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李朝飞:做擅讲故事的校长
1
作者 余麗柃 彭一皓 李朝飞 《课堂内外（中国好老师）》 2021年第12期26-27,共2页
孩提时,李朝飞的理想是当一名军人,一身戎装,英姿飒爽。没想到,由于初三时期的过度熬夜,李朝飞的视力从1.5陡降至0.8,考军校的梦想就此破灭。误打误撞,李朝飞被中师录取。带着一颗极不情愿的心走进中师校园,李朝飞便把课余所有的时间都... 孩提时,李朝飞的理想是当一名军人,一身戎装,英姿飒爽。没想到,由于初三时期的过度熬夜,李朝飞的视力从1.5陡降至0.8,考军校的梦想就此破灭。误打误撞,李朝飞被中师录取。带着一颗极不情愿的心走进中师校园,李朝飞便把课余所有的时间都花在了“借书消愁”上。每逢周末,李朝飞就去县图书馆阅读,一待便是一整天,手抄本成了那段时光的证明--每学期手抄的读书笔记,累积成厚厚一大本。 展开更多
关键词 读书笔记 讲故事 图书馆阅读 手抄本 课余 中师
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机场道面冷拌环氧沥青研发及性能研究
2
作者 李朝飞 胡皓琳 +2 位作者 彭智鑫 李东海 蔡磊 《市政技术》 2024年第2期1-7,13,共8页
沥青路面新材料的开发为提高机场道面使用性能提供了思路,其中环氧沥青近年来被逐步开发研究,其表现出了良好的使用性能。目前环氧沥青混合料多采用高温拌和,难以满足机场道面工程的不停航施工和环保性要求,冷拌环氧沥青混合料能较好地... 沥青路面新材料的开发为提高机场道面使用性能提供了思路,其中环氧沥青近年来被逐步开发研究,其表现出了良好的使用性能。目前环氧沥青混合料多采用高温拌和,难以满足机场道面工程的不停航施工和环保性要求,冷拌环氧沥青混合料能较好地解决上述问题。因此,从冷拌环氧沥青的制备原理出发,基于对固化时间、力学性能、变形能力和容留时间等影响因素的探究,确定了冷拌环氧沥青各组分的种类和配比,自主研发了一种拉伸强度为2.78 MPa、断裂伸长率为58.61%的新型冷拌环氧沥青材料,并对使用该冷拌环氧沥青制成的沥青混合料性能进行了测试,发现该冷拌环氧沥青混合料的高温稳定性、低温变形能力以及水稳定性都较好,均满足机场道面使用要求,可以在机场道面修补工程中推广应用。 展开更多
关键词 机场道面 冷拌环氧沥青 沥青混合料 性能研究
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棉铃虫泛素基因的克隆及序列分析 被引量：7
3
作者 李朝飞 于航 +2 位作者 潘丽晶 杨凯 庞义 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期61-64,共4页
泛素介导的泛素-蛋白酶体通路(Ubiquitin＿proteasomepathway,UPP)是真核细胞内依赖ATP的非溶酶体蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用。设计一对简并引物,从棉铃虫Helicoverpaarmigera卵巢细胞Ha831中克隆了泛... 泛素介导的泛素-蛋白酶体通路(Ubiquitin＿proteasomepathway,UPP)是真核细胞内依赖ATP的非溶酶体蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用。设计一对简并引物,从棉铃虫Helicoverpaarmigera卵巢细胞Ha831中克隆了泛素基因的编码区,GenBank登录号AY456195。序列分析表明,该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸、其编码蛋白的相对分子质量为8560,等电点为6 56。同源性比较发现,棉铃虫泛素基因与其他真核生物泛素基因在氨基酸水平上具有96%以上的相似性,而与棉铃虫核多角体病毒泛素的相似性为76%,所有已知的泛素关键功能位点在该泛素蛋白中均保守存在。 展开更多
关键词 棉铃虫Helicoverpa ARMIGERA 泛素 序列分析
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泛素-蛋白水解酶复合体通路与病毒侵染 被引量：8
4
作者 李朝飞 庞义 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期151-156,共6页
泛素 蛋白水解酶复合体通路 (Ubiquitin proteasomepathway ,UPP)是细胞内依赖于ATP、非溶酶体途径的蛋白质降解通路 ,广泛参与包括细胞周期调控、细胞凋亡、信号转导、转录调控、免疫应答及抗原呈递等多种机体代谢活动。UPP在病毒侵... 泛素 蛋白水解酶复合体通路 (Ubiquitin proteasomepathway ,UPP)是细胞内依赖于ATP、非溶酶体途径的蛋白质降解通路 ,广泛参与包括细胞周期调控、细胞凋亡、信号转导、转录调控、免疫应答及抗原呈递等多种机体代谢活动。UPP在病毒侵染中作用的研究仍处于起步阶段。已发现 ,昆虫病毒和非洲猪瘟病毒分别是迄今发现唯一编码泛素和泛素连接酶的病毒。最近 ,大量的研究表明 ,病毒利用宿主细胞的UPP逃避免疫系统监控。 展开更多
关键词 泛素-蛋白水解酶复合体通路 UPP 病毒侵染 病毒复制 宿主细胞 免疫系统监控 病毒粒子
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雌激素治疗保护去卵巢对血管内皮细胞损伤的初步机制 被引量：2
5
作者 李朝飞 陈冠军 +3 位作者 朱小欢 朱致祥 章秋 鲁云霞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1753-1759,共7页
目的探讨雌激素治疗对去卵巢大鼠胸主动脉内皮与雌激素缺乏的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的初步机制。方法将30只雌性SD大鼠随机分为假手术对照(SHAM)组、去卵巢(OVX)组、去卵巢+雌激素治疗[OVX+EST,0.06 mg/(kg·d)雌二醇)组,6个月后... 目的探讨雌激素治疗对去卵巢大鼠胸主动脉内皮与雌激素缺乏的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的初步机制。方法将30只雌性SD大鼠随机分为假手术对照(SHAM)组、去卵巢(OVX)组、去卵巢+雌激素治疗[OVX+EST,0.06 mg/(kg·d)雌二醇)组,6个月后观察血管内皮的病理学变化,血管环张力实验检测血管舒张差异,RT-PCR及Western blot法分析葡萄糖调节蛋白(GRP)78、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的改变。将HUVEC分为正常对照(CON)组、正常+衣霉素对照(TM)组、雌激素缺乏(ES-D)组、雌激素缺乏+梯度浓度雌激素治疗(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)mol/L雌二醇)组,检测氧化应激及内质网应激指标的变化。结果OVX组大鼠体重增加,胸主动脉内皮出现损伤及脂质沉积,GRP78、CHOP的mRNA与蛋白表达水平上调;OVX+EST组上述指标均显著逆转。HUVEC中ES-D组表现出活性氧簇升高及GRP78、CHOP的表达升高,补充不同浓度雌激素后上述指标均下降,且表现出一定的剂量效应。结论雌激素缺乏可介导大鼠胸主动脉内皮损伤及HUVEC出现氧化应激和内质网应激,补充雌激素后可逆转此效应。 展开更多
关键词 雌激素缺乏 雌激素治疗 内质网应激 氧化应激 血管内皮
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杆状病毒SpltMNPV病毒粒子中存在泛素复合物 被引量：2
6
作者 李朝飞 尹崇 +1 位作者 何敏儿 庞义 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期66-68,共3页
通过间接免疫荧光分析,发现在斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)感染的Sl＿zsu＿1细胞的细胞质中存在大量的泛素或泛素复合物。Western印迹分析表明,在SpltMNPV多角体源病毒粒子与芽生型病毒粒子中... 通过间接免疫荧光分析,发现在斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)感染的Sl＿zsu＿1细胞的细胞质中存在大量的泛素或泛素复合物。Western印迹分析表明,在SpltMNPV多角体源病毒粒子与芽生型病毒粒子中均存在相对分子质量为30×103～65×103的泛素复合物。推测SpltMNPV在出芽或组装的过程中由感染细胞的胞质中获得泛素复合物。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 SPLTMNPV 泛素
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昆虫病毒gp37/fusolin基因研究进展 被引量：2
7
作者 李朝飞 庞义 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第11期16-18,共3页
昆虫病毒gp37 fusolin基因属病毒复制非必需基因 ,其编码的蛋白能形成一种纺锤形包涵体 (spindlebodies,SBs) ,该包涵体内不含有病毒粒子。Fusolin蛋白形成的SBs与纯化的Fusolin蛋白均能提高靶昆虫对杆状病毒的敏感性 ,推测GP37蛋白也... 昆虫病毒gp37 fusolin基因属病毒复制非必需基因 ,其编码的蛋白能形成一种纺锤形包涵体 (spindlebodies,SBs) ,该包涵体内不含有病毒粒子。Fusolin蛋白形成的SBs与纯化的Fusolin蛋白均能提高靶昆虫对杆状病毒的敏感性 ,推测GP37蛋白也具有类似的功能。对gp37 fusolin基因的深入研究 。 展开更多
关键词 杆状病毒 痘病毒 gp37/fusolin基因 病毒增效剂
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昆虫杆状病毒泛素基因研究进展 被引量：2
8
作者 李朝飞 李充璧 +1 位作者 余健秀 庞义 《生物工程进展》 CSCD 2001年第6期28-30,14,共4页
昆虫杆状病毒是目前已知唯一编码泛素 (ubiquitin)的病毒。迄今 ,已克隆了 8种该类病毒的泛素基因。与真核生物Uba5 2 (80 )相似 ,这些基因在一个泛素分子的C 末端都有不同长度的融合 ,其中斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituramulti... 昆虫杆状病毒是目前已知唯一编码泛素 (ubiquitin)的病毒。迄今 ,已克隆了 8种该类病毒的泛素基因。与真核生物Uba5 2 (80 )相似 ,这些基因在一个泛素分子的C 末端都有不同长度的融合 ,其中斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus ,SpltMNPV)的ubiquitin gp37基因是一个典型的融合基因。近年来 ,对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacaliforniamulticapsidnucleopolyhedrovirus ,AcMNPV) 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒 泛素 ubiquitin基因
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斜纹夜蛾核多角体病毒gp37及其邻近序列的克隆及分析 被引量：6
9
作者 李充璧 李朝飞 +2 位作者 闫庆生 胡国栋 庞义 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期677-682,共6页
从斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中克隆了 gp37基因 .分子生物学软件分析表明 ,在 gp37基因内部存在糖基化位点 .含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG) ,推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基... 从斜纹夜蛾核多角体病毒 (Spodopteralituranucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)基因组中克隆了 gp37基因 .分子生物学软件分析表明 ,在 gp37基因内部存在糖基化位点 .含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG) ,推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因 .通过GP37蛋白的同源性比较 ,绘制了以 gp37基因为基础的杆状病毒进化树 ,发现与以多角体蛋白基因 (polyhedrin)为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异 .以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒 (Bombyxmorinucleopolyhedrovirus,BmNPV)与杆状病毒代表种———苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamultinucleocapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)分开 ,根据 gp37基因分析则将二者归到同一分枝 。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 gp37基因簇 克隆 序列分析
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白藜芦醇通过减缓内质网应激及增加eNOS的表达改善高热量高胆固醇饮食引起的内皮损伤 被引量：6
10
作者 程静静 陈莉 +3 位作者 李朝飞 陈冠军 鲍莹莹 鲁云霞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1756-1762,共7页
目的探讨白藜芦醇改善高热量高胆固醇饮食引起的血管内皮损伤的机制是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的改变有关。方法将24只♂C57BL/6小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高热量高胆固... 目的探讨白藜芦醇改善高热量高胆固醇饮食引起的血管内皮损伤的机制是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的改变有关。方法将24只♂C57BL/6小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高热量高胆固醇饮食组(HCD)及高热量高胆固醇饮食+白藜芦醇组(HCD+RES,白藜芦醇,400 mg·kg-1·d-1),共12周。观察胸主动脉内皮的病理学变化,检测eNOS的表达和ERS上下游相关基因的表达。将血管内皮细胞(MAEC)分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、中浓度RES药物对照组(RES)、低中高剂量RES治疗组(RES dose+PA),观察其对棕榈酸(PA)诱导的小鼠MAEC增殖的影响,检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)蛋白和eNOS蛋白的表达。结果与SCD组相比,HCD组小鼠胸主动脉管壁明显增厚,弹力纤维排列紊乱,ERS上下游基因表达明显升高(P<0.05),eN OS蛋白表达减少;与HCD组相比,HCD+RES组血管弹力纤维排列明显改善,ERS相关基因的表达水平明显降低(P<0.05),eNOS蛋白表达增加。与NC组相比,PA组细胞增殖明显减少(P<0.05),GRP78和CHOP表达明显增加(P<0.05),eNOS表达降低,中、高剂量RES干预后MAECs增殖明显增强(P<0.05),GRP78和CHOP表达明显减少(P<0.05),eNOS蛋白表达增加。结论白藜芦醇有明显的改善高脂饮食引起的内皮损伤和PA诱导的抑制内皮细胞增殖作用,可能与其减缓ERS、增加eNOS的表达有关。 展开更多
关键词 内质网应激 内皮损伤 白藜芦醇 高热量高胆固醇饮食 棕榈酸
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新基因Splt137在大肠杆菌中的表达及抗体制备 被引量：4
11
作者 尹崇 李朝飞 +2 位作者 王立华 张萍 庞义 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期75-77,共3页
用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶... 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化 ,免疫家兔制备了抗Splt137抗体。Western免疫印迹分析表明 ,该抗体适合用作Splt137蛋白的进一步分析。 展开更多
关键词 大肠杆菌 斜纹夜蛾核多角体病毒 Splt137基因 原核表达 抗体 基因表达 杆状病毒
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甜菜夜蛾cDNA文库的构建 被引量：9
12
作者 孙小洁 李朝飞 +3 位作者 于航 裘雪梅 李庆 张文庆 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2006年第3期404-407,共4页
以甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫为材料建立了cDNA表达文库,经检测文库的初始滴度为1.1×105pfu/mL,重组率为97%,扩增后文库的滴度为5.4×107pfu/mL。用设计的2对引物筛选该文库,得到468 bp的1个片段,分析后证实... 以甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫为材料建立了cDNA表达文库,经检测文库的初始滴度为1.1×105pfu/mL,重组率为97%,扩增后文库的滴度为5.4×107pfu/mL。用设计的2对引物筛选该文库,得到468 bp的1个片段,分析后证实是几丁质合成酶基因I保守区域的1个片段。该cDNA文库为进一步筛选甜菜夜蛾功能基因奠定了基础。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 CDNA文库 几丁质合成酶Ⅰ
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甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析 被引量：2
13
作者 李充璧 闫庆生 +2 位作者 李朝飞 庞义 杨凯 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期70-73,共4页
通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37... 通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 . 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 gp37基因 克隆 序列分析 生物杀虫剂
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斜纹夜蛾核多角体病毒VP39-GST融合蛋白原核表达 被引量：2
14
作者 李赛男 李朝飞 +2 位作者 潘丽晶 吴文碧 庞义 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期16-19,共4页
用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异... 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)vp39全长基因。将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达质粒pGEX-4T-vp39,转化Escherichia.coliBL21(DE3),在1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下超量表达了与理论预测值相符的一个约60kDa的VP39-GST融合蛋白。VP39-GST融合蛋白的成功表达为进一步研究VP39在病毒侵染过程中与宿主细胞成分或病毒粒子蛋白间的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 vp39 融合蛋白 原核表达
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甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)ORF100和ORF101基因的克隆、表达与纯化 被引量：2
15
作者 李玲玲 李朝飞 庞义 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第5期21-24,共4页
目的:构建甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF100(Se100)和ORF101(Se101)基因的原核表达载体,表达并纯化两种蛋白。方法:用PCR方法扩增Se100和Se101基因,分别将它们克隆至原核表达载体pQE-30上,... 目的:构建甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF100(Se100)和ORF101(Se101)基因的原核表达载体,表达并纯化两种蛋白。方法:用PCR方法扩增Se100和Se101基因,分别将它们克隆至原核表达载体pQE-30上,转化宿主菌M15[pREP-4],用IPTG进行诱导表达,表达产物用Ni-NTA金属螯合层析法进行纯化,SDS-PAGE检测表达的目的蛋白。结果:构建了分别含有Se100和Se101基因的原核表达质粒pQE100和pQE101;SDS-PAGE检测显示,表达的两个融合蛋白的分子量分别为15kDa和31kDa,比预期分子量稍大;Ni-NTA亲和层析结果显示:6×His-Se100和6×His-Se101融合蛋白主要存在于pH值为4.5的缓冲液中。结论:成功克隆并高效表达了Se100和Se101两个基因,有效纯化了两种蛋白,为深入进行基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 ORF100 ORF101 原核表达 纯化
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人视黄醇结合蛋白4多克隆抗血清的制备及在妊娠糖尿病中的初步应用 被引量：1
16
作者 陈利春 鲁云霞 +4 位作者 孙玉秀 方向东 叶俊良 陈磊 李朝飞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期1050-1052,共3页
目的:制备抗人视黄醇结合蛋白4(retinal binding protein4,RBP4)的多克隆抗血清并用于妊娠糖尿病(GDM)血液和胎盘的检测。方法:用自制rhRBP4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗血清,Western blot检测特异性,ELISA法测定效价,收集20例GDM患者... 目的:制备抗人视黄醇结合蛋白4(retinal binding protein4,RBP4)的多克隆抗血清并用于妊娠糖尿病(GDM)血液和胎盘的检测。方法:用自制rhRBP4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗血清,Western blot检测特异性,ELISA法测定效价,收集20例GDM患者和15例正常孕妇的血液和胎盘,检测RBP4的水平和分布。结果:制备的抗血清效价为1∶128000。与正常孕妇相比,GDM患者血清中RBP4水平明显升高,其分娩胎盘的滋养层细胞质和胞膜中RBP4也显著高表达。结论:制备的多克隆抗血清可初步用于GDM患者血清或组织样本中RBP4的检测,为进一步用于临床检测奠定基础。 展开更多
关键词 糖尿病 妊娠 重组人视黄醇结合蛋白4 多克隆抗血清 血清 胎盘
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杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备 被引量：1
17
作者 李玲玲 李朝飞 +1 位作者 陈维春 庞义 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期5-7,共3页
目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进... 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39基因 原核表达 抗体
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斜纹夜蛾多角体病毒包埋型病毒受体的鉴定 被引量：1
18
作者 尹崇 余健秀 +3 位作者 庞义 胡晓晖 李朝飞 王立华 《中国病毒学》 CSCD 2002年第1期66-68,共3页
蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒（＄Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｌｉｔｕｒａ　　ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｄｒｏｖｉｒｕｓ，　ＳｐｌｔＭＮＰＶ）包埋型病毒粒子（ｐｏｌｙｈｅｄｒａ－... 蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒（＄Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｌｉｔｕｒａ　　ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ　ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｄｒｏｖｉｒｕｓ，　ＳｐｌｔＭＮＰＶ）包埋型病毒粒子（ｐｏｌｙｈｅｄｒａ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｖｉｒｕｓ，ＰＤＶ），以此病毒粒子作抗原，免疫家兔获得抗血清；用ＳＤＳ裂解缓冲液提取斜纹夜蛾幼虫中肠组织细胞总蛋白。采用病毒铺覆蛋白印迹技术（ＶＯＰＢＡ），利用抗ＰＶＤ抗血清对病毒受体进行检测，结果表明斜纹夜蛾中肠细胞总蛋白中４０ｋＤ、７３ｋＤ、８５ｋＤ的三种蛋白能够结合ＰＤＶ。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核多角体病毒 包埋型病毒粒子 受体蛋白 病毒铺覆蛋白印迹技术 鉴定
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杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备 被引量：1
19
作者 李玲玲 李朝飞 庞义 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1-4,共4页
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以... 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35基因基因表达多克隆抗体
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杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备
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作者 李赛男 李朝飞 +1 位作者 庞义 杨凯 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2011年第4期78-81,87,共5页
目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMN-PV)ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠... 目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMN-PV)ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下超量表达了SE29蛋白.采用割胶回收的方法纯化SE29蛋白,以纯化的SE29蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗SE29蛋白的抗体.结果:构建了Se29基因原核表达质粒,在大肠杆菌中实现了SE29蛋白的原核表达,获得了SE29蛋白的多克隆抗体,West-ern blot分析表明该抗体能与SeMNPV感染的细胞蛋白样品发生特异性反应.结论:SE29蛋白的多克隆抗体的获得为进一步研究SE29蛋白的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 Se29 克隆 原核表达 抗体
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