耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件 被引量：8

1

作者 段绪果 沈微 +5 位作者 李艳丽 饶志明 唐雪明 方慧英 刘吉泉 诸葛健 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期74-78,共5页

利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后... 利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的发酵条件进行了优化。结果表明:在LB培养基中,诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5 h,最大产酶量达到72.9 U/mL;在半合成培养基中,于30℃培养4 h,再于42℃诱导培养6 h,产酶量最高达到131 U/mL。 展开更多

关键词 耐热过氧化氢酶 基因工程菌 温控表达载体 发酵条件

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葡萄糖异构酶固定化细胞的制备方法优化及应用 被引量：1

2

作者 段绪果 张帆 吴敬 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2014年第8期45-54,共10页

本研究比较了壳聚糖微球法、聚乙烯醇-海藻酸钠包埋法、微晶纤维素法及壳聚糖絮凝-戊二醛交联法对含有葡萄糖异构酶细胞的固定化效果,发现壳聚糖絮凝-戊二醛交联法效果最好。最佳固定化条件为:壳聚糖浓度为0.015%(m/v),戊二醛浓度为0.05... 本研究比较了壳聚糖微球法、聚乙烯醇-海藻酸钠包埋法、微晶纤维素法及壳聚糖絮凝-戊二醛交联法对含有葡萄糖异构酶细胞的固定化效果,发现壳聚糖絮凝-戊二醛交联法效果最好。最佳固定化条件为:壳聚糖浓度为0.015%(m/v),戊二醛浓度为0.05%(v/v),交联时间为3 h。采用该方法制备的固定化细胞的酶活为2579 U·g-1,酶活回收率为70.5%,机械强度为1797 g。在分批转化方面,固定化细胞在70℃下重复使用8批次后,转化率仍保持在42.1%以上。此外,固定化细胞在连续柱式转化反应器中连续转化19天,转化得到了约5.7 kg果糖。 展开更多

关键词 葡萄糖异构酶 固定化细胞 壳聚糖 戊二醛 絮凝交联

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β-半乳糖苷酶全细胞催化制备低聚半乳糖工艺优化

3

作者 段绪果 孙晓军 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期61-65,共5页

β-半乳糖苷酶能以乳糖为底物生产低聚半乳糖。利用前期构建的产β-半乳糖苷酶F441Y重组毕赤酵母为菌种,进行摇瓶发酵并诱导培养。酵母菌体经过离心、洗涤后作为全细胞催化剂用于转化乳糖制备低聚半乳糖。为了提高转化率,首先通过单因... β-半乳糖苷酶能以乳糖为底物生产低聚半乳糖。利用前期构建的产β-半乳糖苷酶F441Y重组毕赤酵母为菌种,进行摇瓶发酵并诱导培养。酵母菌体经过离心、洗涤后作为全细胞催化剂用于转化乳糖制备低聚半乳糖。为了提高转化率,首先通过单因素实验,优化了反应的初始p H、温度、乳糖浓度、加酶量和反应时间等因素。在此基础上,采用正交实验进一步优化了反应条件,优化后的最佳条件为:反应初始p H 6.0,反应温度为80℃,乳糖浓度为80%(w/v),加酶量为5 U/m L。在最佳转化条件下,反应24 h,低聚半乳糖的最高转化率为59.9%。与游离酶转化方法相比,该反应体系中的杂蛋白和美拉德反应较少,更有利于低聚半乳糖产品的后续分离。该研究建立的全细胞酶转化方法,具有转化率高、简单易行以及容易操作等优点。 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶 毕赤酵母 全细胞催化剂 条件优化 低聚半乳糖

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重组毕赤酵母生产凝乳酶发酵优化 被引量：4

4

作者 李亮 吴丹 +2 位作者 宿玲恰 段绪果 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期457-464,共8页

为了获得毕赤酵母生产凝乳酶的最佳发酵条件,分别从起始诱导OD600、甲醇诱导浓度以及p H等方面研究了P.pastoris GS115在3.6 L发酵罐中表达微小根毛霉来源凝乳酶的高密度发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇检测流加控制器在线监测流... 为了获得毕赤酵母生产凝乳酶的最佳发酵条件,分别从起始诱导OD600、甲醇诱导浓度以及p H等方面研究了P.pastoris GS115在3.6 L发酵罐中表达微小根毛霉来源凝乳酶的高密度发酵,以恒溶氧反馈调节补加甘油和甲醇检测流加控制器在线监测流加甲醇。结果表明,在重组P.pastoris GS115/p PIC9k-chy起始诱导,OD600和甲醇诱导体积分数分别为150和2.0%,诱导p H为5.0时,发酵96 h凝乳酶活达到最大,为1 870 SU/m L,此时对应的生产强度和产物得率均达到最高水平,分别为19.48 SU/(m L·h)和2.42 SU/m L,总蛋白质质量浓度为0.64 mg/m L,凝乳活性与蛋白质水解活性的比值(MCA/PA)为63.43。 展开更多

关键词 毕赤酵母 微小根毛霉 凝乳酶 高密度发酵

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β-丙氨酸的生物代谢过程及生物法制备研究进展 被引量：3

5

作者 丁乾 段绪果 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第4期741-753,共13页

β-丙氨酸是自然界中唯一一种天然存在的β型氨基酸,也是一种非蛋白氨基酸。β-丙氨酸在食品、医药、化工和饲料等领域具有重要用途,市场前景非常广阔。目前,β-丙氨酸的合成方法有化学法和生物法。相较于化学法复杂的生产流程,生物法... β-丙氨酸是自然界中唯一一种天然存在的β型氨基酸,也是一种非蛋白氨基酸。β-丙氨酸在食品、医药、化工和饲料等领域具有重要用途,市场前景非常广阔。目前,β-丙氨酸的合成方法有化学法和生物法。相较于化学法复杂的生产流程,生物法具有产物专一、条件温和及工艺简单等优点,是公认的更环保、更有前景的β-丙氨酸生产方法。该文综述了β-丙氨酸的性质、应用、生物代谢路径及主要的生物合成法,重点讨论了生物法生产β-丙氨酸的现状及存在的问题。以期为β-丙氨酸的高效、绿色生产工艺开发及工业化应用提供参考。 展开更多

关键词 Β-丙氨酸 生物法 发酵法 酶转化 L-天冬氨酸-α-脱羧酶

原文传递

基于角质酶共表达策略的大肠杆菌胞外生产耐高温α-淀粉酶及其发酵条件优化 被引量：4

6

作者 李祝 段绪果 +1 位作者 宿玲恰 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期9-17,共9页

在前期工作中通过分子改造提高了来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶在高温酸性条件下的稳定性,同时改良了催化效率。为了实现α-淀粉酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的胞外高效表达,作者尝试采用共表达嗜热放线菌(Thermobif... 在前期工作中通过分子改造提高了来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶在高温酸性条件下的稳定性,同时改良了催化效率。为了实现α-淀粉酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的胞外高效表达,作者尝试采用共表达嗜热放线菌(Thermobifida fusca)角质酶来增强大肠杆菌膜透性,同时优化诱导策略以提高重组α-淀粉酶的胞外表达。首先构建了能同时表达角质酶和α-淀粉酶的工程菌BL21(DE3)/pETDuet-amy-cutinase,并将此菌株与能单独表达α-淀粉酶的工程菌BL21(DE3)/pET-20b-amy进行摇瓶和3 L发酵罐的产酶发酵对比。结果显示,共表达菌株在胞外产酶方面具有明显的优势。进一步对共表达菌株的诱导条件进行优化,在32℃、诱导剂为0.15μmol/L IPTG与0.5 g/(L·h)乳糖条件下,发酵32 h后胞外α-淀粉酶最高酶活力可达6.05×10^4 U/mL,是单表达菌株摇瓶发酵水平的28.3倍。此时胞外重组α-淀粉酶质量浓度为8.92 g/L,重组蛋白质的分泌效率为93.2%。 展开更多

关键词 Α-淀粉酶 角质酶 共表达 诱导策略

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重组蔗糖异构酶的制备及应用条件优化 被引量：3

7

作者 程胜 段绪果 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期41-47,共7页

对重组菌株E.coli BL21(DE3)/p ET-24a-pal I摇瓶发酵产酶进行研究,探讨了3 L发酵罐中不同乳糖诱导浓度对菌体高密度发酵产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵得到胞外上清酶活253.1 U/m L,3 L发酵罐高密度发酵时,在0.4 g/(L·h)乳糖诱导... 对重组菌株E.coli BL21(DE3)/p ET-24a-pal I摇瓶发酵产酶进行研究,探讨了3 L发酵罐中不同乳糖诱导浓度对菌体高密度发酵产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵得到胞外上清酶活253.1 U/m L,3 L发酵罐高密度发酵时,在0.4 g/(L·h)乳糖诱导浓度下,发酵上清酶活可达到最大值654 U/m L。对重组蔗糖异构酶转化蔗糖生成异麦芽酮糖的酶转化条件进行了优化,结果表明,当底物浓度为400 g/L,反应初始p H 6.5,温度30℃,加酶量20 U/g蔗糖,转化时间8 h,异麦芽酮糖可以达到最大转化率87.9%。 展开更多

关键词 蔗糖异构酶 异麦芽酮糖 酶转化 摇瓶发酵 高密度发酵

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重组果聚糖蔗糖酶的发酵优化及应用 被引量：2

8

作者 唐煜 陈晟 +2 位作者 段绪果 吴敬 吴丹 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期97-103,共7页

为了研究不同条件下重组短小芽孢杆菌产果聚糖蔗糖酶的最适条件以及利用重组酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖的最适转化条件。以前期构建的产果聚糖蔗糖酶重组短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis/pNCMO2-lsc作为菌种,通过单因素试验以及... 为了研究不同条件下重组短小芽孢杆菌产果聚糖蔗糖酶的最适条件以及利用重组酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖的最适转化条件。以前期构建的产果聚糖蔗糖酶重组短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis/pNCMO2-lsc作为菌种,通过单因素试验以及正交试验确定其最适产酶的发酵培养基为:葡萄糖20 g/L、氮源(工业酵母粉∶棉籽粉=2∶1,质量比)为40 g/L、CaCl20.5 mmol/L,最适产酶温度30℃。在最优条件下发酵培养,果聚糖蔗糖酶的酶活可达62.1 U/mL,是优化前的3.69倍。利用该重组果聚糖蔗糖酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖,在蔗糖和乳糖质量浓度均为200 g/L情况下,确定其最适转化条件:反应温度35℃,pH 6.0,加酶量为2 U/g底物,反应8 h后低聚乳果糖转化率可达39.1%。 展开更多

关键词 果聚糖蔗糖酶 发酵优化 低聚乳果糖

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重组β-半乳糖苷酶的制备及转化条件优化 被引量：3

9

作者 胡树兵 段绪果 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1241-1245,共5页

以前期构建的产Bacilluscirculansβ-半乳糖苷酶重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-20b-lac为菌种,进行摇瓶发酵诱导培养,培养24 h胞外上清酶活达15 U/mL。利用制备的β-半乳糖苷酶粗酶液进行酶转化实验。优化了酶转化条件,考查了初始p... 以前期构建的产Bacilluscirculansβ-半乳糖苷酶重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-20b-lac为菌种,进行摇瓶发酵诱导培养,培养24 h胞外上清酶活达15 U/mL。利用制备的β-半乳糖苷酶粗酶液进行酶转化实验。优化了酶转化条件,考查了初始pH、反应温度、乳糖质量浓度、加酶量和反应时间等因素对低聚半乳糖产率的影响。确定最优转化条件为:初始pH 6.5、反应温度55℃,起始乳糖质量浓度为700 g/L,加酶量为8 U/mL。在此条件下反应16 h,低聚半乳糖转化率可达57%。 展开更多

关键词 低聚半乳糖 Β-半乳糖苷酶 摇瓶发酵 酶转化 条件优化

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重组Bacillus stearothermophilusβ-CGTase在β-环糊精制备中的应用条件优化 被引量：1

10

作者 范博望 段绪果 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期897-902,共6页

以作者所在实验室前期构建的产嗜热脂肪芽孢杆菌β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)重组短小芽孢杆菌作为菌种,经过摇瓶发酵,得到酶活为49 U/mL的β-CGTase粗酶液。以马铃薯淀粉为底物用β-CGTase进行单酶法转化制备β-环糊精,并对转... 以作者所在实验室前期构建的产嗜热脂肪芽孢杆菌β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-CGTase)重组短小芽孢杆菌作为菌种,经过摇瓶发酵,得到酶活为49 U/mL的β-CGTase粗酶液。以马铃薯淀粉为底物用β-CGTase进行单酶法转化制备β-环糊精,并对转化条件进行优化。结果表明,最优反应条件为:反应时间18 h,初始pH 6.0,反应温度50℃,底物质量浓度15 g/dL,加酶量13 U/g底物。在最优条件下,总转化率最高为73.9%,其中β-环糊精比例为98.7%。在此基础上,建立了采用普鲁兰酶与β-CGTase复配同步转化淀粉制备β-环糊精的新工艺,并且优化了普鲁兰酶的加酶量。结果表明,当普鲁兰酶加量为50 U/g淀粉底物,反应时间18 h时,总转化率达到最高81.4%,其中β-环糊精占比97.7%。 展开更多

关键词 β-环糊精葡萄糖基转移酶 Β-环糊精 酶转化 条件优化 同步转化

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面包酵母研究进展 被引量：18

11

作者 冯薇 段绪果 《化工时刊》 CAS 2008年第7期42-45,共4页

面包酵母是面包生产过程中最重要的微生物,在面包生产中起着关键作用。面包酵母菌种改良的研究主要集中在耐高糖的机制、麦芽糖的利用、低温适应性、蜜二糖的利用和乳糖的利用等方面。商品面包酵母生产的主要原料是甜菜糖蜜或甘蔗糖蜜,... 面包酵母是面包生产过程中最重要的微生物,在面包生产中起着关键作用。面包酵母菌种改良的研究主要集中在耐高糖的机制、麦芽糖的利用、低温适应性、蜜二糖的利用和乳糖的利用等方面。商品面包酵母生产的主要原料是甜菜糖蜜或甘蔗糖蜜,其发酵过程要求用补料的方法添加培养基,并要求适当的通风。 展开更多

关键词 面包酵母 菌种改良 发酵工艺

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《食品酶学》课程双语教学改革探索与实践 被引量：3

12

作者 段绪果 王耀松 +2 位作者 黄悦 吴彩娥 黄梅桂 《食品与发酵科技》 CAS 2019年第5期124-126,141,共4页

双语教学是培养具有国际化背景高层次人才的有效途径之一,也是我国高等教育面向国际化的需要。《食品酶学》课程是食品科学与工程相关专业本科生的专业必修课,对于学生能力培养具有重要的作用。我们针对本专业相关课程培养要求的特点,... 双语教学是培养具有国际化背景高层次人才的有效途径之一,也是我国高等教育面向国际化的需要。《食品酶学》课程是食品科学与工程相关专业本科生的专业必修课,对于学生能力培养具有重要的作用。我们针对本专业相关课程培养要求的特点,在双语教材选择、授课方式、教师素质、学生因素及教学考核等多个方面开展了初步的探索与尝试。《食品酶学》课程双语教学模式的推广将为培养具有国际化背景的高层次食品专业人才打下良好的基础。 展开更多

关键词 食品酶学 双语教学 教学改革

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疫情背景下“食品酶学”双语课程在线教学的设计及实施 被引量：1

13

作者 段绪果 黄悦 刘玉乾 《轻工科技》 2022年第5期132-134,共3页

新型冠状病毒疫情的爆发,对全国乃至全球各行各业均产生了不同程度的影响,教育行业亦不例外。为响应教育部“停课不停教”“停课不停学”的号召,广大教育工作者迎难而上、积极行动起来,利用腾讯课堂、QQ屏幕分享、钉钉课堂和雨课堂等多... 新型冠状病毒疫情的爆发,对全国乃至全球各行各业均产生了不同程度的影响,教育行业亦不例外。为响应教育部“停课不停教”“停课不停学”的号召,广大教育工作者迎难而上、积极行动起来,利用腾讯课堂、QQ屏幕分享、钉钉课堂和雨课堂等多种形式,坚持开展线上教学。本课程教学组针对“食品酶学”双语课程的特点,积极探索和优化课程在线教学方法,较好地完成了教学目标。本文针对“食品酶学”双语课程培养要求和特点,从在线教学平台的选择、课程设计及教学过程中的主要收获和存在问题等方面进行阐述和讨论。 展开更多

关键词 食品酶学 双语教学 在线教学设计

原文传递

化学分子伴侣及诱导条件协同强化Thermotoga maritimaα-葡聚糖磷酸化酶可溶性表达

14

作者 段绪果 张玉华 +3 位作者 黄婷婷 丁乾 栾舒越 朱秋雨 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期233-242,共10页

为实现海栖热袍菌Thermotoga maritimeα-葡聚糖磷酸化酶的高效制备。构建了产α-葡聚糖磷酸化酶重组菌株,并对发酵条件进行了优化。初步研究发现,重组菌株在37℃条件下进行诱导培养,摇瓶发酵24 h,酶活力仅有5.2 U/mL;SDS-PAGE蛋白电泳... 为实现海栖热袍菌Thermotoga maritimeα-葡聚糖磷酸化酶的高效制备。构建了产α-葡聚糖磷酸化酶重组菌株,并对发酵条件进行了优化。初步研究发现,重组菌株在37℃条件下进行诱导培养,摇瓶发酵24 h,酶活力仅有5.2 U/mL;SDS-PAGE蛋白电泳显示,重组酶主要以不可溶的包涵体状态存在,可溶性酶所占比例偏低。为减少包涵体的形成、提高重组酶可溶性表达水平,分别从诱导条件和分子伴侣两个方面进行了优化。首先,通过对诱导剂种类、诱导剂浓度、温度、诱导剂添加时间等诱导条件进行优化后,α-葡聚糖磷酸化酶的酶活力提高到27.0 U/mL,是优化前的5.2倍。其次,通过添加化学分子伴侣进一步提高重组酶可溶性表达水平,发现在发酵0 h添加20 mmol/L的化学分子伴侣(肌醇)后,最高酶活力为62.0 U/mL,是优化前酶活力的11.9倍;然而,共表达5种分子伴侣质粒pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16对α-葡聚糖磷酸化酶的可溶性表达均没有促进作用。 展开更多

关键词 α-葡聚糖磷酸化酶 重组表达 诱导条件优化 分子伴侣 化学分子伴侣

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工程教育认证背景下《食品安全学》翻转课堂教学模式初探 被引量：3

15

作者 黄悦 段绪果 +1 位作者 王耀松 苏二正 《食品与发酵科技》 CAS 2020年第4期129-132,共4页

工程教育认证是高等工科教育改革发展的核心任务之一,翻转课堂坚持自主式、个性化和多样化的教育模式,符合工程教育认证基本理念。《食品安全学》作为高校食品科学与工程专业的核心课程,提高其教学质量对本专业认证至关重要。本文主要... 工程教育认证是高等工科教育改革发展的核心任务之一,翻转课堂坚持自主式、个性化和多样化的教育模式,符合工程教育认证基本理念。《食品安全学》作为高校食品科学与工程专业的核心课程,提高其教学质量对本专业认证至关重要。本文主要介绍了工程教育认证要求下的《食品安全学》教学目标,翻转课堂引入该课程教学改革的意义,以及基于课程内容的翻转课堂教学模式构建,以期为新形势下该课程教学改革探索新思路和新途径。 展开更多

关键词 工程教育认证 食品安全学 翻转课堂

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基于创新创业能力培养林业院校食品本科专业课程体系构建 被引量：5

16

作者 王耀松 黄梅桂 +3 位作者 应瑞峰 黄悦 苏二正 段绪果 《轻工科技》 2018年第3期145-146,148,共3页

本文以在当今社会掀起的创新创业高潮为背景,基于创新创业能力培养,对林业院校食品本科专业课程培养体系构建进行较为系统的阐述与逻辑分析,包括林业特色食品本科专业课程体系的必要性,创新创业人才培养时代要求的推动性,教学平台、实... 本文以在当今社会掀起的创新创业高潮为背景,基于创新创业能力培养,对林业院校食品本科专业课程培养体系构建进行较为系统的阐述与逻辑分析,包括林业特色食品本科专业课程体系的必要性,创新创业人才培养时代要求的推动性,教学平台、实践平台的基础支撑性及其中的方法和管理技术。通过对以上体系内容的梳理和逻辑分析,构建食品本科专业课程体系,以期为林业院校创新创业人才培养提供参考。 展开更多

关键词 林业院校 食品专业 创新创业 课程体系 构建

原文传递

高校教师工程化能力现状分析与提升对策 被引量：3

17

作者 黄梅桂 苏二正 +1 位作者 吴彩娥 段绪果 《轻工科技》 2019年第10期196-198,共3页

当前,我国正大力推进工程教育专业认证工作,但很多工科类院校普遍存在"工程型"师资严重不足,教师的工程化能力水平不高的现象。究其原因,一是由于高校现有的高学历人才的培养模式和人才招聘机制偏重研究型,导致高层次"... 当前,我国正大力推进工程教育专业认证工作,但很多工科类院校普遍存在"工程型"师资严重不足,教师的工程化能力水平不高的现象。究其原因,一是由于高校现有的高学历人才的培养模式和人才招聘机制偏重研究型,导致高层次"工程型"人才缺乏,且在入职竞争中不占优势;二是因为高校职称评定和教师能力考核制度不健全,缺乏相应的政策导向和激励机制,导致高校和教师对提高工程实践能力的重视程度不高;三是由于缺乏稳定的实践平台和制度保障,导致教师缺乏工程化能力提升的有效途径,也难以形成长效机制。本文通过对当前高等院校工科专业教师工程实践能力的现状及原因进行全面分析,提出有助于提升教师工程实践能力措施,希望对培养教师工程化能力提供新思路。 展开更多

关键词 工程教育 专业认证 工程化能力提升

原文传递

L-天冬氨酸-α-脱羧酶的重组表达、定点突变及高通量检测方法的建立

18

作者 朱秋雨 段绪果 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期269-278,共10页

将枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因进行了克隆和异源表达,并通过定点突变构建了2个突变体。针对该酶活力检测时存在的检测通量低、周期长和成本高等缺点,旨在建立一种简单高效的酶活力高通量检测方法。采用氯酚红(CPR)指示剂和4-... 将枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因进行了克隆和异源表达,并通过定点突变构建了2个突变体。针对该酶活力检测时存在的检测通量低、周期长和成本高等缺点,旨在建立一种简单高效的酶活力高通量检测方法。采用氯酚红(CPR)指示剂和4-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液体系,并对检测条件进行优化,提高检测的准确性和灵敏性,建立了基于比色法的微孔板高通量检测方法,然后以L-天冬氨酸-α-脱羧酶及其突变体作为模型酶,对高通量检测方法进行了验证。优化后的酶活检测条件为MES缓冲液2 mmol/L,CPR指示剂75 μmol/L,L-天冬氨酸75 mmol/L,pH 6.5,温度37℃,反应时间10 min,检测波长为567 nm。采用3种模型酶对微孔板高通量检测方法进行了验证,结果显示该方法与HPLC法测得的结果一致。高通量检测方法具有操作简便易行、灵敏度高等优点,能够用于L-天冬氨酸-α-脱羧酶的快速检测。该方法的建立将为L-天冬氨酸-α-脱羧酶进行定向进化及突变体的高通量筛选奠定基础。 展开更多

关键词 L-天冬氨酸-α-脱羧酶 定点突变 指示剂 微孔板法 高通量检测

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微生物GH13家族淀粉脱支酶研究进展 被引量：10

19

作者 段绪果 吴敬 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期648-656,共9页

普鲁兰酶和异淀粉酶都具有典型的(β/α)8桶状结构,属于GH13家族淀粉脱支酶。GH13家族的淀粉脱支酶能够专一、高效地水解淀粉分支部位的α-1,6-糖苷键,可以有效提高淀粉原料利用率和生产效率,在淀粉加工工业中具有重要的应用价值,因此... 普鲁兰酶和异淀粉酶都具有典型的(β/α)8桶状结构,属于GH13家族淀粉脱支酶。GH13家族的淀粉脱支酶能够专一、高效地水解淀粉分支部位的α-1,6-糖苷键,可以有效提高淀粉原料利用率和生产效率,在淀粉加工工业中具有重要的应用价值,因此近年来对GH13家族淀粉脱支酶的研究逐渐增多。本文系统地综述了微生物来源的GH13家族淀粉脱支酶的国内外研究进展,分别对普鲁兰酶和异淀粉酶的底物特异性及结构基础、研究现状以及应用和研究新趋势进行了阐述。并对GH13家族淀粉脱支酶研究中存在的问题和下一步开发方向提出了见解。 展开更多

关键词 淀粉脱支酶 普鲁兰酶 异淀粉酶 GH13家族

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产β-半乳糖苷酶重组毕赤酵母的发酵条件优化 被引量：4

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作者 段绪果 孙晓军 吴敬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1288-1293,共6页

β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23),又名乳糖酶,是利用乳糖为底物制备低聚半乳糖的关键用酶。利用本研究室前期构建的产β-半乳糖苷酶F441Y重组毕赤酵母为菌种,在摇瓶和3 L发酵罐中对发酵条件进行了优化。优化后的的摇瓶发酵条件为:种龄为22 h... β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23),又名乳糖酶,是利用乳糖为底物制备低聚半乳糖的关键用酶。利用本研究室前期构建的产β-半乳糖苷酶F441Y重组毕赤酵母为菌种,在摇瓶和3 L发酵罐中对发酵条件进行了优化。优化后的的摇瓶发酵条件为:种龄为22 h,初始甲醇浓度为40 g/L,诱导温度26℃,每24 h添加10 g/L甲醇。该条件下诱导表达周期120 h,酶活可达到44.6 U/m L。在摇瓶发酵的基础上,在3 L罐优化了初始诱导菌体浓度。结果显示,当初始诱导菌体浓度(OD600)为200时,发酵液的β-半乳糖苷酶的活力为204.9 U/m L,约为摇瓶酶活水平的4.6倍。 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶 毕赤酵母 发酵条件优化 高密度发酵

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