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基于PiggyBac转座系统的低溢漏诱导型Tet-On过表达体系的建立及应用
1
作者
张柏权
李中瀚
殷旖珂
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期165-172,共8页
为避免诱导基因稳定表达的Tet-On诱导表达系统溢漏表达,实现简便且高效的外源基因稳定诱导表达,本研究拟在Tet-On调控的转录水平基础上,将基于稳定配体Shield-1的不稳定结构域FK506结合蛋白引入目的基因的N端,从蛋白水平控制其本底表达...
为避免诱导基因稳定表达的Tet-On诱导表达系统溢漏表达,实现简便且高效的外源基因稳定诱导表达,本研究拟在Tet-On调控的转录水平基础上,将基于稳定配体Shield-1的不稳定结构域FK506结合蛋白引入目的基因的N端,从蛋白水平控制其本底表达水平.为验证该系统的效果,本研究以荧光蛋白TdTomato为报告基因,经流式分析结果证明优化后的体系较原体系的溢漏表达在蛋白水平上降低7倍左右.将该系统应用于基于小鼠胚胎干细胞的体外牙向分化模型,在诱导因子Dox和稳定配体Shield-1的协同作用下,诱导表达牙齿发育相关转录因子Hand2提高了牙向分化诱导的完成度.
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关键词
PiggyBac转座系统
Tet-on诱导型过表达系统
溢漏表达
不稳定结构域
稳定配体Shield-1
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职称材料
基于CRISPR/Cpf1系统下的诱导型多基因激活体系的建立
2
作者
黄秋月
李中瀚
殷旖珂
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期160-164,共5页
为开发高效率的内源多基因激活工具,利用CRISPR/Cpf1系统能够促使pre-crRNA中多个crRNA自我剪切和释放的特性,将As/Fn/LbCpf1的核酸酶区域定点突变形成dCpf1,并在C端和N端分别引入了VPR三元转录激活域和不稳定结构域(DD-domain)、四环...
为开发高效率的内源多基因激活工具,利用CRISPR/Cpf1系统能够促使pre-crRNA中多个crRNA自我剪切和释放的特性,将As/Fn/LbCpf1的核酸酶区域定点突变形成dCpf1,并在C端和N端分别引入了VPR三元转录激活域和不稳定结构域(DD-domain)、四环素控制的操纵子,构建了TRE3G-DD-dCpf1-VPR激活系统.结果显示,Oct4基因的转录水平提升高达104倍,且Myod1、Oct4基因的转录水平分别在Dox和TMP单药的控制下,能够实现不同程度的转录水平的提升,在加双药的条件下Myod1、Oct4基因可分别提高80、120多倍.证明该系统能够通过靶向DNA快捷、高效的进行诱导内源性多基因激活.
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关键词
CRISPR/Cpf1系统
诱导性
多基因激活
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职称材料
题名
基于PiggyBac转座系统的低溢漏诱导型Tet-On过表达体系的建立及应用
1
作者
张柏权
李中瀚
殷旖珂
机构
四川大学生命科学学院
出处
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期165-172,共8页
基金
国家自然科学基金青年基金(31900900)。
文摘
为避免诱导基因稳定表达的Tet-On诱导表达系统溢漏表达,实现简便且高效的外源基因稳定诱导表达,本研究拟在Tet-On调控的转录水平基础上,将基于稳定配体Shield-1的不稳定结构域FK506结合蛋白引入目的基因的N端,从蛋白水平控制其本底表达水平.为验证该系统的效果,本研究以荧光蛋白TdTomato为报告基因,经流式分析结果证明优化后的体系较原体系的溢漏表达在蛋白水平上降低7倍左右.将该系统应用于基于小鼠胚胎干细胞的体外牙向分化模型,在诱导因子Dox和稳定配体Shield-1的协同作用下,诱导表达牙齿发育相关转录因子Hand2提高了牙向分化诱导的完成度.
关键词
PiggyBac转座系统
Tet-on诱导型过表达系统
溢漏表达
不稳定结构域
稳定配体Shield-1
Keywords
PiggyBac transposition system
Tet-On inducible overexpression system
Leakage expression
Destabilizing domain
Stable ligand Shield-1
分类号
Q28 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cpf1系统下的诱导型多基因激活体系的建立
2
作者
黄秋月
李中瀚
殷旖珂
机构
四川大学生命科学学院
出处
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期160-164,共5页
基金
四川大学专职博士后项目(2018SCU12053)。
文摘
为开发高效率的内源多基因激活工具,利用CRISPR/Cpf1系统能够促使pre-crRNA中多个crRNA自我剪切和释放的特性,将As/Fn/LbCpf1的核酸酶区域定点突变形成dCpf1,并在C端和N端分别引入了VPR三元转录激活域和不稳定结构域(DD-domain)、四环素控制的操纵子,构建了TRE3G-DD-dCpf1-VPR激活系统.结果显示,Oct4基因的转录水平提升高达104倍,且Myod1、Oct4基因的转录水平分别在Dox和TMP单药的控制下,能够实现不同程度的转录水平的提升,在加双药的条件下Myod1、Oct4基因可分别提高80、120多倍.证明该系统能够通过靶向DNA快捷、高效的进行诱导内源性多基因激活.
关键词
CRISPR/Cpf1系统
诱导性
多基因激活
Keywords
CRISPR/Cpf1 system
Inducible
Multi-activation
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于PiggyBac转座系统的低溢漏诱导型Tet-On过表达体系的建立及应用
张柏权
李中瀚
殷旖珂
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
基于CRISPR/Cpf1系统下的诱导型多基因激活体系的建立
黄秋月
李中瀚
殷旖珂
《四川大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
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