DNA克隆载体的发展和应用 被引量：6

1

作者 刘建喜 林爱星 +1 位作者 丁翔 陈永福 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期41-44,共4页

ＤＮＡ克隆载体的发展和应用刘建喜林爱星丁翔陈永福（中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京１０００９４）ＴｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓＬｉｕＪｉａｎ... ＤＮＡ克隆载体的发展和应用刘建喜林爱星丁翔陈永福（中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京１０００９４）ＴｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓＬｉｕＪｉａｎｘｉＬｉｎＡｉｘｉｎＤｉｎｇＸｉａ... 展开更多

关键词 载体 DNA克隆

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牛精子头后部sp18族膜蛋白的分离 被引量：2

2

作者 苟克勉 林爱星 +3 位作者 安晓荣 尚丽娟 任立明 陈永福 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期97-102,共6页

牛鲜精经钙离子载体Ａ２３１８７诱导的顶体反应后，水浴超声波和离心分离得到的精子头低渗处理后制备兔抗牛精子ＩｇＧ（抗ｓｐ１８ＩｇＧ）。激光共聚焦间接免疫组化定位显示牛鲜精经上述生化和物理处理后，剩余的膜蛋白基本位于头后... 牛鲜精经钙离子载体Ａ２３１８７诱导的顶体反应后，水浴超声波和离心分离得到的精子头低渗处理后制备兔抗牛精子ＩｇＧ（抗ｓｐ１８ＩｇＧ）。激光共聚焦间接免疫组化定位显示牛鲜精经上述生化和物理处理后，剩余的膜蛋白基本位于头后部紧邻赤道板的大部分区域（ｓｐ１８质膜区域）和尾前段。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示：用３种去污剂协同提取得到的位于头后部ｓｐ１８质膜区域的膜蛋白主要有３种，分子量分别为１８，１６和１４ｋＤａ，薄层扫描发现它们约占牛精子质膜蛋白总量的６４％；ｓｐ１８单克隆抗体免疫印迹证明，这３种蛋白具有相同的抗原决定簇，故统称ｓｐ１８族膜蛋白；抗ｓｐ１８ＩｇＧ免疫印迹发现，除ｓｐ１８族抗原外，鲜精表面还存在一条６０ｋＤａ的杂交带，该蛋白带在顶体反应后消失；另外，牛精清的１４～１８ｋＤａ间的蛋白带和鸡卵溶菌酶（１４３ｋＤａ）也与抗ｓｐ１８ＩｇＧ有杂交信号。本方法的建立和ｓｐ１８单抗的生产，为进一步探讨ｓｐ１８族膜蛋白的基因结构及其在受精过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 牛精子 sp18族膜蛋白 分离 头后部 精子

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兔转基因单细胞克隆株的分离培养及其染色体倍性分析 被引量：2

3

作者 侯健 安晓荣 +3 位作者 关宏 苟克勉 林爱星 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第5期26-28,共3页

为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性 ,用脂质体介导的转染方法将质粒DNApEGFP -C1(带有报告基因GFP和Neor)导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中 ,经G4 18药物筛选后 ,分离出 73个GFP阳性细胞克隆 ,最... 为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性 ,用脂质体介导的转染方法将质粒DNApEGFP -C1(带有报告基因GFP和Neor)导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中 ,经G4 18药物筛选后 ,分离出 73个GFP阳性细胞克隆 ,最后存活 13个 (18% ) ,对其中 9个克隆的染色体倍性进行分析 ,结果只有 2个 (2 2 % )克隆的染色体倍性正常率在 75 %以上 ,分别为 80 %和 75 % ,其余 7个克隆的染色体倍性正常率均在 70 %以下。这表明 ,当使用转基因单细胞克隆株作为供核细胞生产克隆动物时 ,单细胞克隆的增殖代数和染色体倍性的稳定性需要进一步研究提高。 展开更多

关键词 兔 转基因单细胞克隆株 分离培养 染色体倍性 核型分析 胎儿成纤维细胞系

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端粒酶的研究进展 被引量：5

4

作者 陈新荣 林爱星 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第4期5-8,共4页

端粒酶是由RNA模板和蛋白质催化亚基组成的核糖蛋白颗粒。它解决染色体的未端复制问题 ,归属于逆转录酶家族又和逆转录酶有一定的差别。端粒酶的缺失能在细胞和机体水平引起各种疾病的发生 ,且端粒的过度表达和细胞的永生化和癌变直接相... 端粒酶是由RNA模板和蛋白质催化亚基组成的核糖蛋白颗粒。它解决染色体的未端复制问题 ,归属于逆转录酶家族又和逆转录酶有一定的差别。端粒酶的缺失能在细胞和机体水平引起各种疾病的发生 ,且端粒的过度表达和细胞的永生化和癌变直接相关 ,其中端粒蛋白在此过程中可能起调控作用。端粒酶的结构和功能决定了它有广泛的应用前景。 展开更多

关键词 端粒梅 端粒蛋白 永生化 肿瘤生成

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猪、牛成纤维细胞α-1，3-半乳糖基转移酶基因的敲除以及人白细胞抗原-G1基因的敲入 被引量：4

5

作者 周健 林爱星 陈永福 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期301-306,共6页

构建了敲除猪α-1,3-GT并敲入人白细胞抗原HLA-G1基因的打靶载体pZJ,其中以新霉素抗性基因（Neo）为正筛选基因,绿色荧光蛋白基因（GFP）为负筛选基因。采用优化的脂质体转染法将打靶载体pZJ转染于一个长势良好的胎猪成纤维细胞系中,经7... 构建了敲除猪α-1,3-GT并敲入人白细胞抗原HLA-G1基因的打靶载体pZJ,其中以新霉素抗性基因（Neo）为正筛选基因,绿色荧光蛋白基因（GFP）为负筛选基因。采用优化的脂质体转染法将打靶载体pZJ转染于一个长势良好的胎猪成纤维细胞系中,经7天G418（600μg/ml）药物筛选,共获得30个Neo抗性细胞克隆,其中12个为非绿色荧光细胞克隆,7个扩大培养良好,提取阳性克隆细胞的基因组DNA并进行PCR检测。经PCR结果检测,打靶载体转入到胎猪成纤维细胞中,其中3个非荧光阳性单克隆细胞在细胞基因组中进行了定点整合。以同样的脂质体转染条件将pZJ转染牛胎儿成纤维细胞,经筛选并对其进行PCR检测,其中2个均为定点整合阳性。该研究为今后克隆出表达HLA-G1而不表达α-1,3-GT基因的个体猪,从而提供可以真正用于临床的异种器官打下了基础,也为猪牛之间的跨物种敲除提供了一个佐证。 展开更多

关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶基因 基因打靶 人白细胞抗原HLA-G1

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β乳球蛋白基因(βlg)的表达调控及其应用 被引量：2

6

作者 刘建喜 林爱星 +1 位作者 周云 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第3期23-27,共5页

β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异... β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异位表达、差异表达、表达水平低和表达受位置效应影响等问题。构建表达载体时充分考虑 βlg启动子和远端调控元件 ,有可能使外源基因获得稳定、高效、特异的表达。 展开更多

关键词 β乳球蛋白基因 表达调控 乳腺组织 特异性表达 表达载体

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家兔精子膜蛋白rSP10在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备 被引量：1

7

作者 刘建喜 林爱星 +3 位作者 杨毅 侯健 胡宏宇 陈永福 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期314-317,共4页

为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性 ,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中 ,N端具有His6 肽的融合蛋白re rSP10得到高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 6 7%。经DEAE柱层析纯化表达产物 ,re rSP1... 为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性 ,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中 ,N端具有His6 肽的融合蛋白re rSP10得到高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 6 7%。经DEAE柱层析纯化表达产物 ,re rSP10 ,产量约为 5 0mg mL培养物。Western实验结果表明 ,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re rsp10 ,说明大肠杆菌表达的re rSP10具有免疫原性。用纯化的re rSP10免疫雌性兔 ,得到re rSP10专一性多克隆抗血清。将re rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中 ,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性 。 展开更多

关键词 家兔 精子膜蛋白 rSP10 表达 抗血清 免疫避孕

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敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并敲入HLA-G1基因的打靶载体构建 被引量：2

8

作者 周健 林爱星 陈永福 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期498-502,共5页

本实验室已克隆到猪α1,3半乳糖基转移酶基因(α1,3GT,第九外显子不全)。其中pMD3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子。本实验中利用LAPCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,... 本实验室已克隆到猪α1,3半乳糖基转移酶基因(α1,3GT,第九外显子不全)。其中pMD3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子。本实验中利用LAPCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,3GT的第9外显子序列的扩增产物,将片段克隆于pGEMTeasy载体。将5.0kb和2.0kb片段分别作为打靶载体的5′,3′同源臂,以neo为正选择标记基因,以GFP为负选择标记基因,构建敲除猪α1,3半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLAG1基因的的打靶载体pZJ。经酶切图谱和测序结果的鉴定成功地构建出敲除猪α1,3半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLAG1基因的正负双向选择的打靶载体,为异种器官移植提供了很好的探索。 展开更多

关键词 α1 3-半乳糖基转移酶基因 基因打靶 人白细胞抗原HLA-G1

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氨基酸与肝性脑病 被引量：4

9

作者 周健 林爱星 《华北煤炭医学院学报》 2003年第1期30-31,共2页

关键词 氨基酸 肝性脑病 芳香族氨基酸 支链氨基酸

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牛胚系基因中两种JH和Cμ抗体基因的克隆与分析

10

作者 李敏 陈丽梅 +3 位作者 林爱星 杨兴元 安晓荣 陈永福 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期857-864,共8页

根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品... 根据NCBIGenBankTM中登录的2个牛抗体重链可变区J基因(JH)(序列号为AY158087,AY149283)的序列不同之处设计PCR引物,能从同一个体的Holstein牛基因组DNA中扩增得到与以上2个基因分别相同的序列,证明这2个JH基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的.提取牛脾脏总RNA,RT-PCR扩增IgMcDNA,测序结果显示:序列号为AY149283的JH基因中第六外显子JH6是一个功能基因,它可以编码牛IgM的部分CDR3区和完整的FR4区,从2种IgMcDNA克隆的测序结果可以看出,其恒定区序列分别与序列号为U63637和AY230207的2种抗体重链恒定区μ基因(Cμ)cDNA序列相同.PCR扩增JH-Cμ序列,测序结果表明:序列号为AY158087的JH基因是同以上2种Cμ基因分别串连在一起的(序列号分别为AY230207和U63637).以上结果证明:序列号为U63637和AY230207的2个Cμ基因分别与AY149283的JH基因串联在一起,都能够参与牛IgM的产生,它们与AY158087的JH基因共同存在于同一个体Holstein牛胚系基因中. 展开更多

关键词 Holstein牛 胚系基因 抗体 抗体重链恒定区μ基因(Cμ) 抗体重链可变区J基因(JH) 重组信号序列(RSS)

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家兔精子膜蛋白rsp10基因的克隆和特征分析

11

作者 刘建喜 林爱星 +2 位作者 杨毅 曾斌 陈永福 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期483-487,共5页

sp10基因在精卵识别过程中起着重要作用 .从家兔睾丸cDNA文库中克隆了家兔的sp10基因 (rsp10 ) ,cDNA序列全长 12 82bp ,包含 10 0 5bp开放阅读框 .由开放阅读框推测出的氨基酸序列与人、狒狒、狐和小鼠的SP10氨基酸序列之间存在较高水... sp10基因在精卵识别过程中起着重要作用 .从家兔睾丸cDNA文库中克隆了家兔的sp10基因 (rsp10 ) ,cDNA序列全长 12 82bp ,包含 10 0 5bp开放阅读框 .由开放阅读框推测出的氨基酸序列与人、狒狒、狐和小鼠的SP10氨基酸序列之间存在较高水平的同源性 ,同源性分别为 70 %、69%、68%和 61% .在大肠杆菌中表达rsp10基因 ,获得重组rSP10 .用重组rSP10免疫雌性母兔 ,得到rSP10专一性多抗 .对精子膜蛋白进行免疫印迹分析发现 ,rsp10基因在家兔睾丸中的表达呈现多态性 .rsp10基因在GenBank的登录号为 :AF2 51558. 展开更多

关键词 家兔 精子膜蛋白 rsp10 基因克隆 特征分析

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牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建

12

作者 陈立栋 林爱星 +3 位作者 张雅丽 杨兴元 安晓荣 陈永福 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期25-29,共5页

利用La-PCR的方法,从牛的基因组中成功地获得分别约为2.4kb、15.0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1,3)GT基因的基因组序列。其中2.4kb片段位于5～7外显子之间,包括了完整... 利用La-PCR的方法,从牛的基因组中成功地获得分别约为2.4kb、15.0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1,3)GT基因的基因组序列。其中2.4kb片段位于5～7外显子之间,包括了完整的第五及第六内含子;15.0kb片段位于3～4外显子,包括了完整的第三内含子。15.0kb、2.4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂,使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf—neo17.4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1,3)—GT基因。 展开更多

关键词 启动子 打靶载体 牛 α(1 3)-半乳糖转移酶基因 克隆 基因打靶

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猪干扰素-γ基因在毕赤酵母中的分泌表达 被引量：7

13

作者 黄志清 胡宏宇 +3 位作者 陈小玲 任立明 林爱星 陈永福 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期731-736,共6页

将去除信号肽的猪干扰素γ(PoIFNγ)基因置于酿酒酵母α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPIC9KαPoIFNγ分泌型重组表达载体,电转化导入毕赤酵母GS115中,经G418筛选后获得2株多拷贝插入的重组子。SDSPAGE和Westernblot分析结果表明,所... 将去除信号肽的猪干扰素γ(PoIFNγ)基因置于酿酒酵母α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPIC9KαPoIFNγ分泌型重组表达载体,电转化导入毕赤酵母GS115中,经G418筛选后获得2株多拷贝插入的重组子。SDSPAGE和Westernblot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出17kD和23kD左右的PoIFNγ特异蛋白,其表达量为108mgL,占培养液总蛋白的60%。实验首次在毕赤酵母表达系统中实现了PoIFNγ基因的分泌表达。 展开更多

关键词 猪干扰素-γ 毕赤酵母 分泌表达

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转pGH基因猪外源基因染色体定位研究 被引量：4

14

作者 牛屹东 何新 +3 位作者 陈清轩 林爱星 陈永福 魏庆信 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期318-321,共4页

应用地高辛标记探针对转pGH基因 (猪生长激素基因 )猪染色体进行原位杂交 ,经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明 ,转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异 ,但对个体而言 ,外源基因总是集中... 应用地高辛标记探针对转pGH基因 (猪生长激素基因 )猪染色体进行原位杂交 ,经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明 ,转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异 ,但对个体而言 ,外源基因总是集中分布于某一特定的染色体上。 展开更多

关键词 pGH基因 转基因猪 染色体原位杂交 基因定位

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异源Oct-4基因启动子在猪、兔和小鼠早期胚胎中的时空表达活性 被引量：3

15

作者 张颖 史芳瑜 +1 位作者 高绍荣 林爱星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1180-1185,共6页

Oct-4是一种哺乳动物早期胚胎中特异表达的转录因子,它与细胞多能性的维持有关.异源Oct-4基因在早期胚胎中的表达模式尚不明确.构建了一个以完整的牛Oct-4调控区指导GFP表达的转基因结构pOct-4(p)-GFP,通过单精子注射的方法将其导入猪... Oct-4是一种哺乳动物早期胚胎中特异表达的转录因子,它与细胞多能性的维持有关.异源Oct-4基因在早期胚胎中的表达模式尚不明确.构建了一个以完整的牛Oct-4调控区指导GFP表达的转基因结构pOct-4(p)-GFP,通过单精子注射的方法将其导入猪、兔和小鼠的受精卵中,分析其在胚胎发育过程中的表达情况.结果显示:牛Oct-4启动子驱动的GFP基因在3个物种的2-细胞胚胎就已经开始表达,在囊胚期表达加强且只特异表达于内细胞团中,而不表达于滋养层.研究表明:牛的Oct-4启动子在其他物种中也具有表达活性,异源性Oct-4启动子在不同物种的早期胚胎中具有相似的表达模式. 展开更多

关键词 OCT-4 早期胚胎 猪 兔 小鼠

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异种移植动物模型-转人CD59 cDNA首建小鼠的培育

16

作者 王磊 李志伟 +2 位作者 张同琳 林爱星 陈永福 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第1期1-4,共4页

目的　培育转人CD5 9cDNA首建小鼠 ,以进一步研究异种移植 ,并为建立鼠系奠定基础。方法　构建转基因结构pEGFP -C1-OMT -CD5 9,限制性内切酶切除质粒载体 ,回收、纯化包括人CD5 9cDNA、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein ,GFP)基... 目的　培育转人CD5 9cDNA首建小鼠 ,以进一步研究异种移植 ,并为建立鼠系奠定基础。方法　构建转基因结构pEGFP -C1-OMT -CD5 9,限制性内切酶切除质粒载体 ,回收、纯化包括人CD5 9cDNA、绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein ,GFP)基因及各自启动子的约 3 .3kb的基因片段 ,用显微注射法将此片段注入小鼠受精卵 ;提取F0 代小鼠尾组织DNA ,用PCR法初选 ,再用Southern杂交法对PCR阳性鼠进一步筛选 ,确定阳性转基因首建小鼠。结果　共注射 5 90枚受精卵 ,移植于 2 4只受体母鼠中 ,出生F0 代小鼠 73只 ;PCR初选有 8只呈阳性(6♂∶2♀ ) ,Southern杂交有 2只呈阳性 (1♂∶1♀ ) ;经粗略估算 ,整合外源基因拷贝数分别为 3和 10。结论　成功地培育出转人CD5 9cDNA首建小鼠 。 展开更多

关键词 异种移植 CD59蛋白 转基因小鼠

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信息技术基础下的小学科学课程教育探究 被引量：1

17

作者 林爱星 《教育信息化论坛》 2020年第8期109-110,共2页

科学教育是小学教育阶段负责培养学生素养的重要课程。近年来,随着新课改的不断推进以及我国社会的飞速发展,许多小学已经将现代化信息技术融入教学中。教师充分利用信息技术的优势,通过多媒体设备的丰富教学素材,拓展小学生的眼界,转... 科学教育是小学教育阶段负责培养学生素养的重要课程。近年来,随着新课改的不断推进以及我国社会的飞速发展,许多小学已经将现代化信息技术融入教学中。教师充分利用信息技术的优势,通过多媒体设备的丰富教学素材,拓展小学生的眼界,转变传统教学理念,积极优化科学课堂教育的模式,以提高科学教育的效率,推动我国的小学教育朝着更科学、更高效的方向发展。从小学科学教育阶段应用信息技术的重要作用出发,针对如何在信息技术的辅助下高效开展小学科学教育工作进行了讨论。 展开更多

关键词 信息技术 小学科学教育 教育模式

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自主探究活动促进学生科学知识建构的实践研究

18

作者 林爱星 《名师在线》 2021年第32期61-62,共2页

科学知识的自主建构是学生构建科学知识体系的必备条件,而要想使学生自主构建科学知识体系,教师应鼓励学生进行自主探究。只有这样才能使学生的自主探究、自主构建能力得到真正的提升,同时突出学生在科学课堂上的主体地位,将课堂由原本... 科学知识的自主建构是学生构建科学知识体系的必备条件,而要想使学生自主构建科学知识体系,教师应鼓励学生进行自主探究。只有这样才能使学生的自主探究、自主构建能力得到真正的提升,同时突出学生在科学课堂上的主体地位,将课堂由原本的知识传输场所转变为知识的构建和产生的主阵地,从而促使学生在“做中学”“学中成长”,充分体现科学教学的价值。那么,如何在科学课堂教学过程中通过自主探究活动促进学生建构科学知识体系呢?为此,文章就这一问题进行了实践与研究,并总结了具体的支持策略,为目标的达成提供合理参考。 展开更多

关键词 科学知识 自主探究活动 教学策略

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卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊 被引量：20

19

作者 安晓荣 苟克勉 +6 位作者 关宏 侯健 林爱星 陈永福 朱士恩 曾申明 田见晖 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2002年第1期69-76,共8页

分别以短期培养的5头牛卵丘细胞（1～5 BCC）为细胞核供体,共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚（78.4％）.体外培养后,763枚（82％）发育至2-细胞期,627枚（67.3％）发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚（29.5％）.囊胚... 分别以短期培养的5头牛卵丘细胞（1～5 BCC）为细胞核供体,共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚（78.4％）.体外培养后,763枚（82％）发育至2-细胞期,627枚（67.3％）发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚（29.5％）.囊胚的平均细胞数为124±24.5（n=20）.分析不同个体来源的卵丘细胞,同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间（融合到激活的时间长短）等因素对核移植效率的影响发现,5个个体的体细胞核移植囊胚率（14.1％,45.2％,27.3％,34.3％vs1.5％）有显著差异（P<0.05）.同一供体细胞饥饿与否（47.1％vs44.4％）、饥饿11～12 d（52.5％）和18～19 d（41.6％）均不影响核移植囊胚率（P≥0.05）.核/质相容2～3h的囊胚率（20.3％）显著低于3～6h组（31.0％,P<0.05）.3～6h范围内,囊胚率无差异（P≥0.05）.其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛,妊娠4例,最后顺利获得2头克隆牛犊.结果表明,牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素,核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响.卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊. 展开更多

关键词 卵丘细胞 体细胞核移植术 囊胚 牛犊 克隆 核质相容程度 细胞饥饿程度

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转人CD59基因的猪胚胎成纤维细胞的建立

20

作者 王坤 庄国华 +3 位作者 曾斌 林爱星 张同琳 周孝思 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期180-181,共2页

关键词 CD59 成纤维细胞 超急性排斥反应 胚胎 基因 补体活化 异种移植 体细胞克隆 调控蛋白 介导

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