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脾虚证模型大鼠血浆中β-EP、CGRP、NPY含量的变化 被引量:12
1
作者 杨孝朴 魏彦明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期85-87,共3页
为了阐明脾虚证模型大鼠血浆中β-endorphin,β-EP)、降钙素基因相关肽(calctonin gene related peptide,CGRP)和神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)变化规律和健脾益气方剂四君子汤对其的调节作用以及对脾虚证病理过程的保护机制,应用利血平... 为了阐明脾虚证模型大鼠血浆中β-endorphin,β-EP)、降钙素基因相关肽(calctonin gene related peptide,CGRP)和神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)变化规律和健脾益气方剂四君子汤对其的调节作用以及对脾虚证病理过程的保护机制,应用利血平复制出脾虚证大鼠模型,以特异性放射免疫分析法检测了血浆β-EP、CGRP和NPY的含量变化。结果显示,脾虚证模型大鼠血浆β-EP、CGRP比对照组显著升高(P<0.01),NPY比对照组显著降低(P<0.01),接近对照组水平。提示脾虚证的病理变化过程与β-EP、CGRP、NPY等神经肽类的失衡有一定的相关性,健脾益气方剂四君子汤对脾虚证模型大鼠血浆内β-EP、CGRP和NPY含量变化有较好的调节作用,推测这也许是四君子汤健脾益气能够治疗脾虚证的作用机制之一。 展开更多
关键词 脾虚证 Β-EP CGRP NPY 四君子汤
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甜菜果胶粘度特性的研究 被引量:4
2
作者 杨孝朴 史琦云 文奋武 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第1期71-76,共6页
本文比较了甜菜果胶和丹麦标准化果胶在不同浓度和不同pH条件下的粘度,并探索了三价阳离子、二价阳离子及柠檬酸和二价阳离子对甜菜果胶粘度的影响。在pH3.0条件下,果胶浓度小于0.5%时,甜菜果胶与丹麦标准化果胶的粘度值... 本文比较了甜菜果胶和丹麦标准化果胶在不同浓度和不同pH条件下的粘度,并探索了三价阳离子、二价阳离子及柠檬酸和二价阳离子对甜菜果胶粘度的影响。在pH3.0条件下,果胶浓度小于0.5%时,甜菜果胶与丹麦标准化果胶的粘度值基本相同;果胶浓度大于0.5%时,丹麦标准化果胶的粘度值高于甜菜果胶的粘度值。在果胶浓度为0.5%条件下,pH2.5~3.0时,甜菜果胶和丹麦标准化果胶的粘度值相同;在pH3.5~4.5时,甜菜果胶的粘度值明显高于丹麦标准化果胶的粘度值。三价阳离子中适量的Al ̄(+3)和二价阳离子中适量的Zn ̄(+2)等可提高甜菜果胶的粘度值。但过量的阳离子可使甜菜果胶的粘度值降低。 展开更多
关键词 甜菜果胶 粘度 浓度 PH值
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甜菜颗粒干粕与甜菜渣提取果胶的比较研究 被引量:3
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作者 杨孝朴 文奋武 +1 位作者 张小玲 赵连彪 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第4期361-367,共7页
分别以甜菜颗粒干粕和甜菜渣为原料,采用酸法萃取,乙醇沉淀工艺提取果胶。在相同的条件下,甜菜颗粒干粕的果胶产量比甜菜渣的果胶产量高28.7%~42.8%,甜菜颗粒干粕提取果胶的最高产量比甜菜渣提取果胶的最高产量高23%... 分别以甜菜颗粒干粕和甜菜渣为原料,采用酸法萃取,乙醇沉淀工艺提取果胶。在相同的条件下,甜菜颗粒干粕的果胶产量比甜菜渣的果胶产量高28.7%~42.8%,甜菜颗粒干粕提取果胶的最高产量比甜菜渣提取果胶的最高产量高23%,产品的各项质量指标均与甜菜渣提取的果胶相近。甜菜颗粒干粕提取果胶的最佳萃取条件为:pH1.5、温度80%℃、时间6h,较甜菜渣提取果胶的最佳萃取条件(pH1.5、温度85℃、时间6~8h[1])温和,而且产品色泽明显好于甜菜渣提取的果胶。 展开更多
关键词 甜菜 颗粒干粕 甜菜渣 果胶 酸法萃取
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甜菜渣提取果胶的研究(二)—酸法萃取、铝盐沉淀工艺 被引量:5
4
作者 杨孝朴 文奋武 张小玲 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第3期276-281,共6页
经甜菜渣为原料,采用酸法萃取,铝盐沉淀工艺提取果胶。在料水比为1∶18,萃取液中果胶含量为1.2%左右时,铝盐的用量为10%,Al2(SO4)3液与萃取液的比例是7∶100,最佳pH值为4.4~4.7。脱铝剂的组成为... 经甜菜渣为原料,采用酸法萃取,铝盐沉淀工艺提取果胶。在料水比为1∶18,萃取液中果胶含量为1.2%左右时,铝盐的用量为10%,Al2(SO4)3液与萃取液的比例是7∶100,最佳pH值为4.4~4.7。脱铝剂的组成为95%乙醇∶水∶浓盐酸为8∶1.5∶0.5。并用此工艺和参数进行了kg级放大实验,得率为22%(果胶/甜菜渣),产品中半乳糖醛酸含量68.33%,脂化度65.97%。产品经化学定量分析无Al+++残存,除胶凝度尚需进一步讨论之外。 展开更多
关键词 甜菜渣 果胶 铝盐沉淀
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空肠弯曲菌质粒与其生物学特性的关系 被引量:1
5
作者 杨孝朴 吴润 朱利 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第12期54-59,共6页
对不同来源的空肠弯曲菌的质粒及其与菌株来源、生物型、致病性和耐药性的关系进行了研究。共检出大小分别为 1.9、2 .3、2 .6、5 .6、12 .6、33.0、82 .0和 10 8.0kb的 8种CCC型质粒 ,构成 7种质粒谱型。健康鸡源菌的质粒阳性率为 0 ;... 对不同来源的空肠弯曲菌的质粒及其与菌株来源、生物型、致病性和耐药性的关系进行了研究。共检出大小分别为 1.9、2 .3、2 .6、5 .6、12 .6、33.0、82 .0和 10 8.0kb的 8种CCC型质粒 ,构成 7种质粒谱型。健康鸡源菌的质粒阳性率为 0 ;患病鸡源菌为 1.96 % ;患病猪源菌为 4 5 .8% ;健康羔羊源菌为 0 ;患病人源菌为 0。空肠弯曲菌的质粒用EcoRⅠ酶切后 ,1.9和 2 .3kb质粒的酶切谱随菌株来源的不同而异 ,其他 6种质粒的酶切谱没有差异。统计分析表明 ,空肠弯曲菌质粒的质粒谱型和酶切谱型与菌株来源、Lior生物型、致病性相关 (P <0 .0 0 1) ;也与对链霉素 (P <0 .0 0 1)、萘啶酸 (P <0 .0 5 )的耐药性相关 ;空肠弯曲菌对链霉素的耐药性与 2 .3kb的质粒有关 (P<0 .0 5 )。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 质粒 质粒谱型 酶切谱 生物学特性
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空肠弯曲菌质粒DNA提取条件的优化 被引量:1
6
作者 杨孝朴 吴润 朱利 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期462-466,共5页
在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0~12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min... 在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0~12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min。在该条件下用该方法提取了219株不同畜禽来源的空肠弯曲菌质粒DNA,质粒阳性率为10.96%,最大质粒DNA108kb,最小质粒DNA1.9kb。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 质粒DNA 提取
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动物科学类硕士研究生高级生物化学教学实践与思考 被引量:5
7
作者 杨孝朴 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2000年第1期105-107,共3页
在高等农业院校动物科学类硕士研究生高级生物化学教学中,调整充实教学内容,形成完整的现代生物化学知识结构体系;改革教学方法,优化课堂教学结构;重视实验课教学,加强研究能力培养,以达到开发学生智慧,培养学生能力的目的。
关键词 生物化学 硕士研究生 动物科学类 课程教学
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牦牛CYGB基因CDS区克隆与生物信息学分析 被引量:27
8
作者 孙雪婧 杜晓华 +2 位作者 杨孝朴 罗玉柱 刘霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期2690-2698,共9页
【目的】丰富牦牛CYGB基因研究的基础数据,对牦牛CYGB基因的CDS区进行克隆和生物信息学分析。【方法】提取牦牛大脑海马区组织的总RNA并运用RT-PCR技术反转录为cDNA,并根据GenBank中普通牛CYGB基因cDNA序列(GenBank登录号:DV874786.1),... 【目的】丰富牦牛CYGB基因研究的基础数据,对牦牛CYGB基因的CDS区进行克隆和生物信息学分析。【方法】提取牦牛大脑海马区组织的总RNA并运用RT-PCR技术反转录为cDNA,并根据GenBank中普通牛CYGB基因cDNA序列(GenBank登录号:DV874786.1),使用Primer3.0在线软件设计特异性引物,运用PCR扩增技术、TA克隆技术和核酸测序技术获得CYGB基因的完整CDS区序列及部分5′端和3′端UTR区,并使用ProtParam、PredictProtein、SWISS-MODEL等在线分析软件与Lasergene7.1软件包分析CYGB的一级结构、二级结构、三级结构与理化性质,并进行同源性分析及构建系统进化树;利用PyMol软件修饰并输出三维结构;使用在线亚细胞定位工具PSORT II Prediction预测蛋白质的亚细胞定位;使用Protfun软件对蛋白质的功能进行预测分析。【结果】克隆获得牦牛CYGB基因650 bp,包括CDS区573 bp(GenBank登录号:KF669898),碱基组成为A 20.59%、T 16.40%、G 33.33%、C 29.67%,编码190个氨基酸残基组成的蛋白质。与普通牛比对,牦牛CYGB基因在CDS区存在4个碱基突变,同源性为99.3%,这个突变未导致氨基酸序列的改变,4个突变均属同义突变。牦牛CYGB基因编码蛋白的分子式为C964H1513N263O278S7,分子量约为21.5 kD,理论等电点(pI)为6.32,消光系数为24075,不稳定系数为48.43,疏水指数为83.63,平均亲水性为-0.301,属不稳定可溶性酸性蛋白质,在哺乳动物网织红细胞内的半衰期为30 h。二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,其中α-螺旋占64.21%,无规卷曲占35.79%,属全α类蛋白质。三级结构是一个呈"three-over-three"三明治夹心型的α-螺旋折叠结构。亚细胞定位CYGB分布在细胞质(65.2%)、细胞核(17.4%)、线粒体(13.0%)、分泌系统的囊泡(4.3%)中,主要在细胞质,推测可能在能量代谢和辅因子的生物合成过程中发挥信号转导和转录因子调控的作用。牦牛CYGB氨基酸序列与普通牛、绵羊、家犬、小鼠、褐家鼠、原鸡、猴、黑猩猩、人的CYGB氨基酸序列的同源性分别为100%、98.9%、97.8%、95.3%、93.7%、78.8%、98.4%、95.8%和96.8%,物种之间同源性较高,系统进化情况与其亲缘关系远近一致,说明CYGB基因编码区在进化过程中比较保守。【结论】通过RT-PCR与TA克隆技术及核酸测序技术获得了牦牛CYGB基因全长573 bp的CDS区,并对其核苷酸序列和编码蛋白氨基酸序列及其蛋白结构和功能进行了分析,得知牦牛的CYGB是一个由190个氨基酸残基构成的可溶酸性蛋白质,在能量代谢和辅因子生物合成过程中发挥重要作用。CYGB基因编码区在长期生物进化过程中具有较强的保守性。该基因的成功克隆及分析为揭示牦牛CYGB基因的遗传特性提供了理论依据。 展开更多
关键词 牦牛 胞红蛋白 基因克隆 生物信息学
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实验性脾虚证大鼠血浆胃泌素和胃动素含量变化及四君子汤对其调整作用 被引量:30
9
作者 魏彦明 宗瑞谦 杨孝朴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期281-283,共3页
通过大鼠肌肉注射利血平的方法复制了脾虚证动物模型 ,并应用四君子汤治疗以反证 ,研究了脾虚证大鼠血浆胃泌素 ( GAS)和胃动素 ( MOT)的含量变化。结果表明 ,脾虚证大鼠血浆 GAS和 MOT含量显著降低 ,与对照组和四君子汤治疗组比较差异... 通过大鼠肌肉注射利血平的方法复制了脾虚证动物模型 ,并应用四君子汤治疗以反证 ,研究了脾虚证大鼠血浆胃泌素 ( GAS)和胃动素 ( MOT)的含量变化。结果表明 ,脾虚证大鼠血浆 GAS和 MOT含量显著降低 ,与对照组和四君子汤治疗组比较差异极显著 ( P<0 .0 1 ) ,对照组与四君子汤治疗组之间 GAS和 MOT的变化无明显差异 ( P>0 .0 5) ;脾虚时的消化吸收机能障碍和胃肠动力学的改变与 GAS和 MOT的分泌减少密切相关 ;四君子汤能够提高血浆 GAS和 MOT含量 ,有效地改善脾虚证的胃肠功能。 展开更多
关键词 四君子汤 胃泌素 胃动素 实验性脾虚证大鼠 血浆 含量变化
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12种中草药对8种畜禽肠道病原菌的体外抑菌试验(简报) 被引量:21
10
作者 陈虹 刘磊 +1 位作者 吴润 杨孝朴 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期26-30,共5页
采用平板打孔法和改良的试管二倍稀释法分别测定了12种中草药水提物对8种畜禽肠道病原菌的抑菌直径和最小抑菌浓度(MIC).结果表明:12种中草药水提物对8种供试菌既有不同的抑菌谱,又有不同的抑菌效果,抑菌圈的大小与MIC值存在一定的平行... 采用平板打孔法和改良的试管二倍稀释法分别测定了12种中草药水提物对8种畜禽肠道病原菌的抑菌直径和最小抑菌浓度(MIC).结果表明:12种中草药水提物对8种供试菌既有不同的抑菌谱,又有不同的抑菌效果,抑菌圈的大小与MIC值存在一定的平行关系.其中,对8种畜禽肠道病原菌(大肠杆菌O2、O139、O8、O78、鸡白痢沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌)抑菌直径最大的分别为黄芩、乌梅、黄芩、艾叶、乌梅、黄芩、乌梅、乌梅;对上述8种病原菌抑菌效果最好(MIC最小)的分别为五倍子和诃子;五倍子;五倍子和黄芩;石榴皮、五倍子、黄芩、黄连和艾叶;黄芩和黄连;黄芩;石榴皮和五倍子;五倍子和黄芩. 展开更多
关键词 中草药 水提物 抑菌作用 抑菌直径 最小抑菌浓度
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鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达 被引量:12
11
作者 龚婷 杨孝朴 +3 位作者 李银聚 张春杰 吴庭才 程相朝 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-14,40,共5页
根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核... 根据已发表的鸡白介素-2(ChIL-2)cDNA编码基因序列设计3条引物,利用RT-PCR技术从经诱导的卢氏鸡胚脾淋巴细胞中扩增出429 bp的ChIL-2全长基因cDNA和363 bp去除信号肽的ChIL-2基因cDNA.将ChIL-2全长和去信号肽的基因cDNA分别克隆到原核表达载体pET28a(+),构建原核重组表达质粒pET28a-IL-2和pET28a-△SIL-2,并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,在22 ku和18 ku处有2条清晰的蛋白带,相同条件下pET28a-△SIL-2表达量较高.RNAstructure软件分析表明,pET28a-IL-2的mRNA5′端序列形成了复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,证明信号肽序列的存在对ChIL-2基因在原核细胞中的表达有一定的影响. 展开更多
关键词 细胞白介素 IL-2基因 信号肽 原核表达 MRNA二级结构
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甜菜渣提取果胶的研究——酸法萃取、乙醇沉淀工艺 被引量:11
12
作者 文奋武 杨孝朴 +1 位作者 张小玲 赵连彪 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期142-148,共7页
以甜菜渣为原料,采用酸法萃取、乙醇沉淀工艺提取果胶.首先通过正交实验[L9(34)]确定了影响果胶得率的因素依次为pH、萃取温度、萃取时间.在此基础上针对果胶的产量、质量、色泽等对各个提取步骤进行了系统的比较研究,筛... 以甜菜渣为原料,采用酸法萃取、乙醇沉淀工艺提取果胶.首先通过正交实验[L9(34)]确定了影响果胶得率的因素依次为pH、萃取温度、萃取时间.在此基础上针对果胶的产量、质量、色泽等对各个提取步骤进行了系统的比较研究,筛选出最佳萃取条件为:pH1.5、温度85℃、时间6~8h.萃取前原料的处理条件为:80℃热水浸泡30min,充分洗涤后,用盐酸调pH1.5,浸泡14h.萃取液的脱色条件为高岭土在50℃搅拌脱色30min.乙醇沉淀条件pH在1.5~2.5范围,醇的体积分数为68%.果胶分子量为76000,酯化度60%~75%,半乳糖醛酸含量60%~70%.除胶凝度尚需进一步讨论之外。 展开更多
关键词 果胶 萃取 甜菜渣 酸法 乙醇 沉淀
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四君子汤对实验性脾虚证模型大鼠血浆内几种神经肽含量的影响 被引量:18
13
作者 魏彦明 杨孝朴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期404-407,共4页
为了阐明脾虚证模型大鼠血浆中部分神经肽的变化规律和健脾益气方剂四君子汤对神经肽的调节作用以及对脾虚证病理过程的保护机制 ,应用利血平和苦寒中药方剂小承气汤两种方法复制出脾虚证大鼠模型 ,以特异性放射免疫分析法检测了血浆 β... 为了阐明脾虚证模型大鼠血浆中部分神经肽的变化规律和健脾益气方剂四君子汤对神经肽的调节作用以及对脾虚证病理过程的保护机制 ,应用利血平和苦寒中药方剂小承气汤两种方法复制出脾虚证大鼠模型 ,以特异性放射免疫分析法检测了血浆 β 内啡肽 (β endorphin ,β EP)、降钙素基因相关肽 (Calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)和神经肽Y(NeuropeptideY ,NPY)的含量变化。结果表明 :两种方法复制的大鼠脾虚证模型均表现为血浆β EP、CGRP比对照组显著升高 (P <0 0 1) ,NPY比对照组显著降低 (P <0 0 1) ,以上变化经四君子汤治疗后都有不同程度的好转 ,与模型组比较差异极显著 (P <0 0 1) ,接近对照组水平。提示脾虚证的病理变化过程与 β EP、CGRP、NPY等神经肽类的失衡有一定的相关性 ,而健脾益气方剂四君子汤对脾虚证模型大鼠血浆内神经肽含量有较好的调节作用 ,推测这也许是该方能够治疗脾虚证的作用机制之一。 展开更多
关键词 大鼠 血浆 神经肽含量 脾虚证 四君子汤 实验模型
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离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究 被引量:8
14
作者 杨学山 杨孝朴 +1 位作者 杨志杰 吴兵 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期157-160,共4页
以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,... 以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40~60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6~9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用. 展开更多
关键词 羊血 SOD 离子交换层析 稳定性
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口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测 被引量:4
15
作者 马江涛 卢曾军 +5 位作者 曹轶梅 郭慧琛 郭建宏 祝秀梅 杨孝朴 刘在新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期540-545,共6页
用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3ABC基因 杆状病毒 分泌性表达
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微小牛蜱Bm86基因的克隆与原核表达 被引量:7
16
作者 樊瑞泉 罗建勋 +8 位作者 杨孝朴 殷宏 高金亮 关贵全 刘志杰 党志胜 马米玲 任巧云 刘爱红 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期15-19,共5页
根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm8... 根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97%和95.6%.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88 Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39%,表达量约为1.08 mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别. 展开更多
关键词 微小牛蜱 Bm86基因 克隆 表达
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铜盐-热变性法分离提取羊血超氧化物歧化酶工艺条件优化 被引量:5
17
作者 杨学山 付文力 +1 位作者 孔志亮 杨孝朴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第20期42-45,共4页
目的:优化铜盐-热变性法分离提取羊血超氧化物歧化酶(SOD)工艺。方法:采用单因素和正交试验,对影响SOD比活力的主要因素进行研究。结果:铜盐-热变性法分离提取SOD的最优工艺条件为热变性温度65℃、热变性时间15min、添加体积分数2.5%的1... 目的:优化铜盐-热变性法分离提取羊血超氧化物歧化酶(SOD)工艺。方法:采用单因素和正交试验,对影响SOD比活力的主要因素进行研究。结果:铜盐-热变性法分离提取SOD的最优工艺条件为热变性温度65℃、热变性时间15min、添加体积分数2.5%的10mmol/L CuSO4溶液,丙酮用量为溶血液的1.25倍,在此条件下得到的SOD比活力为2338.9U/mg。结论:此方法操作简单,成本低,适合工厂化生产。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 酶活性 硫酸铜 热变性
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金属离子对羊血超氧化物歧化酶活性的影响 被引量:7
18
作者 杨学山 杨孝朴 +1 位作者 吴兵 杨志杰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期89-91,共3页
以离子交换层析法制备的羊血SOD(Superoxide dismutase)为原料,加入不同浓度的Na+、K+、Ba2+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+等金属离子,25℃保温4h后,利用邻苯三酚自氧化法测定SOD酶活力,并计算相对酶活力。结果表明:不同金属离子在不... 以离子交换层析法制备的羊血SOD(Superoxide dismutase)为原料,加入不同浓度的Na+、K+、Ba2+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+等金属离子,25℃保温4h后,利用邻苯三酚自氧化法测定SOD酶活力,并计算相对酶活力。结果表明:不同金属离子在不同浓度下对羊血SOD酶活的影响不同。Na+对SOD酶活影响不大;K+、Ca2+、Fe2+在体外对羊血SOD具有激活作用,且Fe2+作用明显,相对酶活力可达378.98%;Ba2+、Mg2+在低浓度下对SOD影响不大,在高浓度下有一定的激活作用,但不同浓度激活效果不同;Zn2+、Cu2+在体外对羊血SOD表现有抑制作用,但二者的抑制程度不同。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 金属离子 酶活力
原文传递
中草药复方对畜禽肠道病原菌的体外抑菌试验 被引量:12
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作者 陈虹 刘磊 +1 位作者 吴润 杨孝朴 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第13期6005-6006,6022,共3页
[目的]为应用中草药复方治疗畜禽肠道病提供参考数据。[方法]用改良试管二倍稀释法测定15组中草药复方对8种畜禽肠道病原菌的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]乌梅和五倍子、诃子分别配伍对大肠杆菌O8的MIC高达15.6 mg/ml,五倍子和大黄、诃子... [目的]为应用中草药复方治疗畜禽肠道病提供参考数据。[方法]用改良试管二倍稀释法测定15组中草药复方对8种畜禽肠道病原菌的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]乌梅和五倍子、诃子分别配伍对大肠杆菌O8的MIC高达15.6 mg/ml,五倍子和大黄、诃子和黄连、黄芩和大黄配伍的MIC为31.25 mg/ml。五倍子和大黄、诃子和乌梅配伍对大肠杆菌O78的MIC为31.25 mg/ml。五倍子和黄连、黄芩和大黄配伍对鸡白痢沙门氏菌的MIC高达3.9 mg/ml,诃子和大黄配伍的MIC达7.8 mg/ml,诃子和艾叶配伍的MIC达15.6 mg/ml,五倍子和乌梅、五倍子和黄柏、诃子和乌梅、黄芩和乌梅、黄芩和艾叶配伍的MIC为31.25 mg/ml。乌梅和五倍子、诃子分别配伍对鼠伤寒沙门氏菌的MIC为31.25 mg/ml。五倍子和乌梅、艾叶分别配伍对猪伤寒沙门氏菌的MIC达31.25 mg/ml。黄芩和大黄、艾叶分别配伍对猪霍乱沙门氏菌的MIC高达15.6 mg/ml,五倍子和乌梅、诃子和大黄配伍的MIC为31.25 mg/ml。[结论]本试验所选15组中草药复方,大部分表现出协同作用。 展开更多
关键词 中草药复方 最小抑菌浓度 协同作用
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银翘蓝芩口服液中绿原酸含量测定方法的建立 被引量:6
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作者 许春燕 刘希望 +5 位作者 杨亚军 孔晓军 李世宏 秦哲 杨孝朴 李剑勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第11期126-129,共4页
为建立银翘蓝芩口服液中绿原酸含量的高效液相色谱测定方法,选用Scienhome Kromasil ODS-1 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水(体积比为20∶80),检测波长324 nm,柱温30℃,流速为1 m L/min进行测定。结果显示... 为建立银翘蓝芩口服液中绿原酸含量的高效液相色谱测定方法,选用Scienhome Kromasil ODS-1 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水(体积比为20∶80),检测波长324 nm,柱温30℃,流速为1 m L/min进行测定。结果显示,绿原酸在该色谱条件下,系统适应性良好,在质量浓度为19.32~96.60μg/m L时线性关系良好,回归方程为Y=29 059X-117 695,R^2=0.999;加样平均回收率为94.57%,RSD为1.93%;对3批样品的绿原酸含量进行测定,RSD为1.76%。表明建立的方法可用于银翘蓝芩口服液中绿原酸含量的测定。 展开更多
关键词 银翘蓝芩口服液 绿原酸 高效液相色谱法
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