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一种改良的5-羟色胺转运体活性化合物高内涵筛选方法
1
作者 刘艳庭 应树松 +3 位作者 武艺静 董鹏志 吴红华 徐砚通 《天津中医药大学学报》 CAS 2016年第3期180-186,共7页
[目的]建立一种改良的5-羟色胺转运体(SERT)活性化合物高内涵筛选(HCS)方法,包括构建稳定转染h SERT细胞株和优化SERT活性化合物HCS条件。[方法]应用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒h SERT-pc DNA3转染入HEK293细胞,采用遗传霉素(G418)筛选获得... [目的]建立一种改良的5-羟色胺转运体(SERT)活性化合物高内涵筛选(HCS)方法,包括构建稳定转染h SERT细胞株和优化SERT活性化合物HCS条件。[方法]应用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒h SERT-pc DNA3转染入HEK293细胞,采用遗传霉素(G418)筛选获得稳定转染细胞系,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)方法分别从转录和翻译水平验证h SERT表达,采用SERT荧光底物4-(4-二甲氨基)苯基-1-甲基吡啶(APP+)在高内涵系统上验证SERT摄取功能并优化其检测条件,应用选择性SERT抑制剂Fluoxetine和SERT增强剂Tianeptine验证SERT HCS方法可靠性。[结果]经PEI转染和G418筛选获得了稳定转染h SERT-HEK293细胞株。与HEK293细胞相比,h SERT-HEK293细胞中h SERT m RNA和蛋白表达量均显著性增加,APP+摄取实验表明h SERT-HEK293细胞摄取APP+显著性增加,并可被Fluoxetine特异性抑制。实验优化了高内涵检测APP+摄取实验中APP+浓度、孵育时间、数据分析方法等条件。Fluoxetine显著地抑制h SERT-HEK293对APP+的摄取,Tianeptine显著地增强h SERT-HEK293对APP+的摄取,证实此HCS方法的可靠性。[结论]本研究首次优化了应用APP+检测SERT活性的HCS条件,显著提高了SERT荧光检测方法灵敏度,并首次证实此HCS方法适用于SERT促进剂筛选,因此,建立了一种改良的SERT活性化合物HCS方法。 展开更多
关键词 5-羟色胺转运体 APP+ H SERT-HEK293细胞系 高内涵筛选
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植物挥发油快速起效抗抑郁潜能探讨 被引量：14
2
作者 杜金平 刘艳庭 +2 位作者 武艺静 吴红华 徐砚通 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期2006-2016,共11页
现有抗抑郁药物临床起效缓慢,因此需要研发快速起效抗抑郁药物。植物挥发油显示具有快速起效抗抑郁潜能,首先,挥发油气味芳香能够直接刺激嗅神经,脂溶性高易于透过血脑屏障,挥发性强适合鼻腔脑靶向和吸入给药,能够快速调节脑功能,具有... 现有抗抑郁药物临床起效缓慢,因此需要研发快速起效抗抑郁药物。植物挥发油显示具有快速起效抗抑郁潜能,首先,挥发油气味芳香能够直接刺激嗅神经,脂溶性高易于透过血脑屏障,挥发性强适合鼻腔脑靶向和吸入给药,能够快速调节脑功能,具有快速起效抗抑郁潜能;其次,抗抑郁活性植物挥发油化学和药理研究进展揭示了挥发油抗抑郁化学物质基础、抗抑郁效果及可能作用机制;再者,考察植物挥发油抗抑郁活性成分对快速起效抗抑郁靶点作用,发现植物挥发油化学成分能拮抗NMDA受体活性,提示植物挥发油具有快速起效抗抑郁靶点机制潜能;最后,探讨通过整合抗抑郁挥发油特性、快速起效抗抑郁靶点机制和给药方式,充分发挥植物挥发油快速起效抗抑郁优势,为新药研发提供方向。 展开更多
关键词 植物 挥发油 快速 抗抑郁
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