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由反转录病毒载体转移的马立克病毒糖蛋白D基因在感染细胞中的表达 被引量:6
1
作者 段玉友 崔治中 +3 位作者 秦爱建 殷震 杨冠珍 吴祥甫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期151-157,共7页
用EcoRI、PstI将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用ClaI再将gD重组pUCCl... 用EcoRI、PstI将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用ClaI再将gD重组pUCCla112N中的gD基因切出,构建于RCAS的ClaI位点。通过原位杂交筛选重组RCAS,并结合酶切分析鉴定出gD插入方向正确的重组RCAS。用磷酸钙沉淀法将gD重组RCAS转染鸡胚成纤维细胞(CEF),转染后第9天收集细胞上清,用其感染原代CEF,在感染后第4天和第6天收集CEF。提取CEF基因组DNA,用Digoxigenin(Dig)标记gD基因片段作为探针,通过Dot和Southernblot检测基因转移情况。用上述上清再次感染原代CEF,在第6天用异硫氰酸胍-氯化铯离心法提取感染细胞总RNA,用Dig和32P标记gDDNA为探针,分别用Dot和Northernblot检测MDVgDmRNA。结果表明,转染的重组RCAS不仅在细胞内成熟为具传染性的完整病毒。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 反转录病毒质粒 糖蛋白 D基因
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产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA探针的制备及应用研究 被引量:9
2
作者 段玉友 崔治中 +1 位作者 高菘 葛天同 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1995年第3期219-223,共5页
用纯化的产蛋下降综合征(EDS-76)病毒(H91毒株)悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量较大、背景清晰的核酸带。用BamHI酶消化产生4个片段,大小分别为17kb、10kb、4.0kb和2.0kb。将... 用纯化的产蛋下降综合征(EDS-76)病毒(H91毒株)悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量较大、背景清晰的核酸带。用BamHI酶消化产生4个片段,大小分别为17kb、10kb、4.0kb和2.0kb。将其中的2.0kb片段克隆进pUC18DNA载体中,重组质粒DNA用digoxigenin标记作为DNA探针,在dotblot中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒(MDV)DNA、鸡传染性贫血病毒(CAV)DNA、SPF鸡基因组DNA等核酸反应,只与3株EDS病毒(EDS标准毒株AV-127、EDSH91毒株和从健康鹅体中分离的EDSY81毒株)DNA呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后24h即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出EDS病毒DNA,在感染后35h仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用SPF鸡胚分离病毒,并用HA和HI试验检测分离病毒的特异性;在感染过程中,同时检测了血清中HI抗体的消长情况。结果表明,人工感染鸡排毒至少可以维持2个月左右,而且血清中HI抗体即使很高,也不能阻止感染鸡的排毒。 展开更多
关键词 家禽 DNA探针 泄殖腔分泌物 减蛋综合症 病毒
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用digoxigenin标记DNA探针检测鸡贫血病病毒感染 被引量:10
3
作者 段玉友 肖雪君 +2 位作者 潘志明 刘晓文 崔治中 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第1期16-18,共3页
用digoxigenin标记鸡贫血病病毒(CAV)衣壳蛋白基因的重组质粒克隆作为探针对江苏、上海等不同地区随机采集的60~120日龄病鸡或死亡鸡的胸腺抽提DNA,进行Dot blot检测CAV感染情况。在被检测的84只鸡胸腺病料中,有24只鸡的病料显示阳性(... 用digoxigenin标记鸡贫血病病毒(CAV)衣壳蛋白基因的重组质粒克隆作为探针对江苏、上海等不同地区随机采集的60~120日龄病鸡或死亡鸡的胸腺抽提DNA,进行Dot blot检测CAV感染情况。在被检测的84只鸡胸腺病料中,有24只鸡的病料显示阳性(阳性检出率为28.6%),这一结果表明,CAV感染在我国鸡群中已很普遍,且引起严重的二重感染。 展开更多
关键词 鸡病 贫血病 病毒感染 核酸探针 DNA 检测
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产蛋下降综合症H_(91)病毒基因组DNA的酶切分析 被引量:17
4
作者 段玉友 崔治中 +1 位作者 葛天同 王永坤 《江苏农学院学报》 CSCD 1995年第3期54-58,共5页
从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒(EDS_(-76))H_(91)株接种鹅胚收获的尿囊液,用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了EDS病毒。电镜下观察到病毒无囊膜,大小为70~85nm。从纯化的病毒悬液提取的核酸,经琼... 从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒(EDS_(-76))H_(91)株接种鹅胚收获的尿囊液,用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了EDS病毒。电镜下观察到病毒无囊膜,大小为70~85nm。从纯化的病毒悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现一条分子量为34kb、背景清晰的核酸带。用6种限制性内切酶对其基因组DNA进行了酶切分析,各种酶消化分别产生4,4,9,9,11和3条片段。将此结果与EDS标准株AV_(-127)株基因组DNA由相同的内切酶消化的结果进行比较发现,由HindⅢ和SmaⅠ消化2个病毒基因组DNA产生的片段数及大小有些差异。 展开更多
关键词 鸡病 卵用鸡 减蛋综合症 病毒DNA 酶切分析
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鹅细小病毒核酸探针的制备及应用 被引量:12
5
作者 段玉友 崔治中 王永坤 《中国畜禽传染病》 CSCD 1993年第5期37-39,共3页
由纯化的鹅细小病毒(即小鹅瘟病毒,GPV)提取病毒核酸,经琼脂糖凝胶电泳,在以 Lambda DNA-HindⅢ消化物作为标记时,病毒核酸条带位于4.3~6.5kb 之同。约5.0kb.由制备性凝胶电泳纯化的病毒核酸在非变性条件下同非放射性 digoxigenin 进... 由纯化的鹅细小病毒(即小鹅瘟病毒,GPV)提取病毒核酸,经琼脂糖凝胶电泳,在以 Lambda DNA-HindⅢ消化物作为标记时,病毒核酸条带位于4.3~6.5kb 之同。约5.0kb.由制备性凝胶电泳纯化的病毒核酸在非变性条件下同非放射性 digoxigenin 进行标记而制备 DNA探针.在特异性检测中.该探针仅与小鹅瘟病毒核酸发生阳性反应,而不与正常鹅胚组织、鹅胚尿囊液、鹅肝组织、鹅肠组织及其他病毒核酸抽提物发生反应.该探针能有效地检出通过 Southern blot 和 dot blot 固定到硝酸纤维素膜上的同源 DNA(能检出0.1pg).对送检的疑患小鹅瘟的病鹅肝脏、肠及其内容物抽提的核酸检测的结果与临床诊断和荧光抗体检测的结果完成一致.整个检测过程快速、准确和方便。 展开更多
关键词 鹅病 细小病毒 核酸探针 制备
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兔出血症病料中病毒核酸成分的分析鉴别 被引量:2
6
作者 段玉友 崔治中 +1 位作者 王永坤 朱国强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第2期113-117,共5页
将兔出血症病毒(RHDV)感染死亡兔肝反复冻融,分别经氯仿抽提,聚乙二醇(PEG)沉淀浓缩,蔗糖垫底超速离心,Sepharose4B柱层析及蔗糖密度梯度离心,得到纯化的RHDV。电镜观察,RHDV粒子无囊膜,大小为3... 将兔出血症病毒(RHDV)感染死亡兔肝反复冻融,分别经氯仿抽提,聚乙二醇(PEG)沉淀浓缩,蔗糖垫底超速离心,Sepharose4B柱层析及蔗糖密度梯度离心,得到纯化的RHDV。电镜观察,RHDV粒子无囊膜,大小为32~34nm。核酸展层法显示,病毒基因组核酸长度约为7.0kb。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸,在琼脂糖凝胶电泳呈现2条主带;当以λDNA-HindⅢ消化物为分子量标准时,它们分别位于相当于20kb(A带)和2.0kb(B带)的位置。用DNAse、RNAse及S1核酸酶消化试验分析表明,A带是一种双股DNA,而日带为单股RNA。在Northernblot中只有B带可以与德国提供的RHDV-cDNA克隆探针发生杂交反应,而A带不与该探针显示任何反应。此外,用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与A带一致的核酸提取物。本研究表明,在我国流行的RHD病料中,出现的约7.0kb的单股RNA是RHDV病原特异的。 展开更多
关键词 出血症 病毒 病毒核酸 DNA探针
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 被引量:4
7
作者 段玉友 崔治中 殷震 《中国病毒学》 CSCD 1996年第2期176-182,共7页
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质... 用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 糖蛋白D 聚合酶链式反应
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马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D基因的分离克隆、定序及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
8
作者 段玉友 崔治中 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期544-550,共7页
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从马立克氏病病毒(MDV)GA株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因1209bp编码序列。将该PCR扩增产物于EcoRI和KpnⅠ位点克隆进... 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从马立克氏病病毒(MDV)GA株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因1209bp编码序列。将该PCR扩增产物于EcoRI和KpnⅠ位点克隆进pUC18质粒载体中。将gD重组pUC18质粒DNA用Digoxigenin(Dig)标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA(含gD全基因)。重组质粒序列分析结果表明,MDVGA株gD与MDVRB1B株gD在DNA和氨基酸序列组成上略显差异。将gD基因从重组的pUC18质粒中切出,插入表达性质粒pEZZ18载体中的葡萄球菌A蛋白(SPA)的信号肽基因的下游。对含gD重组pEZZ18质粒插入序列进行部分测序,结果表明,gD阅读框与pEZZ18中SPA信号肽的阅读框是吻合的。gD重组pEZZ18质粒在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达gD,即gD与SPA的信号肽(14000)相连。根据SPA的信号肽可与IgG结合的特性,用兔IgG结合的Sepharose4B制备的亲和凝胶柱来纯化表达的gD融合蛋白。纯化的表达产物经SDS-PAGE鉴定后,? 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 糖蛋白D 聚合酶链式反应 克隆
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猪MHCⅠ类基因区基因组DNA的RFLP初步分析 被引量:2
9
作者 段玉友 王林云 崔治中 《江苏农学院学报》 CSCD 1993年第4期39-42,共4页
用4种限制性内切酶EeoRI、BamHI、HindⅢ和PstI对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组DNA进行内切酶消化和电泳,经Southcrn blot将DNA转移到NC膜上。将来源于猪MHC的Ⅰ类基因猪移植抗原(SLA)基因片段克隆PD1-A DNA(4.3kb)用digoxigcnin标... 用4种限制性内切酶EeoRI、BamHI、HindⅢ和PstI对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组DNA进行内切酶消化和电泳,经Southcrn blot将DNA转移到NC膜上。将来源于猪MHC的Ⅰ类基因猪移植抗原(SLA)基因片段克隆PD1-A DNA(4.3kb)用digoxigcnin标记作为DNA探针,进行分子杂交反应。比较了不同品系和个体间的限制性酶切片段长度多态性(RFLP),结果表明:(1)经各种单酶消化后分子杂交反应中。产生1~5条大小不等的片段。长度范围介于9.0~1.0kb之间;(2)在使用4种酶单独消化时。1头二花脸公猪不仅与2头梅山母猪显示不同的RFLP带型,而且与2头二花脸母猪也显示完全不同的带型;(3)在使用4种酶单独消化时,2头梅山母猪表现完全相同的RFLP带型;(4)在使用 EcoRI、BamHI、Pstl 3种酶单独消化时。2头二花脸母猪呈现完全相同的RFLP带型,但在用HindⅢ酶消化时,虽然都有一条共同带,但其中1头多一条带。(5)如果比较2头梅山母猪及2头二花脸母猪,它们的基因组DNA的EcoRI和BamHI消化的带型完全一致;但它们的HindⅢ和PstI消化的带型不同,显然有一条共同的带。用SLA基因克隆PDI-A作为探针,结果表明。不仅二花脸猪的RFLP表现与梅山猪有所区别,而且似乎二花脸猪更易表现个体间差异。 展开更多
关键词 基因组 DNA 基因 多态性
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兔出血症病毒形态学的研究 被引量:1
10
作者 段玉友 王永坤 崔治中 《江苏农学院学报》 CSCD 1993年第3期17-23,共7页
用氯仿抽提、PEG沉淀、Scpharosc 4B柱层析、超离及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔出血症病毒。电镜下观察到兔出血症病毒粒子为无囊膜,大小为32~34nm。外观呈现独特的结构。正二十面体对称,髓蕊直径15~17nm,衣壳厚8~9nm。由内、外... 用氯仿抽提、PEG沉淀、Scpharosc 4B柱层析、超离及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔出血症病毒。电镜下观察到兔出血症病毒粒子为无囊膜,大小为32~34nm。外观呈现独特的结构。正二十面体对称,髓蕊直径15~17nm,衣壳厚8~9nm。由内、外衣壳组成。外衣壳上按T=3排列着32个壳粒,壳粒呈中空的管状,长5~6nm,直径约4~5nm。中心孔径约2nm。有一环状呈不连续的内衣壳,厚2~3nm,内环上不连续每段约4nm,与壳粒相连。在5、3和2次轴对称时,病毒表面有大的、3个以上特征性的表面凹陷(Surfacc dcpression),这种表面凹陷呈一定的分布。呈五次轴对称时,病毒表周有10个向外管状突起。病毒表周不规则,表面含丰富的突起和大、小的凹陷(dcpression and small indentation)是兔出血症病毒形态学特点之一,其大小和形态,在动物病毒中比较类似于嵌杯样病毒。 展开更多
关键词 兔病 出血症病毒 形态学
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用digoxigenin标记DNA探针检测Ⅰ型马立克病病毒感染 被引量:1
11
作者 段玉友 刘晓文 +2 位作者 潘志明 肖雪君 崔治中 《天津畜牧兽医》 1996年第4期20-21,共2页
用非放射性digoxigenin(dig)标记Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性DNA探针对从江苏不同地区送检的60d龄~120d龄左右的可疑马立克氏病(MD)病鸡或死亡鸡的羽囊抽提的DNA样品进行dotblot检测... 用非放射性digoxigenin(dig)标记Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性DNA探针对从江苏不同地区送检的60d龄~120d龄左右的可疑马立克氏病(MD)病鸡或死亡鸡的羽囊抽提的DNA样品进行dotblot检测。在被检可疑MD的24只鸡羽囊病料中,有16只鸡的病料DNA显示MDV阳性(阳性检出率为66.7%)。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 DNA探针 斑点杂交
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马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究
12
作者 段玉友 崔治中 +1 位作者 秦爱建 殷震 《江苏农学院学报》 CSCD 1996年第4期51-54,共4页
用EcoRI,PstI内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用Clal再将g... 用EcoRI,PstI内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用Clal再将gD重组pUCCla112N中的gD基因切出,用ClaI将RCAS载体切开,将gD基因构建于RCAS的ClaI位点。通过原位杂交筛选重组RCAS,并结合酶切分析鉴定出gD插入方向正确的重组RCAS。用磷酸钙沉淀法将gD重组RCAS转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第9天的细胞上清,并用其感染原代CEF,在感染后第4天和第6天收集CEF。提取CEF基因组DNA,用Digoxigenin(dig)标记gD基因片段作为探针,通过dotblot和Southernblot检测基因转移情况。结果表明,转染的重组RCAS不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒。 展开更多
关键词 马立克病毒 糖蛋白D基因 感染细胞 DNA
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PCR和斑点杂交检测鸡传染性贫血病毒 被引量:43
13
作者 刘岳龙 崔治中 段玉友 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第1期38-42,共5页
通过聚合酶链反应(pcR)扩增鸡传染性贫血病毒(cAV)DNA特定片段,将此pcR产物用Digoxigenin标记后作为探针进行斑点杂交,以此检测CAV并作流行病学调查。对从江苏省不同地市随机采集的2月龄左右不同疾病... 通过聚合酶链反应(pcR)扩增鸡传染性贫血病毒(cAV)DNA特定片段,将此pcR产物用Digoxigenin标记后作为探针进行斑点杂交,以此检测CAV并作流行病学调查。对从江苏省不同地市随机采集的2月龄左右不同疾病的病鸡DNA样品进行检测,在被检的52个不同鸡群来源的病料中,有36个鸡群来源的病料DNA显示CAV阳性(群阳性率为69.2%);备组织中CAVDNA含量有所差异,依次为胸腺>脾、骨髓、肝>肾、法氏囊、脑。用PCR检测得到的阳性鸡的组织病料感染SPF鸡,在感染后第24天检查,出现贫血症状。初步调查表明,在江苏一些地区CAV感染已相当普遍,但它与发病的关系还有待于进一步研究。 展开更多
关键词 传染性贫血 病毒 聚合酶链反应 斑点杂交 鸡病
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鸡贫血病毒VP1基因在大肠杆菌中的高效表达及其生物学特性的初步分析 被引量:5
14
作者 刘岳龙 秦爱建 +4 位作者 金文杰 叶建强 吉荣 崔治中 段玉友 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期61-65,共5页
将鸡贫血病毒 (CAV)VP1蛋白 44 9个氨基酸中的 42 4个氨基酸 (占 95 % )编码序列分二段 ,分别克隆入表达性载体 pGEX - 5X - 3,在大肠杆菌以GST融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫小鼠 4次 ,制备了抗CAV的多克隆抗体。通过对... 将鸡贫血病毒 (CAV)VP1蛋白 44 9个氨基酸中的 42 4个氨基酸 (占 95 % )编码序列分二段 ,分别克隆入表达性载体 pGEX - 5X - 3,在大肠杆菌以GST融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫小鼠 4次 ,制备了抗CAV的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞做间接免疫荧光试验 (IFA) ,结果为阳性。这表明表达物保留了天然VP1相关的抗原性。用此抗CAV抗体和所建立的IFA方法对临床CAV凝似病料成功地进行了实验室诊断。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 VP1基因 表达 多抗血清 间接免疫荧光试验 IFA
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第46代鸡贫血病病毒细胞凋亡素基因的体外扩增、克隆、序列比较 被引量:5
15
作者 刘岳龙 崔治中 +3 位作者 秦爱建 叶建强 段玉友 金文杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期337-341,共5页
通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增了第 46代鸡贫血病病毒 (CAV)Cux株的细胞凋亡素 (Apoptin)基因 ,并克隆入pGEX_5X_3质粒载体中。通过限制性内切酶分析、序列测定 ,验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为 36 3bp ,编码 12 1个氨基酸。... 通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增了第 46代鸡贫血病病毒 (CAV)Cux株的细胞凋亡素 (Apoptin)基因 ,并克隆入pGEX_5X_3质粒载体中。通过限制性内切酶分析、序列测定 ,验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为 36 3bp ,编码 12 1个氨基酸。与Meehan .等发表的CAVCux株序列相比 ,第 46代细胞适应毒的细胞凋亡素基因的第 2 0 9个核苷酸由CT ,与澳大利亚株、美国株CAV序列分别有 5个和 2个碱基的差别 ,并且均匀分布在 5’端前 2 10碱基区 ,而在 3’端序列较为保守。与同处欧洲的英国株CAV序列相比 ,序列较为一致。本研究对所克隆的调亡素编码蛋白进行了疏水性分析和抗原表位优势分析。 展开更多
关键词 鸡盆血病病毒 凋亡素基因 PCR 基因克隆 序列比较
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中国株和德国株兔出血症病毒的基因组比较 被引量:8
16
作者 崔治中 段玉友 +1 位作者 王永坤 朱国强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期242-247,共6页
以兔出血症病毒(RHDV)德国株基因组cDNA的部分片段为探针,与中国的NJ株和LW株RHDV的基因组做分子杂交,结果表明,它们属于同一病毒。将中国株RHDV感染兔肝组织,用硫氰酸胍-氯化铯超速离心法提取的核酸沉淀,... 以兔出血症病毒(RHDV)德国株基因组cDNA的部分片段为探针,与中国的NJ株和LW株RHDV的基因组做分子杂交,结果表明,它们属于同一病毒。将中国株RHDV感染兔肝组织,用硫氰酸胍-氯化铯超速离心法提取的核酸沉淀,或将提纯病毒悬液经苯酚抽提法获取的核酸沉淀,在用RNase或DNase,消化后直接做Dotblot,或将相应样品做PCR后再做Dotblot或Southernblot,再与经Digoxigenin标记的cDNA探针做分子杂交,结果证明,在中国的二个不同来源的兔出血症病料中,与德国株RHDV基因组cDNA同源的病毒是一种ssRNA病毒。本文还讨论了在中国兔出血症病料中存在另一种DNA病毒的可能性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 中国株 德国株 基因组
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雏鸡传染性脑脊髓炎病毒的分离与初步鉴定 被引量:7
17
作者 秦爱建 段玉友 +5 位作者 沈保山 周阳生 李厚达 崔治中 段素华 郁培华 《中国家禽》 北大核心 1993年第4期25-26,共2页
用神经胶质细胞培养和6日龄SPF鸡胚卵黄囊接种,分离出一株病毒,经免疫荧光及琼脂扩散试验,证明该病毒为禽传染性脑脊髓炎病毒.
关键词 鸡病 雏鸡 传染病 脑脊髓炎 病毒
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I型马立克氏病毒38kD磷蛋白与Ⅱ和Ⅲ型病毒间的交叉免疫反应 被引量:10
18
作者 秦爱建 崔治中 段玉友 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期393-397,共5页
由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,... 由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,同时也用不同型MDV毒株(HVT,Z4)制备的抗血清和自然感染发病鸡血清分别与感染重组病毒的Sf9细胞进行免疫交叉反应.试验结果表明,完整的Ⅰ型MDV来源的pp38基因产物与所试Ⅱ型Z4株和Ⅲ型HVT Fc126毒株在抗原性上有显著交叉反应.这一结果表明,在Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株中可能存在着pp38的类似物. 展开更多
关键词 马立克氏病 病毒 磷蛋白 交叉免疫
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鹅源腺病毒全基因组DNA酶切片段的克隆 被引量:4
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作者 徐福洲 崔治中 +3 位作者 段玉友 刘岳龙 孙怀昌 何良梅 《扬州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2001年第1期44-47,共4页
利用 1株鹅源腺病毒 Y81G4 株 ,经鹅胚增殖后收获尿囊液 ,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组 DNA.病毒 DNA经 H ind 酶切后共产生 1 0个片段 ,分别回收各酶切片段 ,与经 H ind 单酶切的p UC1 8连接 ,获得 8个不同的重组质粒 .对... 利用 1株鹅源腺病毒 Y81G4 株 ,经鹅胚增殖后收获尿囊液 ,用差速离心法纯化病毒子并提取病毒基因组 DNA.病毒 DNA经 H ind 酶切后共产生 1 0个片段 ,分别回收各酶切片段 ,与经 H ind 单酶切的p UC1 8连接 ,获得 8个不同的重组质粒 .对于未克隆到的两末端片段 ,经碱处理去除末端蛋白后 ,以平端和 H ind 粘端与经 Sma 和 H ind 双酶切的 p UC1 8连接 ,获得了重组质粒 p GAHC和 p GAHI.克隆的各酶切片段 ,通过酶切电泳和 Southern blotting结果鉴定 ,证明已分别克隆到该病毒基因组 DNA H ind 酶切片段 ,且各酶切片段大小之和约为 3 2 . 展开更多
关键词 鹅源腺病毒 基因组 酶切片段 克隆
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鹅源腺病毒Y_(81)G_(4)株基因组末端倒置重复序列(ITR)的核酸鉴定和结构分析 被引量:3
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作者 刘岳龙 崔治中 +4 位作者 徐福洲 段玉友 孙怀昌 秦爱建 何良梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期285-288,共4页
对鹅源腺病毒株Y81G4 基因组两侧末端序列测定和比较 ,鉴定出其ITR区。Y81G4 株ITR全长为 12 5bp ,远长于其它禽Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群腺病毒ITR长度。在Y81G4 株ITR中有一些腺病毒ITR序列特征 :① 5 _C(A/T) (A/T)NTCAT_腺病毒典型起始序列 ;... 对鹅源腺病毒株Y81G4 基因组两侧末端序列测定和比较 ,鉴定出其ITR区。Y81G4 株ITR全长为 12 5bp ,远长于其它禽Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群腺病毒ITR长度。在Y81G4 株ITR中有一些腺病毒ITR序列特征 :① 5 _C(A/T) (A/T)NTCAT_腺病毒典型起始序列 ;② 9~ 13bp存在腺病毒科共有的 (A/T)T(A/T)ATA保守序列 ;③在ITR区 37~ 42bp出现的GNGGCG保守序列 ;④在ITR 45~ 5 0bp出现TGACGT保守序列。此外 ,哺乳动物腺病毒ITR中被转录因子SP1所识别的序列和以增强DNA复制启动的两个宿主核蛋白NFⅠ和NFⅢ的结合序列在Y81G4 株TIR中并没有出现。经DNASTAR软件“Clustal”方法对禽腺病毒Y81G4 株ITR与其它腺病毒ITR的同源性进行比较 ,其同源性由高到低依次为 :禽Ⅲ群减蛋综合征病毒 (EDSV ,10 0 % ) >羊腺病毒 (OAV ,43 .5 % ) >禽Ⅱ群火鸡出血性肠炎病毒 (HEV ,30 .8% )和禽Ⅰ群鸡胚致死孤儿病毒 (CELO株 ,2 8.2 % ) >人腺病毒 12型 (HAd12 ,2 6 .4% )和牛腺病毒 1型 (BAd1,2 6 .4% )。通常在腺病毒科同一亚属或亚群中ITR是很保守的 ,因而推测Y81G4 展开更多
关键词 鹅源腺病毒Y_(81)G_(4)株 ITR测定 结构分析 同源性分析
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