增强型绿色荧光蛋白与IgG抗体亲和肽融合蛋白的制备

1

作者 杨洪鸣 张义军 高鹏 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2007年第5期25-28,共4页

目的构建、表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与IgG抗体亲和肽融合蛋白,并对其生物学功能进行研究。方法将EGFP基因与IgG抗体亲和肽基因重组,构建原核分泌表达载体pSpA-EGFP-His,通过竞争ELISA和荧光光谱测定,考察其在大肠杆菌中表达产物SpA... 目的构建、表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与IgG抗体亲和肽融合蛋白,并对其生物学功能进行研究。方法将EGFP基因与IgG抗体亲和肽基因重组,构建原核分泌表达载体pSpA-EGFP-His,通过竞争ELISA和荧光光谱测定,考察其在大肠杆菌中表达产物SpA-EGFP融合蛋白的生物学活性。结果SpA-EG-FP融合蛋白的相对分子质量42kD,与理论值相近,荧光光谱与文献报道一致,且能与SpA-Peroxidase竞争结合反应体系中的兔IgG抗体。结论SpA-EGFP融合蛋白在E.coliDH5α中正确表达,且具有EGFP的荧光特性和与哺乳动物IgG抗体结合的生物学活性。 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 IgG亲和肽 融合蛋白

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甘氨酸和TritonX-100对ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达影响的初步研究 被引量：2

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作者 唐金宝 杨洪鸣 +1 位作者 张义军 李万忠 《中国医药生物技术》 CSCD 2007年第4期266-269,共4页

目的考察不同浓度的甘氨酸和TritonX-100对葡萄球菌蛋白质AZZ亲和肽-增强型绿色荧光蛋白(ZZ-EGFP)融合蛋白在大肠杆菌分泌表达的影响。方法研究设计为两因素三水平析因设计。向液体培养基中分别加入终浓度0、1%、2%的甘氨酸和0、1%、2%... 目的考察不同浓度的甘氨酸和TritonX-100对葡萄球菌蛋白质AZZ亲和肽-增强型绿色荧光蛋白(ZZ-EGFP)融合蛋白在大肠杆菌分泌表达的影响。方法研究设计为两因素三水平析因设计。向液体培养基中分别加入终浓度0、1%、2%的甘氨酸和0、1%、2%的TritonX-100(共9种组合方式,终浓度均为0者为对照组),诱导大肠杆菌周质腔内ZZ-EGFP融合蛋白泄漏到液体培养基中,以培养上清液荧光强度为观察指标,通过ZZ-EGFP融合蛋白浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中ZZ-EGFP融合蛋白表达量。结果培养基中分别加入1%、2%甘氨酸或1%、2%TritonX-100培养后,培养上清液荧光强度分别为283±11、711±19和622±25、733±25,与对照组(74±5)比较,组间差异均有统计学意义(甘氨酸:F=10.881,P=0.024;TritonX-10:F=12.848,P=0.018);而且甘氨酸与TritonX-100两者之间有交互效应(F=5.441,P=0.005),其中培养基中同时含有终浓度2%甘氨酸及1%TritonX-100时培养上清液荧光强度最高(1854±45),ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达量达到10.4mg/L,与对照组(0.94mg/L)相比提高了11倍。结论甘氨酸和TritonX-100能提高ZZ-EGFP融合蛋白在液体培养基中的分泌表达量。 展开更多

关键词 甘氨酸 辛苯昔醇 重组融合蛋白质类 葡萄球菌蛋白质A 绿色荧光蛋白质类 大肠杆菌

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十二指肠空肠旁路术治疗后T2DM大鼠血糖水平及回肠组织中GLUT-1表达观察 被引量：1

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作者 冯启凯 季万胜 +3 位作者 杨洪鸣 郭瑜 刘凤娇 曲梅花 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第39期23-25,共3页

目的观察十二指肠空肠旁路术(DJB)后2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖水平及回肠组织中葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达变化。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为空白组、模型组和手术组。模型组和手术组以腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。手术... 目的观察十二指肠空肠旁路术(DJB)后2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖水平及回肠组织中葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达变化。方法雄性Wistar大鼠36只,随机分为空白组、模型组和手术组。模型组和手术组以腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。手术组施行DJB术。分别于术后第1、4、8周(空白组、模型组于同一时间)测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平。术后第8周处死大鼠,分别采用免疫荧光双标记法及Western blotting法检查回肠组织中的GLUT-1。结果手术组术后1、4、8周后空腹血糖、空腹胰岛素水平降低,与术前相比,P均<0.01;手术组、空白组术后1、4、8周空腹血糖及空腹胰岛素水平低于模型组(P均<0.01)。手术组、模型组、空白组GLUT-1阳性细胞数分别为(226±7)、(78±5)、(46±4)个,三组两两相比,P均<0.01;手术组、模型组、空白组回肠组织中GLUT-1相对表达量分别为1.642 1±0.213 4、0.723 2±0.126 2、0.315 4±0.075 1,三组两两相比,P均<0.01。结论 DJB术后T2DM大鼠血糖水平降低,回肠组织中GLUT-1表达增高,其降糖作用可能与调节GLUT-1表达有关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 十二指肠空肠旁路术 血糖 葡萄糖转运蛋白1 动物实验

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地高辛血药浓度测定方法的应用与分析 被引量：6

4

作者 吴文珊 杨洪鸣 唐金宝 《中国实用医药》 2008年第1期149-151,共3页

查阅近年来国内外地高辛血药浓度测定的相关文献,进行分类整理并总结地高辛血药浓度的检测分析方法,为满足不同临床检测需求选用合适的测定方法起一定参考作用。

关键词 地高辛 血药浓度 检测方法

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ZZ亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白的制备与初步应用 被引量：1

5

作者 鲍如梦 赵爽佳 +2 位作者 薛敏 杨洪鸣 唐金宝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1214-1216,1220,共4页

目的:构建、表达ZZ亲和肽与碱性磷酸酶(AP)融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:将ZZ亲和肽基因与AP基因重组,构建原核表达载体p EZZ-AP并利用大肠杆菌表达,金属离子亲和层析纯化目的蛋白,Western blot鉴定ZZ-AP生物学活性并初步应用于... 目的:构建、表达ZZ亲和肽与碱性磷酸酶(AP)融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:将ZZ亲和肽基因与AP基因重组,构建原核表达载体p EZZ-AP并利用大肠杆菌表达,金属离子亲和层析纯化目的蛋白,Western blot鉴定ZZ-AP生物学活性并初步应用于免疫细胞化学。结果:所构建重组质粒p EZZ-AP经E.coli DH5α表达,SDS-PAGE结果显示目的蛋白相对分子量为62 k D,与理论值相近。Western blot结果表明ZZ-AP融合蛋白既具有兔Ig G抗体结合活性,又具有碱性磷酸酶活性,在细胞免疫组化应用中与AP标记的羊抗兔二抗显色模式与效果相似。结论:ZZ-AP融合蛋白构建成功,该融合蛋白具有兔Ig G抗体结合活性和碱性磷酸酶活性,细胞免疫组化应用结果表明该融合蛋白在免疫分析中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 ZZ亲和肽 碱性磷酸酶 融合蛋白 应用

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基于Avi-tag技术的双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白 被引量：1

6

作者 赵爽佳 鲍如梦 +3 位作者 唐海科 包雪翠 杨洪鸣 唐金宝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期655-658,共4页

目的:利用Avi-tag技术制备双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。方法:PCR方式扩增EGFP基因片段,重组至带有双Avi-tag标签的中间质粒载体pdi-Avitag,构建原核表达载体p EGFP-(Avitag)2并转化E-.coli DH5α;表达菌株... 目的:利用Avi-tag技术制备双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。方法:PCR方式扩增EGFP基因片段,重组至带有双Avi-tag标签的中间质粒载体pdi-Avitag,构建原核表达载体p EGFP-(Avitag)2并转化E-.coli DH5α;表达菌株菌体冻融上清经金属离子亲和色谱纯化目的蛋白EGFP-(Avitag)2,以Bir A酶体外催化生物素分子与目的蛋白在Avi-tag位点的生物连接,并以Western blot和竞争ELISA鉴定生物素化产物EGFP-B2的生物素化效果。结果:成功构建p EGFP-(Avitag)2载体,并在E.coli DH5α中可溶性表达EGFP-(Avitag)2,经Western blot和竞争ELISA鉴定,EGFP-(Avitag)2分子经Bir A酶体外催化可连接两个生物素分子。结论:成功获得双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白,为其在BAS体系中的应用奠定了研究基础。 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 生物素化 Avi-tag Bir A酶

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现代生物技术在中药鉴定中的应用 被引量：8

7

作者 杨洪鸣 李真玉 唐金宝 《中国药师》 CAS 2004年第10期811-812,共2页

关键词 中药鉴定 对药 中药品种 巨大 显微鉴定 临床用药 饮片 药材 国有 保证

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试论文艺作品中方志敏形象塑造问题

8

作者 杨洪鸣 《上饶师范学院学报》 1989年第4期59-61,72,共4页

建国以来,全国发表了不少以方志敏同志业绩为题材的文艺作品。大致上可以分为两个阶段:第一阶段从1949年至1966年,以石凌鹤先生所著的话剧剧本《方志敏》为代表。第二段从1976年至今,文艺界出现了空前繁荣的局面,许多老一辈无产阶级革... 建国以来,全国发表了不少以方志敏同志业绩为题材的文艺作品。大致上可以分为两个阶段:第一阶段从1949年至1966年,以石凌鹤先生所著的话剧剧本《方志敏》为代表。第二段从1976年至今,文艺界出现了空前繁荣的局面,许多老一辈无产阶级革命家的形象,在文阶艺作品中争相出现,反映方志敏的文艺作品在前一阶段基础上,有了新的提高。 展开更多

关键词 文艺作品 形象塑造 话剧剧本 二段 历史真实 历史小说 艺术形象 艺术典型 历史题材 人物形象

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光敏Z亲和肽-碱性磷酸酶重组蛋白的构建及其生物学活性研究

9

作者 于晓甜 张晓坤 +2 位作者 高晓艺 杨洪鸣 唐金宝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期1610-1613,共4页

目的:构建并表达含光敏基团(对苯甲酰苯丙氨酸,Bpa)的Z亲和肽-碱性磷酸酶(Z_(Bpa)-AP)重组蛋白,并研究其生物学活性。方法:基因工程技术构建Z亲和肽(第17位氨基酸密码子突变为琥珀密码子)与碱性磷酸酶融合蛋白的表达载体pZ_(TAG)-AP,并... 目的:构建并表达含光敏基团(对苯甲酰苯丙氨酸,Bpa)的Z亲和肽-碱性磷酸酶(Z_(Bpa)-AP)重组蛋白,并研究其生物学活性。方法:基因工程技术构建Z亲和肽(第17位氨基酸密码子突变为琥珀密码子)与碱性磷酸酶融合蛋白的表达载体pZ_(TAG)-AP,并与pEVOL-pBpF质粒共转化E.coli BL21,利用密码子扩展修饰蛋白质技术制备光敏Z_(Bpa)-AP重组蛋白。目的蛋白经金属离子亲和层析纯化后,考察其与抗体的共价偶联效率及偶联产物的碱性磷酸酶活性。结果:SDS-PAGE结果显示含pZ_(TAG)-AP与pEVOL-pBpF质粒的E.coli BL21在加入Bpa培养后,所表达蛋白的表观分子量(56 kD)与Z_(Bpa)-AP理论值一致;经365 nm紫外激发后,约90%的抗体与Z_(Bpa)-AP共价偶联;对照实验表明Z_(Bpa)-AP与兔F(ab')2_片段未发生共价偶联;Western blot结果表明偶联产物具有碱性磷酸酶活性。结论:成功构建光敏Z_(Bpa)-AP融合蛋白,该融合蛋白能特异性共价偶联抗体Fc位点,且偶联产物具有碱性磷酸酶活性。 展开更多

关键词 光敏Z_(Bpa)-AP重组蛋白 抗体 光亲和标记 生物学活性

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白藜芦醇多相脂质体家兔体内灌胃给药的药动学 被引量：3

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作者 杨洪鸣 唐金宝 +3 位作者 王峰 李万忠 张义军 张广学 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期203-205,共3页

目的:研究白黎芦醇多相脂质体灌胃给药后在家兔体内的药动学特征。方法:家兔一次性灌胃白黎芦醇溶液及多相脂质体后,高效液相色谱(HPLC)法测定白黎芦醇血药浓度;通过3P97程序计算药动学参数。结果:白黎芦醇溶液及多相脂质体在家兔体血... 目的:研究白黎芦醇多相脂质体灌胃给药后在家兔体内的药动学特征。方法:家兔一次性灌胃白黎芦醇溶液及多相脂质体后,高效液相色谱(HPLC)法测定白黎芦醇血药浓度;通过3P97程序计算药动学参数。结果:白黎芦醇溶液及多相脂质体在家兔体血药时程变化均符合二室模型。白黎芦醇多相脂质体在家兔体内消除相半衰期t1/2β为(4.4±0.3)h,曲线下面积AUC0→3为(4.6±0.6)mg·h·L-1,清除率CL为(22.0±2.8)L·kg-1·h-1,最大血药质量浓度Cmax为(3.10±0.07)mg.L-1,与白黎芦醇溶液药动学参数比较,其差异均有统计学意义,白黎芦醇溶液药动学参数t1/2β为(1.07±0.20)h,AUC0→3为(0.97±0.04)mg·h·L-1,CL为(103.3±4.0)L·kg-1·h-1,Cmax为(1.030±0.021)mg·mL-1。结论:白黎芦醇多相脂质体可延长白黎芦醇在家兔体内半衰期、增加其曲线下面积和提高最大血药浓度,降低其清除率,有利于提高白黎芦醇生物利用度。 展开更多

关键词 白藜芦醇 白藜芦醇多相脂质体 药动学

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皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5在肿瘤细胞株中的表达

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作者 高峰 康白 +3 位作者 杨洪鸣 赵廷坤 曲梅花 王金红 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第3期41-45,55,共6页

目的探讨皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5(c TAGE5)在肿瘤细胞株中的表达及其在肿瘤发生发展中的生物学作用。方法细胞免疫荧光化学检测c TAGE5来源于人的肿瘤细胞株的表达。取阳性表达c TAGE5的人卵巢透明细胞癌ES-2细胞,分为正常对照组、脂... 目的探讨皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5(c TAGE5)在肿瘤细胞株中的表达及其在肿瘤发生发展中的生物学作用。方法细胞免疫荧光化学检测c TAGE5来源于人的肿瘤细胞株的表达。取阳性表达c TAGE5的人卵巢透明细胞癌ES-2细胞,分为正常对照组、脂质体对照组、siRNA转染组、表柔比星(终浓度1×10-6mol/L)对照组,平板克隆形成试验和MTT法观察c TAGE5对细胞生长增殖能力的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果c TAGE5在乳腺癌、肺癌、卵巢癌均有表达,而在胃癌和肝癌肿瘤细胞中表达不明显。与正常对照组比较,siRNA转染组的肿瘤细胞增殖生长抑制(P<0.01),细胞迁移能力降低(P<0.01),表柔比星对照组也显示肿瘤细胞增殖抑制(P<0.01),细胞迁移能力降低(P<0.01)。结论 c TAGE5在不同组织来源的肿瘤细胞株表达存在差异,siRNA干扰c TAGE5表达可有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移能力。 展开更多

关键词 皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5 肿瘤细胞 RNA干扰 增殖 迁移

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重组BirA酶的原核表达及其活性鉴定

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作者 赵爽佳 鲍如梦 +2 位作者 唐海科 杨洪鸣 唐金宝 《药物生物技术》 CAS 2015年第6期489-491,共3页

构建含有r TEV酶切位点的原核表达载体p UC18-His-Bir A,利用E.coli DH5α表达重组Bir A酶,并通过酶切获得不含His标签肽的Bir A酶。PCR方式扩增Bir A基因片段重组至质粒p UC18,构建原核表达载体p UC18-His-Bir A并转化E.coli DH5α;采... 构建含有r TEV酶切位点的原核表达载体p UC18-His-Bir A,利用E.coli DH5α表达重组Bir A酶,并通过酶切获得不含His标签肽的Bir A酶。PCR方式扩增Bir A基因片段重组至质粒p UC18,构建原核表达载体p UC18-His-Bir A并转化E.coli DH5α;采用冻融法释放菌体蛋白,SDS-PAGE分析目的蛋白的存在形式;冻融上清经金属离子亲和色谱纯化获得目的蛋白His-Bir A酶,利用r TEV酶切除His标签肽,并采用HABA方法进行Bir A酶活鉴定分析。经双酶切验证、基因测序结果表明重组载体构建正确,SDS-PAGE结果显示表达产物可溶部分比例约占50%;利用r TEV酶将标签切除,经HABA测定该酶相对酶活性可达4 365 U/μg。该研究通过构建p UC18-His-Bir A质粒表达载体,实现了重组Bir A酶较高比例的可溶性表达。表达产物经r TEV酶酶切后具有较高的酶活性,为实现Bir A酶的经济、高效制备奠定了一定的实验基础。 展开更多

关键词 重组BirA酶 表达 酶活性

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把握质量守恒定律关键在于理解实质

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作者 杨洪鸣 《中学生理科月刊（初三版）（中考金刊）》 2003年第9期41-41,共1页

质量守恒定律是初中化学中的重要内容之一,它从量的方面研究化学反应的客观规律,是书写化学方程式的理论依据,怎样理解质量守恒定律呢?

关键词 质量守恒定律 化学 初中 适用范围 学习辅导

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牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析

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作者 王京红 于晓甜 +2 位作者 唐铭泽 杨洪鸣 唐金宝 《药物生物技术》 CAS 2019年第1期1-4,共4页

该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EK_(LC))。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D_4K-EK_(LC)并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同... 该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EK_(LC))。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D_4K-EK_(LC)并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率。复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EK_(LC)自切方式移除重组EK_(LC)的N-端6×His-D_4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EK_(LC),酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EK_(LC)高于商品化牛肠激酶。重组EK_(LC)在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EK_(LC)的经济、高效制备研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 重组牛肠激酶轻链 大肠杆菌 非融合蛋白 表达 包涵体 活性分析

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