茄科作物抗青枯病水培法鉴定研究I.烟草、辣椒、番茄的水培条件及营养液配方筛选 被引量：51

1

作者 李乃坚 袁四清 +1 位作者 李颖 谭炳安 《广东农业科学》 CAS CSCD 2000年第3期36-37,40,共3页

对辣椒、番茄、烟草幼苗水培条件下营养液通气增氧时间和营养液配方进行了筛选试验。结果表明 ,在基本满足幼苗正常生长前提下 ,营养液每小时通气 1 5分钟可满足水中溶氧值的需要 ;筛选出的MS改良营养液更能增加参试植物的生长量 ,该营... 对辣椒、番茄、烟草幼苗水培条件下营养液通气增氧时间和营养液配方进行了筛选试验。结果表明 ,在基本满足幼苗正常生长前提下 ,营养液每小时通气 1 5分钟可满足水中溶氧值的需要 ;筛选出的MS改良营养液更能增加参试植物的生长量 ,该营养液加入 1mg/L吲哚丁酸 (IBA) 展开更多

关键词 茄科作物 水培法 营养液 青枯病 抗性鉴定 育种

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双价抗菌肽基因转化辣椒 被引量：23

2

作者 李乃坚 余小林 +3 位作者 李颖 黄自然 张银东 王得元 《热带作物学报》 CSCD 2000年第4期45-51,共7页

在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株... 在建立高效快速辣椒（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　 ａｎｎｕｕｍ　 Ｌ，）子叶离体培养和植株再生体系的基础上，将昆虫抗菌肽Ｂ、Ｄ基因构建而成的双价质粒ｐＣＤＢ－ＩＩ以农杆菌为介导转入５个辣椒栽培品种，共获得ＫａｎＲ植株１２００多株，对部分ＫａｎＲ植株进行点杂交、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测，结果证明了外源基因被成功整合。盆栽接青枯菌试验，结果显示，转基因植株具有较强的抗病力。 展开更多

关键词 辣椒 抗菌肽 双基因表达载体 基因转化

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卡那霉素胁迫对转基因烟草种子发芽的影响 被引量：7

3

作者 李乃坚 袁四清 《广东农业科学》 CAS CSCD 1998年第4期13-15,共3页

利用花粉管通道法将抗菌肽Ｄ基因ＤＮＡ注入烟草子房，收获的种子经１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素浸种发芽，结果显示，未转基因烟草种子的小苗子叶变黄，胚轴变软；转基因种子的小苗子叶始终保持绿色。用胭脂碱合成酶检验此法有效率达７９．... 利用花粉管通道法将抗菌肽Ｄ基因ＤＮＡ注入烟草子房，收获的种子经１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素浸种发芽，结果显示，未转基因烟草种子的小苗子叶变黄，胚轴变软；转基因种子的小苗子叶始终保持绿色。用胭脂碱合成酶检验此法有效率达７９．２％，表明利用卡那霉素胁迫发芽是前期筛选转基因材料的有效措施。 展开更多

关键词 转基因烟草 烟草种子 发芽 卡那霉英 浸种

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栽培番茄的耐盐筛选 被引量：9

4

作者 李乃坚 T.Cardi +1 位作者 E.Filippone L.M.Monti 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期299-303,共5页

组织培养耐盐筛选技术可为抗逆性基因选择提供另一种方法。本研究采用9个番茄栽培品种,以不同浓度NaCl对子叶外植体、种籽发芽和植株作盐协迫处理。研究结果,21个试验设计均反映出基因间差异。经各指标测定结果,参试品种‘罗城1号’耐... 组织培养耐盐筛选技术可为抗逆性基因选择提供另一种方法。本研究采用9个番茄栽培品种,以不同浓度NaCl对子叶外植体、种籽发芽和植株作盐协迫处理。研究结果,21个试验设计均反映出基因间差异。经各指标测定结果,参试品种‘罗城1号’耐盐力最强,‘方茄’最弱。二品种在子叶离体培养,NaCl浓度为10g/l,一周后便可显出差异。同一浓度处理的愈伤组织芽分化亦较易反映品种间耐盐力高低。 展开更多

关键词 番茄 栽培 组织培养 耐盐 筛选

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黄麻圆果种开花期性状遗传规律及控制基因数目估算研究 被引量：1

5

作者 李乃坚 周安靖 蒋宝韶 《中国麻作》 北大核心 1989年第1期8-13,共6页

采用广义法、F_2代群体分离法和回交法估算圆果种黄麻开花期等性状遗传力、遗传进度,遗传变异系数与诸性状的相关系数以及该性状控制基因数目。结果表明,黄麻开花期性状在测试诸性状中遗传力最高,因遗传引起的变化或是环境条件影响程度... 采用广义法、F_2代群体分离法和回交法估算圆果种黄麻开花期等性状遗传力、遗传进度,遗传变异系数与诸性状的相关系数以及该性状控制基因数目。结果表明,黄麻开花期性状在测试诸性状中遗传力最高,因遗传引起的变化或是环境条件影响程度最小。该性状最小控制基因数目为3对、呈不完全显性,分离规律呈偏斜常态分布,分离群体植株开花期居中间偏早的多,超亲频率约1.5～3％。开花期性状较强的世代传递力和早期稳定性,说明在低世代对该性状的严格选择是有效的。 展开更多

关键词 黄麻 圆果种黄麻 花期 遗传 基因

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对广东省跨世纪蔬菜产业发展的思考 被引量：1

6

作者 李乃坚 石尧清 《广东农业科学》 CAS CSCD 1999年第1期12-15,共4页

近年来，广东省各级领导认真贯彻农业生产和农村经济要“实现两个根本性转变”的精神，狠抓“菜篮子”工程建设，落实各项关键措施，充分调动了政府、集体和菜农的生产积极性，全省蔬菜生产呈现出前所未有的大好形势。９０年代以来，我... 近年来，广东省各级领导认真贯彻农业生产和农村经济要“实现两个根本性转变”的精神，狠抓“菜篮子”工程建设，落实各项关键措施，充分调动了政府、集体和菜农的生产积极性，全省蔬菜生产呈现出前所未有的大好形势。９０年代以来，我省蔬菜种植面积、单产和总产连年增长... 展开更多

关键词 广东 蔬菜生产 产业发展 菜蓝子工程 发展扶持

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番茄再生植株变异性的研究

7

作者 李乃坚 《广东农业科学》 CAS CSCD 1989年第3期21-22,共2页

近年来,大量研究报道体细胞无性系广泛存在于愈伤组织的再生植株中。一些作物的再生植株,除了整倍体和非整倍体染色体数目外,在同一个体内还存在具2种以上不同染色体数目细胞的嵌合体(Evans D.A.,1986)。此外,Evans(1984)和Zagorska等(1... 近年来,大量研究报道体细胞无性系广泛存在于愈伤组织的再生植株中。一些作物的再生植株,除了整倍体和非整倍体染色体数目外,在同一个体内还存在具2种以上不同染色体数目细胞的嵌合体(Evans D.A.,1986)。此外,Evans(1984)和Zagorska等(1984)分别报道了番茄植株形态变化,包括矮生、杂色叶、花粉不育及无柄果实等性状。这些变异增加了基因选择的机会,为育种工作者提供了大量的研究材料。本研究对番茄子叶再生植株进行了染色体镜检和植株性状的调查,了解第一代组培植株染色体数目与植株形态变化,为进一步研究变异植株遗传性及性状分离提供资料。 展开更多

关键词 番茄 再生植株 变异性 植株

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辣椒子叶离体培养和植株再生体系的建立 被引量：65

8

作者 余小林 李乃坚 +1 位作者 黄自然 李颖 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期42-46,共5页

选用辣椒 (CapsicumannuumL .) 4个栽培品种和 2个杂交亲本的子叶进行诱导不定芽分化、生长及生根成苗试验 ,从中筛选出 3个较好的激素配方 ,建立了辣椒栽培品种的高效快速离体植株再生体系。外植体分化频率可达 10 0 % ,每外植体平均... 选用辣椒 (CapsicumannuumL .) 4个栽培品种和 2个杂交亲本的子叶进行诱导不定芽分化、生长及生根成苗试验 ,从中筛选出 3个较好的激素配方 ,建立了辣椒栽培品种的高效快速离体植株再生体系。外植体分化频率可达 10 0 % ,每外植体平均分化不定芽数10 .9个 ,出苗 8～ 10株。发现添加氨基酸混合物 (LY)对不定芽的诱导分化及生长有较强的促进作用。从子叶外植体培养起至再生苗出瓶需 5 0～ 5 5d ,最快的 1批仅 44d。 展开更多

关键词 辣椒 组织培养 植株再生体系 子叶 遗传改良

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转抗菌肽基因辣椒株系的青枯病抗性鉴定及系统选育 被引量：18

9

作者 李颖 余小林 +2 位作者 李乃坚 王恒明 黄自然 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第2期217-221,共5页

利用通过农杆菌介导技术获得的T0代转抗菌肽基因辣椒植株为试材,对其自交株系世代群体连续进行抗青枯病鉴定筛选、分子生物学检测和系统选育,首次获得了具有抗青枯病能力的转抗菌肽基因辣椒稳定株系。同时,对其主要果实性状、青枯病抗... 利用通过农杆菌介导技术获得的T0代转抗菌肽基因辣椒植株为试材,对其自交株系世代群体连续进行抗青枯病鉴定筛选、分子生物学检测和系统选育,首次获得了具有抗青枯病能力的转抗菌肽基因辣椒稳定株系。同时,对其主要果实性状、青枯病抗性进行的对比试验结果表明,转抗菌肽辣椒株系除抗青枯病能力明显提高外,果实性状基本不变。上述结果显示,外源目的基因主要特性的遗传是稳定的、表达是忠实的,从实践上验证了转抗菌肽基因工程操作的实用性。 展开更多

关键词 株系 青枯病 辣椒 系统选育 果实性状 抗菌肽基因 抗性鉴定 分子生物学检测 首次 表达

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农杆菌携带柞蚕抗菌肽基因转入烟草的研究 被引量：22

10

作者 黄自然 徐飞 +5 位作者 庄楚雄 管志文 李乃坚 袁四清 崔植琳 戴冕 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1992年第4期1-5,共5页

柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能,对烟草等茄科作物的青枯病假单胞菌(Pseudomonassolanacearum)具有较强的杀菌效果。人工合成抗菌肽基因(122 bp)转入根癌农杆菌(Agrobnctcrium tumefaciena),感染烟草叶盘,诱导成苗。通过对卡那霉素敏感筛选... 柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能,对烟草等茄科作物的青枯病假单胞菌(Pseudomonassolanacearum)具有较强的杀菌效果。人工合成抗菌肽基因(122 bp)转入根癌农杆菌(Agrobnctcrium tumefaciena),感染烟草叶盘,诱导成苗。通过对卡那霉素敏感筛选,胭脂碱脱氢酶检定及抗菌肽片段探针杂交,确认抗菌肽基因已转入烟草。现正研究其在烟草中表达及抗青枯病的可能性。 展开更多

关键词 柞蚕抗菌肽 烟草 基因转导

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新鲜蔬菜硝酸盐含量测定的改进试粉法 被引量：14

11

作者 杜应琼 王富华 +2 位作者 李乃坚 袁利升 苏青云 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期49-53,共5页

为适应新鲜蔬菜硝酸盐快速检测的需要,在现有试粉法的基础上对硝酸盐测定的试粉法进行 了改良研究。结果表明,本研究建立的直接以去离子水浸提蔬菜匀浆,混合试粉配方为柠檬酸∶一水硫酸 锰∶无水对氨基苯磺酸∶N-1-萘乙二胺盐酸... 为适应新鲜蔬菜硝酸盐快速检测的需要,在现有试粉法的基础上对硝酸盐测定的试粉法进行 了改良研究。结果表明,本研究建立的直接以去离子水浸提蔬菜匀浆,混合试粉配方为柠檬酸∶一水硫酸 锰∶无水对氨基苯磺酸∶N-1-萘乙二胺盐酸盐∶细锌粉=30∶4∶1.6∶0.8∶1,其加入量为0.1g的改进试粉 法,对于溶液中硝酸盐含量在0～20mg/L范围时,显色吸光值与硝酸盐含量呈现良好的线性关系,相关系 数达0.9999,方法回收率在97.7%～104.5%之间,相对标准偏差2.71%。用本改进试粉法测定11种蔬菜 的硝酸盐含量与国标法测定结果的t检验具有一致性。 展开更多

关键词 蔬菜 硝酸盐含量 改进试粉法

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RAPD技术鉴定番茄一代杂种粤星种子纯度的研究 被引量：11

12

作者 蒲汉丽 李乃坚 +2 位作者 黄爱兴 王得元 庄楚雄 《种子》 CSCD 北大核心 2000年第5期14-16,共3页

应用 RAPD标记技术对番茄杂种一代粤星种子纯度的鉴定进行研究的结果表明 :在 15 9个随机引物的 RAPD反应中 ,有 11个引物使亲本间具有多态性 ;分别用母本特异引物 OPJ- 11和父本特异引物 OPF- 0 9就可以对番茄一代杂种粤星种子纯度进行... 应用 RAPD标记技术对番茄杂种一代粤星种子纯度的鉴定进行研究的结果表明 :在 15 9个随机引物的 RAPD反应中 ,有 11个引物使亲本间具有多态性 ;分别用母本特异引物 OPJ- 11和父本特异引物 OPF- 0 9就可以对番茄一代杂种粤星种子纯度进行RAPD鉴定 。 展开更多

关键词 RAPD技术 种子纯度 纯度鉴定 粤星杂种一代番茄

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RAPD标记检测蔬菜种子纯度中DNA提取方法研究 被引量：18

13

作者 王得元 邓义才 李乃坚 《广东农业科学》 CAS CSCD 1999年第3期13-14,共2页

对ＤＮＡ提取方法的ＳＤＳ法进行改进的研究结果表明：改进了的ＳＤＳ法操作简便，操作过程可在１小时内完成，适于番茄、辣椒、黄瓜等蔬菜作物的基因组ＤＮＡ提取，且宜于在种子纯度检测的ＲＡＰＤ分析中应用。

关键词 DNA提取 RAPD技术 种子纯度 蔬菜 种子检测

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高效液相色谱-荧光法测定辣椒素和二氢辣椒素 被引量：10

14

作者 徐爱平 王富华 +2 位作者 王晓容 李乃坚 赖穗春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期592-595,共4页

建立了一种测定辣椒素和二氢辣椒素的反相高效液相色谱荧光法.样品中的辣椒素和二氢辣椒素用乙腈提取,以水和甲醇为流动相梯度洗脱,HP ODS Hypersil(5μm,250 mm×4 mm i.d)柱分离,用荧光检测器(λex=229 nm,λem=320 nm)测定.研究... 建立了一种测定辣椒素和二氢辣椒素的反相高效液相色谱荧光法.样品中的辣椒素和二氢辣椒素用乙腈提取,以水和甲醇为流动相梯度洗脱,HP ODS Hypersil(5μm,250 mm×4 mm i.d)柱分离,用荧光检测器(λex=229 nm,λem=320 nm)测定.研究表明辣椒素和二氢辣椒在0.02～125.00 μg/mL范围内,峰面积与待测物的质量浓度呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,相对标准偏差在0.44%和2.74%之间,回收率为80.8%～99.9%.该方法操作简便、快速,适用范围广,重现性好,灵敏度高. 展开更多

关键词 辣椒素 二氢辣椒素 高效液相色谱

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华南地区辣椒品种选育及育种技术研究进展 被引量：10

15

作者 李颖 王恒明 +4 位作者 徐小万 徐晓美 王得元 李乃坚 余小林 《广东农业科学》 CAS 2020年第11期60-69,共10页

辣椒是我国华南地区南菜北运最重要的种类。30多年来,华南地区众多科研院所、高校和育种公司共同努力,选育了许多具有华南特色的优异品种,获得了较好的经济效益和社会效益。概述了华南地区辣椒新品种选育及主要育种技术研究进展:(1)辣... 辣椒是我国华南地区南菜北运最重要的种类。30多年来,华南地区众多科研院所、高校和育种公司共同努力,选育了许多具有华南特色的优异品种,获得了较好的经济效益和社会效益。概述了华南地区辣椒新品种选育及主要育种技术研究进展:(1)辣椒新品种选育方面,华南地区已选育出青皮椒、黄皮椒、指天椒、线椒等各类型品种,其中粤椒一号、辣优4号、茂椒4号、东方神剑、汇丰二号等在当时辣椒种子市场占有较大份额。(2)辣椒抗青枯病转基因技术研究方面,采用农杆菌介导法,将抗菌肽B、D基因导入辣椒,获得抗菌肽B、D基因转化辣椒抗青枯病工程株系,并获农业农村部批准进行田间试验。(3)辣椒耐高温、湿涝机理研究方面,通过高温高湿胁迫下植物生理生化、转录本衍生片段、DNA甲基化、表达谱和miRNA等多组学数据,揭示了辣椒耐高温高湿机制,阐明了辣椒杂交种基因均呈非加性的表达模式。(4)辣椒疫病特异抗性基因的精细定位方面,利用辣椒抗疫病材料CM334和感病材料10399为亲本构建遗传分离群体并对辣椒根腐疫病抗性遗传规律进行研究,表明在广东辣椒疫霉菌优势生理小种Race 3侵染下,辣椒根腐疫病抗性性状为显性单基因控制,并将抗性基因PhR10定位在约2.6 Mb范围内。(5)辣椒雄性不育研究方面,利用回交或逆向回交系统选育技术,选育出辣椒不育系、保持系和恢复系,实现辣椒三系配套并应用,同时对辣椒雄性不育机理进行了研究。针对华南地区气候特点及消费习惯,提出对未来华南地区辣椒育种研究的建议。 展开更多

关键词 华南地区 辣椒 品种选育 育种技术

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广东省蔬菜硝酸盐含量的调查与分析 被引量：24

16

作者 杜应琼 王富华 +5 位作者 李乃坚 邓义才 苏青云 殷秋妙 赖穗春 徐爱平 《生态环境》 CSCD 2004年第1期19-22,共4页

为了解广东省蔬菜硝酸盐含量状况,分别对阳山、番禺、深圳等蔬菜生产基地和深圳市各流通领域中蔬菜的硝酸盐含量进行跟踪调查。结果表明,广东省蔬菜生产基地的蔬菜硝酸盐含量超标严重,特别是市民食用量较大的几种叶类蔬菜超标最为明显... 为了解广东省蔬菜硝酸盐含量状况,分别对阳山、番禺、深圳等蔬菜生产基地和深圳市各流通领域中蔬菜的硝酸盐含量进行跟踪调查。结果表明,广东省蔬菜生产基地的蔬菜硝酸盐含量超标严重,特别是市民食用量较大的几种叶类蔬菜超标最为明显。定点监测结果表明,蔬菜的硝酸盐含量与蔬菜的新鲜程度呈明显的正相关,蔬菜越新鲜其硝酸盐含量越高;在2次定点监测中,蔬菜硝酸盐平均含量都呈现出如下的趋势:生产基地的>批发市场的>超市和农贸市场的。 展开更多

关键词 蔬菜 硝酸盐 农药污染 重金属污染 分级标准 限量标准

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果蔬中5种农药的同时检测与残留量分析 被引量：5

17

作者 徐爱平 王富华 +2 位作者 赖穗春 李乃坚 王晓容 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期561-563,共3页

建立了蔬菜和水果中甲基毒死蜱、毒死蜱、联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯残留量的分析方法。将样品中的甲基毒死蜱、毒死蜱、联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯经盐析提取和固相萃取(SPE)小柱净化,用毛细管色谱柱分离,气相色谱仪带微电子捕... 建立了蔬菜和水果中甲基毒死蜱、毒死蜱、联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯残留量的分析方法。将样品中的甲基毒死蜱、毒死蜱、联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯经盐析提取和固相萃取(SPE)小柱净化,用毛细管色谱柱分离,气相色谱仪带微电子捕获检测器(u-ECD)测定。该分析方法中5种农药的检出限为0.002～0.005mg/kg,添加回收率为84.0％～104.0％,在0.002～3.00 mg/kg范围内检测线性关系良好,其线性相关系数为0.995。该分析方法灵敏、准确,操作简便,适合蔬菜和水果中甲基毒死蜱、毒死蜱、联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯残留量的分析。 展开更多

关键词 水果 蔬菜 农药 检测技术 残留量分析

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利用RAPD技术鉴定早青3号黄瓜种子纯度的研究 被引量：5

18

作者 邓义才 王得元 +1 位作者 李乃坚 蒲汉丽 《广东农业科学》 CAS CSCD 1999年第3期17-18,共2页

改进黄瓜ＤＮＡ抽提方法，利用ＲＡＰＤ技术从４０个随机引物中筛选出２个引物，能准确、快速、有效地检测早青３号黄瓜杂种的纯度。

关键词 早青3号黄瓜 RAPD 种子纯度 黄瓜 种子检测

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辣椒不同品种与不同分化批次的再生植株对其基因转化频率的影响 被引量：8

19

作者 余小林 李乃坚 +2 位作者 李颖 黄自然 曹家树 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CSCD 北大核心 2000年第4期437-440,共4页

在建立了高效辣椒子叶离体培养植株再生体系的基础上,通过含有 pCDB Ⅱ双价重组转化质粒的农杆菌LBA4 40 4将抗菌肽B,D基因导入四个辣椒品种,并对各品种同一外植体的三个分化批次转基因再生植株的基因转化频率进行调查统计。结果显示,... 在建立了高效辣椒子叶离体培养植株再生体系的基础上,通过含有 pCDB Ⅱ双价重组转化质粒的农杆菌LBA4 40 4将抗菌肽B,D基因导入四个辣椒品种,并对各品种同一外植体的三个分化批次转基因再生植株的基因转化频率进行调查统计。结果显示,辣椒品种间在PCR检测水平上呈显著差异,分化批次间无显著差异; 展开更多

关键词 辣椒 品种 基因转化频率 分化批次 再生植株

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RAPD技术在粤星番茄种子纯度检测中的初步研究 被引量：6

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作者 王得元 李乃坚 邓义才 《广东农业科学》 CAS CSCD 1999年第3期15-16,共2页

应用２０个随机引物对华南地区番茄主栽品种之一———粤星及其亲本的基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析，发现７个引物可以在粤星及其亲本的ＲＡＰＤ图谱中形成多态性差异，其中引物Ｐ１８可应用于粤星番茄种子中混杂的母本类假杂种的检测。

关键词 粤星番茄 杂种 种子纯度 RAPD 番茄 种子检测

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