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DNA甲基化修饰对金钱鱼卵巢Cyp17a1表达水平的影响
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作者 周一帆 江政霆 +5 位作者 李雨 焦开智 潘书慧 许芮 李广丽 江东能 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期46-53,共8页
【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,... 【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,用MethPrimer软件分析其Cyp17a1基因CpG二核苷酸位点分布特征,并预测CpG岛;采用亚硫酸氢盐测序法检测不同发育时期卵巢以及投喂雌二醇个体卵巢中的Cyp17a1的DNA甲基化修饰水平,并用实时荧光定量PCR分析Cyp17a1基因表达水平。【结果】金钱鱼Cyp17a1翻译起始位点2000 bp后无CpG岛,取第1外显子含有5个CpG位点(翻译起始位点后106、116、129、148和203 bp处)的区域用于DNA甲基化水平检测。金钱鱼III期卵巢Cyp17a1外显子1的DNA甲基化修饰水平显著高于IV期卵巢(P<0.05),与其mRNA表达水平呈负相关。116、129和203 bp处DNA甲基化存在发育时期差异,但106和148 bp处差异不显著(P>0.05)。投喂雌二醇后,金钱鱼卵巢Cyp17a1 mRNA表达水平和第1外显子CpG富集区域整体DNA甲基化修饰水平无显著变化(P>0.05),但雌激素处理雌鱼翻译起始位点后148、203 bp处甲基化水平明显上升(P<0.05)。【结论】金钱鱼卵巢Cyp17a1第一个外显子CpG富集区的整体甲基化水平与基因表达呈负相关,饲料E2可上调Cyp17a1第一个外显子148、205 bp处甲基化水平,表明甲基化修饰参与金钱鱼Cyp17a1的表达调控。 展开更多
关键词 金钱鱼 Cyp17a1 基因表达 亚硫酸氢盐测序法 DNA甲基化
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金钱鱼毒腺基因NeoVTX的基因序列和表达 被引量:1
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作者 曾珍 卢嘉仪 +4 位作者 江东能 李广丽 樊森 黄远青 施钢 《海南热带海洋学院学报》 2023年第5期8-14,共7页
为了解金钱鱼毒液成分,从其基因组中分离了NeoVTX⁃α和NeoVTX⁃β基因序列,进行生物信息学分析,并研究它们在毒腺及其他组织的表达特征。结果表明,金钱鱼NeoVTX⁃α和NeoVTX⁃β的开放阅读框ORF全长分别为1581 bp和2106 bp,分别编码526和70... 为了解金钱鱼毒液成分,从其基因组中分离了NeoVTX⁃α和NeoVTX⁃β基因序列,进行生物信息学分析,并研究它们在毒腺及其他组织的表达特征。结果表明,金钱鱼NeoVTX⁃α和NeoVTX⁃β的开放阅读框ORF全长分别为1581 bp和2106 bp,分别编码526和701个氨基酸。同源性和系统进化分析发现,金钱鱼NeoVTX⁃α与鲉形目的荫平鲉、尖头拟鲉、玫瑰毒鲉、粗毒鲉等鱼类同属一支且同源性较高(67.3%~73.5%)。金钱鱼NeoVTX(α和β亚基)三维结构与粗毒鲉的SNTX(α和β亚基)毒素的三维结构比较相似。qPCR和转录组数据表明,金钱鱼NeoVTX⁃α和NeoVTX⁃β在毒腺组织中高表达,其他组织低表达或不表达。研究表明,NeoVTX可能是金钱鱼中一种与鲉形目毒素相类似的毒素。 展开更多
关键词 金钱鱼 毒腺 NeoVTX 组织表达
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来曲唑对豹纹鳃棘鲈提前性反转的诱导效果
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作者 赵灿 蒋谋炎 +3 位作者 江东能 张俊鹏 侯贤坤 朱春华 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期19-25,共7页
【目的】探究来曲唑诱导豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)发生性反转的效果及性反转后性别相关基因的表达变化。【方法】取性腺已分化为II期卵巢的1龄豹纹鳃棘鲈,投喂含200 mg/kg来曲唑的饲料,分别在处理后45、90及120 d通过石蜡切片... 【目的】探究来曲唑诱导豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)发生性反转的效果及性反转后性别相关基因的表达变化。【方法】取性腺已分化为II期卵巢的1龄豹纹鳃棘鲈,投喂含200 mg/kg来曲唑的饲料,分别在处理后45、90及120 d通过石蜡切片、HE染色检查性腺发育情况,统计生长指标及性反转比例,采用ELISA及实时定量PCR方法检测来曲唑处理120 d后对照组及处理组血清中11-酮基睾酮(11-Ketotestosterone,11-KT)含量和性腺中性别相关基因的相对表达量。【结果】来曲唑处理45 d时体长显著增长,处理90 d时体质量显著增长。90 d后的样本开始出现含少量精子细胞的间性性腺(55.56%),120 d时33.33%的实验鱼性腺发生性反转,出现大量精母细胞、精子细胞及精子及少量退化的卵母细胞。与对照组相比,处理后120 d性反转个体中血清中11-KT的浓度显著上升,性腺中dmrt1、cyp11b2及gsdf的表达显著高于对照组,cyp19a1a和foxl2的表达显著低于对照组。【结论】来曲唑可通过降低体内雌激素水平诱导性腺已分化为II期卵巢的豹纹鳃棘鲈性腺提前性反转为精巢。 展开更多
关键词 豹纹鳃棘鲈 性反转 人工诱导 来曲唑 芳香化酶抑制剂
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17β-雌二醇注射雌性金钱鱼下丘脑转录组分析 被引量:4
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作者 石红娟 茹笑影 +5 位作者 刘玉琪 郑芸 伍旭辉 黄洋 李广丽 江东能 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2021年第2期76-85,共10页
【目的】通过转录组测序分析雌激素(17β-Estradiol,E_(2))对雌性金钱鱼下丘脑中基因表达的影响。【方法】E_(2)体注射后进行雌性金钱鱼下丘脑转录组测序,基因功能注释,差异基因筛选、鉴定,GO(Gene Ontology annotation)和KEGG(Kyoto En... 【目的】通过转录组测序分析雌激素(17β-Estradiol,E_(2))对雌性金钱鱼下丘脑中基因表达的影响。【方法】E_(2)体注射后进行雌性金钱鱼下丘脑转录组测序,基因功能注释,差异基因筛选、鉴定,GO(Gene Ontology annotation)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路富集分析,并利用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测E_(2)体注射后雌性金钱鱼下丘脑中相关基因的表达。【结果】雌性金钱鱼下丘脑转录组测序共测得Clean reads为190909756,注释到17687个基因,筛选和鉴定了22个差异表达基因,包括prl、erf3α、pgr和cyp19a1b等11个表达上调基因和chsy1、muc17l、prf1和hla-α等11个下调基因。通过KEGG功能富集分析发现差异基因涉及13个代谢通路。转录组和qPCR结果显示,与对照雌鱼相比,E_(2)注射组雌鱼下丘脑中prl、pgr、cyp19a1b和3β-HSDI的表达显著上调,而生长轴相关基因ghrh、sst1、sst3、sst5和sst6的表达未受影响。【结论】E_(2)通过反馈作用调节下丘脑中部分性类固醇激素合成通路相关基因的表达,但不影响生长相关基因的表达。 展开更多
关键词 金钱鱼 下丘脑 17Β-雌二醇 转录组分析
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金钱鱼Dmrt4基因的克隆及表达分析 被引量:6
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作者 江东能 彭友幸 +6 位作者 奥马尔.法鲁克.穆斯塔法 古皓天 邓思平 陈华谱 朱春华 吴天利 李广丽 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第1期7-13,共7页
【目的】研究金钱鱼(Scatophagus argus)Dmrt4(Doublesex and Mab-3 related transcription factors 4)基因在性腺和胚胎发育中的表达。【方法】克隆金钱鱼Dmrt4,采用逆转录PCR检测Dmrt4的组织表达,用实时荧光定量PCR检测Dmrt4在性腺和... 【目的】研究金钱鱼(Scatophagus argus)Dmrt4(Doublesex and Mab-3 related transcription factors 4)基因在性腺和胚胎发育中的表达。【方法】克隆金钱鱼Dmrt4,采用逆转录PCR检测Dmrt4的组织表达,用实时荧光定量PCR检测Dmrt4在性腺和胚胎发育过程中的表达。【结果与结论】金钱鱼Dmrt4的开放阅读框(ORF)全长1 260 bp,编码蛋白全序列为419个氨基酸。金钱鱼Dmrt4氨基酸序列含有DM和DMA结构域。金钱鱼Dmrt4与欧洲海鲈(Dicentrarchus labrax)和大黄鱼(Larimichthys crocea)的同源性最高,为87.6%;与非洲爪蟾(Xenopus laevis)的同源性最低,为47.1%。金钱鱼Dmrt4与其他鲈形目鱼类在系统进化树上聚为一支。金钱鱼Dmrt4在精巢、卵巢和鳃中高表达,在Ⅲ和Ⅳ期精巢中的表达显著高于V期精巢和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期卵巢。胚胎发育过程中Dmrt4均有表达,原肠胚的表达水平最高。 展开更多
关键词 金钱鱼 Dmrt4 基因克隆 组织表达 性腺 胚胎发育
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高校课程小班化教学的SWOT分析及应对策略 被引量:9
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作者 吴天利 邓思平 +1 位作者 江东能 李广丽 《大学教育》 2020年第1期12-14,21,共4页
小班化教学是在控制一定人数的基础上实施的一种教学新模式。目前,国内高校已出现少量小班化教学的尝试,但这在全国远未普及。小班化教学模式具有互动性强、参与度高、教学效果好等优势,但对教学条件、师资力量、教师能力的要求也较高... 小班化教学是在控制一定人数的基础上实施的一种教学新模式。目前,国内高校已出现少量小班化教学的尝试,但这在全国远未普及。小班化教学模式具有互动性强、参与度高、教学效果好等优势,但对教学条件、师资力量、教师能力的要求也较高。近年来,国家加大了对高校教学改革的支持力度,教育政策对小班化教学的探索提供了强力支撑,但实施起来也面临资金不足、配套的评价体系和激励机制不完善、教学理念滞后等问题。在全国高校普及小班化教学尚需时日,高校仍需在观念革新、制度完善、资金筹措等方面加大力度,并激励教师对小班化教学进行有益探索。 展开更多
关键词 小班化教学 高校 SWOT分析 策略
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依托科研项目培养普通农科大学生创新能力的实践与探索 被引量:4
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作者 江东能 邓思平 +4 位作者 陈华谱 吴天利 田昌绪 朱春华 李广丽 《教育教学论坛》 2019年第3期162-165,共4页
我校开展了依托科研项目培养农科大学生创新能力的实践,取得了一些成绩。但是一些问题也凸现出来,比如学生在参与科研项目上的时间分配不合理,指导教师在创新能力培养上面临新挑战。本文从具体的原因着手,并提出相应的完善依托科研项目... 我校开展了依托科研项目培养农科大学生创新能力的实践,取得了一些成绩。但是一些问题也凸现出来,比如学生在参与科研项目上的时间分配不合理,指导教师在创新能力培养上面临新挑战。本文从具体的原因着手,并提出相应的完善依托科研项目培养农科大学生创新能力的对策,可为普通农科院校大学生创新能力的培养提供有益的参考。 展开更多
关键词 农科大学生 科研 创新能力
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依托科研项目培养农科大学生创新能力的途径与应用 被引量:2
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作者 邓思平 陈华谱 +4 位作者 吴天利 江东能 朱春华 申玉春 李广丽 《教育教学论坛》 2017年第51期108-109,共2页
目前农科大学生人才培养模式存在缺乏实践训练和创造性,学生在知识和能力上存在严重缺陷,缺乏创新性,造成教育供给与社会需求的不相适应等问题。本文分析了农科大学生创新能力培养过程中存在的问题,阐述了依托科研,提高农科大学生创新... 目前农科大学生人才培养模式存在缺乏实践训练和创造性,学生在知识和能力上存在严重缺陷,缺乏创新性,造成教育供给与社会需求的不相适应等问题。本文分析了农科大学生创新能力培养过程中存在的问题,阐述了依托科研,提高农科大学生创新能力的对策和途径,为提高农科学生的创新能力的培养提供了有益的参考。 展开更多
关键词 科研项目 农科大学生 创新能力
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金钱鱼生物学及繁养殖技术研究进展 被引量:11
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作者 杨尉 陈华谱 +4 位作者 江东能 邓思平 吴天利 朱春华 李广丽 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期104-108,共5页
金钱鱼(Scatophagus argus)是广泛分布于印度-太平洋地区的广盐性鱼类,其营养丰富、肉质鲜美,具有食用与观赏双重经济价值,且食性广、养殖成本低,是我国东南沿海及东南亚、南亚国家的重要养殖经济鱼类,苗种需求逐年增加。总结近年来国... 金钱鱼(Scatophagus argus)是广泛分布于印度-太平洋地区的广盐性鱼类,其营养丰富、肉质鲜美,具有食用与观赏双重经济价值,且食性广、养殖成本低,是我国东南沿海及东南亚、南亚国家的重要养殖经济鱼类,苗种需求逐年增加。总结近年来国内外金钱鱼在基础生物学、繁殖生物学、分子遗传学、人工繁养殖技术等方面的研究成果,并结合发展前景提出了未来的研究方向,以期为金钱鱼种质资源开发及产业发展提供有益参考。 展开更多
关键词 金钱鱼 生物学 遗传 繁殖 养殖技术
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金钱鱼IGF-1和IGF-2的克隆及其在胚胎发育过程的表达 被引量:13
10
作者 张克伟 陈华谱 +4 位作者 江东能 邓思平 朱春华 吴天利 李广丽 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第2期7-14,共8页
【目的】克隆金钱鱼IGF-1和IGF-2基因,研究二基因在金钱鱼胚胎发育过程中的表达。【方法】采用实时荧光定量PCR,以不同发育时间点的金钱鱼(Scatophagus argus)胚胎为实验材料,分析IGF-1和IGF-2基因在鱼类胚胎发育过程中的表达图式。【... 【目的】克隆金钱鱼IGF-1和IGF-2基因,研究二基因在金钱鱼胚胎发育过程中的表达。【方法】采用实时荧光定量PCR,以不同发育时间点的金钱鱼(Scatophagus argus)胚胎为实验材料,分析IGF-1和IGF-2基因在鱼类胚胎发育过程中的表达图式。【结果】金钱鱼IGF-1和IGF-2的蛋白全序列分别为186和215个氨基酸。序列分析表明,IGF-1和IGF-2均有胰岛素样生长因子蛋白典型结构,含有N端信号肽、B、C、A、D和E结构域,且有6个保守的半胱氨酸,与其他鲈形目鱼类花鲈的IGF-1和IGF-2相似性较高(95%和91%)。IGF-1从受精卵到出膜的胚胎发育过程中表达量逐渐上调;IGF-2在受精后至囊胚期表达量极低,而在原肠胚期和神经胚期表达量显著上调至最高水平,在神经胚期后表达量显著降低并维持稳定。【结论】IGF-1和IGF-2序列保守性低,与鲈形目同源性高,在金钱鱼胚胎发育过程中起不同调控作用。 展开更多
关键词 金钱鱼 IGF-1 IGF-2 基因克隆 胚胎发育
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金钱鱼Amhr2基因的克隆及表达分析 被引量:6
11
作者 王妹 邓思平 +4 位作者 陈华谱 朱春华 吴天利 李广丽 江东能 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第3期17-24,共8页
【目的】Amh(anti-Müllerian hormone)与其特异的Ⅱ型受体Amhr2共同参与脊椎动物性腺发育过程,本研究旨在了解金钱鱼Amhr2在性腺发育中的作用。【方法】克隆金钱鱼(Scatophagus argus)Amhr2,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR分别检... 【目的】Amh(anti-Müllerian hormone)与其特异的Ⅱ型受体Amhr2共同参与脊椎动物性腺发育过程,本研究旨在了解金钱鱼Amhr2在性腺发育中的作用。【方法】克隆金钱鱼(Scatophagus argus)Amhr2,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR分别检测Amhr2的组织分布及其卵巢发育过程中的表达。【结果】金钱鱼Amhr2的开放阅读框(ORF)全长为1 533 bp,编码510个氨基酸。氨基酸序列分析表明,金钱鱼Amhr2 N端有信号肽、跨膜螺旋区和配体结合结构域。金钱鱼Amhr2与欧洲海鲈(Dicentrarchus labrax)的相似性最高,为73.1%,与人类的相似性最低,为23.2%。金钱鱼与欧洲海鲈和大黄鱼(Larimichthys crocea)亲缘关系最近,与进化地位一致,说明金钱鱼Amhr2与其他物种具有一定保守性。金钱鱼Amhr2主要在性腺表达,且精巢表达高于卵巢。Amhr2在Ⅱ时相卵巢中的表达显著高于ⅡI和IV时相卵巢。【结论】金钱鱼Amhr2序列与鲈形目同源性高,在雌雄性腺均发挥作用。 展开更多
关键词 金钱鱼 Amhr2 基因克隆 基因表达 卵巢发育
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罗非鱼性别控制遗传育种研究进展 被引量:1
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作者 江东能 焦开智 +6 位作者 张峻铭 彭友幸 杨空松 郑德锋 郭向召 石红娟 李广丽 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第2期148-156,共9页
罗非鱼全雄养殖可有效控制繁殖、提高养殖效率,遗传全雄罗非鱼(Genetically male tilapia,GMT)技术是性别控制的高效手段,但GMT技术培育的鱼苗雄性率不稳定。基因组学和基因编辑等技术已广泛应用于罗非鱼研究,极大地促进了罗非鱼性别决... 罗非鱼全雄养殖可有效控制繁殖、提高养殖效率,遗传全雄罗非鱼(Genetically male tilapia,GMT)技术是性别控制的高效手段,但GMT技术培育的鱼苗雄性率不稳定。基因组学和基因编辑等技术已广泛应用于罗非鱼研究,极大地促进了罗非鱼性别决定与分化基础理论研究。分析导致XY个体性别逆转的可能因素,提出将来GMT技术研究的关键问题,探讨现代基因编辑技术在罗非鱼性别控制育种中可能应用。 展开更多
关键词 遗传全雄罗非鱼 性别控制 性别决定 基因编辑
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金钱鱼基因组微卫星分布特征分析及多态性标记开发 被引量:12
13
作者 王耀嵘 杨尉 +5 位作者 任席林 江东能 邓思平 陈华谱 朱春华 李广丽 《广东海洋大学学报》 CAS 2020年第4期7-14,共8页
【目的】研究金钱鱼(Scatophagus argus)全基因组微卫星分布特征,筛选高多态性微卫星(SSR)标记。【方法】利用MISA软件对金钱鱼基因组中微卫星进行筛选并分析分布特征,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳筛选高多态性位点。【结果与结... 【目的】研究金钱鱼(Scatophagus argus)全基因组微卫星分布特征,筛选高多态性微卫星(SSR)标记。【方法】利用MISA软件对金钱鱼基因组中微卫星进行筛选并分析分布特征,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳筛选高多态性位点。【结果与结论】金钱鱼基因组总共挖掘390967个SSR位点,相对丰度为653个/Mb。二碱基重复类型最多(52.64%),微卫星标记整体偏向A+T碱基组合。筛选出23对多态性标记位点,其中7对的等位基因数为4~11,期望杂合度为0.431~0.859,观测杂合度0.417~0.861,多态性含量为0.389~0.830。经Bonferroni校正后,5个位点符合哈德温伯格平衡,且位点间不存在连锁不平衡现象。 展开更多
关键词 金钱鱼 基因组survey测序 微卫星 标记开发
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饥饿及复投喂对金钱鱼肠型脂肪酸结合蛋白基因表达的影响 被引量:4
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作者 刘建业 陈华谱 +5 位作者 江东能 吴天利 田昌绪 李广丽 朱春华 邓思平 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期701-707,共7页
为阐明肠型脂肪酸结合蛋白基因(ifabp)在金钱鱼(Scatophagus argus)脂肪代谢中的作用,从金钱鱼肝脏转录组中得到ifabp的unigene片段,设计特异引物克隆了金钱鱼2种亚型ifabp基因(ssifabp2a和ssifabp2b),并分析了这2种基因在雌、雄鱼中的... 为阐明肠型脂肪酸结合蛋白基因(ifabp)在金钱鱼(Scatophagus argus)脂肪代谢中的作用,从金钱鱼肝脏转录组中得到ifabp的unigene片段,设计特异引物克隆了金钱鱼2种亚型ifabp基因(ssifabp2a和ssifabp2b),并分析了这2种基因在雌、雄鱼中的组织分布以及饥饿及复投喂后肝脏和肠道中的表达变化。聚类结果表明,ssifabp2a与其他硬骨鱼类Ifabp2a、Ifabp或IfabpX1聚为一类,ssifabp2b则与其他鱼类的Ifabp2b或Ifabp-like聚为一类。同源性比较发现,ssifabp2a与其他硬骨鱼类Ifabp2a、Ifabp或IfabpX1的同源性为78.8% 87.9%;ssifabp2b与其他硬骨鱼类Ifabp2b或Ifabp-like的同源性为79.5%—87.9%;ssifabp2a与ssifabp2b的同源性为73.5%。RT-PCR发现:在雄鱼中,ssifabp2a在小肠中表达最强,在肾和肝脏等表达较弱;ssifabp2b也在小肠中表达最强,在肝脏、胃和下丘脑等较弱。在雌鱼中,ssifabp2a在胃中表达最强,在肾、肝脏和下丘脑组织表达较弱,在其他组织中有微弱表达,脑垂体中没有检测到表达。与ssifabp2a表达情况不同,ssifabp2b在下丘脑、卵巢、心脏、肠中表达较强,其他组织中有微弱表达,鳃中没有检测到表达。饥饿及复投喂结果表明:在肠中,饥饿2d后,ssifabp2a表达量显著降低,ssifabp2b无显著性变化;饥饿7d后,ssifabp2a表达量显著下降,但ssifabp2b无显著性变化;在复投喂后,与7d饥饿相比较,ssifabp2a和ssifabp2b的表达量均显著升高。在肝脏中,饥饿2d后,ssifabp2a表达量无显著变化,而ssifabp2b的表达量显著升高;饥饿7d后,ssifabp2a和ssifabp2b的表达量均显著升高;在复投喂后,ssifabp2a和ssifabp2b表达均显著下降,恢复到正常水平。结果表明,饥饿及复投喂对金钱鱼肝脏和肠道中的ssifabp2a和ssifabp2b的表达具有显著影响,表明两者都参与了金钱鱼的脂肪代谢调节。 展开更多
关键词 金钱鱼 肠型脂肪酸结合蛋白 饥饿 复投喂 表达
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金钱鱼cyp17a1基因克隆、组织分布及在卵巢发育中的表达 被引量:8
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作者 翟毅 刘建业 +4 位作者 贾丽英 江东能 陈华谱 李广丽 邓思平 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第5期1-7,共7页
【目的】克隆金钱鱼cyp17a1基因,分析其在组织中的分布、卵巢不同发育时期中的表达变化,为金钱鱼繁殖生物学提供理论依据。【方法】通过金钱鱼转录组文库筛选和RT-PCR进行cyp17a1 c DNA序列扩增;用DNAstar软件比较Cyp17a1同源性,MEGA5.... 【目的】克隆金钱鱼cyp17a1基因,分析其在组织中的分布、卵巢不同发育时期中的表达变化,为金钱鱼繁殖生物学提供理论依据。【方法】通过金钱鱼转录组文库筛选和RT-PCR进行cyp17a1 c DNA序列扩增;用DNAstar软件比较Cyp17a1同源性,MEGA5.0构建系统进化树,RT-PCR检测cyp17a1组织表达,实时定量PCR检测不同卵巢发育时期cyp17a1的表达量。【结果】金钱鱼cyp17a1开放阅读框编码515个氨基酸残基;Cyp17a1氨基酸序列与同属鲈形目鱼类Cyp17a1同源性较高(87.8%~92.7%),与大黄鱼最高(92.7%),与其他目鱼类同源性次之(72.7%~85.0%),与硬骨鱼类Cyp17a2或Cyp17a1-like同源性最低(48.2%~51.7%);所有硬骨鱼类Cyp17a1聚为一支,在Cyp17a1分支中,金钱鱼与鲈形目鱼类聚为一支;cyp17a1在性腺中表达量较高,在精巢中表达最强;在肝、脑和头肾表达较弱;在脾脏、肠、心脏、肌肉和鳃中未检测到表达;卵巢中cyp17a1的表达量随卵巢发育逐渐增加,Ⅳ期卵巢中cyp17a1表达量最高。【结论】cyp17a1在性腺中表达量较高,在金钱鱼卵巢发育过程中有重要作用。 展开更多
关键词 金钱鱼 cyp17a1 基因克隆 组织分布 基因表达 卵巢发育
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金钱鱼Zar1基因克隆及其表达分析 被引量:2
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作者 何飞祥 江东能 +6 位作者 陈华谱 邓思平 吴天利 田昌绪 石红娟 朱春华 李广丽 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第2期1-7,共7页
【目的】分析金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢发育过程重要基因——合子阻滞因子1(Zygote arrest 1,Zar1)组织表达及其在卵子成熟和胚胎发育过程中的表达。【方法】克隆金钱鱼Zar1基因,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测其在各组织的分布情况,... 【目的】分析金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢发育过程重要基因——合子阻滞因子1(Zygote arrest 1,Zar1)组织表达及其在卵子成熟和胚胎发育过程中的表达。【方法】克隆金钱鱼Zar1基因,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测其在各组织的分布情况,实时荧光定量PCR(q PCR)研究Zar1在不同卵巢发育时期和胚胎发育过程中的表达。【结果】金钱鱼Zar1的开放阅读框(ORF)序列全长为1008bp,编码335个氨基酸。序列分析发现,金钱鱼Zar1在蛋白C末端高度保守,具有非典型的PHD基序(Plant homeo domain)和锌指结构域。金钱鱼Zar1同源性分析发现,它与鲈形目物种相似度最高,其中大黄鱼(Larimichthys crocea)相似性最高,为85.1%。系统进化树分析显示,金钱鱼Zar1与大黄鱼亲缘关系最近,与其分类地位一致。组织分布发现,金钱鱼Zar1仅在卵巢中表达。Zar1在II、III和IV期卵巢表达呈现逐渐递增趋势,其中IV期表达水平显著高于II期卵巢。Zar1在胚胎发育早期表达较高,后期较低,其中在四细胞期表达水平最高,之后逐渐降低。【结论】金钱鱼Zar1在卵巢和胚胎期表达,在金钱鱼卵子发生和胚胎发育阶段发挥重要作用。 展开更多
关键词 金钱鱼 Zar1 克隆 卵子发生 胚胎发育
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金钱鱼Dmrt5基因的克隆及表达分析 被引量:4
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作者 古皓天 刘倩晴 +4 位作者 司徒家欣 江东能 陈华谱 吴天利 李广丽 《海南热带海洋学院学报》 2019年第2期9-15,共7页
为了解金钱鱼Dmrt5在性腺中的作用,克隆了金钱鱼Dmrt5,采用逆转录PCR检测了它的组织分布,并采用荧光定量PCR检测了Dmrt5在性腺和胚胎期中的表达模式.实验结果表明,金钱鱼Dmrt5的ORF全长为1347 bp,编码蛋白含448个氨基酸残基.同源性分析... 为了解金钱鱼Dmrt5在性腺中的作用,克隆了金钱鱼Dmrt5,采用逆转录PCR检测了它的组织分布,并采用荧光定量PCR检测了Dmrt5在性腺和胚胎期中的表达模式.实验结果表明,金钱鱼Dmrt5的ORF全长为1347 bp,编码蛋白含448个氨基酸残基.同源性分析发现,金钱鱼Dmrt5与橙线雀的相似性最高为96. 0%,与人的相似性最低为68. 0%.通过系统进化分析可知金钱鱼Dmrt5与鲈形目鱼类Dmrt5为一类,与其进化地位一致.组织分布表明,金钱鱼Dmrt5在下丘脑和脑垂体中高表达.对性腺不同发育时期的表达分析发现,Dmrt5在Ⅲ期和Ⅳ期精巢中的表达显著高于Ⅴ期精巢,而在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢间的表达无显著差异. Dmrt5在胚胎期各阶段都有表达,但差异不显著.金钱鱼Dmrt5可能具有性别调控和神经发生等功能. 展开更多
关键词 金钱鱼 Dmrt5 克隆 组织表达 性腺 胚胎期 神经发生
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饥饿和复投喂对金钱鱼四种igfbp基因表达的影响 被引量:4
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作者 王妹 陈华谱 +4 位作者 江东能 李广丽 朱春华 吴天利 邓思平 《海南热带海洋学院学报》 2017年第5期1-7,共7页
本文通过实时荧光定量PCR检测了igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因在金钱鱼(Scatophagus argus)下丘脑、脑垂体、性腺、鳃、心脏、肾、肝、脾、肠、肌肉组织中的表达量及经过饥饿和复投处理后在肝脏中的表达量差异.结果显示:4种ig... 本文通过实时荧光定量PCR检测了igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因在金钱鱼(Scatophagus argus)下丘脑、脑垂体、性腺、鳃、心脏、肾、肝、脾、肠、肌肉组织中的表达量及经过饥饿和复投处理后在肝脏中的表达量差异.结果显示:4种igfbp在金钱鱼11种组织中均有表达,其中igfbp-1在脑垂体和肝脏中表达量最高,在下丘脑和鳃中次之,在肾脏中最低.igfbp-3在脑垂体和肌肉中表达量最高,而在脾脏、胃、肾脏、肠中相对较低;igfbp-4在下丘脑和心脏中表达量最高,在其他组织中较低;igfbp-5在肠、鳃、脾中表达量最高,在肌肉、下丘脑、心脏、肾脏和肝脏中较低.饥饿2d后,金钱鱼肝脏中igfbp-1和igfbp-3基因的表达量组显著升高,而igfbp-4和igfbp-5基因与对照组相比无显著差异;饥饿7d后,肝脏中igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因的表达量均较对照组显著升高;在饥饿7d后复投,igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5基因表达量均显著降低.结果表明igfbp-1、igfbp-3、igfbp-4、igfbp-5在金钱鱼的摄食调节中起着重要作用. 展开更多
关键词 金钱鱼 类胰岛素生长因子结合蛋白 饥饿 复投喂
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金钱鱼孕激素受体基因的克隆、鉴定与表达研究 被引量:1
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作者 石红娟 黄健旋 +6 位作者 朱晨阳 吴佳钢 何飞祥 江东能 黄洋 朱春华 李广丽 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期23-34,共12页
核受体(Pgr),隶属于核受体超家族,由核受体亚家族3C组成员3基因编码。孕酮通过结合Pgr介导其在脊椎动物繁殖过程中的生理学功能,因此,研究金钱鱼核受体基因(pgr基因)在不同组织及不同发育时期性腺中的表达模式,有助于为金钱鱼的繁殖提... 核受体(Pgr),隶属于核受体超家族,由核受体亚家族3C组成员3基因编码。孕酮通过结合Pgr介导其在脊椎动物繁殖过程中的生理学功能,因此,研究金钱鱼核受体基因(pgr基因)在不同组织及不同发育时期性腺中的表达模式,有助于为金钱鱼的繁殖提供理论依据。笔者克隆金钱鱼的pgr基因,用Megalign软件比较Pgr氨基酸同源性,用MEGA 7.0.4软件构建系统进化树,利用反转录PCR和实时荧光定量PCR分别探究pgr mRNA在金钱鱼各组织和性腺发育过程中的表达。金钱鱼pgr基因的开放阅读框(ORF)的长度为2016 bp,共编码671个氨基酸。氨基酸序列相似性分析发现,它与同属一个分支的鲈形目大黄鱼同源性最高。组织分布结果显示,pgr基因在雌、雄金钱鱼各组织中均有表达,且性腺、垂体中的表达最高。在垂体中,外源雌激素17β-雌二醇(E2)能显著升高pgr基因的表达。此外,随着性腺的发育,pgr基因在性成熟金钱鱼精巢、卵巢中的表达量最高。因此,Pgr对金钱鱼的生殖细胞发育成熟可能十分重要。 展开更多
关键词 金钱鱼 孕酮核受体基因 表达模式 性腺发育
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ERR-dsRNA对罗氏沼虾卵巢中ERR及生殖相关基因表达的影响 被引量:8
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作者 刘金磊 邓思平 +5 位作者 江东能 陈华谱 李广丽 吴天利 田昌绪 朱春华 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第3期8-16,共9页
【目的】研究雌激素相关受体(Estrogen-related receptor,ERR)在雌性罗氏沼虾生殖过程中的功能。【方法】通过注射双链RNA(Double-strandedRNA,dsRNA)干扰罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)ERR的表达,对干扰组和对照组的卵巢样本进... 【目的】研究雌激素相关受体(Estrogen-related receptor,ERR)在雌性罗氏沼虾生殖过程中的功能。【方法】通过注射双链RNA(Double-strandedRNA,dsRNA)干扰罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)ERR的表达,对干扰组和对照组的卵巢样本进行转录组测序,筛选与生殖相关的差异表达基因,并通过qPCR检测它们在卵巢发育过程中的表达。【结果】注射ERR-dsRNA后,卵巢中ERR mRNA和ERR蛋白的表达显著下降。ERR-dsRNA干扰组和对照组卵巢转录组测序获得的差异表达Unigene中,9条被富集到生殖GO条目,3条被富集到生殖过程GO条目,21条被富集到卵母细胞减数分裂Pathway条目。这些生殖相关的Unigene中差异倍数较大的有9条,经qPCR验证,5条在ERR干扰组和对照组间的表达差异有统计学意义。这5条Unigene中有3条在卵巢发育过程中的表达差异有统计学意义,其中2条(CL7112.Contig4_All和Unigene4600_All)与卵母细胞减数分裂有关,1条(CL4888.Contig2_All)与生殖相关激素的合成及释放有关。【结论】ERR可通过调控卵母细胞减数分裂和生殖相关激素的合成与释放调控罗氏沼虾卵巢发育。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 雌激素相关受体(ERR) 生殖 RNA干扰(RNAI) 转录组分析
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