目的:研究H1N1型流感病毒神经氨酸酶(NA)在原核系统中的表达、纯化方法及其免疫原性。方法:构建了大肠杆菌表达载体pET22b-NA,并转化了大肠杆菌BL21(DE3);通过SP-Sepharose Fast Flow柱对重组NA进行分离纯化,并用Sephadex G-25柱对SP柱...目的:研究H1N1型流感病毒神经氨酸酶(NA)在原核系统中的表达、纯化方法及其免疫原性。方法:构建了大肠杆菌表达载体pET22b-NA,并转化了大肠杆菌BL21(DE3);通过SP-Sepharose Fast Flow柱对重组NA进行分离纯化,并用Sephadex G-25柱对SP柱后获得的NA进行柱上复性;用不同剂量的重组NA免疫BALB/c小鼠,并检测其诱导产生的抗体滴度。结果:大肠杆菌表达的NA以包涵体形式存在,通过分离及柱上复性,纯化得到重组NA;NA抗原的免疫原性是剂量依赖的,随着剂量的增加,其免疫原性相应增强,3次免疫后,3μg NA诱导小鼠产生的抗体滴度最高,为1∶7000。结论:大肠杆菌表达的NA具有一定的诱导小鼠产生针对天然NA的抗体的能力,为流感病毒基因工程疫苗研究提供了初步线索。展开更多
文摘目的:研究H1N1型流感病毒神经氨酸酶(NA)在原核系统中的表达、纯化方法及其免疫原性。方法:构建了大肠杆菌表达载体pET22b-NA,并转化了大肠杆菌BL21(DE3);通过SP-Sepharose Fast Flow柱对重组NA进行分离纯化,并用Sephadex G-25柱对SP柱后获得的NA进行柱上复性;用不同剂量的重组NA免疫BALB/c小鼠,并检测其诱导产生的抗体滴度。结果:大肠杆菌表达的NA以包涵体形式存在,通过分离及柱上复性,纯化得到重组NA;NA抗原的免疫原性是剂量依赖的,随着剂量的增加,其免疫原性相应增强,3次免疫后,3μg NA诱导小鼠产生的抗体滴度最高,为1∶7000。结论:大肠杆菌表达的NA具有一定的诱导小鼠产生针对天然NA的抗体的能力,为流感病毒基因工程疫苗研究提供了初步线索。
