文摘目的明确TOLL样受体2(TLR2)与micro RNA144(mi R-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的mi R-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-q PCR检测mi R-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏c DNA为模板,PCR获取目的片段(即含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区);用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmir GLO报告基因载体和含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR;并用mi R-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确mi R-144与TLR2 m RNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L mi R-144 mimics后,NR8383细胞中mi R-144表达显著升高,而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降;而100 nmol/L mi R-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L mi R-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 mi R-144通过靶向结合TLR2 m RNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。
