BLS-FlgE融合蛋白,经过优化表达条件,目的蛋白获得较大量的表达,免疫印迹结果显示可被阳性病人血清识别。以FlgE蛋白构建ELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为70.83%和41.67%,以BLS-FlgE蛋白构建ELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为68.75%和52.08%。结论成功表达布鲁氏菌鞭毛钩蛋白FlgE和融合蛋白BLS-FlgE,分别作为诊断抗原总体符合率低,免疫诊断价值较低。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 鞭毛钩蛋白FlgE 融合蛋白BLS-FlgE 原核表达
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人工诱变利福平抗性布鲁氏菌转录组测序分析 被引量:2
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作者 杨晓雯 赵鸿雁 +2 位作者 朴东日 田国忠 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期834-839,846,共7页
目的筛选布鲁氏菌中参与利福平代谢相关基因(除rpoB基因外)。方法利用人工诱变技术获得利福平抗性菌株,通过转录组测序获得标准菌株和利福平抗性菌株全基因组水平的基因表达量,利用EBSeq算法筛选差异表达基因,预测利福平代谢相关基因及... 目的筛选布鲁氏菌中参与利福平代谢相关基因(除rpoB基因外)。方法利用人工诱变技术获得利福平抗性菌株,通过转录组测序获得标准菌株和利福平抗性菌株全基因组水平的基因表达量,利用EBSeq算法筛选差异表达基因,预测利福平代谢相关基因及主要代谢途径。结果通过不同浓度的利福平人工诱变,能够获得抗性表型稳定的布鲁氏菌变异菌株。转录组测序发现利福平抗性菌株中有121个基因表达量上调,197个基因表达量下调,差异基因功能主要集中于催化活性、细胞膜和细胞成分、代谢过程和细胞过程;主要参与抗生素的生物合成、细菌分泌系统和ABC转运蛋白等代谢通路。结论包括virB操纵子在内的涉及碳代谢等代谢通路的基因,通过表达量的改变参与抵抗利福平的作用。本研究为布鲁氏菌耐药相关基因的筛选提供新思路,同时为布鲁氏菌耐药菌株的防控提供基础性数据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 利福平抗性 IV型分泌系统 RPOB
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五种布鲁氏菌核酸检测试剂盒检测性能的评价 被引量:2
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作者 范玉 姜海 +8 位作者 塔娜 宋春志 丛宇 刘佳音 杨晓雯 田国忠 赵鸿雁 张宇 朴东日 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期883-889,共7页
目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、... 目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 核酸 试剂盒 实时荧光PCR
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