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核酸诊断技术规范化的研究 被引量：12
1
作者 杨瑞馥 郭兆彪 +3 位作者 张敏丽 汪晓辉 宋亚军 王津 《生物技术通讯》 CAS 1999年第2期81-88,91,共9页
针对 PCR技术应用中的一些问题 ,从下述几方面开展了核酸诊断技术标准化的研究 :1探讨了设计引物的影响因素 ,发现根据同一基因设计的不同引物对 PCR敏感性影响较大 ,可相差 2 0倍 ,进一步研究表明 ,引物的自由能 ,尤其是引物 3′端 6... 针对 PCR技术应用中的一些问题 ,从下述几方面开展了核酸诊断技术标准化的研究 :1探讨了设计引物的影响因素 ,发现根据同一基因设计的不同引物对 PCR敏感性影响较大 ,可相差 2 0倍 ,进一步研究表明 ,引物的自由能 ,尤其是引物 3′端 6个碱基的自由能可能决定着 PCR的敏感性 ;2研制成功室温稳定的 PCR试剂 ,将所有 PCR成分 (加入一种酶保护剂 )配制并分装于微量离心管中 ,并干燥 ,试剂室温放置 8个月 ,37℃破坏 2周对检测结果无任何影响 ;3因尿嘧啶糖基化酶( UDG)可特异降解 DNA双链中的尿密啶核苷 ,PCR体系中以 d UTP代替 d TTP,并在 PCR扩增前用 UDG消化 1 5 min,就可以特异防止 PCR产物的污染。对炭疽杆菌、鼠疫杆菌、土拉杆菌和布鲁氏菌扩增结果表明 ,0 .1 U的 UDG可完全消化 1 0 3～ 1 0 8个产物分子的污染 ;4建立了微孔板杂交技术代替电泳方法检测扩增产物 ,将 PCR产物克隆作为捕获探针包被聚乙烯微孔板 ,PCR引物5′末端生物素标记 ,扩增后作为待检测探针杂交 ,通过比较影响微孔板杂交的包被、杂交和显色等因素 ,建立了 PCR- EIA技术。通过比较包被缓冲液发现镁离子及其离子强度是影响 DNA包被的重要因素 ,包被的 DNA以线型质粒最佳 ,每孔包被 30 0 ng左右的 DNA杂交效果最好 ;杂交液中加和不加甲? 展开更多
关键词 聚合酶链反应 微孔板杂交 防污染 酶免疫测定 规范化
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炭疽芽孢杆菌检测鉴定技术研究进展 被引量：16
2
作者 杨瑞馥 韩延平 +3 位作者 宋亚军 杜宗敏 翟俊辉 甄蓓 《微生物学免疫学进展》 2002年第2期53-56,共4页
炭疽芽孢杆菌的感染 ,无论是自然感染 ,还是作为生物恐怖和生物战的手段 ,快速检验和鉴定炭疽芽孢杆菌是最为关键的 ,只有正确识别生物战剂的种类 ,才能为正确实施防治措施指明方向。本文讨论了炭疽芽孢杆菌的检验鉴定技术 ,包括常规的... 炭疽芽孢杆菌的感染 ,无论是自然感染 ,还是作为生物恐怖和生物战的手段 ,快速检验和鉴定炭疽芽孢杆菌是最为关键的 ,只有正确识别生物战剂的种类 ,才能为正确实施防治措施指明方向。本文讨论了炭疽芽孢杆菌的检验鉴定技术 ,包括常规的分离培养、免疫学技术、核酸分析技术、生物传感器、基因芯片技术的应用和新诊断分子 ,如肽核酸与适配子的应用。 展开更多
关键词 炭疽芽孢杆菌 检验 鉴定
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鼠疫耶尔森菌比较和进化基因组学研究 被引量：11
3
作者 杨瑞馥 黄培堂 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期189-191,共3页
鼠疫菌是鼠疫的病原体 ,曾经引起 3次世界范围的鼠疫大流行。从基因组角度认识鼠疫菌在不同疫源地的演化对鼠疫的检验、鉴定和防治具有重要意义。本文论述了目前对鼠疫菌基因组进化的认识 。
关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 基因组 进化
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橡树岭军团菌的分离及用16S rDNA测序法的鉴定 被引量：4
4
作者 杨瑞馥 汪晓辉 +4 位作者 李崇辉 郭兆彪 张敏丽 周方 高树德 《微生物学免疫学进展》 1999年第1期1-5,共5页
军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能... 军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能定种。由于核酸分析技术和细菌鉴定观念上进步，使我们能根据１６ＳｒＤＮＡ序列比较推测细菌间进化关系，并进而对未知细菌进行鉴定和检测。我们用以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列的ＰＣＲ和测定鉴定，确定了该分离株为橡树岭军团菌（Ｌ．ｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）。 展开更多
关键词 16SrDNA 测序 PCR 橡树岭军团菌
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生物芯片技术及其应用 被引量：9
5
作者 杨瑞馥 宋亚军 《生物技术通讯》 CAS 1999年第4期286-292,共7页
生物芯片是指包被在固相载体上的高密度ＤＮＡ、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵，它是微电子学和分子生物学结合产生的新技术。该技术被评为１９９８年度世界十大科技进展之一。本文讨论了生物芯片技术的发展、技术参数、相关仪器的发... 生物芯片是指包被在固相载体上的高密度ＤＮＡ、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵，它是微电子学和分子生物学结合产生的新技术。该技术被评为１９９８年度世界十大科技进展之一。本文讨论了生物芯片技术的发展、技术参数、相关仪器的发展和在ＤＮＡ序列测定、基因表达分析、基因分型、基因多态性分析、疾病的诊断、突变分析、药物筛选和微生物的鉴定等方面的应用。 展开更多
关键词 生物芯片 微点阵 仪器 应用
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鼠疫耶尔森菌的研究及其军事医学意义 被引量：12
6
作者 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期172-176,共5页
随着军事医学的发展,防生物危害医学学科研究的范畴应当包括目前认识到的所有可以导致生物危害的领域,包括生物战、生物恐怖、外来有害生物入侵、生物资源流失、转基因生物安全和研发、突发疫情的应对研究等。鼠疫耶尔森菌是导致自然疫... 随着军事医学的发展,防生物危害医学学科研究的范畴应当包括目前认识到的所有可以导致生物危害的领域,包括生物战、生物恐怖、外来有害生物入侵、生物资源流失、转基因生物安全和研发、突发疫情的应对研究等。鼠疫耶尔森菌是导致自然疫源性疾病鼠疫的病原菌,也是重要的生物战和生物恐怖剂之一,历史上曾3次导致世界鼠疫大流行,多次被用于战争,并多次在战争中导致军队感染。目前鼠疫主要分布在亚洲、非洲、美洲及俄罗斯地区,我国现有12种类型的鼠疫自然疫源地,分布在19个省(区),占国土面积的15%左右,疫情监测结果表明,疫区动物鼠疫自然疫源地异常活跃,面积不断扩大,逐渐向城市逼近,防治形势严峻。2001年美国"9.11"恐怖袭击后,鼠疫耶尔森菌的研究方兴未艾,其中很多研究进展对其他生物恐怖剂的研究具有借鉴意义。微生物法医学溯源数据库的建立及其检测新技术的研究进展为生物恐怖剂的溯源和应急处置提供了很好的经验。 展开更多
关键词 耶尔森菌 鼠疫 生物战 军事医学
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从外环境分离军团杆菌的研究 被引量：1
7
作者 杨瑞馥 王菊英 +1 位作者 黄留玉 高树德 《中国公共卫生》 CAS CSCD 1989年第11期21-23,共3页
我们通过腹腔注射嗜肺军团杆菌(Lp)感染豚鼠证明,感染后第4～5天剖杀取脾和肺脏新鲜切面压印于BCYE_α培养基是再分离Lp的最佳条件,又比较了离心和钾明矾絮凝两种集菌法对再分离Lp的影响,结果发现后者分离效果好。从而摸索出从外环境分... 我们通过腹腔注射嗜肺军团杆菌(Lp)感染豚鼠证明,感染后第4～5天剖杀取脾和肺脏新鲜切面压印于BCYE_α培养基是再分离Lp的最佳条件,又比较了离心和钾明矾絮凝两种集菌法对再分离Lp的影响,结果发现后者分离效果好。从而摸索出从外环境分离军团杆菌的合适程序:钾明矾絮凝—豚鼠—BCYE_α培养基。为了验证此法的实际应用价值,我们从北京某两宾馆空调系统采集水样29份,分离出6株Lp,说明这一方法是可行的。 展开更多
关键词 军团杆菌 豚鼠 分离 外环境
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鼠疫疫苗的相关基础研究 被引量：2
8
作者 杨瑞馥 《生命科学》 CSCD 2007年第6期598-606,共9页
1 鼠疫菌比较转录组学研究 全基因组DNA芯片转录谱芯片在细菌转录调控网络的研究上存在着巨大的潜力，除了分析单个体外或体内条件转录谱获悉刺激元和调控元的信息外，更重要的是将多个条件的转录谱数据进行综合分析，结合生物信息学... 1 鼠疫菌比较转录组学研究 全基因组DNA芯片转录谱芯片在细菌转录调控网络的研究上存在着巨大的潜力，除了分析单个体外或体内条件转录谱获悉刺激元和调控元的信息外，更重要的是将多个条件的转录谱数据进行综合分析，结合生物信息学信息，推测全基因组范围内的转录调节包括操纵予和启动予结合位点的预测。 展开更多
关键词 基础研究 鼠疫 生物信息学 转录组学 DNA芯片 疫苗 调控网络 全基因组
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从土壤中分离DNA的研究进展 被引量：19
9
作者 杨瑞馥 《微生物学免疫学进展》 2000年第2期57-61,共5页
从土壤中分离DNA用于各种分析有着重要的意义。本文论述了土壤中存在的生物活性抑制因子及其消除对策 ,讨论了从土壤中分离DNA的基本步骤及应注意的问题 ,并列举了两种从土壤中分离DNA的简便方法。
关键词 土壤 DNA提取 生物活性抑制剂 微生物区系
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遗传聚类群特异的寡核苷酸探针
10
作者 杨瑞馥 林万明 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 1991年第2期87-89,96,共4页
近十几年来,随着分子遗传学的不断发展和基因工程研究的深入,人们已清楚地认识到,不同种生物体含有不同的DNA序列。于是我们可以利用核苷酸咸基序互补的原理,通过核酸杂交阐明细菌间的亲缘关系。核酸杂交探针广泛地应用于微生物的鉴定... 近十几年来,随着分子遗传学的不断发展和基因工程研究的深入,人们已清楚地认识到,不同种生物体含有不同的DNA序列。于是我们可以利用核苷酸咸基序互补的原理,通过核酸杂交阐明细菌间的亲缘关系。核酸杂交探针广泛地应用于微生物的鉴定、传染病诊断、流行病学调查、环境中遗传变异的检测和微生物生态系统中群体结构和动力学的研究。 展开更多
关键词 寡核苷酸探针 核酸杂交 微生物鉴定 流行病学调查 微生物生态系统 DNA 基因工程研究 核昔酸 基序 群体结构
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肽核酸及其应用
11
作者 杨瑞馥 郭兆彪 《生物技术通讯》 CAS 1996年第1期35-38,共4页
我们大家都熟知“合成寡核苷酸”是指人工制造的一小段DNA,它严格复制了天然DNA,每段寡核苷酸由5′-OH起始,以3′-OH终止。这种“合成寡核苷酸”已作为探针、引物、连接子和基因片段等广泛用于分子生物学研究。而谈及肽核酸(Peptide Nuc... 我们大家都熟知“合成寡核苷酸”是指人工制造的一小段DNA,它严格复制了天然DNA,每段寡核苷酸由5′-OH起始,以3′-OH终止。这种“合成寡核苷酸”已作为探针、引物、连接子和基因片段等广泛用于分子生物学研究。而谈及肽核酸(Peptide Nucleic Acids,PNA)就不如“合成寡核苷酸”那么熟悉了。 展开更多
关键词 肽核酸 DNA双链 寡核苷酸 天然DNA 连接臂 特异性 分子生物学研究 等位基因 寡聚物 突变型
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下期专题预告
12
作者 杨瑞馥 黄培堂 +1 位作者 尹庆水 艾福志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期106-106,共1页
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鼠疫耶尔森菌基因组进化与生态位适应研究 被引量：77
13
作者 周冬生 韩延平 +18 位作者 宋亚军 童宗中 裴德翠 戴二黑 张玲 包静月 李敏 崔百忠 张秀清 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期204-210,共7页
目的　探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系。方法　对 36株鼠疫耶尔森菌和 7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析 ,鉴定差异区段 (DFR) ,并对 2 6 0株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证 ,分析... 目的　探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系。方法　对 36株鼠疫耶尔森菌和 7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析 ,鉴定差异区段 (DFR) ,并对 2 6 0株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证 ,分析各DFR在这些鼠疫耶尔森菌中的分布 ,同时进行基因组岛分析。结果　在鼠疫耶尔森菌基因组中鉴定出 2 2个DFR ,基于DFR图谱 ,将鼠疫耶尔森菌中国分离株分成 14个基因组型。鼠疫耶尔森菌共有 2 1个基因组岛 ,其中 18个已存在于假结核杆菌中 ,余下 3个为鼠疫耶尔森菌独有。结论　探明了各基因组岛在鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌间的差异分布 ,探究了鼠疫耶尔森菌的起源进化 ;建立了鼠疫耶尔森菌基因组分型系统 ;建立了各基因组型别间的系统发育关系 ,初步揭示了鼠疫耶尔森菌基因组的进化规律及其与鼠疫耶尔森菌生态位适应和鼠疫疫源地扩展之间的关系 。 展开更多
关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 DNA芯片 基因组进化 生态位适应
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鼠疫耶尔森菌菌株91001全基因组序列测定及初步分析 被引量：36
14
作者 宋亚军 童宗中 +26 位作者 王津 郭兆彪 汪莉 韩延平 张建国 裴德翠 周冬生 秦海鸥 庞昕 韩玉军 翟俊辉 李敏 祁芝珍 金丽霞 戴瑞霞 崔百忠 陈峰 李胜霆 叶辰 杜宗敏 王效义 王俊 于军 杨焕明 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期192-199,共8页
目的　测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1的全基因组序列 ,并通过比较基因组学研究 ,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法　采用全基因组鸟枪法测定 910 0 1菌株的全基因组序列 ,利用比较基因组... 目的　测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株 910 0 1的全基因组序列 ,并通过比较基因组学研究 ,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法　采用全基因组鸟枪法测定 910 0 1菌株的全基因组序列 ,利用比较基因组方法对 910 0 1与另外 2株鼠疫耶尔森菌(CO92和KIM)的全基因组进行比较研究。结果　910 0 1菌株的基因组包括 1条染色体和 4个质粒 (pPCP1、pCD1、pMT1和pCRY)。pPCP1质粒长度为 96 0 9bp,与参考菌株基本一致 ;pCD1质粒是编码Ⅲ型分泌系统的质粒 ,长度为70 15 9bp,编码情况与参考菌株基本相同 ,但重排导致了质粒的结构与参考菌株存在差异 ;pMT1质粒长度为10 6 6 4 2bp,保留了较多的原始质粒片段 ,毒力相关基因与参考菌株没有差异 ;pCRY质粒是本研究中新发现的质粒 ,在国内外研究中未曾报道 ,这一质粒长度为2 174 2bp ,具有独立复制能力 ,有一群编码Ⅳ型分泌系统的基因。 910 0 1菌株的染色体长度为4 5 95 0 6 5bp,有 4 0 37个编码序列 (CDS) ,其中 14 1个是假基因 ;染色体中存在着非常丰富的插入序列 ,由于存在IS序列介导的基因组重排 ,910 0 1菌株染色体的结构与参考菌株存在较大差异。通过比较基因组学分析 ,初步确定了910 0 1菌株甘油降解阳性、硝酸盐还原阴性、阿拉? 展开更多
关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 基因组 进化 序列分析 DNA
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16SrDNA基因芯片检测临床常见感染性细菌 被引量：33
15
作者 翟俊辉 郭兆彪 +4 位作者 宋亚军 王津 张敏丽 杨瑞馥 韩俊 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期133-136,共4页
目的　提高细菌和临床微生物检测的速度和准确性 ,建立含有 2 0种细菌探针在内的感染性细菌检测用基因芯片模型。方法　使用 16SrDNA克隆探针和合成的寡核苷酸探针两种 ,利用点样仪制成基因芯片。细菌DNA经过 16SrDNA通用引物扩增后与... 目的　提高细菌和临床微生物检测的速度和准确性 ,建立含有 2 0种细菌探针在内的感染性细菌检测用基因芯片模型。方法　使用 16SrDNA克隆探针和合成的寡核苷酸探针两种 ,利用点样仪制成基因芯片。细菌DNA经过 16SrDNA通用引物扩增后与芯片上的探针杂交 ,然后用荧光扫描仪检测信号。结果　基因芯片能够用于细菌检测 ,克隆探针具有广泛和灵敏的特点 ,但是交叉反应明显 ;寡核苷酸探针具有较高的特异性 ,但是灵敏度稍差。结论　cDNA探针和寡核苷酸探针结合或设计几个不同的探针来指向同一株细菌很可能是将来基因芯片的检测方向。 展开更多
关键词 检测 感染性细菌 基因芯片 细菌感染 16S RDNA
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鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型——田鼠型的提出 被引量：24
16
作者 周冬生 童宗中 +16 位作者 宋亚军 张玲 裴德翠 庞昕 韩延平 李敏 崔百忠 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期211-215,共5页
目的　探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法　通过全基因组序列的比较分析 ,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变 ,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法 ,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果　田鼠鼠疫自然疫源... 目的　探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法　通过全基因组序列的比较分析 ,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变 ,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法 ,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果　田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变 ,所有甘油利用阴性菌株的 glpD基因发生了突变 ,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论　提出了一个新的生物型———田鼠型 ;相应糖醇代谢相关基因发生突变是 4个生物型变异的遗传基础。 展开更多
关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 生物型 突变
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光纤生物传感器用于核酸的特异性检测 被引量：19
17
作者 翟俊辉 黄惠杰 +2 位作者 杨瑞馥 任冰强 赵永凯 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-37,共4页
为了利用光纤传感器实现对细菌核酸分子的特异性和相对快速检测 ,我们使用直径 1mm的石英光纤和 6 35nm激光二极管 ,利用倏逝波原理制作了光纤生物传感器。光纤经过处理后产生醛基化基团 ,然后与核酸分子进行共价结合。通过 3个实验来... 为了利用光纤传感器实现对细菌核酸分子的特异性和相对快速检测 ,我们使用直径 1mm的石英光纤和 6 35nm激光二极管 ,利用倏逝波原理制作了光纤生物传感器。光纤经过处理后产生醛基化基团 ,然后与核酸分子进行共价结合。通过 3个实验来验证传感器的特异性和灵敏度。荧光素溶液直接检测 ,使用互补模式寡核苷酸分子 (2 5mer)进行核酸杂交模式实验和设计嗜肺军团菌一段特异性探针与荧光标记嗜肺军团菌染色体DNA杂交。结果表明 :光纤检测荧光素的灵敏度可达 0 0 1nmol L ,而生物芯片扫描仪最低可检测到 1nmol L的荧光素 ;模式寡核苷酸杂交表明 :光纤传感器可以特异性地检出目的核酸分子 ,灵敏度可达纳克级水平 ;染色体杂交结果显示在正常检测浓度下 ,光纤检测军团菌之信噪比达到了 6∶1,同时具有较好的特异性。检测时间约需要 3～ 4h。我们构建的光纤生物传感器可以用于核酸分子的特异性检测 ,并且具有较好的灵敏度 ,对光纤表面修饰、样品处理和杂交过程的优化可望使之应用于实际标本的检测。 展开更多
关键词 光纤传感器 生物传感器 核酸 特异性检测
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鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片的研制及用于比较基因组学分析 被引量：21
18
作者 周冬生 韩延平 +17 位作者 戴二黑 宋亚军 包静月 裴德翠 李敏 崔百忠 张秀清 童宗中 王津 郭兆彪 祁芝珍 金丽霞 翟俊辉 杜宗敏 王效义 汪建 黄培堂 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期200-203,共4页
目的　研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片 ,并将其用于比较基因组分析。方法　挑选出 4 0 0 5条鼠疫耶尔森菌基因 ,PCR扩增各基因 ,以纯化的PCR产物点样制备芯片 ,采用双色荧光杂交策略 ,进行芯片比较基因组杂交。结果　设计了若干质控... 目的　研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片 ,并将其用于比较基因组分析。方法　挑选出 4 0 0 5条鼠疫耶尔森菌基因 ,PCR扩增各基因 ,以纯化的PCR产物点样制备芯片 ,采用双色荧光杂交策略 ,进行芯片比较基因组杂交。结果　设计了若干质控杂交组合 ,芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致。 展开更多
关键词 耶尔森氏菌 鼠疫 DNA芯片 比较基因组学
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通用基因芯片检测感染性细菌方法的研究 被引量：19
19
作者 翟俊辉 宋亚军 +3 位作者 杜宗敏 郭兆彪 王津 杨瑞馥 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期430-431,共2页
目的　为提高临床微生物的检测速度和准确性 ,建立一次实验就能检测出一个样品中多个目标的方法。方法　利用生物信息学手段设计 16种常见临床细菌的寡核苷酸探针 ,对 16种临床常见微生物进行检测。结果　建立以 16SrDNA为对象的基因芯... 目的　为提高临床微生物的检测速度和准确性 ,建立一次实验就能检测出一个样品中多个目标的方法。方法　利用生物信息学手段设计 16种常见临床细菌的寡核苷酸探针 ,对 16种临床常见微生物进行检测。结果　建立以 16SrDNA为对象的基因芯片检测方法。利用寡核苷酸探针芯片对 16种临床常见细菌进行检测的结果证明 ,大部分的细菌都可以由 4条探针确定到种的位置。纯细菌菌液最低可以检测到 2 0 0 (铜绿假单胞菌 )到 2 35 (金黄色葡萄球菌 )个细胞。血液模拟标本只能得到 2 0 0 0到 2 35 0 0个细胞。染色体系列稀释灵敏度实验表明基因芯片检测比PCR -电泳灵敏 10倍。混合标本盲测实验结果表明 ,样品中如果存在一个以上的待测对象也可以检测出来。结论　利用寡核苷酸为探针的基因芯片检测系统具有一定的种属鉴别能力 ,可以将本实验中提及的大部分细菌区分到种的位置。整个检测过程大约需要 4 5h。 展开更多
关键词 基因芯片 微阵列 感染性细菌 通用检测系统 16S RRNA
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用双重聚合酶链快速鉴别葡萄球菌及其甲氧西林耐药性 被引量：28
20
作者 阳志强 郭兆彪 +3 位作者 宋亚军 周正强 王津 杨瑞馥 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2003年第10期916-918,共3页
目的　建立一种同时鉴别金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)的快速方法。方法　利用双重聚合酶链反应 (PCR)技术同时检测金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶 (NUC)基因和编码耐甲氧... 目的　建立一种同时鉴别金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)的快速方法。方法　利用双重聚合酶链反应 (PCR)技术同时检测金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶 (NUC)基因和编码耐甲氧西林葡萄球菌青霉素结合蛋白 (PBP2a)的mecA基因。结果　 94株金黄色葡萄球菌 (SA)的NUC基因 10 0 %阳性 ,mecA基因阳性率为 4 8 9% ,药敏法MRSA的阳性率为 4 7 9% ;10 1株凝固酶阴性葡萄球菌 (CNS)的NUC基因 10 0 %阴性 ,mecA基因阳性率为 35 6 % ,药敏法MRCNS阳性率为 34 7%。结论　双重PCR技术检测葡萄球菌 (SA、CNS)及其甲氧西林耐药性具有简便、快速、敏感和特异的特点 。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 葡萄球菌属 NUC基因 MECA基因
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