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以玉米幼胚为受体的外源基因转化研究 被引量:9
1
作者 柯遐义 张秀文 +2 位作者 石和平 陈春洪 李宝健 《广东农业科学》 CAS CSCD 1995年第2期14-16,共3页
选用具有较强再生能力的甜玉米品种华农超甜42的幼胚作转化受体,以自制的脉冲放电式电激仪HPES3将新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因导入到受体细胞并成功地得到了转基因植株。NPTⅡ点滴分... 选用具有较强再生能力的甜玉米品种华农超甜42的幼胚作转化受体,以自制的脉冲放电式电激仪HPES3将新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因导入到受体细胞并成功地得到了转基因植株。NPTⅡ点滴分析、MU荧光检测和DNA点杂交的结果都证实了外源基因在转化愈伤组织和植株中的整合与表达。通过对转化条件的摸索,发现幼胚存活率为70%左右时可得到较好的转化结果;在不同的输出方式中,长脉冲输出校短脉冲输出对转化更有利;其它电激条件、幼胚胚龄与筛选程序对玉米幼胚转化也有很大的影响。 展开更多
关键词 玉米 幼胚 基因转化 电激法
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利用电激法转化小麦幼胚的研究 被引量:14
2
作者 柯遐义 黄粤 +1 位作者 石和平 李宝健 《武汉植物学研究》 CSCD 1997年第2期103-107,共5页
利用我们实验室自制的脉冲放电式电激仪HPES-3,我们将合bar基因即PAT酶(phosphinothricinacetyltransferase)基因的pDM302质粒DNA导入了一个春小麦品种(TriticumaestivumL.)“T2003”的幼胚中。经过在含有ppt(phosphinothricin... 利用我们实验室自制的脉冲放电式电激仪HPES-3,我们将合bar基因即PAT酶(phosphinothricinacetyltransferase)基因的pDM302质粒DNA导入了一个春小麦品种(TriticumaestivumL.)“T2003”的幼胚中。经过在含有ppt(phosphinothricin)的选择培养基上筛选,得到了抗ppt的愈伤组织和再生小苗。PCR检测与DNA点杂交结果显示,外源bar基因已整合进了转基因的小麦植株中。 展开更多
关键词 小麦 幼胚 电激 转基因植株 基因工程
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影响小麦成熟胚培养的几种因素研究 被引量:17
3
作者 柯遐义 陈春洪 +2 位作者 杨芳 李宝健 陈家旺 《广东农业科学》 CSCD 1995年第6期12-14,共3页
选取6个春小麦品种的成熟胚进行培养,着重研究不同基因型、培养基、种子贮藏时间、愈伤组织诱导培养时间等对分化的影响。确定了较好的分化培养基,供试品种中,华农400有较好的分化性能;不同基因型的小麦诱导愈伤组织产生的能力... 选取6个春小麦品种的成熟胚进行培养,着重研究不同基因型、培养基、种子贮藏时间、愈伤组织诱导培养时间等对分化的影响。确定了较好的分化培养基,供试品种中,华农400有较好的分化性能;不同基因型的小麦诱导愈伤组织产生的能力差别不大,分化绿点及生根的能力有一定差异,而分化成苗的能力则有很大的变化;种子贮存时间与愈伤组织诱导培养时间对分化有较大的负影响。 展开更多
关键词 小麦 成熟胚:愈伤组织 分化
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玉米幼胚培养及其影响因素的研究 被引量:7
4
作者 柯遐义 张秀文 +1 位作者 石和平 李宝健 《中山大学学报论丛》 1996年第2期23-29,共7页
选取10个不同的玉米品种于大田栽种并自花授粉,采其授粉后14~24d的幼胚进行培养,筛选出了5个较易诱导体胚而再生植株的品种.在影响玉米幼胚培养的许多重要因素中,如2,4-D,KT,NAA,6-BA,ZT,ZiP,A... 选取10个不同的玉米品种于大田栽种并自花授粉,采其授粉后14~24d的幼胚进行培养,筛选出了5个较易诱导体胚而再生植株的品种.在影响玉米幼胚培养的许多重要因素中,如2,4-D,KT,NAA,6-BA,ZT,ZiP,Ag+,水解酪蛋白,琼脂糖,脯氨酸和谷氨酰胺等,2,4-D和Ag+是最关键的因子.以华农超甜42号玉米幼胚为材料进行培养时,2,4-D15mg/L与Ag+10mg/L浓度下的MS培养基(再结合其它因子的适当组合)比较易于诱导出胚性愈伤组织,从而有利于其植株再生.以琼脂糖代替琼脂粉对体胚诱导也有较好效果. 展开更多
关键词 玉米 幼胚 组织培养 愈伤组织 体胚发生 植株再生
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通过基因枪轰击转化获得转基因小麦植株的研究 被引量:15
5
作者 黄粤 柯遐义 李宝健 《西北植物学报》 CAS CSCD 1997年第2期142-146,共5页
利用JQ-700型高速基因枪将pDM302质粒DNA上的bar基因即PAT酶(phosphinothricinacetyltransferase)基因导入了冬小麦品种“农大146”的幼胚中。经过在含有phosphinothricin(简称ppt)的选择培养基上筛选,得到了9块具有ppt抗性的愈... 利用JQ-700型高速基因枪将pDM302质粒DNA上的bar基因即PAT酶(phosphinothricinacetyltransferase)基因导入了冬小麦品种“农大146”的幼胚中。经过在含有phosphinothricin(简称ppt)的选择培养基上筛选,得到了9块具有ppt抗性的愈伤组织。PCR电泳检测与PCR-Southern杂交结果显示,外源bar基因已转化进了由其中4块愈伤组织再生出的转基因的小麦植株中。 展开更多
关键词 小麦 BAR基因 基因枪 转基因植株
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用高速微弹轰击技术将外源基因导入甜玉米的研究 被引量:2
6
作者 张秀文 柯遐义 +2 位作者 石和平 陈春洪 丰宝健 《广东农业科学》 CAS CSCD 1994年第6期11-12,38,共3页
利用不至自行研制和设计的高速微弹轰击装置将外源新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因导入甜玉米品种甜1328的幼胚细胞中,经筛选培养20~30天后得到抗G418的抗性愈伤组织。NPTⅡ点滴分... 利用不至自行研制和设计的高速微弹轰击装置将外源新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因导入甜玉米品种甜1328的幼胚细胞中,经筛选培养20~30天后得到抗G418的抗性愈伤组织。NPTⅡ点滴分析和DNA杂交证明了外源基因在抗性愈伤组织细胞中的整合与表达. 展开更多
关键词 甜玉米 高速微弹轰击 外源基因导入 愈伤组织
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猪精子电激法转移基因研究初报 Ⅰ不同电激条件对猪精子活力和死亡的影响
7
作者 王建忠 魏平华 +4 位作者 彭国良 王祖昆 雷春 石和平 柯遐义 《畜牧兽医科技》 1991年第3期8-13,共6页
电激法(electroporation),也有译名电脉冲刺激、电场转移基因法等。其基本原理是,生物细胞在外界的高电压,短脉冲电场作用下,细胞膜结构发生变化,使膜产生可逆性的电穿孔。此时若在细胞膜周围放置一定浓度和大小的 DNA 分子,DNA 能在细... 电激法(electroporation),也有译名电脉冲刺激、电场转移基因法等。其基本原理是,生物细胞在外界的高电压,短脉冲电场作用下,细胞膜结构发生变化,使膜产生可逆性的电穿孔。此时若在细胞膜周围放置一定浓度和大小的 DNA 分子,DNA 能在细胞膜产生瞬间电穿孔的时候进入细胞,从而达到向生物细胞导入外源基因的目的。 展开更多
关键词 电激法 精子活力 转移基因
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应用电激法将外源基因导入小麦的研究 被引量:1
8
作者 陈春洪 张秀文 +2 位作者 柯遐义 石和平 李宝健 《广东农业科学》 CAS CSCD 1993年第5期11-13,共3页
建立了以小麦成熟胚为外植体的组织培养系统。应用电激仪HPES-3,摸索了适合小麦种胚外源基因转化的电激条件,并以含有潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因的质粒 pLCN_(1055)DNA 直接对萌动的小麦种胚进行电激转化,在含有潮霉素(Hm)的小麦愈伤组... 建立了以小麦成熟胚为外植体的组织培养系统。应用电激仪HPES-3,摸索了适合小麦种胚外源基因转化的电激条件,并以含有潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因的质粒 pLCN_(1055)DNA 直接对萌动的小麦种胚进行电激转化,在含有潮霉素(Hm)的小麦愈伤组织培养基中培养,获得了假定的转基因愈伤组织。Southern 杂交初步证明 HPT 基因已整合至小麦愈伤组织的基因组中。将这些转基因愈伤组织培养成苗还在试验之中。 展开更多
关键词 小麦 基因导入 电激法
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用高速微弹法将外源基因导入水稻愈伤组织
9
作者 石和平 柯遐义 李宝健 《中山大学学报论丛》 1989年第4期163-165,共3页
高速微弹法是在1987年发展起来的引人注目的外源基因导入技术。它是用粒子枪把被覆盖目的基因DNA分子的微钨弹加速到高速,直接穿过植物的细胞壁、细胞膜,将DNA带进细胞内部。与其他转化技术相比,既不受植物种类的限制,也不存在原生质体... 高速微弹法是在1987年发展起来的引人注目的外源基因导入技术。它是用粒子枪把被覆盖目的基因DNA分子的微钨弹加速到高速,直接穿过植物的细胞壁、细胞膜,将DNA带进细胞内部。与其他转化技术相比,既不受植物种类的限制,也不存在原生质体培养成株方面的困难。用高速微弹法,T.M.Klein(1987年)把TMV 展开更多
关键词 水稻愈伤组织 原生质体培养 高速 微弹 外源基因导入 转化技术 导入技术 粒子 细胞壁 植物种类
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用两种电激仪将外源基因导入胡萝卜和水稻的比较研究
10
作者 石和平 柯遐义 李宝健 《中山大学学报论丛》 1989年第4期67-72,共6页
用自制的电容放电式(Ⅰ型)电激仪和高压脉冲串式(Ⅱ型)电激仪,成功地把ρLGV2103转化到胡萝卜和水稻原生质体及水稻种子胚组织中。在经过电激处理的原生质体和由水稻种子胚誘导的愈伤组织上,均检测到NPTⅡ活性.NPTⅡ点滴杂交法表明。
关键词 电激法 水稻 胡萝卜 pLGV 2103 NPTⅡ检测法
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电激法将外源基因导入三种植物的组织细胞
11
作者 李宝健 石和平 柯遐义 《中山大学学报论丛》 1989年第4期73-78,共6页
用自制的电容放电式电激系统,将质粒pLGVneo2103上的NPTⅡ基因直接导入到烟草叶片组织细胞和玉米、大豆的愈伤组织细胞中。经过一定时间的卡那霉素选择后,在转化而来的烟草叶片愈伤组织上得到了绿色小苗。经NPTⅡ检测表明,在转化后的玉... 用自制的电容放电式电激系统,将质粒pLGVneo2103上的NPTⅡ基因直接导入到烟草叶片组织细胞和玉米、大豆的愈伤组织细胞中。经过一定时间的卡那霉素选择后,在转化而来的烟草叶片愈伤组织上得到了绿色小苗。经NPTⅡ检测表明,在转化后的玉米和大豆愈伤组织细胞中,外源基因有较明显的表达。这种直接将外源基因导入完整的植物细胞的技术,可以避免因原生质体培养而引起的一系列问题,且在转化受体方面不存在农杆菌Ti质粒介导法所有的物种限制,可以期望,它将在植物基因工程,特别是农作物的基因转化方面得到越来越广泛的应用。 展开更多
关键词 电激法 愈伤组织 pLGV NEO 2103 NPTⅡ基因
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孕妇邻苯二甲酸酯内暴露水平及影响因素研究 被引量:6
12
作者 杨月 施明明 +12 位作者 陈碧钦 林剑锋 杨松静 朱宝平 庄宝玲 贾玉珠 黄桢翔 陈静 刘惠芬 陈江慧 苏艳华 柯遐义 赵本华 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期998-1004,共7页
目的分析孕妇(孕周≤16周)邻苯二甲酸酯内暴露水平及其影响因素。方法选取2013年4—6月在厦门市思明区妇幼保健院建立孕产妇保健手册的1020名孕妇(孕周≤16周)纳入研究,采用调查问卷收集孕妇人口学信息、孕期生活方式以及产检信息... 目的分析孕妇(孕周≤16周)邻苯二甲酸酯内暴露水平及其影响因素。方法选取2013年4—6月在厦门市思明区妇幼保健院建立孕产妇保健手册的1020名孕妇(孕周≤16周)纳入研究,采用调查问卷收集孕妇人口学信息、孕期生活方式以及产检信息,并收集其尿样,最终完成问卷调查并收集尿样的孕妇共998名。以此为抽样人群,采用系统抽样的方法,从中随机抽取100名孕妇作为研究对象。应用固相萃取一高效液相色谱串联质谱技术检测研究对象尿液中5种邻苯二甲酸单酯的含量,包括邻苯二甲酸单甲酯(MMP)、邻苯二甲酸单乙酯(MEP)、邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单苄基酯(MBzP)和邻苯二甲酸-单一乙基己基酯(MEHP),同时结合调查问卷信息,采用多因素logistic回归模型分析孕妇各邻苯二甲酸单酯水平的影响因素。结果100份孕妇(孕周≤16周)尿样中,5种邻苯二甲酸单酯MMP、MEP、MBP、MBzP和MEHP的检m率分别为94%、93%、87%、83%、99%,含量的中位数分别为20.56、17.62、10.15、2.03、5.12ng/ml,经尿比重校正后分别为20.81、20.36、12.88、2.58、5.00ng/ml。多因素logistic回归分析结果显示:随着文化程度的提高,孕妇尿液中MMP、MEP、MBP、MBzP和MEHP含量均呈下降的趋势,OR(95%CI)值分别为0.495(0.253~0.966)、0.380(0.191~0.755)、0.379(0.186~0.774)、0.401(0.196~0.819)、0.373(0.183~0.762);孕期烫染头发会使尿液中MBP和MBzP的含量增加,0R(95%CI)值分别为12.867(1.240-q33.525)、15.982(1.367-186.911);孕期使用化妆品会使尿液中MEP和MBP的含量增加,OR(95%C/)值分别为2.977(1.012-8.757)、4.440(1.485-13.272);饮用水类型与尿液中MEP和MEHP含量的增加有关,饮用桶装、瓶装水会增加其含量,OR(95%C1)值分别为3.780(1.417~10.083)、2.699(1.039~7.010);随着家庭年收入的提高,尿液中MMP的含量呈下降趋势,OR(95%CI)值为0.597(0.372~0.959);孕期服用药物使尿液中MEHP的含量增加,OR(95%CI)值为4.853(1.084~21.732)。结论孕妇(孕周≤16周)普遍暴露于邻苯二甲酸酯,孕期邻苯二甲酸酯内暴露水平与多种因素存在关联性,且不同邻苯二甲酸酯内暴露水平的影响因素不尽相同。 展开更多
关键词 孕妇 甲酸酯类 母亲暴露 影响因素
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孕妇乙型肝炎病毒宫内感染相关危险因素研究 被引量:20
13
作者 杨松静 黄桢翔 +7 位作者 陈碧钦 施明明 陈江慧 陈静 刘惠芬 苏艳华 柯遐义 赵本华 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期44-47,共4页
目的探讨厦门市孕妇乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染情况和HBV宫内感染的影响因素。方法在1 064名孕妇第一次到医院建立孕产妇保健卡时进行问卷调查并检测其血清乙肝标志物,根据检测结果选择外周血乙型肝炎表面抗原(hepatitis ... 目的探讨厦门市孕妇乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染情况和HBV宫内感染的影响因素。方法在1 064名孕妇第一次到医院建立孕产妇保健卡时进行问卷调查并检测其血清乙肝标志物,根据检测结果选择外周血乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性的产妇179例随访至其分娩,并采集其分娩时的脐血和胎盘组织。对脐血进行HBsAg和HBV DNA的检测,对胎盘组织进行HBsAg的检测。采用χ2检验和非条件Logistic回归分析相关因素与HBV宫内感染的关系。结果被调查的1 064名孕妇中,HBsAg阳性的孕妇共179名,感染率为16.8%。对179名HBsAg阳性的孕妇的脐血进行检测发现,发生HBV宫内感染的孕妇共34名,感染率为19.0%。孕妇HBV宫内感染的危险因素为胎盘HBsAg阳性、孕妇血清乙型肝炎E抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性、孕前超重,OR分别为5.123(95%CI:1.422~18.413)、4.619(95%CI:1.225~17.534)、3.343(95%CI:1.233~9.092)。结论对于HBsAg和HBeAg双阳性的超重/肥胖孕妇,其新生儿可能发生HBV宫内感染,应加强自身防护措施,合理规避HBV宫内感染风险。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 危险因素 病例对照研究
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厦门市孕妇双对氯苯基三氯乙烷内暴露水平及其影响因素 被引量:2
14
作者 于晓姗 何洁 +7 位作者 陈江慧 赖圳宾 苏艳华 施明明 黄桢翔 程祺峻 柯遐义 赵本华 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期982-989,共8页
目的分析厦门市孕妇双对氯苯基三氯乙烷(dichlorodiphenyltrichloroethane,DDTs)内暴露水平及其影响因素。方法2014年4月-2015年7月在厦门市某医院妇产科招募1064名孕妇作为调查对象,采用调查问卷收集孕妇人口学信息、孕期生活方式... 目的分析厦门市孕妇双对氯苯基三氯乙烷(dichlorodiphenyltrichloroethane,DDTs)内暴露水平及其影响因素。方法2014年4月-2015年7月在厦门市某医院妇产科招募1064名孕妇作为调查对象,采用调查问卷收集孕妇人口学信息、孕期生活方式以及妊娠信息,并收集孕妇外周静脉血和分娩时的脐带血样本,最终完成问卷且有配对的外周血和脐带血的样本共600名,以此为抽样人群,采用系统抽样方法从中抽取150名孕妇作为调查对象。采用气相色谱联用电子捕获器检测DDTs 6种同系物:对,对.二氯二苯基三氯乙烷(p,p’-DDT)、邻,对-二氯二苯基三氯乙烷(o,p'-DDT)、对,对-二氯二苯基二氯乙烷(p,p'-DDD)、邻,对-二氯二苯基二氯乙烷(o,p'-DDD)、对,对.二氯二苯基二氯乙烯(p,p'-DDE)、邻,对-二氯二苯基二氯乙烯(p,p'-DDE)并计算总和,以总DDTs的P50为界将孕妇分为低浓度组(≤P50)和高浓度组(〉P50)。同时结合调查问卷信息,采用多因素logistic回归模型分析孕妇DDTs内暴露水平的影响因素。结果150名孕妇中外周血中6种DDTs同系物p,p’DDT、o,p'-DDT、p,p'-DDD、o,p'-DDD、p,p'-DDE和o,p'-DDE的检出率分别为83.3%(125名)、29.3%(44名)、58.0%(87名)、24.0%(36名)、82.0%(123名)和34.7%(52名),6种DDTs同系物浓度中位数分别为1.56、0.03、0.07、0.03、0.93和0.03μg/ml;脐带血中6种DDTs同系物p,p'-DDT、o,p’DDT、p,p’DDD、o,p'-DDD、p,p'-DDE和o,p'-DDE的检出率分别为69.3%(104名)、10.7%(16名)、29.3%(44名)、20.7%(31名)、81.3%(122名)和45.3%(68名),6种DDTs同系物浓度中位数分别为0.41、0.03、0.03、0.03、0.42和0.03μg/ml。DDTs高、低浓度组各有75名调查对象,DDTs浓度范围分别为0-3.69、3.74—82.09μg/ml。单因素分析显示,DDTs低浓度组的75名调查对象中,海鲜食用频率为基本不吃、每周2次以下、每周2次及以上的人数(比例)分别为15(20.3%)、22(29.7%)、37(50.0%);DDTs高浓度组的75名调查对象中,分别为4(5.3%)、20(26.7%)、51(68.0%),差异有统计学意义(x2=8.69,P=0.013)。多因素logistic回归分析结果显示,海鲜食用频率为每周2次以下、每周2次及以上的孕妇与基本不吃相比,其外周血DDTs浓度较高,OR(95%CI)值分别为1.14(1.08~1.21),2.11(1.55-2.85)。结论厦门市孕妇DDTs内暴露水平较高,海鲜摄入频率过高是影响DDTs内暴露水平的危险因素。 展开更多
关键词 孕妇 滴滴涕 母亲暴露 影响因素
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INTRODUCTION OF FOREIGN GENES INTO THE SEED EMBRYO CELLS OF RICE BY ELECTRO-INJECTION AND THE REGENERATION OF TRANSGENIC RICE PLANTS
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作者 李宝健 许新萍 +1 位作者 石和平 柯遐义 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1991年第8期923-931,共9页
The NPTII gene has been successfully transferred to the seed embryo cells of two rice varieties (Oryza sativa L. subsp. indica cv. Sanerai and Qryza sativa L. subsp. japonica cv. Nonghu No. 6) by means of electroinjec... The NPTII gene has been successfully transferred to the seed embryo cells of two rice varieties (Oryza sativa L. subsp. indica cv. Sanerai and Qryza sativa L. subsp. japonica cv. Nonghu No. 6) by means of electroinjection. Resistant calli were screened out on MS medium with 100 μg/ml Km. Transgenic rice plants were regenerated via somatic embryogenesis. Both NPTII detection and Southern blot hybridization demonstrate that the foreign gene has integrated and expressed stably in the transformants. 展开更多
关键词 RICE SEED EMBRYO electroinjection NPTⅡ GENE GENE transformation TRANSGENIC RICE plant.
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