猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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作者 杨小曼 时洪艳 +8 位作者 张燎原 张鑫 张记宇 刘大凯 冯廷帅 曾苗苗 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期608-613,共6页

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析... 为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。 展开更多

关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S1蛋白 间接ELISA方法 抗体检测

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神经退行性疾病中轴突运输障碍的机制

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作者 杨小曼 徐岩 曹学兵 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期558-562,共5页

临床上许多神经退行性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病和肌萎缩侧索硬化症等,主要表现为致病蛋白的蓄积和细胞器的异常定位。这一病理特征可能与神经元中轴突运输障碍有关,轴突运输异常可能导致致病蛋白不能定向转运到特定部位降解,细... 临床上许多神经退行性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病和肌萎缩侧索硬化症等,主要表现为致病蛋白的蓄积和细胞器的异常定位。这一病理特征可能与神经元中轴突运输障碍有关,轴突运输异常可能导致致病蛋白不能定向转运到特定部位降解,细胞器不能运至指定区域发挥正常生理功能,甚至轴突运输障碍极有可能是此类疾病的早期病理事件,并逐渐发展成轴突完整性的丧失与退行性改变。在此,我们对多种常见的神经退行性疾病中轴突运输障碍的发生发展机制进行探讨,为后续的基础研究提供新思路。 展开更多

关键词 轴突运输障碍 阿尔茨海默病 肌萎缩侧索硬化症 帕金森病

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猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究 被引量：3

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作者 曾苗苗 刘大凯 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 时洪艳 张鑫 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期61-69,共9页

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证... 为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。 展开更多

关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 自噬 病毒复制 LC3-Ⅱ

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猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用 被引量：1

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作者 刘大凯 韩郁茹 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 曾苗苗 时洪艳 秦毅斌 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期499-504,共6页

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。 展开更多

关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白 原核表达 多克隆抗体 初步应用

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磨坪贡柚产业现状及发展思路

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作者 宋正彪 谭永国 杨小曼 《河北农机》 2024年第15期133-135,共3页

本文主要介绍了提高磨坪贡柚品质和效益的多种策略。通过高接换种改良柚树品种,提升果品质量。实施配方施肥,增加有机肥,以提高土壤肥力。采用绿色防控技术,有效防治病虫害,确保果实无公害生产。通过果实套袋和覆膜增糖技术,进一步改善... 本文主要介绍了提高磨坪贡柚品质和效益的多种策略。通过高接换种改良柚树品种,提升果品质量。实施配方施肥,增加有机肥,以提高土壤肥力。采用绿色防控技术,有效防治病虫害,确保果实无公害生产。通过果实套袋和覆膜增糖技术,进一步改善柚果品质。在生产过程中,推广省力化农艺设施,如小微机械和水肥一体化技术,以实现节本增效。通过树立品牌形象、规范包装、拓宽销售渠道、应用仓储保鲜设施和开展柚子深加工,全面提高磨坪贡柚的市场竞争力和经济效益。通过这些措施,旨在推动磨坪贡柚产业的标准化、绿色化和现代化,提升其在市场上的竞争力,实现可持续发展。 展开更多

关键词 高接换种 配方施肥 绿色防控 省力化农艺 新型经营主体

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智慧交通时代的城市轨道交通信息安全

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作者 高健龙 肖晟 杨小曼 《人民公交》 2024年第10期46-48,共3页

随着智慧交通技术的快速发展,城市轨道交通系统正逐步向智能化和自动化方向演进。然而,信息技术的广泛应用也带来了严重的信息安全挑战。本文首先概述了智慧交通的发展背景和城市轨道交通系统智能化的概念,强调了信息安全在这一领域的... 随着智慧交通技术的快速发展,城市轨道交通系统正逐步向智能化和自动化方向演进。然而,信息技术的广泛应用也带来了严重的信息安全挑战。本文首先概述了智慧交通的发展背景和城市轨道交通系统智能化的概念,强调了信息安全在这一领域的重要性,通过分析现阶段城市轨道交通信息安全面临的威胁,探讨了当前的安全现状和典型案例,提出了一系列信息安全技术与策略。旨在为智慧交通时代的城市轨道交通系统信息安全提供有效的防护措施和理论支持,以期能够进一步促进智慧交通系统的健康和可持续发展。 展开更多

关键词 智慧交通 城市轨道交通 信息安全

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面向制造业的分销管理系统研究和实现 被引量：3

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作者 杨小曼 洪玫 王宇峰 《计算机应用研究》 CSCD 北大核心 2005年第8期55-56,96,共3页

讨论了面向制造业的分销管理系统的分布式架构设计和系统的主要功能模块以及系统的关键实现技术,即利用WebServices技术和基于XML的数据交换技术实现企业总部和分销网点之间信息的实时传递;同时,采用模糊综合评判的算法实现企业对各分... 讨论了面向制造业的分销管理系统的分布式架构设计和系统的主要功能模块以及系统的关键实现技术,即利用WebServices技术和基于XML的数据交换技术实现企业总部和分销网点之间信息的实时传递;同时,采用模糊综合评判的算法实现企业对各分销网点的有效评估。 展开更多

关键词 分销管理 模糊综合评判 WEB SERVICES

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遗传小波神经网络用于极谱信号的滤噪 被引量：5

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作者 郑建斌 杨小曼 +1 位作者 刘辉 仲红波 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期447-450,共4页

将遗传算法的全局搜索能力与小波神经网络的强拟合与容错能力相结合,构造了遗传小波神经网络。对模拟和极谱信号处理的结果表明:由于该网络使用遗传算法优化了神经网络的参数,从而避免了网络陷入局部最小和选择网络参数时的人工参与,能... 将遗传算法的全局搜索能力与小波神经网络的强拟合与容错能力相结合,构造了遗传小波神经网络。对模拟和极谱信号处理的结果表明:由于该网络使用遗传算法优化了神经网络的参数,从而避免了网络陷入局部最小和选择网络参数时的人工参与,能够有效地进行滤噪和数据压缩,使神经网络用于化学信号处理的智能化程度得以提高。 展开更多

关键词 化学计量学 信号处理 小波变换 神经网络 遗传算法

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示波信号能谱的傅里叶自去卷积法 被引量：1

9

作者 郑建斌 杨小曼 刘辉 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期304-306,共3页

以支持电解质溶液产生的示波计时电位信号作为线性函数、去极剂本身的示波信号作为去噪函数 ,提出了一种傅里叶自去卷积新方法———示波信号能谱的傅里叶自去卷积法。研究了噪音和切口重叠等对去卷积结果的影响。与其他傅里叶自去卷积... 以支持电解质溶液产生的示波计时电位信号作为线性函数、去极剂本身的示波信号作为去噪函数 ,提出了一种傅里叶自去卷积新方法———示波信号能谱的傅里叶自去卷积法。研究了噪音和切口重叠等对去卷积结果的影响。与其他傅里叶自去卷积法相比较 :该方法具有操作简单、不会引起负的旁瓣效应。 展开更多

关键词 化学计量学 信号处理 示波分析 傅里叶自去卷积法

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斥天与誓天——简析《窦娥冤》中对天的矛盾态度 被引量：1

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作者 杨小曼 《语文建设》 北大核心 2009年第7期51-51,共1页

《寞娥冤》是关汉卿的传世之作，也是中国戏剧史上的经典之作。高中语文教材选了这部戏的第三折，即全剧的高潮部分。可是，在读完选文之后，我们发现一个问题，即在《滚绣球》里，窦娥斥天骂地，指责它不公平，使善良之人多灾多难。可... 《寞娥冤》是关汉卿的传世之作，也是中国戏剧史上的经典之作。高中语文教材选了这部戏的第三折，即全剧的高潮部分。可是，在读完选文之后，我们发现一个问题，即在《滚绣球》里，窦娥斥天骂地，指责它不公平，使善良之人多灾多难。可后来她又指天发誓，要老天彰显自己的冤屈，并说“若没些儿灵圣与世人传，也不见得湛湛青天”“你道是天公不可期，人心不可怜，不知皇天也肯从人愿”，这岂不前后矛盾？ 展开更多

关键词 《窦娥冤》 矛盾态度 高中语文教材 中国戏剧史 关汉卿 不公平 可怜

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别样风采——苏洵杂文解读 被引量：1

11

作者 杨小曼 《乐山师范学院学报》 2010年第3期4-5,11,共3页

苏洵以议论文名传千古,研究者多有重视,而其杂文数量较少,常为人们所忽略。苏洵杂文多来自日常生活,有着与其议论文不同的风格。文章从其杂文内容和风格探究了苏洵的另一特色,从而深化了对苏洵的认知。

关键词 苏洵 杂文 感性 多种艺术特色

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CASIO可编程计算器在线路施工测量中的应用

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作者 杨红 陈向阳 杨小曼 《地理空间信息》 2012年第4期120-122,125,共4页

在线路施工测量中,利用Gauss-Legendre 5点通用公式,采用CASIO可编程计算器编制曲线任意里程中边桩三维坐标正反算程序,只需输入任意里程,即可提供线路该里程的设计中桩坐标和高程,又可通过反算得到任意测点对应的线路里程和偏距。

关键词 线路施工测量 CASIO计算器 正反算 程序

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基于B2B的协同电子商务平台分析与设计 被引量：7

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作者 王宇峰 杨小曼 唐慧佳 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2004年第36期220-222,共3页

协同是企业获取竞争优势的主要源泉,在企业中开展协同电子商务有利于企业创建长期、持续的竞争优势。该文提出了协同电子商务的一种应用模式,对应用模式进行了全面的分析、设计,并对系统开发的关键实现技术进行了讨论。

关键词 协同电子商务 电子商务供应链 知识管理

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陶渊明隐逸诗人形象主观成因探析

14

作者 杨小曼 《九江学院学报》 2009年第2期4-6,共3页

陶渊明的隐逸诗人形象是经过漫长选择的经典化结果,中国文人选择他而非其他隐者或隐逸诗人,是因为他合乎中国文人对隐逸诗人的审美要求。本文通过陶渊明和孟浩然的比较,分析了陶渊明所具备的三方面素质,说明了他脱颖而出的原因。

关键词 隐逸诗人形象 主观因素 文才 品格 心灵解脱的方式

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移动互联网时代电信运营商的转型策略和方案分析 被引量：4

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作者 王于峰 杨小曼 王哲 《移动通信》 2014年第20期86-91,共6页

在移动互联网时代,对于电信运营商来说面临着挑战和机遇。通过分析当前电信运营商的应对策略,并结合电信运营商在业务转型期间的竞争优势,提出了在移动互联网时代电信运营商的转型策略和方案。

关键词 PC互联网业务 移动互联网业务 电信运营商服务平台

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枣休眠与解除过程中生理生化变化的研究

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作者 杨小曼 谭智军 +2 位作者 张川疆 梁文锋 林敏娟 《现代园艺》 2020年第21期17-20,共4页

以需冷量不同的屯屯枣、尜尜枣、胎里红3个枣品种的1年生枣头枝作为试验材料,研究枣树整个休眠进程中淀粉、蛋白质、脯氨酸、可溶性糖及其糖组分含量的变化,并找出影响休眠进程的关键物质。研究结果表明:‘屯屯枣’和‘尜尜枣’2个品种... 以需冷量不同的屯屯枣、尜尜枣、胎里红3个枣品种的1年生枣头枝作为试验材料,研究枣树整个休眠进程中淀粉、蛋白质、脯氨酸、可溶性糖及其糖组分含量的变化,并找出影响休眠进程的关键物质。研究结果表明:‘屯屯枣’和‘尜尜枣’2个品种可溶性总糖、葡萄糖和果糖含量呈现升高-降低-升高-降低随后趋于平缓的趋势,‘胎里红’呈现升高-降低-升高后趋于平缓的趋势;3种试材的蔗糖含量呈现升高-降低-升高-降低-升高的趋势,整体呈现"M"形,且均在12月24日达到最高;淀粉含量呈现先骤增后骤降随后平缓上升的趋势;可溶性蛋白质含量在休眠初期迅速上升随后迅速下降慢慢趋于平缓之后缓慢上升;脯氨酸含量在休眠初期上升随后下降趋于平缓。根据枝条中淀粉和可溶性糖的含量可以确定休眠的开始和结束时间。 展开更多

关键词 枣树 休眠 生理生化

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Novacron NC活性染料印花工艺 被引量：8

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作者 武丰才 杨小曼 《印染》 北大核心 2011年第3期20-23,共4页

分析了传统印花用活性染料存在的缺陷,介绍了Novacron NC活性染料的氟代均三嗪活性基、非对比色概念和色牢度高的特点,研究了其在印花中的应用性能。实践证明:Novacron NC活性染料在印花中具有色光稳定性好,色牢度很高的优点。

关键词 印花 活性染料 染色牢度 重现性 棉织物

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大海中的音乐家——座头鲸

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作者 杨小曼 《绿色天府》 2020年第6期60-61,共2页

人们在茫茫的海洋世界里航行时,往往可以听到一种神秘莫测的美妙歌声,这种歌声在古希腊史诗《奥德赛》中被充分渲染为迷人的“海妖之歌”,后来人们才发现,原来这个海洋中的神秘“音乐家”就是座头鲸。座头鲸虽然不是世界上最大的鲸类,... 人们在茫茫的海洋世界里航行时,往往可以听到一种神秘莫测的美妙歌声,这种歌声在古希腊史诗《奥德赛》中被充分渲染为迷人的“海妖之歌”,后来人们才发现,原来这个海洋中的神秘“音乐家”就是座头鲸。座头鲸虽然不是世界上最大的鲸类,但也是海洋中当之无愧的庞然大物,体型肥大而臃肿,座头鲸成体平均体长雄性为12.9米,雌性为13.7米,最大记录雌性18米。体重25~30吨。它的头相对较小,扁而平,吻宽,嘴大,嘴边有20~30个肿瘤状的突起,有趣的是每个突起的上面都长出一根毛,而身体的其他部位却全都没有毛。 展开更多

关键词 《奥德赛》 平均体长 座头鲸 音乐家 歌声 古希腊

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金融集聚对房价的影响分析

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作者 杨小曼 《现代商业》 2019年第27期122-123,共2页

金融集聚会从多渠道多方面对房价产生或正向或负向的影响。银行业、保险业集聚有助于遏制房价的过快上涨;证券业集聚对房价上涨有拉动效应。政府应制定有效的区域金融政策,优化金融资源配置,缩小金融集聚程度的区域差异,促进房地产市场... 金融集聚会从多渠道多方面对房价产生或正向或负向的影响。银行业、保险业集聚有助于遏制房价的过快上涨;证券业集聚对房价上涨有拉动效应。政府应制定有效的区域金融政策,优化金融资源配置,缩小金融集聚程度的区域差异,促进房地产市场健康有序发展;建立科学的人才流动机制,鼓励人才向中西部经济落后地区流动;拓宽房地产企业和房地产消费者的融资渠道,倡导多渠道融资。 展开更多

关键词 房价 金融集聚 抑制效应 拉动效应

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组合电站的控制与监视系统

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作者 杨小曼 彭杏珍 《世界机电技术》 1991年第9期21-24,共4页

关键词 组合电站 控制 监视系统 发电厂

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