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大数据及精准医疗背景下医学研究生所面临的挑战及对策
1
作者 杜珍武 孙昊炎 +2 位作者 石传楷 李庆宇 宋旸 《中国实验诊断学》 2023年第10期1250-1253,共4页
随着科技的迅猛发展和医学领域的不断创新,大数据和精准医疗正日益成为医学研究和临床实践的重要支柱。在这个新时代背景下,医学研究生不仅需要具备传统医学知识和技能,还需要应对大数据和精准医疗带来的挑战,并制定相应的对策,以适应... 随着科技的迅猛发展和医学领域的不断创新,大数据和精准医疗正日益成为医学研究和临床实践的重要支柱。在这个新时代背景下,医学研究生不仅需要具备传统医学知识和技能,还需要应对大数据和精准医疗带来的挑战,并制定相应的对策,以适应不断变化的医疗环境[1]。大数据的广泛应用为医学研究提供了丰富的数据资源和分析工具。医学研究生需要具备数据分析和解读的能力,能够从海量的数据中提取有价值的信息,为医学科研和临床决策提供支持[2]。 展开更多
关键词 精准医疗 医学研究生 临床决策 传统医学 大数据 医学领域 知识和技能 临床实践
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基于高通量测序肺腺癌个体化新抗原预测结果分析
2
作者 秦续元 周平平 +2 位作者 宋旸 杜珍武 张桂珍 《中国实验诊断学》 2023年第6期699-703,共5页
肿瘤新抗原(Tumor Neoantigen)又称为肿瘤特异性抗原,该抗原只在肿瘤细胞内表达而在正常细胞内不表达,并能被人白细胞分化抗原(HLA)I类分子识别、结合并递呈到肿瘤细胞表面,激活特异性T淋巴细胞,引发机体抗肿瘤免疫反应[1]。
关键词 肿瘤特异性抗原 抗肿瘤免疫反应 新抗原 递呈 肺腺癌 高通量测序 个体化 正常细胞
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应用凝胶成像分析系统定量测定DNA含量的检测范围 被引量：4
3
作者 杜珍武 王茜 +3 位作者 张玉成 吴玫 刘佳南 张桂珍 《中国体视学与图像分析》 2008年第4期264-267,共4页
目的探讨用凝胶成像分析系统进行DNA定量的DNA含量的检测范围。方法将已知含量的质粒DNA样本稀释成不同含量的DNA样本,进行琼脂糖凝胶电泳。利用凝胶成像系统进行观察及图像采集,并应用IMAGE J软件对DNA的电泳图谱进行灰度分析,用EXCEL... 目的探讨用凝胶成像分析系统进行DNA定量的DNA含量的检测范围。方法将已知含量的质粒DNA样本稀释成不同含量的DNA样本,进行琼脂糖凝胶电泳。利用凝胶成像系统进行观察及图像采集,并应用IMAGE J软件对DNA的电泳图谱进行灰度分析,用EXCEL软件对已知含量的DNA的灰度值与含量之间进行相关性分析,建立线性方程式。用上述线性方程式计算出样本的DNA含量。结果DNA灰度值与DNA含量之间呈正相关关系,但不成正比关系;DNA灰度值与DNA含量在一定范围内呈现良好的线性关系。通过所建立的线性关系式可以确定DNA含量的检测范围,在此范围内可较好地进行DNA的定量。结论通过建立DNA灰度值与DNA含量之间的良好线性关系,可以较好地确定凝胶成像分析系统进行DNA定量的DNA含量的检测范围。 展开更多
关键词 DNA含量 凝胶成像分析系统 灰度值 线性关系
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人白细胞介素12两个亚基基因p35、p40拼接的新方法
4
作者 杜珍武 齐熙明 +3 位作者 王茜 吴晓冬 杨绍娟 张桂珍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期309-313,共5页
目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人I... 目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人IL-12p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物,其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点,p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及KpnⅠ酶切位点。通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12p35与p40基因片段。利用KpnⅠ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切,酶切产物回收后利用T4DNA连接酶进行连接,应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增。利用KpnⅠ内切酶对连接产物进行酶切鉴定。将扩增的连接产物克隆入T载体,挑选阳性克隆并进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序。结果:通过PCR分别获得约1000bp大小的p40基因片段与600bp大小的p35基因片段,两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1600bp左右的拼接产物,采用KpnI内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1000和600bp大小的基因片段,分别与p40和p35基因片段大小一致。拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1600bp大小的酶切产物,拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致。结论:利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接。建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法,为进一步研究IL-12的生物学功能以及基因治疗提供实验基础。 展开更多
关键词 白细胞介素12 聚合酶链反应 基因拼接
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甲胎蛋白在肝癌细胞株的癌干细胞中的表达
5
作者 杜珍武 邸军 +4 位作者 盛春华 王茜 金正贤 张玉成 张桂珍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1895-1897,共3页
目的观察甲胎蛋白在肝癌细胞株的癌干细胞表达。方法利用肝癌细胞株HepG-2,采用细胞克隆法分离肝癌干细胞,倒置显微镜下采用细胞克隆形态鉴别肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。应用免疫细胞化学技术对所用的细胞克隆进行AFP的检测,同时以宫颈... 目的观察甲胎蛋白在肝癌细胞株的癌干细胞表达。方法利用肝癌细胞株HepG-2,采用细胞克隆法分离肝癌干细胞,倒置显微镜下采用细胞克隆形态鉴别肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。应用免疫细胞化学技术对所用的细胞克隆进行AFP的检测,同时以宫颈癌细胞株HeLa作为阴性对照。结果HepG-2细胞形成三种克隆形态,即Holoclones型、Meroclones型、Paraclones型,其中Holoclones型为少数,是肿瘤干细胞。免疫细胞化学技术显示,HepG-2细胞三种克隆AFP染色均为阳性,HeLa细胞AFP染色为阴性。结论肝癌细胞株HepG-2分离的癌干细胞表达AFP,为以AFP为靶点的肝癌肿瘤干细胞治疗提供了实验基础和理论依据。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 HEPG-2细胞 肝癌干细胞
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长春地区2051例女性人乳头瘤病毒检测基因类型及感染人群特征分析 被引量：2
6
作者 杜珍武 艾冬晴 +4 位作者 李智慧 李楠 马锦浩 张楚群 张桂珍 《中国体视学与图像分析》 2021年第4期346-354,共9页
目的观察人乳头瘤病毒在吉林省长春地区女性人群的感染状况及感染人群特征,为本地区HPV感染引发的疾病的防治提供理论依据。方法应用聚合酶链式反应(PCR)-膜斑点杂交技术对2020年10月至2021年11月在医院体检和就诊的2051例不同年龄的女... 目的观察人乳头瘤病毒在吉林省长春地区女性人群的感染状况及感染人群特征,为本地区HPV感染引发的疾病的防治提供理论依据。方法应用聚合酶链式反应(PCR)-膜斑点杂交技术对2020年10月至2021年11月在医院体检和就诊的2051例不同年龄的女性患者采集的宫颈脱落细胞标本进行6种低危型和15种高危型HPV检测。结果2051例受检者检出HPV阳性为329例,总阳性率为16.05%。检出20种HPV亚型,HPV42基因型未被检出,其中高危型为310例(占15.12%),低危型为19例(占0.93%)。高危HPV优势亚型阳性率居前5位的是HPV16(3.61%)、HPV52(2.93%)、HPV58(2.10%)、HPV53(1.76%)和HPV31(1.22%);单一HPV基因型别感染率为12.48%,双重感染率为2.09%,三重及以上感染率为0.54%。高危HPV阳性率最高是60岁以上人群(占21.54%),其次为15~30年龄段人群(占19.33%)。结论长春地区女性HPV感染率低于国内平均感染率,感染HPV以单一型别感染为主,其中高危型HPV16、52及58亚型为主要感染型别;感染年龄段以60岁以上人群及年轻人(小于30岁)为主,需要针对不同年龄段易感人群定期进行HPV核酸检测及基因分型筛查。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 基因分型 流行性
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巨噬细胞的肿瘤组织浸润及抗肿瘤功能抑制
7
作者 杜珍武 侯志富 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期450-452,共3页
关键词 肿瘤浸润 巨噬细胞 抗肿瘤功能抑制 促肿瘤生长
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Se、VE、V、Cr对1型糖尿病小鼠脾脏细胞因子抗原表达的影响 被引量：11
8
作者 张桂珍 刘霆 +3 位作者 高申 郑德明 卜丽莎 杜珍武 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期412-415,共4页
目的 :　研究 1型糖尿病 (T1 DM)与脾脏淋巴细胞亚群及其表达细胞因子种类的关系及微量营养素拮抗 T1 DM作用。方法 :　应用链脲佐菌素 (STZ)小剂量 ,多次注射方法复制T1 DM小鼠模型 ,分别联合添加一定剂量的硒 (Se)、维生素 E(VE)、铬 ... 目的 :　研究 1型糖尿病 (T1 DM)与脾脏淋巴细胞亚群及其表达细胞因子种类的关系及微量营养素拮抗 T1 DM作用。方法 :　应用链脲佐菌素 (STZ)小剂量 ,多次注射方法复制T1 DM小鼠模型 ,分别联合添加一定剂量的硒 (Se)、维生素 E(VE)、铬 (Cr)、钒 (V) ,应用流式细胞术检测脾脏 CD4、CD8、肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)、干扰素 - γ(IFN- γ)、白介素 - 4(IL- 4)、白介素 - 1 0(IL- 1 0 )阳性淋巴细胞百分比及活性氧产量。结果 :　T1 DM模型组小鼠脾脏 CD8阳性细胞百分比降低 ,活性氧产生量增加 ,联合补充 Se、VE、Cr、V明显提高了脾脏 CD8淋巴细胞数目 ,降低了脾组织活性氧含量和升高的血糖水平 ,但脾脏淋巴细胞表达细胞因子的种类各组间无统计学意义。结论 :　微量营养素分别通过抗氧化和免疫调节机制对 T1 DM时脾脏淋巴细胞抗原表达进行调控 ,对 T1 展开更多
关键词 1型糖尿病 微量营养素 脾脏 细胞因子
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早期监测血浆降钙素原水平对感染性休克预后判断及抗生素治疗的指导意义 被引量：15
9
作者 王永杰 邬志强 +2 位作者 奇铁男 孙英霞 杜珍武 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2934-2935,共2页
早期经验性抗生素治疗是感染性休克集束化治疗的重要组成部分，同时，抗生素选择也是治疗的难点。近期抗生素暴露、多重耐药菌的传播以及多种合并疾病的存在增加了抗生素选择的压力。而早期抗生素选择的失误严重影响预后。
关键词 降钙素原 感染性休克 预后
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环巴胺诱导大肠癌Caco-2细胞凋亡效应和线粒体蛋白质组学研究 被引量：6
10
作者 代恩勇 张桂珍 +3 位作者 卢振霞 杜珍武 白鹭鹭 孟令俊 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期407-412,共6页
目的:探讨环巴胺对大肠癌Caco-2细胞的促凋亡效应,在线粒体蛋白水平阐明其作用机制。方法:取对数生长期大肠癌Caco-2细胞分为环巴胺处理组及阴性对照组,以5、10、20和40μmol.L-1环巴胺处理Caco-2细胞,分别应用MTS法及流式细胞术测定Cac... 目的:探讨环巴胺对大肠癌Caco-2细胞的促凋亡效应,在线粒体蛋白水平阐明其作用机制。方法:取对数生长期大肠癌Caco-2细胞分为环巴胺处理组及阴性对照组,以5、10、20和40μmol.L-1环巴胺处理Caco-2细胞,分别应用MTS法及流式细胞术测定Caco-2细胞生长抑制率及凋亡率,采用nano LC-ESI-MS方法检测环巴胺处理组与阴性对照组细胞线粒体蛋白质组学差异。结果:环巴胺处理组Caco-2细胞分别经10、20和40μmol.L-1环巴胺作用24、48和72 h后,生长抑制率(分别为23.1%±1.8%,46.2±0.9%,53.4±2.3%;45.1%±2.8%,73.0%±2.5%,81.2%±1.6%;59.7±2.3%,87.5±1.4%,91±1.06%)明显高于阴性对照组(1.8%±0.2%,2.5%±0.1%,3.7%±0.3%)(P<0.01);经5、10、20和40μmol.L-1环巴胺作用于Caco-2细胞48 h后,细胞凋亡率分别为24.1%±1.3%、31.7%±1.6%、50.5%±2.3%和64.0%±1.9%,明显高于阴性对照组(14.4%±0.7%)(P<0.01)。蛋白质组学差异分析,环巴胺作用后,Caco-2细胞线粒体共有32种蛋白表达下调,25种蛋白表达上升,这些蛋白功能主要涉及细胞凋亡、细胞骨架、核酸、核糖体及蛋白质代谢等,其中与凋亡关系密切的蛋白包括ATF6、Clusterin、OPA1、RGD1565411和Cofilin。结论:环巴胺通过阻断Hedgehog(HH)通路,抑制大肠癌Caco-2细胞增殖,其机制与促进细胞凋亡有关;环巴胺可明显改变Caco-2细胞线粒体蛋白表达,其差异与凋亡关系密切。 展开更多
关键词 环巴胺 HEDGEHOG通路 大肠肿瘤 蛋白质组学
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糖尿病患者合并阴道炎189例病原体分析 被引量：9
11
作者 李劲然 李威 +1 位作者 杜珍武 贾玉玺 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期498-499,共2页
糖尿病(DM)是中老年常见的内分泌代谢疾病之一,近年来发病率呈上升趋势。既往研究表明DM患者合并念珠菌性阴道炎的发病率高达46%〔1〕,为进一步探讨DM与阴道炎的相关性,本研究对中老年女性患者阴道分泌物进行常规涂片及培养,并就其临床... 糖尿病(DM)是中老年常见的内分泌代谢疾病之一,近年来发病率呈上升趋势。既往研究表明DM患者合并念珠菌性阴道炎的发病率高达46%〔1〕,为进一步探讨DM与阴道炎的相关性,本研究对中老年女性患者阴道分泌物进行常规涂片及培养,并就其临床意义进行对比分析。1临床资料1.1研究对象352例阴道炎均为我院门诊患者,其中DM组189例,20~40岁86例(青年组)。 展开更多
关键词 糖尿病 阴道炎 病原体
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IL-24重组载体的构建及其联合化疗药物对SKOV3细胞中TUBB3与ERCC-1基因表达的影响 被引量：4
12
作者 祝贺 杜珍武 +2 位作者 范丽梅 高海成 崔满华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期927-931,共5页
通过基因重组技术将白介素24(IL-24)基因片段分别克隆成pc DNA3.0-OSP-1-IL-24和pc DNA3.0-IL-24载体,利用逆转录PCR(RT-PCR)测定2种载体的表达.将2种化疗药物紫杉醇(PTX)与顺铂(DDP)分别作用于正常SKOV3细胞及pc DNA3.0,pc DNA3.0-IL-2... 通过基因重组技术将白介素24(IL-24)基因片段分别克隆成pc DNA3.0-OSP-1-IL-24和pc DNA3.0-IL-24载体,利用逆转录PCR(RT-PCR)测定2种载体的表达.将2种化疗药物紫杉醇(PTX)与顺铂(DDP)分别作用于正常SKOV3细胞及pc DNA3.0,pc DNA3.0-IL-24,pc DNA3.0-OSP-1和pc DNA3.0-OSP-1-IL-24稳定转染SKOV3细胞(卵巢癌细胞株),通过噻唑蓝(MTT)法检测化疗药物联合IL-24基因对细胞的杀伤效果及细胞的增殖能力,应用实时荧光定量PCR技术检测人β-微管蛋白3(TUBB3)与核苷酸切除修复交叉互补基因位1(ERCC1)基因在各组细胞中的表达.RT-PCR检测结果显示,通过基因重组技术克隆了pc DNA3.0-IL-24与pc DNA3.0-OSP-1-IL-24载体,IL-24基因能提高SKOV3细胞对化疗药物顺铂和紫杉醇的敏感性.其联合化疗药物对肿瘤药物的IC50值分别下降了10倍和6倍,TUBB3和ERCC1基因在IL-24基因转染的SKOV3细胞内的表达水平与在正常SKOV3细胞内相比,分别下降4倍和10倍多.上述结果表明,IL-24联合化疗药物可明显下调TUBB3与ERCC1基因的表达,该实验为临床治疗卵巢癌提供了重要的理论依据. 展开更多
关键词 IL-24基因 顺铂 紫杉醇 SKOV3细胞
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分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及鉴定 被引量：3
13
作者 张玉成 杜珍武 +3 位作者 王雅丽 卜丽莎 吕俊峰 张桂珍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期354-356,共3页
目的:构建分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,为研究DCN的生物学功能奠定基础。方法:利用特异性引物,应用PCR技术扩增DCN全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及... 目的:构建分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,为研究DCN的生物学功能奠定基础。方法:利用特异性引物,应用PCR技术扩增DCN全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体。结果:获得了约1080bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型DCNcDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中。结论:成功克隆了分泌型DCNcDNA,并且构建了真核表达载体pcDNA3.1-DCN。 展开更多
关键词 核心蛋白聚糖 聚合酶链反应 克隆 基因表达
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人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定 被引量：3
14
作者 王玲玲 马峰 +2 位作者 张玉成 杜珍武 张桂珍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1215-1216,共2页
目的对人皮肤成纤维细胞进行分离、纯化、培养及细胞鉴定,探讨一种高效的分离及纯化方法,为细胞移植提供种子细胞。方法使用酶消化法原代提取人成纤维细胞,快速贴壁法纯化细胞,对细胞进行形态学观察、HE染色,免疫细胞化学鉴定细胞标志物... 目的对人皮肤成纤维细胞进行分离、纯化、培养及细胞鉴定,探讨一种高效的分离及纯化方法,为细胞移植提供种子细胞。方法使用酶消化法原代提取人成纤维细胞,快速贴壁法纯化细胞,对细胞进行形态学观察、HE染色,免疫细胞化学鉴定细胞标志物Vimentin。结果利用倒置显微镜及HE染色,可见细胞为散在分布的梭形贴壁细胞,当细胞汇流时,呈鱼群样或漩涡状排列,且细胞在15代内形态保持不变。结论成功地发现快速提取成人成纤维细胞的方法,为成人自体细胞移植的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人成纤维细胞 细胞分离 培养 鉴定
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家蚕素Ⅱ基因在293FT细胞中的表达 被引量：3
15
作者 李洪霞 杜珍武 +2 位作者 张玉成 李治坤 张桂珍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期634-636,共3页
目的探讨家蚕素Ⅱ(BombyxinⅡ)基因在293FT细胞中的表达。方法应用脂质体将携带具有6个组氨酸标签的家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体与携带β半乳糖苷酶基因的真核表达载体共同导入293FT细胞。采用β半乳糖苷酶细胞原位染色检测β半乳糖苷... 目的探讨家蚕素Ⅱ(BombyxinⅡ)基因在293FT细胞中的表达。方法应用脂质体将携带具有6个组氨酸标签的家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体与携带β半乳糖苷酶基因的真核表达载体共同导入293FT细胞。采用β半乳糖苷酶细胞原位染色检测β半乳糖苷酶基因在细胞内的表达,从而判断基因的细胞转染效率;应用逆转录PCR方法检测家蚕素Ⅱ基因在细胞内mRNA水平的表达;应用免疫组织化学方法检测6个组氨酸标签蛋白在细胞内的表达,从而间接判断家蚕素Ⅱ基因在蛋白水平表达情况。结果β半乳糖苷酶原位染色显示基因转染组可见到染成蓝色的细胞,正常未转染组未见到蓝色细胞;逆转录PCR结果显示只有转染携带家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体的293FT细胞中可检测到家蚕素Ⅱ基因表达;免疫组化结果显示只有转染携带家蚕素Ⅱ基因的真核表达载体的293FT细胞中可见到染成棕黄色的细胞颗粒。结论通过基因转染技术,成功使家蚕素Ⅱ基因在293FT细胞得以表达,为进一步研究其降血糖生物活性奠定实验基础。 展开更多
关键词 家蚕素基因Ⅱ 基因表达 293FT细胞
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重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞周期、凋亡以及P21表达的影响 被引量：2
16
作者 张玉成 王雅丽 +3 位作者 杜珍武 赵虹 吕俊峰 张桂珍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期241-243,共3页
目的将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体转染到HepG2中并检测其表达同时研究其抗肿瘤作用的机制。方法脂质体介导分泌型DCN真核表达载体转染HepG2细胞,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR、免疫组化检测其表达... 目的将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体转染到HepG2中并检测其表达同时研究其抗肿瘤作用的机制。方法脂质体介导分泌型DCN真核表达载体转染HepG2细胞,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR、免疫组化检测其表达。MTT检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR方法检测P21WAF1/CIP1mRNA表达情况。结果RT-PCR可见转染组细胞DCN mRNA表达明显增多,免疫组化可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。细胞生长曲线显示转染组细胞生长缓慢;G1期细胞显著增多;P21WAF1/CIP1mRNA表达增高。结论本研究成功建立稳定转染DCN的HepG2细胞株,证实DCN通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和提高P21WAF1/CIP1蛋白抑制HepG2的生长。 展开更多
关键词 核心蛋白聚糖 P21^WAF1/CIP1 细胞周期 转染 HEPG2
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CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达 被引量：2
17
作者 王晓峰 周翔宇 +3 位作者 张桂珍 王伟 杜珍武 张天夫 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期498-502,I0001,共6页
目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人... 目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。 展开更多
关键词 CD133启动子 加强型绿色荧光蛋白 肿瘤干细胞 HEP-2细胞系
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抗氧化微量营养素对T1DM小鼠胰岛细胞保护作用的超微结构研究 被引量：2
18
作者 朴松兰 张桂珍 +3 位作者 杜珍武 吴玫 常颖 孙英 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期136-139,共4页
目的探讨联合抗氧化微量营养素(antioxidant micronutrients,AM)对胰岛β细胞超微结构的保护作用。方法应用多低剂量链脲佐菌素法(multipe low dosage of streptozotocin,MLDS)方法制备T1DM(type 1 diabetes mellitus)小鼠模型,分别联... 目的探讨联合抗氧化微量营养素(antioxidant micronutrients,AM)对胰岛β细胞超微结构的保护作用。方法应用多低剂量链脲佐菌素法(multipe low dosage of streptozotocin,MLDS)方法制备T1DM(type 1 diabetes mellitus)小鼠模型,分别联合添加4种AM[硒(Se)+维生素E(VE)+钒(V)+铬(Cr)]和7种AM(Se+VE+V+Cr+VC+硫辛酸+烟酰胺)进行干预,观察胰岛β细胞超微结构的变化。结果联合补充AM使T1DM小鼠血糖明显降低;T1DM模型组胰岛β细胞及内分泌颗粒数量减少,内质网明显扩张囊泡变,部分线粒体发生肿胀变性;AM4、AM7组小鼠胰岛β细胞超微结构完好,胞浆内胰岛素分泌颗粒数量明显增多于T1DM模型组小鼠。结论联合AM对T1DM模型小鼠胰岛β细胞超微结构具有良好的保护作用。 展开更多
关键词 1型糖尿病 抗氧化微量营养素 胰岛Β细胞 超微结构
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结肠癌细胞总RNA电穿孔法体外转染成熟树突状细胞 被引量：2
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作者 杨蕾 霍锐 +3 位作者 卜丽梅 杜珍武 邸军 张桂珍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期271-275,共5页
目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素... 目的:探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞(mDCs)的转染效率及对树突状细胞(DCs)特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法:用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞(imDCs),肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)作用24h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA,电穿孔法将总RNA转染mDCs,设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果:rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性,CD80弱阳性,CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高(P<0.01),而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白,电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。 展开更多
关键词 树突细胞 电穿孔 RNA
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四环素基因表达调控系统调控β-半乳糖苷酶基因在肝癌细胞中的表达 被引量：2
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作者 王茜 杜珍武 +1 位作者 卜丽莎 张桂珍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期304-308,共5页
目的:构建调控β-半乳糖苷酶(β-gal)基因表达的四环素基因表达调控载体,验证其在肝癌细胞内调控β-半乳糖苷酶基因的表达,为进一步利用该调控系统调控治疗基因治疗肝癌奠定实验基础。方法:根据2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因与pcD... 目的:构建调控β-半乳糖苷酶(β-gal)基因表达的四环素基因表达调控载体,验证其在肝癌细胞内调控β-半乳糖苷酶基因的表达,为进一步利用该调控系统调控治疗基因治疗肝癌奠定实验基础。方法:根据2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因与pcDNA3.1载体的基因核苷酸序列,设计引物,以pcDNA3.1载体为模板进行PCR。将具有串联2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因的PCR产物连接入pcDNA3.1载体CMV启动子下游,构建成pcDNA3.1-TetO2载体,应用ABI3130测序仪利用pcDNA3.1-TetO2载体对TetO2PCR产物进行测序分析。再将β-gal克隆入pcDNA3.1-TetO2载体,构建成受四环素调控表达的β-半乳糖苷酶基因的表达载体pcDNA3.1-TetO2-β-gal。利用脂质体将携带四环素调控子基因(TR)的pcDNA6/TR载体转染到肝癌细胞HepG2中,利用杀稻瘟菌素进行细胞转染的稳定筛选,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TR基因在HepG2细胞内的表达。将pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体转染到稳定表达pcDNA6/TR的HepG2细胞中,转染3～4d后,给予强力霉素(4mg.L-1),利用β半乳糖苷酶原位染色试剂盒染色,检测β-半乳糖苷酶基因的表达。结果:构建的pcDNA3.1-TetO2载体测序结果表明,串联2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因片段插入到pcDNA3.1载体CMV启动子基因下游。pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体酶切鉴定结果表明,β-gal成功地克隆入pcDNA3.1-TetO2载体。RT-PCR结果显示,TR基因在pcDNA6/TR转染的经杀稻瘟菌素筛选的HepG2细胞内得到稳定表达。给予强力霉素后,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内得以表达;而未给予强力霉素,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内表达受到抑制。结论:成功地构建了调控β-半乳糖苷酶基因表达的四环素基因表达调控载体,利用该载体成功地调控了β-半乳糖苷酶基因在HepG2细胞内的表达。 展开更多
关键词 四环素 基因表达调控 Β-半乳糖苷酶基因 HEPG2细胞
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