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远志皂苷元通过改善内质网应激保护小鼠心肌缺血再灌注损伤 被引量:5
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作者 李子希 陈娟 吕建新 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期409-412,共4页
目的观察远志皂苷元(senegenin,SEN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并深入探讨远志皂苷元作用的分子机制。方法实验分组:对照组(穿线不结扎,空置225min)、模型组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注180min)和SEN处理组(冠状动脉左... 目的观察远志皂苷元(senegenin,SEN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并深入探讨远志皂苷元作用的分子机制。方法实验分组:对照组(穿线不结扎,空置225min)、模型组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注180min)和SEN处理组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注前10min给予静脉注射30mg/kg远志皂苷元,再灌注180min)。采用伊文氏蓝-TTC双染法测定心肌梗死面积;荧光分析法检测Caspase-12和Caspase-3的活性以评价小鼠心肌细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法检测心肌梗死区内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠心肌梗死区的面积显著增大,Caspase-12和Caspase-3活性分别增高了4.71倍和3.37倍,内质网应激相关的标志蛋白GRP78和CHOP表达水平亦显著增高。与模型组相比,SEN处理组小鼠心肌缺血再灌注损伤导致的心肌梗死面积、Caspase-12和Caspase-3的活性程度均显著降低,GRP78和CHOP的表达水平亦显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论远志皂苷元对小鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其可能的机制与改善心肌内质网应激介导的细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 远志皂苷元 心肌缺血再灌注损伤 内质网应激
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利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定
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作者 李子希 卢颖洁 +2 位作者 刘晓峰 冯曾义 陈娟 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期369-373,共5页
目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质... 目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质粒为基础,利用Gateway技术设计引物,将人apoE4(1-272)片段克隆至pRP.EX3d载体上,并将神经元特异性启动子SYN1插入至人apoE4(1-272)片段之前,再借助IRES元件连接EGFP报告基因,构建pRP.EX3d-SYN1-apoE4(1-272)-IRES/EGFP重组表达质粒;经脂质体转染法将上述质粒转染至N2a细胞,转染24h后,荧光显微镜观察转染效率,并采用Western blot检测apoE4(1-272)蛋白的表达水平。结果成功构建神经元特异性表达人apoE4(1-272)的真核表达质粒,经测序鉴定各核心元件序列均正确无误,与预期结果相一致,且经转染N2a细胞观察到新构建质粒可顺利表达,Western blot检测结果显示apoE表达及分子量均与预期一致。结论成功构建了神经元特异性人apoE4(1-272)片段的表达质粒,并初步鉴定了其表达功能,为后续开展相关研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 apoE4(1-272) 神经元特异性表达 GATEWAY技术
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内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡 被引量:10
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作者 孔曼 陈娟 +4 位作者 周洁 朱文德 万丽敏 熊宇芳 李子希 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期253-257,共5页
目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各... 目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。 展开更多
关键词 内质网应激 氧化应激 细胞凋亡 心肌细胞
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Changes in Platelet GPIbα and ADAM17 during the Acute Stage of Atherosclerotic Ischemic Stroke among Chinese 被引量:1
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作者 凌家艳 沈霖 +5 位作者 刘庆 薛莎 马威 吴辉 李子希 朱锐 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2013年第3期438-442,共5页
Summary: Glycoprotein (GP) Ibα ectodomain shedding has important implications for thrombosis and hemostasis. A disintegrin and metalloproteinase 17 (ADAM17) was identified to play an essen- tial role in agonist ... Summary: Glycoprotein (GP) Ibα ectodomain shedding has important implications for thrombosis and hemostasis. A disintegrin and metalloproteinase 17 (ADAM17) was identified to play an essen- tial role in agonist induced GPIbαshedding. The relationship of GPIbu shedding and ADAM 17 in the acute stage of atherosclerotic ischemic stroke (AIS) patients has not been thoroughly studied. A total of 306 patients and 230 controls matched for age, sex, race, history of hypertension and diabetes mel- litus were enrolled in the study. GPIbα, ADAM17, glycocalicin were detected by flow cytometry, Western blotting, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) respectively. Compared with the control group, the expression of GPIbα in patients with acute ischemic stroke was significantly lower (P=0.000, P〈0.01). Plasma glycocalicin and ADAM17 in AIS group were higher than those in con- trol group (P=0.699, P=0.000). Pearson's analysis showed glycocalicin bore no correlation with GPIbu in AIS patients (r=0.095, P〉0.05). GPIbα and National Institute of Health Stroke Scale (NIHSS) had negative correlation (r=-0.514, P〈0.01). Our findings indicate that ADAM 17 may be a risk factor for ischemic stroke in Chinese and the expression of GPIbα can serve as a measure for stroke severity. 展开更多
关键词 GPIbα stroke ADAM17 glycocalicin PLATELETS
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辛温通阳中药对急性心肌缺血大鼠炎性因子白介素-6、白介素-10及肿瘤坏死因子-α的影响 被引量:4
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作者 雷杰 郑琼莉 +1 位作者 李子希 段刚峰 《湖北中医杂志》 2018年第1期3-5,共3页
目的观察不同辛温通阳中药抗急性心肌缺血的作用,从"阳气不通"的角度探讨其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、空白模型组、葱白提取物组、薤白提取物组、桂枝提取物组、硝酸甘油组。采用结扎左冠状动脉前降支复... 目的观察不同辛温通阳中药抗急性心肌缺血的作用,从"阳气不通"的角度探讨其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、空白模型组、葱白提取物组、薤白提取物组、桂枝提取物组、硝酸甘油组。采用结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌缺血模型,观察3种常用辛温通阳中药对急性心肌缺血大鼠白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。结果与模型组相比,各治疗组大鼠血清IL-6、TNF-α水平降低,IL-10水平升高,差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01),各中药治疗组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论辛温通阳中药能显著减轻大鼠心肌缺血,其机制可能与影响血清炎性因子IL-10、IL-6及TNF-α水平有关。 展开更多
关键词 急性心肌缺血 大鼠 辛温通阳中药 白介素-6 白介素-10 肿瘤坏死因子
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