鹰嘴豆芽素A抗HIV-1活性及抑制CD4^+淋巴细胞早期活化作用 被引量：12

1

作者 林长乐 曾耀英 +4 位作者 曾祥凤 赵令斋 王通 李海仙 李莉平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期214-218,共5页

目的研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响。方法①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含... 目的研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响。方法①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含量变化,以评价BioA的抗HIV-1活性。②以PHA刺激剂诱导人外周血CD4+淋巴细胞活化,利用流式细胞术检测不同浓度BioA对早期活化标志CD69分子的表达影响。结果①BioA在本实验所设浓度下均能减少由HIV-1介导的细胞融合数(EC50=5.1μmol.L-1,SI=39)及p24抗原的表达量(EC50=38μmol.L-1,SI=5.2)。②终浓度5、10、25、50μmol.L-1的BioA对CD4+淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显抑制作用(P<0.01),其中50μmol.L-1达到最大抑制率,能使活化率从(60.42±0.52)%降低到(19.70±0.38)%。结论BioA具有抗HIV-1介导的细胞融合和HIV-1复制的活性及抑制CD4+淋巴细胞早期活化作用。 展开更多

关键词 biochanin A HIV-1 细胞融合 P24抗原 早期活化

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鹰嘴豆芽素A对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖和细胞周期的影响 被引量：9

2

作者 林长乐 曾耀英 +3 位作者 曾祥凤 赵令斋 黄秀艳 叶雪仪 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期115-119,共5页

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响。方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基... 目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响。方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析T淋巴细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析T淋巴细胞细胞周期变化。结果:终浓度为25、50μmol/L的bioA对ConA刺激下的T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P<0.05),50μmol/L抑制达到峰值;CFDA-SE染色法显示,25、50μmol/L bioA对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有显著的抑制作用(P<0.05);终浓度为5、25、50μmol/L的bioA能够使ConA刺激的T淋巴细胞滞留于G0/G1期,减少处于S期和G2/M期细胞数。结论:BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 鹰嘴豆芽素A T淋巴细胞 早期活化 细胞增殖 细胞周期

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双黄连粉针剂及其药物血清体外抗HIV-1作用 被引量：8

3

作者 曾祥凤 曾耀英 +3 位作者 林长乐 赵令斋 李海仙 李莉平 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期144-147,156,共5页

【目的】探讨双黄连药物及其药物血清在体外是否有抗HIV-1作用。【方法】采用荧光染料CalcienAM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)分别与不同稀释浓度的双黄连药物和药物血清作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1Ⅲ... 【目的】探讨双黄连药物及其药物血清在体外是否有抗HIV-1作用。【方法】采用荧光染料CalcienAM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)分别与不同稀释浓度的双黄连药物和药物血清作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测药物对HIV感染细胞的保护作用;HIV-1p24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清p24抗原含量的变化。【结果】双黄连粉针剂及其药物血清能够抑制MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞融合,能够保护HIV感染细胞的死亡,减少HIV-1p24的表达。【结论】双黄连粉针剂及其药物血清在体外具有抗HIV-1的作用。 展开更多

关键词 双黄连 HIV-1 细胞融合 药物血清

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白杨素对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响 被引量：3

4

作者 赵令斋 曾耀英 +4 位作者 曾祥凤 林长乐 黄秀艳 王通 肇静娴 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期779-783,共5页

目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-... 目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,分析T细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为5、25、50μmol/L的CR后,活化T细胞CD69的表达率由ConA对照组的(85.12±1.07)%,分别降低为(78.42±1.82)%、(66.24±1.43)%和(53.09±1.77)%;72 h的T细胞增殖指数由ConA对照组的2.29±0.14分别降至1.91±0.02、1.47±0.03和1.14±0.01;对细胞周期的影响表现为:随着CR浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,25μmol/L时,G2/M期细胞也减少。结论:CR能有效抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖,阻滞活化细胞从G1期进入S期,是一种潜在的免疫抑制剂。 展开更多

关键词 白杨素 CD69 细胞增殖 细胞周期 流式细胞术

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白杨素对HIV-1感染、复制和CD4^+ T细胞活化的抑制作用研究 被引量：3

5

作者 赵令斋 曾耀英 +4 位作者 曾祥凤 林长乐 李海仙 黄秀艳 王通 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期99-102,107,共5页

目的:研究白杨素(CR)体外对人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染和复制的影响及对植物血凝素(PHA)刺激的正常人外周血CD4+T细胞活化的影响。方法:以CR对Calcein-AM标记的慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)和MT-2细胞的融合、对HIV-1诱导的... 目的:研究白杨素(CR)体外对人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染和复制的影响及对植物血凝素(PHA)刺激的正常人外周血CD4+T细胞活化的影响。方法:以CR对Calcein-AM标记的慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)和MT-2细胞的融合、对HIV-1诱导的MT-2细胞形成合胞体及对感染HIV-1的MT-2细胞产生p24抗原的影响,探讨其抗HIV-1活性;以PHA刺激人外周血单个核细胞,利用流式细胞术,检测CD4+T细胞CD69表达的百分率,分析CR对免疫活化的影响。结果:CR抑制H9/HIV-1ⅢB细胞与MT-2细胞融合、HIV-1诱导的MT-2细胞形成合胞体和P24抗原产生的选择指数分别为7.24±0.43、6.74±0.47和8.16±0.30;CR降低PHA刺激的CD4+T细胞CD69的表达。结论:CR体外对HIV-1的感染和复制有一定的抑制作用,且可抑制抗原刺激的CD4+T细胞的活化。 展开更多

关键词 白杨素 HIV-1 细胞融合 慢性免疫活化 流式细胞术

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穿琥宁粉针剂体外抗HIV-1作用 被引量：3

6

作者 曾祥凤 曾耀英 +4 位作者 李海仙 林长乐 赵令斋 李莉平 肇静娴 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2006年第13期1163-1165,共3页

目的:探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗H IV作用.方法:采用荧光染料Calc ien AM标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测... 目的:探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗H IV作用.方法:采用荧光染料Calc ien AM标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测穿琥宁对H IV感染细胞的保护作用;H IV-1P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化.结果:穿琥宁粉针剂能够抑制MT-2和H9/H IV-1ⅢB细胞融合(其抑制融合的EC50为5.49 mg/L,选择指数SI为327.6);能够保护H IV感染细胞的死亡(EC50为64.57 mg/L,SI为27.85)和减少HIV-1 P24抗原的表达(EC50为194.67 mg/L,SI为9.23).结论:穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用. 展开更多

关键词 穿琥宁粉针剂 艾滋病病毒 细胞融合 钙黄绿素

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清开灵注射液体外抑制HIV-1作用 被引量：2

7

作者 赵令斋 曾耀英 +3 位作者 黄秀艳 曾祥凤 林长乐 唐先高 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期176-179,共4页

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 ... 目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响。结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75。结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制。 展开更多

关键词 清开灵注射液 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 细胞融合 抑制作用

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重组腺病毒HIV-1 vpr基因的构建和表达 被引量：2

8

作者 贺芳 曾耀英 +3 位作者 王通 吴晓萍 季煜华 林长乐 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期86-89,共4页

目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad... 目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad-vpr,用脂质体法将重组质粒转染至HEK293A细胞包装,获得重组腺病毒Ad-vpr,荧光显微镜观察Ad-vpr感染C8166细胞GFP的表达,Western blotting鉴定Vpr在C8166细胞内的特异性表达,流式细胞术检测Ad-vpr感染C8166细胞的效率。结果成功构建携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,Western blotting结果表明重组腺病毒Ad-vpr感染的C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白,流式细胞术检测结果表明Ad-vpr感染C8166细胞效率高(44.07±3.62)%。结论成功构建出携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,使C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白。 展开更多

关键词 重组腺病毒 HIV-1 VPR基因 C8166细胞

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灭活HIV-1颗粒对人CD4^+ T细胞活化和全血Th1/Th2细胞因子分泌的影响 被引量：3

9

作者 黄秀艳 曾耀英 +1 位作者 赵令斋 林长乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2179-2185,共7页

目的:体外研究AT-2灭活的HIV-1颗粒对人CD4+T细胞活化和全血(whole blood,WB)Th1/Th2细胞因子分泌的影响。方法:AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,运用ELISA法测定所制备的灭活病毒中p24抗原的含量,按照1/500、1/50和1/5(V/V)的浓度加入到WB... 目的:体外研究AT-2灭活的HIV-1颗粒对人CD4+T细胞活化和全血(whole blood,WB)Th1/Th2细胞因子分泌的影响。方法:AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,运用ELISA法测定所制备的灭活病毒中p24抗原的含量,按照1/500、1/50和1/5(V/V)的浓度加入到WB中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照;24h后,收集WB培养上清,运用流式微球分析法(cytometric bead array,CBA)检测WB分泌Th1(IL-2、IFN-γ和TNF-α)和Th2(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子水平;同时运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测WB中CD4+ T细胞早期活化标记分子CD69的表达百分率。结果:我们所制备的灭活病毒中p24抗原的含量为85.5μg/L;24h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD69的表达百分率为(1.62±0.63)%,PHA组为(38.82±6.00)%,HIV-1(1/500)组为(3.83±1.07)%,HIV-1(1/50)组为(5.94±0.85)%,HIV-1(1/5)组为(9.30±1.22)%;空白对照组WB培养上清中细胞因子主要为IL-6和TNF-α,PHA组中Th1和Th2细胞因子全部升高,3个浓度的HIV-1组中Th1和Th2细胞因子也全部升高。结论:AT-2灭活的HIV-1ⅢB颗粒能够明显引起WB中CD4+ T细胞活化,并上调WB培养上清中Th1和Th2细胞因子的水平,其机制可能是除了HIV-1病毒蛋白的作用外,HIV-1出胞时,许多宿主细胞来源的免疫分子整合到病毒颗粒包膜中,而模拟抗原提呈细胞,从而产生免疫调节作用。 展开更多

关键词 HIV颗粒 细胞因子类 CD4^+T细胞

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TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响 被引量：1

10

作者 叶雪仪 曾耀英 +4 位作者 黄秀艳 王通 臧宁 周建国 林长乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1008-1012,共5页

目的:研究胞内钙离子释放阻断剂8-(N,N-二乙胺)辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯(TMB-8)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以ConA作为T细胞活化、增殖的刺激剂,以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A(C... 目的:研究胞内钙离子释放阻断剂8-(N,N-二乙胺)辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯(TMB-8)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以ConA作为T细胞活化、增殖的刺激剂,以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A(CsA)联合作用于该系统,用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达;以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色流式细胞术,分析TMB-8在ConA刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数(PI);以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果:ConA作用6h后,CD69+T细胞的比率为(74.88±1.88)%,TMB-8在终浓度10、20、40μmol/L下均抑制ConA介导的T细胞CD69表达(P<0.01),其中,40μmol/L的TMB-8为(52.55±1.54)%,达到最高抑制率。培养48h和72h,ConA刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07,TMB-8从5μmol/L起均抑制ConA介导的淋巴细胞增殖(P<0.01),以40μmol/L的效果最为显著,PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01;10μmol/L的TMB-8与25μg/L的环孢菌素A(CsA)具有明显的协同抑制作用(P<0.01)。细胞周期分析显示,培养48h的TMB-8从10μmol/L起即显著抑制S期(P<0.01)。结论:TMB-8可明显抑制ConA介导下的T细胞早期活化及增殖,并具T细胞周期的S期阻滞作用。 展开更多

关键词 三甲氧基苯甲酸酯 T淋巴细胞 CD69 细胞增殖 细胞周期 流式细胞术

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双黄连粉针剂体外抗HIV-1作用的实验研究 被引量：1

11

作者 曾祥凤 曾耀英 +2 位作者 李海仙 林长乐 李莉平 《河南中医学院学报》 CAS 2006年第1期3-5,共3页

目的:探讨双黄连粉针剂在体外是否有抗HIV作用及其可能的作用机制。方法:采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)与不同稀释浓度的双黄连粉针剂作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的... 目的:探讨双黄连粉针剂在体外是否有抗HIV作用及其可能的作用机制。方法:采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)与不同稀释浓度的双黄连粉针剂作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测双黄连对HIV感染细胞的保护作用;HIV-1 P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化。结果:双黄连粉针剂能够抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB融合,能够保护HIV感染细胞的死亡,减少HIV-1 P24抗原的表达。结论:双黄连粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用。 展开更多

关键词 双黄连 HIV-1 细胞融合 钙黄绿素AM

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胡晓华副省长视察省海洋水产科学研究院

12

作者 林长乐 《水产科学》 CAS 北大核心 2005年第5期F002-F002,共1页

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对水工设计方案的对比问题的探讨 被引量：1

13

作者 林长乐 《黑龙江科技信息》 2013年第36期237-237,共1页

文章着重对水电工程的设计方案对比进行了分析,通过对其原则的论述,阐释其对整个水电工程的重要意义,着重对方案设计对比、工程投资方案对比、环境影响方案对比进行了论述。

关键词 方案对比 水利工程 意义 原则

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人绒毛膜促性腺激素在HIV-1感染中作用的体外研究

14

作者 李莉平 曾耀英 +3 位作者 曾祥凤 狄静芳 林长乐 肇静娴 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期173-173,共1页

关键词 人绒毛膜促性腺激素 HIV-1感染 体外研究 特殊类型 人类病毒 传播率 早孕期 hCG 母婴

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HIV-1 Vpr蛋白对C8166细胞毒性研究

15

作者 贺芳 曾耀英 +3 位作者 王通 肇静娴 臧宁 林长乐 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期899-903,共5页

目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细... 目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布、凋亡和坏死。用Hoechst—PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死，JC-1荧光染色测定线粒体膜电势。结果An—nexinV—PI染色及Hoechst—PI染色一致显示HIV-1Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死；PI细胞周期结果表明HIV-1Vpr能阻滞C8166细胞于G2期；JC—1荧光染色法测定HIV-1Vpr致C8166线粒体膜电势下降。结论细胞内HIV-1Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡。 展开更多

关键词 重组腺病毒 HIV-1 VPR C8166细胞 细胞死亡

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