升压物质检查法在药品生物安全性检查中的应用及实验关键点

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作者 张媛 郭龙静 +2 位作者 吴彦霖 杨泽岸 纳涛 《实验动物科学》 2024年第3期90-94,共5页

升压物质检查法是《中国药典》收录的一项药物安全性检查法。用以检测可能含有引起血压升高杂质的原料药及其制剂中升压物质的限度是否符合标准规定。该检查法的使用范围虽然较窄,但在临床用药安全上发挥着重要作用。本文就升压物质检... 升压物质检查法是《中国药典》收录的一项药物安全性检查法。用以检测可能含有引起血压升高杂质的原料药及其制剂中升压物质的限度是否符合标准规定。该检查法的使用范围虽然较窄,但在临床用药安全上发挥着重要作用。本文就升压物质检查法的实验原理、实验系统、方法应用、各国药典收录情况、改进建议,以及实验要点进行综述,为相关实验人员提供参考。 展开更多

关键词 升压物质检查法 升压素 血压 生物安全性检查

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生物来源的缩宫素注射液升压物质检查替代方法的研究 被引量：2

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作者 郭龙静 杨泽岸 +3 位作者 吴彦霖 蔡彤 高华 张媛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期794-799,共6页

目的 对生物来源缩宫素注射液的升压物质检查进行大鼠血压法和HPLC法的替代研究。方法 建立体外升压物质检查的HPLC法并进行方法验证,分别使用HPLC法和大鼠血压法对生物来源的缩宫素注射液样品和模拟样品进行升压物质检查。结果 在该文H... 目的 对生物来源缩宫素注射液的升压物质检查进行大鼠血压法和HPLC法的替代研究。方法 建立体外升压物质检查的HPLC法并进行方法验证,分别使用HPLC法和大鼠血压法对生物来源的缩宫素注射液样品和模拟样品进行升压物质检查。结果 在该文HPLC色谱条件下,升压素与相邻杂质峰之间的分离度均符合要求,在210~13 330 IU·L^(-1)范围内,升压素浓度与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9。HPLC法与现行标准中的生物检查法-大鼠血压法检测结果一致。结论 该法专属性好、灵敏、准确,可作为升压物质检查法代替现行标准中的大鼠血压法。 展开更多

关键词 缩宫素 升压素 升压物质检查法 高效液相色谱 验证 方法替代

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骨肽原液抗骨质疏松的药效学研究 被引量：4

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作者 陈晨 张媛 +4 位作者 吴彦霖 杨泽岸 胡文言 蔡彤 高华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1012-1018,共7页

目的针对骨肽原液生物活性评价方法缺失的现状,建立抗骨肽原液的骨质疏松的药效学实验评价方法。方法建立去卵巢骨质疏松大鼠骨质疏松模型,选取10个厂家的骨肽原液进行抗骨质疏松药效学评价及生理生化指标的检测。结果通过横向比较10个... 目的针对骨肽原液生物活性评价方法缺失的现状,建立抗骨肽原液的骨质疏松的药效学实验评价方法。方法建立去卵巢骨质疏松大鼠骨质疏松模型,选取10个厂家的骨肽原液进行抗骨质疏松药效学评价及生理生化指标的检测。结果通过横向比较10个厂家骨肽原液,其骨密度、骨钙、骨磷均有一定程度的增加;骨病理均不同程度的优于模型组;并具有促进碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性增强的作用、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)活性降低的作用。结论骨肽原液通过增加骨密度、骨钙骨磷含量、改善骨组织形态、调节ALP和TRACP,发挥改善骨质疏松症的作用。 展开更多

关键词 骨肽原液 生物活性测定法 药效学评价 生理生化指标 骨质疏松 质量评价

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冻干狂犬病疫苗热原检测在HL-60单核细胞激活实验中的方法转移和验证研究 被引量：2

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作者 杨泽岸 陈晨 +3 位作者 张媛 王灿 高华 吴彦霖 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1586-1590,共5页

目的研究人早幼粒白血病HL-60单核细胞激活实验在人狂犬疫苗冻干人用狂犬病疫苗热原检测中的可行性。方法将已建立的HL-60单核细胞激活实验进行实验室间方法转移,并进行方法验证;参照《中国药典》细菌内毒素检查法中光度测定法中的干扰... 目的研究人早幼粒白血病HL-60单核细胞激活实验在人狂犬疫苗冻干人用狂犬病疫苗热原检测中的可行性。方法将已建立的HL-60单核细胞激活实验进行实验室间方法转移,并进行方法验证;参照《中国药典》细菌内毒素检查法中光度测定法中的干扰试验,用HL-60-IL-6单核细胞激活实验检测13批冻干人用狂犬病疫苗中的回收率及其热原含量。结果以不同浓度内毒素标准品刺激HL-60细胞导致细胞分泌IL-6的量计算与内毒素浓度的线性,R^(2)均为0.95以上;计算最低检测限不超过0.125 EU·mL^(-1);以内毒素含量为0.5、1.0 EU·mL^(-1)的溶液做回收实验,考察方法的准确度;通过HL-60-IL-6检测13批冻干人用狂犬病疫苗,内毒素的回收率均在50%~200%;对4批热原检查、内毒素含量测定不合格的冻干人用狂犬病疫苗和附带的3批注射用水,该方法检测结果与家兔热原检查法和内毒素测定法的结果一致。结论以IL-6为检测指标的HL-60单核细胞激活实验适用于冻干人用狂犬病疫苗的热原物质检测。 展开更多

关键词 方法转移 方法验证 单核细胞激活实验 热原检测 白介素6 人早幼粒白血病HL-60细胞 冻干人用狂犬病疫苗

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基于生物活性测定的骨肽类制剂质量评价方法 被引量：9

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作者 杨泽岸 张媛 +1 位作者 吴彦霖 高华 《中国药事》 CAS 2019年第4期380-384,共5页

目的:探讨骨肽类制剂的基本特性、质控模式、生物活性评价方法的研究现状,建立科学合理的质量评价模式。方法:通过对骨肽类制剂体内外生物活性评价方法的汇总和梳理,探讨适宜的骨肽类制剂的质量评价方法。结果与结论:旨在介绍一种能反... 目的:探讨骨肽类制剂的基本特性、质控模式、生物活性评价方法的研究现状,建立科学合理的质量评价模式。方法:通过对骨肽类制剂体内外生物活性评价方法的汇总和梳理,探讨适宜的骨肽类制剂的质量评价方法。结果与结论:旨在介绍一种能反映骨肽类制剂药效的生物活性测定研究思路,与主要活性成分理化分析方法相结合,从而使现有质量标准的评价更全面更合理。 展开更多

关键词 骨肽类制剂 生物活性测定 质量标准

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骨肽原液对骨髓间充质干细胞成骨分化作用的影响 被引量：5

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作者 张媛 吴彦霖 +3 位作者 纳涛 杨泽岸 胡文言 高华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期791-797,共7页

目的考察骨肽原液对胎儿骨髓间充质干细胞(fetal marrow mesenchymal stem cells,F-BMSCs)成骨分化的影响,并对其相关作用机制进行初步探讨。方法选取4个不同厂家生产的骨肽原液,对F-BMSCs干预的同时进行成骨诱导。诱导后在不同时间点进... 目的考察骨肽原液对胎儿骨髓间充质干细胞(fetal marrow mesenchymal stem cells,F-BMSCs)成骨分化的影响,并对其相关作用机制进行初步探讨。方法选取4个不同厂家生产的骨肽原液,对F-BMSCs干预的同时进行成骨诱导。诱导后在不同时间点进行ALP活性及茜素红染色检测,使用定量PCR进行骨分化标志物基因OPN、OCN、Runx2、ALP表达的检测,使用Western blot进行特异性标记蛋白Runx2和OCN表达的检测。结果经成骨诱导后,与诱导组相比,骨肽供试品组厂家C骨肽原液处理的F-BMSCs ALP活性明显增加(P<0.05);厂家B、L骨肽原液处理的F-BMSCs ALP活性高于诱导组,但差异无显著性(P>0.05)。F-BMSCs经茜素红染色,肉眼观察厂家B、C、L骨肽原液处理的F-BMSCs红色明显增强;显微镜下厂家B、C、L骨肽原液处理的F-BMSCs茜素红染色阳性结节状覆盖面积明显多于诱导组。厂家B骨肽原液处理的F-BMSCs成骨分化标志物基因OPN、OCN、Runx2、ALP的mRNA表达量增加,明显高于诱导组;Runx2、OCN蛋白表达亦明显高于诱导组。结论骨肽原液对F-BMSCs的成骨分化具有明显促进作用。 展开更多

关键词 骨肽原液 间充质干细胞 成骨分化 碱性磷酸酶 茜素红 骨钙素

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骨肽原液促UMR106细胞增殖法的建立及验证 被引量：2

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作者 吴彦霖 张媛 +2 位作者 杨泽岸 胡文言 高华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1324-1328,共5页

目的建立骨肽原液促UMR106细胞增殖法并进行方法学验证,确定方法的限值和判定标准,为建立骨肽原液的生物活性测定方法提供研究数据。方法1)选取2个厂家的骨肽原液进行UMR106细胞增殖方法建立;2)选用1批样品进行方法学验证;3)选取13个厂... 目的建立骨肽原液促UMR106细胞增殖法并进行方法学验证,确定方法的限值和判定标准,为建立骨肽原液的生物活性测定方法提供研究数据。方法1)选取2个厂家的骨肽原液进行UMR106细胞增殖方法建立;2)选用1批样品进行方法学验证;3)选取13个厂家39批的骨肽原液进行方法限值和判定标准的确定。结果1)建立了骨肽原液致UMR106细胞增殖方法;2)重复性、中间精密度和耐用性结果符合方法学验证的要求;3)13个厂家39批骨肽原液中:8个厂家的骨肽原液促UMR106细胞增殖率≥150%,5个厂家的骨肽原液促UMR106细胞增殖率<150%。结论骨肽原液促UMR106细胞增殖方案:以1.0 g·L^-1骨肽原液药物浓度作为限值剂量,增殖率≥150%作为符合规定的判定标准。 展开更多

关键词 骨肽 成骨 UMR106 生物活性测定法 方法学验证 质量标准

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第2批赖氨酸升压素国家标准品的标定

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作者 吴彦霖 郭龙静 +13 位作者 杨泽岸 高华 曹春然 曾亚力 孟长虹 陆益红 唐黎明 航艾 匡荣 蒙宏 朱敏莹 夏星辉 叶飞 张媛 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1062-1067,共6页

目的:制备和标定第2批赖氨酸升压素的国家标准品。方法:参照第1批WHO赖氨酸升压素国际标准品77/512,选择7个实验室,采用《中华人民共和国药典》2020年版四部1205升压素生物测定法和0512HPLC法标定赖氨酸升压素待标品的效价,通过加权平... 目的:制备和标定第2批赖氨酸升压素的国家标准品。方法:参照第1批WHO赖氨酸升压素国际标准品77/512,选择7个实验室,采用《中华人民共和国药典》2020年版四部1205升压素生物测定法和0512HPLC法标定赖氨酸升压素待标品的效价,通过加权平均的方式合并计算2种方法的结果。结果:经标定,待标品的效价为每支安瓿含4 IU的赖氨酸升压素。结论:本批待标品可作为第2批赖氨酸升压素国家标准品,用于赖氨酸升压素的效价测定、鉴别及升压物质检查使用。 展开更多

关键词 赖氨酸升压素 升压素生物测定 效价 标准品

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第3批缩宫素国家标准品的建立

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作者 张媛 杨泽岸 +3 位作者 孟长虹 李晓洁 高华 吴彦霖 《药物评价研究》 CAS 2023年第3期578-582,共5页

目的建立首批HPLC含量测定用缩宫素国家标准品。方法第3批缩宫素国家标准品采用冻干制备。使用核磁共振和HPLC法对缩宫素进行结构确证;采用HPLC法测定待标品的质量分数,并测定待标品水分及氨基酸比值;以缩宫素USP对照品为标准,采用HPLC... 目的建立首批HPLC含量测定用缩宫素国家标准品。方法第3批缩宫素国家标准品采用冻干制备。使用核磁共振和HPLC法对缩宫素进行结构确证;采用HPLC法测定待标品的质量分数,并测定待标品水分及氨基酸比值;以缩宫素USP对照品为标准,采用HPLC外标法和大鼠子宫法分别测定待标品的生物效价。结果经核磁共振和HPLC法确证缩宫素的结构;待标品水分含量为4.8%,各氨基酸比值均在限度范围内,经HPLC检测质量分数为99.69%;待标品经HPLC法测定每支含量为274 IU,经大鼠子宫法测定每支含量为275 IU。结论建立的待标品可作为第3批缩宫素国家标准品,供缩宫素效价测定及鉴别使用。 展开更多

关键词 缩宫素 高效液相色谱法 标准品 生物效价 大鼠子宫法

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独行菜C4H基因克隆与表达分析 被引量：12

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作者 赵乐 马利刚 +2 位作者 杨泽岸 冯卫生 郑晓珂 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期821-831,共11页

以独行菜(Lepidium apetalum)为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,克隆了独行菜肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因的cDNA序列,命名为LaC4H,Gen Bank登录号为KX064050,并进行生物信息学分析,原核表达、纯化... 以独行菜(Lepidium apetalum)为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,克隆了独行菜肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因的cDNA序列,命名为LaC4H,Gen Bank登录号为KX064050,并进行生物信息学分析,原核表达、纯化,组织特异性分析和诱导表达分析。结果表明:(1)LaC4H基因开放阅读框(ORF)长1 518 bp,编码505个氨基酸,其蛋白质分子质量为57.73 k D。(2)生物信息学分析显示La C4H蛋白包含细胞色素P450的保守基序和5个特征性底物结合位点,是细胞色素P450超家族成员,系统进化分析显示LaC4H蛋白与拟南芥等十字花科植物C4H蛋白同源性较高。(3)通过构建原核表达载体pET-32a-LaC4H在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaC4H重组蛋白,利用Ni^(2+)亲和色谱得到了纯化的LaC4H重组蛋白。(4)荧光定量PCR结果表明LaC4H基因在茎中表达量最高,叶和花中次之,根中表达量最低。经茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后,叶中LaC4H表达量明显上升,诱导后48 h达到最高值,叶中LaC4H的表达量与黄酮含量之间呈正相关。这为进一步研究LaC4H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础。 展开更多

关键词 独行菜 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析

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独行菜幼苗叶片乙酰CoA酰基转移酶基因克隆、序列分析与原核表达 被引量：3

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作者 赵乐 马利刚 +3 位作者 杨泽岸 冯卫生 匡海学 郑晓珂 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期34-39,共6页

目的:研究独行菜强心苷生物合成途径的相关基因,从独行菜幼苗叶片中克隆强心苷生物合成途径关键酶乙酰CoA酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因,进行序列分析和原核表达。方法:根据独行菜转录组数据中LaAACT基因序列设... 目的:研究独行菜强心苷生物合成途径的相关基因,从独行菜幼苗叶片中克隆强心苷生物合成途径关键酶乙酰CoA酰基转移酶(acetyl-CoA C-acetyltransferase,AACT)基因,进行序列分析和原核表达。方法:根据独行菜转录组数据中LaAACT基因序列设计特异性引物,克隆得到LaAACT基因的cDNA序列,构建pET-32a-LaAACT原核表达载体,诱导表达LaAACT重组蛋白。结果:LaAACT基因ORF全长为1 212 bp,编码403个氨基酸。序列分析结果显示LaAACT蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有硫解酶家族保守结构域。系统进化结果显示LaAACT蛋白与十字花科植物的AACT蛋白亲缘关系较近。通过IPTG诱导,在大肠埃希菌中成功表达LaAACT重组蛋白,并得到了纯化的LaAACT重组蛋白。结论:首次从独行菜幼苗叶片中克隆了LaAACT基因,建立其稳定的原核表达体系,为LaAACT蛋白抗体的制备,进一步研究LaAACT基因在独行菜强心苷生物合成途径中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 独行菜幼苗叶片 酶乙酰CoA酰基转移酶 基因克隆 序列分析 原核表达

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卵泡刺激素及其测定法研究进展 被引量：3

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作者 张媛 吴彦霖 +2 位作者 张铭露 杨泽岸 高华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期573-578,共6页

卵泡刺激素是由脑垂体前叶合成与分泌的一种糖蛋白促性腺激素。目前,是人类辅助生殖技术临床应用最为广泛的药物。中国、英国、美国等各国药典收录的法定卵泡刺激素生物活性测定方法均为动物卵巢增重法。而随着检测技术的进步,以及重组... 卵泡刺激素是由脑垂体前叶合成与分泌的一种糖蛋白促性腺激素。目前,是人类辅助生殖技术临床应用最为广泛的药物。中国、英国、美国等各国药典收录的法定卵泡刺激素生物活性测定方法均为动物卵巢增重法。而随着检测技术的进步,以及重组来源卵泡刺激素的发展,越来越多的体外活性测定法,甚至是理化检测法应运而生。本文就卵泡刺激素的功能、结构、临床应用以及现有测定方法进行全面综述。 展开更多

关键词 卵泡刺激素 重组 生物测定 免疫测定

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第5批人绝经尿促性腺素国家标准品的制备与标定 被引量：1

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作者 吴彦霖 张媛 +13 位作者 万龙岩 汪佩华 李严 夏星辉 叶飞 唐黎明 王巧旭 孟长虹 王瑶 吴海苹 贺庆 张铭露 杨泽岸 高华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期441-446,共6页

目的:制备和标定第5批人绝经尿促性腺素(HMG)国家标准品。方法:以WHO第5批国际标准品10/286作为标准,选择6个实验室,采用《中华人民共和国药典》2015年版四部1216卵泡刺激素(FSH)测定法和1217黄体生成素(LH)测定法对第5批HMG国家标准品... 目的:制备和标定第5批人绝经尿促性腺素(HMG)国家标准品。方法:以WHO第5批国际标准品10/286作为标准,选择6个实验室,采用《中华人民共和国药典》2015年版四部1216卵泡刺激素(FSH)测定法和1217黄体生成素(LH)测定法对第5批HMG国家标准品待标品的生物效价进行标定;按照2015年版药典四部通则1431生物统计法中的量反应平行线测定法,采用BS 2000软件计算生物效价,并进行合并计算。结果:第5批HMG国家标准品待标品经协作标定,确定其生物效价FSH为220 IU·安瓿^(-1),LH为203 IU·安瓿^(-1)。结论:本批待标品可作为第5批HMG国家标准品供HMG及相关制剂的生物效价测定用。 展开更多

关键词 人绝经尿促性腺素 卵泡生成激素 促黄体生成素 生物测定 效价 标准品制备

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第10批绒促性素国家标准品的标定 被引量：1

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作者 吴彦霖 张媛 +15 位作者 万龙岩 汪佩华 唐黎明 王巧旭 芮菁 华晓东 侯娟 巩媛媛 夏星辉 叶飞 李严 吴海苹 张铭露 贺庆 杨泽岸 高华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期1906-1910,共5页

目的:研制第10批绒促性素(HCG)国家标准品。方法:依据《中华人民共和国药典》2015年版四部1209"绒促性素生物测定法",以第5批国际标准品07/364作为参考,联合6个实验室对HCG国家待标品的生物效价进行协作标定。结果:本批HCG待... 目的:研制第10批绒促性素(HCG)国家标准品。方法:依据《中华人民共和国药典》2015年版四部1209"绒促性素生物测定法",以第5批国际标准品07/364作为参考,联合6个实验室对HCG国家待标品的生物效价进行协作标定。结果:本批HCG待标品经协作标定和合并计算,生物效价为55 IU·安瓿^(-1)。结论:本品可作为第10批HCG国家标准品,供HCG原料药及制剂的效价测定使用。 展开更多

关键词 标准品研制 绒促性素 生物测定 效价

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谷氨酰胺对骨肽药物促UMR106细胞增殖试验的影响

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作者 张媛 纳涛 +2 位作者 吴彦霖 杨泽岸 高华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1060-1064,共5页

目的考察谷氨酰胺对骨肽生物活性测定方法——UMR106细胞增殖试验的影响。方法使用液质联用测定骨肽原液中谷氨酰胺含量,采用CCK-8法检测谷氨酰胺对UMR106细胞增殖影响的浓度范围,以及骨肽原液对UMR106细胞的增殖作用。同时对骨肽原液... 目的考察谷氨酰胺对骨肽生物活性测定方法——UMR106细胞增殖试验的影响。方法使用液质联用测定骨肽原液中谷氨酰胺含量,采用CCK-8法检测谷氨酰胺对UMR106细胞增殖影响的浓度范围,以及骨肽原液对UMR106细胞的增殖作用。同时对骨肽原液浓度与相应谷氨酰胺浓度,以及谷氨酰胺试验应用浓度(骨肽原液浓度1 mg/mL)与相应细胞增殖率进行相关性分析。结果骨肽原液中谷氨酰胺含量差异较大,且UMR106细胞对谷氨酰胺较为敏感。骨肽原液浓度与其相应谷氨酰胺含量、谷氨酰胺试验应用浓度与相应细胞增殖率均无显著相关性(r分别为0.1463和0.5471,P均>0.05)。结论骨肽原液中谷氨酰胺不会对骨肽生物活性测定方法——UMR106细胞增殖试验产生影响。 展开更多

关键词 骨肽 谷氨酰胺 UMR106细胞 细胞增殖 相关性

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