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蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟中的作用
1
作者 郝永哲 段雪含 +1 位作者 丁骏 戚春建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期783-791,共9页
目的探究蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)作用下对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)成熟过程及其免疫相关功能的调控效应。方法从NCBI的基因表达数据集(GEO)数据库中下载GSE2197数据集,随后通过深入分析该数据集的芯片数据,识别并获... 目的探究蛋白C受体(PROCR)在全葡聚糖颗粒(WGP)作用下对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)成熟过程及其免疫相关功能的调控效应。方法从NCBI的基因表达数据集(GEO)数据库中下载GSE2197数据集,随后通过深入分析该数据集的芯片数据,识别并获得了差异表达基因(DEG)。从免疫学数据库和分析门户网站(IMMPORT)数据库中下载并整理与免疫功能相关的基因,与DEG取交集得到免疫相关的差异基因。通过运用专门的R包等生物信息学算法,成功识别了关键基因并解析了相关的信号通路。实时定量PCR检测BMDC经WGP刺激前后的差异基因。在体外实验中,从小鼠的胫骨和腓骨中抽取骨髓,并利用FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)诱导这些骨髓细胞分化成BMDC。经过诱导后,对这些BMDC进行转染处理,并随后使用WGP进行刺激。为了评估BMDC的免疫表型,利用流式细胞术分析了细胞表面分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅰ/Ⅱ(MHC-Ⅰ/Ⅱ)以及程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的表达情况。此外,为了探究BMDC的免疫调节功能,利用ELISA技术检测了BMDC上清液中细胞因子白细胞介素12p40(IL-12p40)、IL-6、IL-10的分泌含量。在T细胞实验中,我们利用OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠的淋巴结和脾脏,通过磁珠分选试剂盒成功分离出CD8^(+)和CD4^(+)T细胞。随后,我们将这些T细胞与特异性抗原卵清蛋白(OVA)以及之前制备的BMDC进行共培养。最后,利用流式细胞术检测了T细胞的增殖与分化情况,以评估BMDC在抗原特异性T细胞反应中的作用。结果经过分析WGP诱导的与CpG(GSE2197)刺激的BMDC的差异基因,与IMMPORT数据库中的免疫基因取交集,筛选到PROCR基因。数据显示敲低PROCR基因后,经WGP激发的BMDC的表面分子MHC-Ⅰ明显降低,细胞因子IL-10的分泌显著增多;其驱使CD8^(+)T细胞产生γ干扰素(IFN-γ)的能力明显减弱。结论在WGP诱导BMDC成熟的过程中,PROCR对MHC-Ⅰ的表达以及IL-10的分泌具有调控作用,进而调节BMDC诱导CD8^(+)IFN-γ^(+)T细胞增殖与分化的功能。 展开更多
关键词 全葡聚糖颗粒 树突状细胞 免疫功能 PROCR
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树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)在抗肿瘤免疫中的研究进展
2
作者 段雪含 丁骏 戚春建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1039-1043,共5页
树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)受体是真菌细胞壁上β葡聚糖的主要模式识别受体。Dectin-1广泛表达于树突状细胞(DC)、巨噬细胞及中性粒细胞等髓样细胞,在与内、外源性配体结合后,dectin-1能够诱导自身胞内信号传导触发一系列的细... 树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)受体是真菌细胞壁上β葡聚糖的主要模式识别受体。Dectin-1广泛表达于树突状细胞(DC)、巨噬细胞及中性粒细胞等髓样细胞,在与内、外源性配体结合后,dectin-1能够诱导自身胞内信号传导触发一系列的细胞免疫反应,参与机体抗感染及抗肿瘤等过程。Dectin-1与其不同配体之间的相互作用,触发了不同的信号活化途径和细胞功能;与β葡聚糖的识别促进DC的成熟和向T细胞递呈抗原的能力,诱导细胞毒性T淋巴细胞的增殖,激活机体的特异性免疫应答进而发挥抗肿瘤作用。我们主要总结了dectin-1分子的结构、信号通路及其在抗肿瘤免疫中的研究进展。 展开更多
关键词 DECTIN-1 β葡聚糖 抗肿瘤免疫 综述
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β-葡聚糖对不同诱导来源的小鼠骨髓树突状细胞生物学功能的影响
3
作者 段雪含 郝永哲 +1 位作者 丁骏 戚春建 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期225-233,共9页
目的研究在不同诱导条件下β-葡聚糖对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)活化和功能的影响。方法取小鼠胫骨和腓骨的骨髓在体外分别用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L)... 目的研究在不同诱导条件下β-葡聚糖对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)活化和功能的影响。方法取小鼠胫骨和腓骨的骨髓在体外分别用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和IL-4诱导成FL-DCs、GM-DCs, 经全葡聚糖颗粒(whole glucan particles, WGP)刺激后, 流式细胞术分析FL-DCs和GM-DCs表面分子CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α、CD11b的表达;ELISA检测细胞上清液中IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;实时荧光定量PCR检测各细胞因子及趋化因子受体的mRNA水平;OT-Ⅰ、OT-Ⅱ小鼠经磁珠分选试剂盒分选出CD8+、CD4+T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA)与FL-DCs、GM-DCs共培养, 流式细胞术检测T细胞的增殖分化情况。结果经WGP刺激后, FL-DCs和GM-DCs中CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α的表达均显著上调(P<0.05);细胞因子IL-12p40、TNF-α的分泌显著增多(P<0.05), 而IL-6、IL-10含量在FL-DCs、GM-DCs间存在差异;实时荧光定量PCR结果显示, WGP促进GM-DCs中趋化因子受体CXCR5和CCR7的表达(P<0.001和P<0.01), FL-DCs中CCR7的改变更为显著(P<0.000 1);在两种不同的培养方式中, WGP均能促进CD4+T细胞产生更多的IFN-γ和IL-17α(P<0.05)。结论 WGP可诱导BMDCs的成熟, 提高BMDCs对效应T细胞的活化能力, 且可促使不同诱导来源的BMDCs向不同的Th细胞分化。 展开更多
关键词 Β-葡聚糖 树突状细胞 免疫功能
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三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用 被引量：2
4
作者 丁骏 段雪含 +5 位作者 谢叶文 潘洁 夏蕾 宁永玲 何树燕 戚春建 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期285-293,共9页
目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derive... 目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激发后, 荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs, pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后, 流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达, ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8^(+)和CD4^(+)T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA), 与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8^(+)或CD4^(+)T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF), 将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs, 经LPS激发后, 流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。结果经LPS激发后, BMDCs中Trim23表达水平显著下调;过表达Trim23后, 其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降;与T细胞共培养结果显示, 过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4^(+)T细胞增殖分化以及诱导CD8^(+)T细胞增殖的能力;Western blot结果显示, 过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较, RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。结论过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能, 其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域, 本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细胞疫苗的免疫应答效应提供实验参考。 展开更多
关键词 树突状细胞 Trim23 功能域 免疫功能
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