期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到9篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定 被引量：3
1
作者 李涛 于文燕 +3 位作者 欧小利 刘爱华 梅柱中 姜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期352-355,共4页
目的构建人抗原R(HuR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能。方法提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测... 目的构建人抗原R(HuR)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能。方法提取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列,酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞,采用Western blotting分析HuR在细胞中的表达,并采用Real-time PCR检测HuR过表达对DUSP1mRNA水平的影响。结果成功构建了重组质粒pcDNA3.1-HuR-FLAG,Western blotting显示该质粒能在NIH3T3细胞中高效表达,Real-time PCR结果表明HuR过表达可提高细胞内DUSP1基因的mRNA水平。结论成功构建了带FLAG标签的HuR真核表达载体,该载体能在NIH3T3细胞中有效表达,并具有相应的生物学功能,为深入研究肿瘤细胞中HuR对DUSP1基因表达的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 人抗原R 基因表达 基因转录后调控
下载PDF
BTB-Kelch家族蛋白KLHL32参与炎症反应调控的初步分析 被引量：3
2
作者 王妮 陈新玉 +2 位作者 欧小利 姜勇 梅柱中 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期870-875,共6页
目的:克隆人BTB-Kelch家族蛋白KLHL32编码基因并初步鉴定其在细胞中的功能。方法:采用实时荧光定量PCR分析Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)特异性激活剂鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白(flagllin from S.typhimurium,ST-FLA)刺激经佛波酯(... 目的:克隆人BTB-Kelch家族蛋白KLHL32编码基因并初步鉴定其在细胞中的功能。方法:采用实时荧光定量PCR分析Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)特异性激活剂鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白(flagllin from S.typhimurium,ST-FLA)刺激经佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞中KLHL32 mRNA表达水平的变化,应用RT-PCR克隆人KLHL32编码区的cDNA序列并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1,采用萤光素酶双报告基因表达系统分析KLHL32过表达对转录因子核因子κB(NF-κB)活性的影响,并采用免疫共沉淀实验分析了KLHL32与Cul-3蛋白在细胞内的相互结合。结果:ST-FLA(100μg/L)刺激经PMA诱导分化的THP-1巨噬细胞4 h引起KLHL32 mRNA的表达水平下调;成功克隆了人KLHL32基因并将其克隆至真核表达载体中获得重组质粒pcDNA3.1-KLHL32-FLAG,在HEK293细胞中过表达KLHL32蛋白对TNF-α诱导的转录因子NF-κB激活没有明显影响,但KLHL32可通过其氨基端的BTB结构域与Cul-3相互结合。结论:成功鉴定了人KLHL32蛋白,其通过BTB结构域与Cul-3蛋白相互结合,可能是一种潜在的E3泛素连接酶,证实了TLR5受体激活可诱导其表达水平的下调,提示KLHL32蛋白在细胞中可能参与炎症细胞信号转导的调控。 展开更多
关键词 KLHL32蛋白 E3泛素连接酶 TOLL样受体5
下载PDF
TRPM2蛋白在大肠杆菌的表达纯化和多克隆抗体制备 被引量：1
3
作者 孙宏卫 罗海华 +4 位作者 王妮 欧小利 温晓梨 姜勇 梅柱中 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期511-514,共4页
目的获得人瞬时受体电位M2(TRPM2)离子通道蛋白N末端的原核表达融合蛋白,制备兔抗人TRPM2多克隆抗体。方法采用PCR扩增编码人TRPM2蛋白N末端1～334位氨基酸残基(在人与小鼠中高度保守)的cDNA序列,将其克隆至谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合... 目的获得人瞬时受体电位M2(TRPM2)离子通道蛋白N末端的原核表达融合蛋白,制备兔抗人TRPM2多克隆抗体。方法采用PCR扩增编码人TRPM2蛋白N末端1～334位氨基酸残基(在人与小鼠中高度保守)的cDNA序列,将其克隆至谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-3上。将原核表达重组质粒转化BL2l(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-TRPM2N融合蛋白的表达,并纯化获得相对分子质量(Mr)约70000的GST-TRPM2融合蛋白。将此融合蛋白与弗氏完全佐剂混合后采用经典的4次免疫法免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,用Western blot法对该抗体进行鉴定。结果通过PCR扩增获得编码TRPM2蛋白N末端的cDNA片段并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T3中,采用IPTG诱导、蛋白质的变性与复性纯化获得融合蛋白GST-TRPM2N,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备获得特异性抗TRPM2蛋白的多克隆抗体。结论成功制备了特异性抗人TRPM2蛋白的多克隆抗体。 展开更多
关键词 TRPM2 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
原文传递
小鼠DUSP13＇-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定 被引量：4
4
作者 温晓梨 孙宏卫 +3 位作者 欧小利 王妮 梅柱中 姜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期265-268,共4页
目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-cont... 目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达。将含有小鼠DUSP1 3'-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响。结果成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体。小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P<0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P<0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P<0.05)。结论成功构建了DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究。 展开更多
关键词 荧光素酶类 基因 报告 转录 遗传
下载PDF
平衡计分卡:以战略引导执行
5
作者 欧小利 《人力资源管理》 2008年第8期51-52,共2页
为了促进战略转型新目标的顺利实现,我国一些大型商业银行开始重视绩效评价在经营发展的指挥棒作用,引入平衡计分卡,期望通过平衡计分卡的实施使绩效评价能够与战略管理实现有机结合,从而有效激励部门、机构和个人增强战略执行力,推进... 为了促进战略转型新目标的顺利实现,我国一些大型商业银行开始重视绩效评价在经营发展的指挥棒作用,引入平衡计分卡,期望通过平衡计分卡的实施使绩效评价能够与战略管理实现有机结合,从而有效激励部门、机构和个人增强战略执行力,推进战略转型. 展开更多
关键词 平衡计分卡 商业 分行 战略中心型组织
下载PDF
浅谈初三英语总复习
6
作者 欧小利 《新校园（上旬刊）》 2013年第3期197-197,共1页
本文针对初三后期的总复习，从阶段复习、专项训练、综合训练和模拟考试四个阶段进行了详尽的总结。
关键词 阶段复习 专项训练 综合训练 模拟考试
下载PDF
可诱导型CRISPRi系统的构建及其初步应用 被引量：1
7
作者 陈新玉 庞德剑 +2 位作者 欧小利 姜勇 梅柱中 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期128-132,共5页
[目的]构建可诱导型CRISPRi系统以特异性地抑制靶基因的表达。[方法]采用PCR技术将人ZNF10基因的KRAB结构域编码序列分别克隆至d Cas9蛋白编码基因的5’端(KRAB-d Cas9)与3’端(d Cas9-KRAB)。设计并构建靶向荧光素酶报告基因起始密码... [目的]构建可诱导型CRISPRi系统以特异性地抑制靶基因的表达。[方法]采用PCR技术将人ZNF10基因的KRAB结构域编码序列分别克隆至d Cas9蛋白编码基因的5’端(KRAB-d Cas9)与3’端(d Cas9-KRAB)。设计并构建靶向荧光素酶报告基因起始密码子附近序列的4种gRNA表达载体,其表达受到含有Tet O调控元件的H1启动子调控。分析共表达d Cas9蛋白和gRNA对共转染的荧光素酶报告基因表达水平的影响。在此基础上,设计并构建靶向人KLHL21基因转录起始位点附近区域的3种gRNA表达载体,将其与KRAB-d Cas9融合表达载体分别共转染HEK293T细胞,24h后收集细胞并采用荧光实时定量PCR与蛋白质印迹技术分析KLHL21基因表达水平的变化。[结果]CRISPRi系统有效地抑制HEK293T细胞中荧光素酶报告基因与内源性的KLHL21基因的表达。共表达TetR抑制蛋白可阻断CRISPRi对荧光素酶报告基因表达的抑制作用,在细胞培养基中加入1μg/ml盐酸四环素可解除这种抑制作用。[结论]成功构建了可诱导型CRISPRi系统,可有效抑制真核细胞基因的表达。 展开更多
关键词 CRISPRi 四环素调控表达系统 荧光素酶报告基因 KLHL21基因
原文传递
NFKBIA 3＇UTR功能鉴定及相互作用蛋白的蛋白质组学筛选
8
作者 王静 李涛 +2 位作者 欧小利 姜勇 梅柱中 《生物技术》 北大核心 2017年第2期154-160,共7页
[目的]鉴定NFKBIA基因3'非翻译区功能并筛选与其相互作用的蛋白质。[方法](1)PCR扩增获得luciferaseNFKBIA 3'非翻译区融合片段并克隆至p GL3-control载体中获得重组质粒p GL3-NF,转染NIH3T3细胞24h后回收细胞检测荧光素酶活性... [目的]鉴定NFKBIA基因3'非翻译区功能并筛选与其相互作用的蛋白质。[方法](1)PCR扩增获得luciferaseNFKBIA 3'非翻译区融合片段并克隆至p GL3-control载体中获得重组质粒p GL3-NF,转染NIH3T3细胞24h后回收细胞检测荧光素酶活性。(2)制备生物素标记的NFKBIA 3'非翻译区RNA探针,通过链亲和素-生物素RNA-pull down获得与其相互结合的蛋白质并进行质谱鉴定。[结果](1)NFKBIA 3'非翻译区能显著性降低与其相连的荧光素酶基因的表达(p<0.001)。(2)质谱鉴定得到Myosin9等24种与NFKBIA 3'非翻译区相互作用的蛋白质。[结论]NFKBIA基因3'非翻译区对与其相连的基因的表达起负调控作用。与NFKBIA基因3'非翻译区相互结合的24种蛋白质之间存在直接或间接的相互作用。 展开更多
关键词 核因子"B NFKBIA MRNA 3'非翻译区 RNA结合蛋白 质谱
原文传递
平衡计分卡在我国商业银行战略实施中的运用 被引量：4
9
作者 欧小利 《中国人力资源开发》 CSSCI 北大核心 2008年第10期62-65,共4页
本文针对我国商业银行在运用平衡记分卡实施战略中的不足,研究花旗银行、东京三菱银行、国民城市银行等国际先进银行运用平衡计分卡的成功经验。提出了我国商业银行运用平衡记分卡实施战略的建议。
关键词 平衡计分卡 商业银行 战略管理
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部