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连翘内生真菌的分离鉴定及其发酵液抑菌活性和HPLC测定 被引量：3
1
作者 牛明福 杜梦璇 +5 位作者 范逸文 李阳 刘永慧 布青云 朱凯阳 陈济斌 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期597-602,共6页
为获得能产生抑菌活性物质的连翘内生菌,从连翘新鲜组织中分离纯化内生真菌并进行形态学分析,牛津杯法测定发酵液的抑菌活性,对具有抑菌活性的菌株进行18S rRNA基因序列分析,并以连翘主要活性成分连翘苷和连翘酯苷A、B标准品为对照,HPL... 为获得能产生抑菌活性物质的连翘内生菌,从连翘新鲜组织中分离纯化内生真菌并进行形态学分析,牛津杯法测定发酵液的抑菌活性,对具有抑菌活性的菌株进行18S rRNA基因序列分析,并以连翘主要活性成分连翘苷和连翘酯苷A、B标准品为对照,HPLC测定发酵上清液中的连翘苷和连翘酯苷A、B含量。结果表明从连翘新鲜组织中获得了5株内生真菌,其中4株菌的发酵上清液对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌有很好的抑菌活性,对这4株菌的分子生物学检测表明3株菌为枝胞菌,另1株菌为曲霉菌,HPLC结果显示这4株菌的发酵上清液中均含有一定浓度的连翘苷和连翘酯苷A、B,发酵液中发挥抑菌活性的成分是否与这三种物质有关需要进一步研究,但连翘内生真菌可以产生抑菌活性物质这一结果为后续利用微生物发酵生产抑菌物质提供了新的途径和新的菌种来源。 展开更多
关键词 连翘 内生真菌 分离鉴定 抑菌活性 HPLC
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鸡γ干扰素与补体C3d主要片段的串联表达及活性测定 被引量：1
2
作者 牛明福 范逸文 +3 位作者 杜梦璇 鲍永毅 宫强 侯颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期662-666,共5页
目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中... 目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂。方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。将重组蛋白纯化后进行鸡胚内抗新城疫病毒活性研究;并与DNA疫苗共同免疫雏鸡,HI法测定抗体水平,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,并分析免疫器官指数变化。结果:成功表达纯化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d两个蛋白,SDS-PAGE电泳检测分子量分别约为17 kD和21 kD,His标签抗体检测表明蛋白表达正确。鸡胚内抗病毒活性测定表明一定浓度的chIFN-γ和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低浓度时chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;与DNA疫苗联合免疫后,HA组、γ+HA和γ+C+HA组抗体水平持续升高,且与HA组相比,γ+C+HA组抗体水平更高,差异有极显著统计学意义(P<0.01)。第7周开始γ+C+HA组的抗体水平均高于γ+HA组,差异有极显著统计学意义(P<0.01)。HA、γ+HA和γ+c+HA组淋巴细胞均显示出较高的增殖活性,且γ+c-HA组增殖活性更高,与HA组差异有极显著统计学意义(P<0.01),与γ+HA相比差异有显著统计学意义(P<0.05),说明chIFN-γ-C3d、chIFN-γ都具有促进淋巴细胞增殖的作用,并且chIFN-γ-C3d比chIFN-γ作用更强,差异有显著统计学意义(P<0.05)。第9周时,γ+C+HA组胸腺指数和法氏囊指数都高于其他组,与γ+HA组相比差异有极显著统计学意义(P<0.01)。结论:实验表明,相比于单独的DNA疫苗,chIFN-γ-C3d或chIFN-γ与DNA疫苗联合免疫具有更强的免疫效果,chIFN-γ-C3d比单独的chIFN-γ效果更好,可作为一种新的免疫佐剂应用于DNA疫苗的免疫。 展开更多
关键词 鸡γ-干扰素 补体C3d 原核表达 抗病毒活性 免疫佐剂
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响应面法优化蛋壳内膜酶解制备抑菌活性物质的工艺条件 被引量：1
3
作者 牛明福 杜梦璇 +5 位作者 张婷婷 李亚恒 宫强 秦翠丽 侯颖 李阳 《中国饲料》 北大核心 2018年第7期28-34,共7页
本试验以鸡蛋壳内膜为试验材料,用蛋白酶进行酶解,测定酶解液对微生物的抑菌活性,分析碱性预处理、酶解温度、酶解时间、加酶量、酶解pH对鸡蛋壳内膜酶解液抑菌效果的影响,并在单因素试验基础上,利用Design Expert 8.0.6分析软件,采用Bo... 本试验以鸡蛋壳内膜为试验材料,用蛋白酶进行酶解,测定酶解液对微生物的抑菌活性,分析碱性预处理、酶解温度、酶解时间、加酶量、酶解pH对鸡蛋壳内膜酶解液抑菌效果的影响,并在单因素试验基础上,利用Design Expert 8.0.6分析软件,采用Box-Behnken中心组合设计法及响应面分析法(RSM)优化酶解工艺条件,得到鸡蛋壳内膜酶解液抑菌效果最佳的酶解工艺条件为:酶解温度45℃,酶解时间2 h,酶用量37.51 U/mg,酶解pH 10.14。该工艺条件下,鸡蛋壳内膜酶解液对S.enteritidis的抑菌圈直径为(17.927±0.19)mm,与理论最优值(17.941±0.21)mm接近,抑菌效果比优化前提高了10.52%,说明拟合方程与实际相符合,所得结果准确可靠。 展开更多
关键词 鸡蛋壳内膜 酶解 抑菌活性 响应面分析法
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基于流式细胞术研究叶绿素对肠道细菌增殖的影响 被引量：1
4
作者 郑红莉 王潇 +2 位作者 杜梦璇 刘畅 张燕 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第22期296-302,共7页
为在菌种水平上探究叶绿素对特定肠道细菌增殖的影响,本研究首先探究了流式细胞术(Flow cytometry,FCM)对肠道细菌计数的可行性并与稀释涂布平板法进行比较,随后利用FCM探究了叶绿素对珀氏解黄酮菌(Flavonifractor plautii)、普通拟杆菌... 为在菌种水平上探究叶绿素对特定肠道细菌增殖的影响,本研究首先探究了流式细胞术(Flow cytometry,FCM)对肠道细菌计数的可行性并与稀释涂布平板法进行比较,随后利用FCM探究了叶绿素对珀氏解黄酮菌(Flavonifractor plautii)、普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)、假长双岐杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)和鼠乳杆菌(Lactobacillus murinus)增殖的影响。结果表明,FCM可实现对活细菌和死细菌的同时检测,FCM活菌计数结果与稀释涂布平板法测定的活菌数之间具有很好的相关性(r>0.8,P<0.001),但FCM检测效率更高、检测结果更接近于真实值。100μg/mL的叶绿素可高度显著促进Flavonifractor plautii的增殖(P<0.01),而300和500μg/mL的叶绿素可极显著抑制Flavonifractor plautii的增殖(P<0.001);100μg/mL的叶绿素可极显著促进Bacteroides vulgatus的增殖(P<0.001),而300和500μg/mL的叶绿素可极显著抑制Bacteroides vulgatus的增殖(P<0.001);叶绿素可极显著抑制Bifidobacterium pseudolongum的增殖(P<0.001),且浓度越高抑制作用越强;叶绿素可极显著促进Lactobacillus murinus的增殖(P<0.001),且浓度越高促进作用越强。本研究为阐明膳食叶绿素对肠道菌群生长的影响规律提供了重要的理论数据。 展开更多
关键词 流式细胞术 稀释涂布平板法 叶绿素 肠道细菌 增殖
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肠道微生物菌株资源库的构建与应用开发 被引量：2
5
作者 杜梦璇 姜民志 +1 位作者 刘畅 刘双江 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期875-890,共16页
肠道微生物组在组成和功能上都具有极高的复杂性,大量基于免培养的微生物组学研究表明肠道菌群失调与多种疾病都存在密切关联,肠道菌群的稳态与宿主健康密切相关已是共识。同时,越来越多的研究者认识到,可培养微生物菌株资源是肠道微生... 肠道微生物组在组成和功能上都具有极高的复杂性,大量基于免培养的微生物组学研究表明肠道菌群失调与多种疾病都存在密切关联,肠道菌群的稳态与宿主健康密切相关已是共识。同时,越来越多的研究者认识到,可培养微生物菌株资源是肠道微生物组研究从关联分析向功能验证、机理解析和应用开发方向深入发展的基础和保障。本文主要对近年来完成的一些具有代表性的人肠道微生物大规模分离培养和菌株资源库构建工作,进行整理,总结回顾肠道微生物分离培养技术和方法的进展;并通过几个有代表性的基于可培养微生物菌株资源开展的肠道微生物数据挖掘、宿主–微生物互作机理研究和应用开发的成果,展示肠道微生物菌株资源库的应用价值和开发潜力。 展开更多
关键词 肠道微生物组 大规模分离培养 免培养研究 培养组学 菌株资源开发
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蛋壳内膜酶解液抑菌活性的工艺研究 被引量：1
6
作者 牛明福 张婷婷 +3 位作者 万鹏 杜梦璇 李亚恒 范逸文 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第4期78-83,共6页
为了研究蛋壳内膜酶解液的抑菌活性,以蛋壳内膜为原料,用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别对其酶解得酶解液,检测不同酶解液对鸡大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、嗜水汽单胞... 为了研究蛋壳内膜酶解液的抑菌活性,以蛋壳内膜为原料,用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别对其酶解得酶解液,检测不同酶解液对鸡大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、嗜水汽单胞菌、产肠毒大肠杆菌和禽多杀性巴氏杆菌的抑菌效果,并对抑菌效果较好的中性蛋白酶酶解的条件进行了单因素试验和正交试验分析。结果表明:用中性蛋白酶酶解蛋壳内膜效果优于其他3种酶,中性蛋白酶酶解蛋壳内膜的最佳条件为预处理Na OH的添加量为质量浓度3%,酶添加量为4 g/L,酶解温度为35℃,酶解时间2 h,pH为6.5。研究结果为蛋壳内膜酶解液应用于食品防腐奠定了理论基础,也为蛋壳内膜的充分利用提供了新思路。 展开更多
关键词 蛋壳内膜 酶解液 抑菌活性 中性蛋白酶
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香坊肠球菌和罗伊氏乳杆菌在无菌猪肠道中的定殖 被引量：1
7
作者 韩姗姗 杜梦璇 +4 位作者 刘畅 牛鹏霞 冯婕 张志刚 刘双江 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3981-3996,共16页
【背景】已有研究表明,微生物在宿主肠道中的定殖受宿主、肠道环境、微生物物种特性和菌株来源等多个因素的影响。一般认为,来源于同类宿主的微生物菌株,在该类宿主肠道中具有定殖优势,但缺乏在物种和菌株水平上研究微生物自身特性在宿... 【背景】已有研究表明,微生物在宿主肠道中的定殖受宿主、肠道环境、微生物物种特性和菌株来源等多个因素的影响。一般认为,来源于同类宿主的微生物菌株,在该类宿主肠道中具有定殖优势,但缺乏在物种和菌株水平上研究微生物自身特性在宿主肠道中定殖的研究报道。【目的】将不同来源(同类宿主肠道、非同类宿主肠道和非肠道环境)、具有不同生物学特性的3株香坊肠球菌(Enterococcus xiangfangensis)和4株罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)对无菌猪肠道进行定殖,在物种和菌株2个水平上探究物种特性和菌株来源对宿主肠道定殖的偏好性,揭示影响微生物定殖效率的关键因素。【方法】在本项研究中,将从藏猪(Tibetan pigs)、小鼠(ob/ob mice)、食蟹猴(Macaca fascicularis)和发酵食品中分离得到的多株香坊肠球菌和罗伊氏乳杆菌,制成混合菌剂对无菌巴马香猪(Bama miniature pig)进行为期4周的饲喂,并通过实时荧光定量PCR方法检测这7株菌在无菌猪肠道中的定殖情况。【结果】在物种水平上,香坊肠球菌和罗伊氏乳杆菌在无菌猪体内具有相近的定殖细胞数目。但是在菌株水平上,小鼠来源的香坊肠球菌(EX-MS)和罗伊氏乳杆菌(LR-MS)定殖的细胞数目显著高于其他5株菌,表明小鼠来源的菌株具有定殖优势。在体外混合培养中,将3株香坊肠球菌和4株罗伊氏乳杆菌分别等比例混合培养72 h后,发现香坊肠球菌EX-MS菌株的细胞数目高于香坊肠球菌EX-MK和EX-PG菌株;在罗伊氏乳杆菌中,4株菌的细胞数目相近。7株菌相互作用表明,EX-MS菌株对EX-MK和EX-PG菌株均有明显的抑制作用,但对4株罗伊氏乳杆菌无抑制作用。【结论】本次定殖实验的结果表明,在物种水平上,香坊肠球菌和罗伊氏乳杆菌均具有在无菌猪肠道中良好的定殖能力;但在菌株水平上,小鼠来源的香坊肠球菌EX-MS菌株和罗伊氏乳杆菌LR-MS菌株具有定殖优势;同时发现,小鼠来源的香坊肠球菌EX-MS菌株通过抑制同物种的EX-PG和EX-MK菌株,获得了在宿主肠道中的定殖优势。 展开更多
关键词 肠道微生物 香坊肠球菌 罗伊氏乳杆菌 无菌猪 定殖偏好性
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