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西多福韦促进2型重组腺相关病毒体外转导分析
1
作者 肖桂清 刁勇 +2 位作者 黄晓平 段训威 白如玉 《泉州师范学院学报》 2023年第2期35-40,共6页
为研究小分子药物西多福韦(CDV)对2型重组腺相关病毒(rAAV2)体外转导效率的影响,采用不同剂量CDV干预rAAV2-GFP和rAAV2-LacZ载体转导Hela细胞,从转基因表达量、阳性细胞数量、胞内病毒基因组数等方面研究CDV对rAAV2转导的影响.结果表明,... 为研究小分子药物西多福韦(CDV)对2型重组腺相关病毒(rAAV2)体外转导效率的影响,采用不同剂量CDV干预rAAV2-GFP和rAAV2-LacZ载体转导Hela细胞,从转基因表达量、阳性细胞数量、胞内病毒基因组数等方面研究CDV对rAAV2转导的影响.结果表明,CDV能促进rAAV2体外转导Hela细胞,转基因表达量、阳性细胞数、胞内病毒基因组数与对照组相比,差异具有统计学意义,且其促进作用呈现一定的剂量和时间依赖性. 展开更多
关键词 2型重组腺相关病毒 西多福韦 转导效率 增效剂
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酶解条浒苔蛋白制备抗肺癌活性多肽 被引量：3
2
作者 段训威 肖桂清 +3 位作者 王礼兴 吴文林 戴聪杰 董乐 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期246-252,共7页
为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用木瓜蛋白酶酶解条浒苔蛋白,最佳酶解条件为:料液比1∶25、加酶量1250U/gpro、温度45.7℃、pH7.2、震荡酶解时间120min。在该条件下的酶解多肽经超滤分离获得不同分子量区间的多肽,并... 为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用木瓜蛋白酶酶解条浒苔蛋白,最佳酶解条件为:料液比1∶25、加酶量1250U/gpro、温度45.7℃、pH7.2、震荡酶解时间120min。在该条件下的酶解多肽经超滤分离获得不同分子量区间的多肽,并通过HUVEC、A549、H446、H460等细胞水平初步评价酶解条浒苔制备多肽抗肺癌的细胞生物学效果。结果表明,经上述条件获得的2-6kD条浒苔多肽处理的HUVEC在抗氧化和小管形成等方面均受到抑制,其处理的NCI-H460、NCI-H446和A549的增殖、细胞周期、迁移也受到不同程度抑制,且能够促进细胞凋亡;2-6kD浒苔多肽对H446、H460作用效果显著优于对A549的作用。这一细胞水平研究,不仅证实了酶解条浒苔获取新型天然抗肿瘤小肽的可行性,也为条浒苔蛋白质资源高值化利用探索提供了新的途径。 展开更多
关键词 条浒苔 酶解 多肽 肺癌
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响应面优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞的工艺 被引量：1
3
作者 段训威 肖桂清 +4 位作者 赵艳兰 王礼兴 郑晨娜 董乐 吴文林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期896-902,共7页
目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿瘤坏死因子... 目的优化多细胞因子联合诱导分离树突状细胞(DC)工艺,提高小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)体外诱导分离效率。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)、脂多糖(LPS)、重组小鼠肿瘤坏死因子α(rmTNF-α)和诱导时间为考察因素,未成熟树突状细胞(imDC)和成熟树突状细胞(mDC)获得量为考察指标,采用Box-Behnken设计试验,响应面法分析并验证试验结果,并结合光学显微镜、电子显微镜、流式细胞术分析BMDC形态、表面标志物等指标。结果响应面优化诱导imDC最佳诱导工艺rmGM-CSF为46 ng/mL、rmIL-4为24 ng/mL,诱导时间为6 d;imDC获取量为(4.58±0.28)×10~6个,相对偏差为4.00%。诱导mDC最佳工艺LPS为1.4μg/m L、rmTNF-α为30 ng/m L,诱导时间为1 d;m DC获取量为(4.21±0.15)×10~6个,相对偏差为3.80%。体外诱导5~7 d,可获得足量的具有典型树突状的DC,流式细胞术检测发现imDC较高表达CD11c(68.62%±2.3%),低表达CD86(37.95%±1.8%);mDC高表达CD11c(82.05%±1.6%)和CD86(90.34%±1.4%)。结论单因素实验与响应面优化联合优化多细胞因子体外快速、高效诱导扩增DC,为进一步研究提供了工具。 展开更多
关键词 未成熟树突状细胞 成熟树突状细胞 BOX-BEHNKEN设计 响应面法
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应用型本科高校细胞生物学实验教学改革
4
作者 段训威 杨槟煌 +3 位作者 柯佳颖 许婉芳 董乐 吴文林 《武夷学院学报》 2021年第9期99-102,共4页
为构建应用型本科院校,提高细胞生物学实验教学水平,以细胞生物学实验课程改革实践为例,探析新建应用型本科高校细胞生物学实验教学存在的问题及改革方法,不断优化教学内容,丰富教学方式与手段,完善教学条件与考核。促进应用型本科高校... 为构建应用型本科院校,提高细胞生物学实验教学水平,以细胞生物学实验课程改革实践为例,探析新建应用型本科高校细胞生物学实验教学存在的问题及改革方法,不断优化教学内容,丰富教学方式与手段,完善教学条件与考核。促进应用型本科高校细胞生物学实验教学示范中心建设,保障研究性教学的实施,提高学生自主学习和独立研究的能力。 展开更多
关键词 细胞生物学 实验教学 教学改革 应用型高校
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高校政府采购领域政务诚信治理对策 被引量：1
5
作者 段训威 《中国政府采购》 2021年第11期36-39,共4页
国务院印发的《关于加强政务诚信建设的指导意见》指出,要加强政府采购领域政务诚信建设,建立政府采购方面的政务诚信责任制。高校采购活动是政府采购活动中的重要一环,高校政府采购领域政务诚信建设是政府政务诚信建设中的重要举措。... 国务院印发的《关于加强政务诚信建设的指导意见》指出,要加强政府采购领域政务诚信建设,建立政府采购方面的政务诚信责任制。高校采购活动是政府采购活动中的重要一环,高校政府采购领域政务诚信建设是政府政务诚信建设中的重要举措。本文针对目前高校政府采购领域政务诚信建设缺失问题,结合高校政府采购特点,提出加强高校政府采购领域政务诚信建设的对策与建议,以期对相关工作人员提供借鉴。 展开更多
关键词 政务诚信 高校采购 政府采购领域 治理对策 对策与建议 责任制 政府采购活动 重要举措
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重组胞红蛋白调控肝星状细胞LX2铁死亡作用的研究
6
作者 段训威 肖桂清 +4 位作者 陈怀宇 张勇 吴文林 高壹 刁勇 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期2237-2244,共8页
胞红蛋白(cytoglobin, Cygb)过表达已被证实能减少细胞外基质沉积促进肝纤维化恢复,但其机制尚未明确。本研究构建表达细胞穿膜肽TAT与Cygb的融合蛋白(TAT-Cygb),探究其调控活化型肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)铁死亡作用... 胞红蛋白(cytoglobin, Cygb)过表达已被证实能减少细胞外基质沉积促进肝纤维化恢复,但其机制尚未明确。本研究构建表达细胞穿膜肽TAT与Cygb的融合蛋白(TAT-Cygb),探究其调控活化型肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)铁死亡作用。体外培养肝星状细胞系LX2,分别给予不同浓度的TAT-Cygb及铁死亡诱导剂(erastin)处理,台盼蓝染色、透射电镜、普鲁士蓝染色、试剂盒检测等考察TAT-Cygb对铁死亡表型包括细胞活力、细胞形态特征、铁离子含量、脂质过氧化产物水平及抗氧化系统指标的影响;同时采用铁死亡抑制剂(ferrostain-1, Fer-1)进行反向验证,给予TAT-Cygb和Fer-1共同处理,试剂盒法测定Fe^(2+)、活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)和还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)的水平,蛋白印迹法检测HSCs活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth actin, α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen I)、纤连蛋白(fibronectin)的表达水平,免疫荧光观察促纤维化关键指标表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、肌间线蛋白(desmin)的表达情况。结果显示, TAT-Cygb能显著降低LX2细胞活力,并触发了细胞铁死亡相关事件,包括促进胞内Fe^(2+)堆积并诱导线粒体形态改变,加剧脂质过氧化产物堆积,降低抗氧化指标水平,与erastin发挥相似的作用;而Fer-1显著削弱了TAT-Cygb诱导的Fe^(2+)、ROS、MDA、4-HNE水平的升高以及NADPH和GSH水平的降低,同时还减轻了TAT-Cygb诱导高表达的α-SMA、collagen I和fibronectin水平,下调了TAT-Cygb对EGFR、desmin的表达抑制作用。这一细胞水平研究表明, TAT-Cygb能诱发活化型HSCs铁死亡事件。本研究揭示了TAT-Cygb抗肝纤维化潜在的作用机制,为深入研究TAT-Cygb通过调控铁死亡途径发挥其生物学功能的分子机制提供实验依据。 展开更多
关键词 胞红蛋白 细胞穿膜肽 铁死亡 肝纤维化 肝星状细胞
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重组人组织激肽释放酶结合蛋白对小鼠溃疡性结肠炎的抗炎作用 被引量：5
7
作者 郑晨娜 段训威 +4 位作者 贾东方 罗彩林 汪宁卿 杨会勇 刁勇 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1077-1082,共6页
本文考察了重组人组织激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,Kal)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型的体内抗炎效果。采用4%葡聚糖酸钠(DSS)建立小鼠UC模型,随机分为模型组与Kal高、中、低剂量治疗组及柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗组,并与正常对照组比... 本文考察了重组人组织激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,Kal)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型的体内抗炎效果。采用4%葡聚糖酸钠(DSS)建立小鼠UC模型,随机分为模型组与Kal高、中、低剂量治疗组及柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗组,并与正常对照组比较。测定6组间小鼠体重、结肠长度及病变组织炎症因子及IL-10和TNF-α水平变化,并进行组织损伤评分。结果显示,与模型组相比,Kal高剂量治疗组和SASP治疗组的组织损伤评分、MPO/MDA/TNF-α水平均显著降低,而小鼠体重、IL-10水平和SOD活性则显著提高,趋近于正常对照组,经过Kal治疗后小鼠溃疡性结肠炎得到了明显的改善,且呈剂量依赖性。因此,本研究揭示了Kal可以改善小鼠溃疡性结肠炎,可能与其参与调控炎性细胞因子IL-10、TNF-α水平及具有一定抗氧化能力有关。 展开更多
关键词 人组织激肽释放酶结合蛋白 溃疡性结肠炎 细胞因子 抗氧化作用 肿瘤坏死因子-α 白介素-10
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腺相关病毒载体介导人组织激肽释放酶结合蛋白的胞内生物活性研究 被引量：1
8
作者 段训威 陈思伊 +3 位作者 王峰 成志云 唐明青 许瑞安 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期993-999,共7页
人组织激肽释放酶结合蛋白(Kallistatin,KAL)是一种分泌型蛋白,其通过与胞外受体结合来调控多条下游信号通路,但尚未有KAL的胞内活性研究以及胞内KAL是否具有与胞外相似生物学活性的报道。通过构建无信号肽的KAL腺相关病毒表达载体(rAAV... 人组织激肽释放酶结合蛋白(Kallistatin,KAL)是一种分泌型蛋白,其通过与胞外受体结合来调控多条下游信号通路,但尚未有KAL的胞内活性研究以及胞内KAL是否具有与胞外相似生物学活性的报道。通过构建无信号肽的KAL腺相关病毒表达载体(rAAV-NSK)来探索KAL蛋白的胞内活性。转染rAAV-NSK后,所有受试细胞均有KAL胞内表达但不分泌,其中HUVEC的增殖、迁移和小管形成均受到抑制;NCI-H460、NCI-H446和A549受到不同程度抑制。这一细胞水平研究,不仅证实了KAL的胞内活性,也暗示着KAL将可能作为一种"平衡因子"参与多靶点调控,也为解释目前有关KAL在PI3K-Akt信号通路的调控矛盾提供了新的思路。 展开更多
关键词 人组织激肽释放酶结合蛋白 抗肿瘤 抗氧化 胞内活性
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铁过载抑制神经细胞Rab8A蛋白表达 被引量：1
9
作者 蒙苗 林晓思 +3 位作者 卢小娟 段训威 王翠芳 吴文林 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1838-1841,共4页
铁广泛存在于脑组织中,适宜浓度的铁为神经细胞呼吸链传递、神经递质生成和髓鞘化所必需。年龄的增长往往伴随着脑内铁沉积的增加,在老年痴呆症（Alzheimer’s disease,AD）患者和帕金森症（Parkinson’s disease,PD）患者的脑中铁含量... 铁广泛存在于脑组织中,适宜浓度的铁为神经细胞呼吸链传递、神经递质生成和髓鞘化所必需。年龄的增长往往伴随着脑内铁沉积的增加,在老年痴呆症（Alzheimer’s disease,AD）患者和帕金森症（Parkinson’s disease,PD）患者的脑中铁含量异常升高,导致氧化应激和内质网胁迫。Rab蛋白参与了细胞内多种膜转运途径,是连接多种膜转运途径的关键分子。Rab8A蛋白是众多Rab蛋白中的一种,参与葡萄糖转运,视紫红质的运输等过程。本研究发现,神经细胞中铁过量时,导致Rab8a的表达减少,其表达变化具有时间和浓度效应,可能是AD和PD的致病机制之一。 展开更多
关键词 铁 神经细胞 Rab8A 表达
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人胎盘底蜕膜间充质干细胞库的初步构建
10
作者 肖桂清 段训威 +4 位作者 唐燕程 郑梦盈 苏爱盟 耿晓波 刁勇 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第6期1257-1264,共8页
该文探讨了建立生物学特性稳定的人胎盘底蜕膜间充质干细胞(DB-MSCs)库的可行性,旨在为组织工程种子细胞提供更多来源。该研究采用组织块贴壁法从10例足月人胎盘底蜕膜组织中获取间充质干细胞,并采用STR检测细胞是否均来源于母体组织。... 该文探讨了建立生物学特性稳定的人胎盘底蜕膜间充质干细胞(DB-MSCs)库的可行性,旨在为组织工程种子细胞提供更多来源。该研究采用组织块贴壁法从10例足月人胎盘底蜕膜组织中获取间充质干细胞,并采用STR检测细胞是否均来源于母体组织。对分离得到的DB-MSCs采用–196 ℃低温冻存,并在一定时间复苏培养,用倒置显微镜观察细胞形态,CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面标志物,特定培养基诱导其成脂、成骨、成软骨分化。结果显示,从底蜕膜组织中分离培养扩增获得数目稳定的DB-MSCs。STR分析证明,所得细胞均来源于母体组织,经冻存并复苏后的DB-MSCs形态和表面标志物保持不变,并可稳定扩增8代以上,倍增时间为(2.04±0.25)天,大多数的细胞处于静止期(G_(0)/G_(1)),复苏后的细胞保持了较强的成脂、成骨和成软骨分化能力,在细胞中未发现细菌、真菌、支原体和内毒素等的污染。该研究初步建立了DB-MSCs库,进一步明确了库存细胞的制备流程及其质量评价体系,可为再生医学修复重建组织工程提供较好的种子细胞。 展开更多
关键词 底蜕膜 间充质干细胞 生物学特性 多向分化 细胞库
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