文摘旨在研究Nrf2/HO-1通路在日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)感染引起神经细胞损伤中的作用机制,本试验建立Nrf2激动剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone, TBHQ)处理JEV感染的小鼠神经瘤母N2a细胞的体外感染模型。N2a细胞四种处理分别为空白DMEM对照组(Control)、JEV感染组(JEV)、TBHQ处理组(TBHQ)、JEV感染+TBHQ处理组(JEV+TBHQ)。不同处理后观察细胞病变,检测ROS水平及MDA、SOD、CAT含量变化,利用qPCR和WB技术检测Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白的表达,并通过免疫荧光法检测各组细胞Nrf2蛋白表达情况,以及炎性因子及病毒含量。结果显示,JEV感染N2a细胞后随着时间延长ROS水平逐渐升高,且在36 h ROS水平最高。JEV感染后36 h Nrf2、HO-1的mRNA均升高,炎性因子水平升高。JEV感染N2a细胞后细胞皱缩,胞膜破裂,ROS、MDA水平升高,SOD、CAT水平降低;用40μmol·L^(-1)TBHQ处理6 h后减轻了细胞损伤,降低了ROS、MDA水平,提高了SOD、CAT活性。JEV和TBHQ均激活了Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白的表达,用JEV+TBHQ联合处理Nrf2/HO-1通路的相关蛋白表达水平明显升高,且免疫荧光法检测细胞内Nrf2入核现象明显,且TNF-α、IL-6的mRNA水平及病毒的含量下降。上述结果表明,TBHQ能够通过Nrf2/HO-1通路减轻JEV引起的细胞氧化应激及炎症水平。
