昆虫抗白僵菌免疫应答及其在害虫防治中的应用潜力

1

作者 杨蕾 汪小福 +4 位作者 魏巍 陈笑芸 彭城 徐晓丽 徐俊锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期825-836,共12页

昆虫病原真菌白僵菌能成功侵染多种昆虫寄主并致其死亡,是农业生产中有效的生物杀虫剂。相应地,昆虫依赖多种策略抵御真菌感染,其中先天免疫防御是对抗真菌感染的重要手段。昆虫表皮是抵御真菌入侵的第一道屏障,表皮和外分泌腺可分泌多... 昆虫病原真菌白僵菌能成功侵染多种昆虫寄主并致其死亡,是农业生产中有效的生物杀虫剂。相应地,昆虫依赖多种策略抵御真菌感染,其中先天免疫防御是对抗真菌感染的重要手段。昆虫表皮是抵御真菌入侵的第一道屏障,表皮和外分泌腺可分泌多种抑菌化合物降低真菌毒力,当真菌孢子进入血淋巴后,细胞免疫和体液免疫共同作用产生系统性免疫应答,表达的多种防御效应因子在细胞包囊、细胞凋亡、黑化反应中发挥功能。然而昆虫强烈的免疫反应影响田间施用白僵菌的效果,导致该真菌制剂应用的局限性。文章详细阐述昆虫感染白僵菌后的免疫应答机制,参与抗真菌免疫的基因与作用手段。该研究为了解昆虫抗真菌免疫机制提供了详实的基础,为合理改造白僵菌、有效提高白僵菌毒力水平提供坚实基础,为农业虫害治理提供新的策略。 展开更多

关键词 虫生真菌 表皮免疫 免疫通路 抗真菌免疫应答 害虫防治

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基于重组酶聚合酶扩增技术的牛源性成分快速检测方法

2

作者 王晓雪 纪艺 +5 位作者 余卉茹 徐俊锋 彭城 汪小福 李玥莹 陈笑芸 《生物技术进展》 2024年第2期278-286,共9页

市场中肉类食品掺假的复杂多样化使得监管机构对动物源性成分鉴定的便捷性、准确性、灵敏性要求越来越高。尤其是市场上经济价值较高的牛肉类产品已成为制假的重灾区,迫切需要建立一种快速、高效的牛源性成分分子检测方法。基于此,以牛... 市场中肉类食品掺假的复杂多样化使得监管机构对动物源性成分鉴定的便捷性、准确性、灵敏性要求越来越高。尤其是市场上经济价值较高的牛肉类产品已成为制假的重灾区,迫切需要建立一种快速、高效的牛源性成分分子检测方法。基于此,以牛组成型表达基因β-actin为靶基因设计并筛选了几组牛特异性扩增的引物和探针组合,经过灵敏度检测和特异性验证,建立了一种牛源性成分实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)快速检测方法。通过优化试剂配比,提高了一步法提取牛肉制品DNA的效率,同时将PRA技术与胶体金免疫试纸条显色技术相结合实现了检测的便捷化和结果的可视化。实际应用结果表明,研究建立的牛源性RPA检测方法能够特异性地检测牛源性成分,且最低检测灵敏度可达到14.8个拷贝,通过胶体金免疫试纸条得到的可视化结果的准确性和灵敏度与实时荧光RPA相同。该方法特异性强、灵敏度高,整个过程在25 min内即可完成,极大缩短了检测时间。 展开更多

关键词 牛源性成分 重组酶聚合酶扩增技术 胶体金免疫试纸条

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可剪切多拷贝抗菌肽融合表达载体的构建 被引量：9

3

作者 汪小福 刘仁虎 +2 位作者 陈笑芸 高智谋 陈锦清 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期758-764,共7页

抗菌肽是生物体防御系统产生的一类对外源病菌具有高效杀灭活性的小分子多肽,在植物抗病基因工程中具有重要的应用价值。Thanatin是刺肩蝽(Podisus maculiventris)成虫经诱导产生的一种抗菌肽,由21个氨基酸残基组成,该抗菌肽对革兰阳性... 抗菌肽是生物体防御系统产生的一类对外源病菌具有高效杀灭活性的小分子多肽,在植物抗病基因工程中具有重要的应用价值。Thanatin是刺肩蝽(Podisus maculiventris)成虫经诱导产生的一种抗菌肽,由21个氨基酸残基组成,该抗菌肽对革兰阳性、革兰阴性菌以及真菌都有很强的抗菌活性。为研究该抗菌肽转入油菜对菌核病抗性提高的效果,采用同尾酶反复酶切连接的方法构建了分别含1～5拷贝的Thanatin串联融合表达载体,并导入农杆菌用于油菜的遗传转化。研究采用引物重叠法扩增并克隆了抗菌肽基因,并采用了一种在植物体内可被特异性切割的短肽作为连接肽,使多拷贝融合表达的抗菌肽在植物体内可自动剪切为有功能活性的单个抗菌肽单元,以增加抗菌肽表达丰度和抗菌肽的稳定性。研究还采用了大豆几丁质酶的信号肽作为引导肽引导多拷贝融合表达的抗菌肽分泌到细胞间隙,以增强抗菌肽作用效果。 展开更多

关键词 抗菌肽 THANATIN 串联重复 融合表达 载体构建

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转Cry1Ab基因水稻分子特征及其特异性PCR检测方法 被引量：8

4

作者 汪小福 陈笑芸 +5 位作者 张小明 周育 张焕春 缪青梅 方敬 徐俊锋 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期208-214,共7页

转Cry1Ab基因水稻Bt01为一种新型的转基因水稻,文章首先利用Southern blotting验证了外源基因Cry1Ab转入了Bt01中,且为单拷贝,再利用TAIL-PCR方法获得了其插入位点信息,根据获得的Bt01的5′端插入位点序列,设计了相应的定性与定量PCR检... 转Cry1Ab基因水稻Bt01为一种新型的转基因水稻,文章首先利用Southern blotting验证了外源基因Cry1Ab转入了Bt01中,且为单拷贝,再利用TAIL-PCR方法获得了其插入位点信息,根据获得的Bt01的5′端插入位点序列,设计了相应的定性与定量PCR检测体系的引物及探针,实验结果显示,定性PCR检测体系的最低检测极限(LOD)为10个拷贝,定量PCR检测体系的LOD为5拷贝,最低定量极限(LOQ)为10拷贝。同时为了验证建立的定量PCR体系的准确性,利用该体系检测已知转基因水稻Bt01含量分别为3%和0.5%的样品,定量结果分别为2.7%和0.47%。研究结果表明,该转化体特异性定性与定量检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因水稻Bt01的身份识别和检测提供了有效的方法。 展开更多

关键词 分子特征 转基因 CRY1AB 定性与定量PCR 特异性检测

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抗菌肽Thanatin基因表达载体构建与表达 被引量：3

5

作者 汪小福 刘仁虎 +2 位作者 陈笑芸 高智谋 陈锦清 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期524-526,共3页

根据大肠杆菌的密码子偏好性,人工设计并合成了3条寡核苷酸片段,相邻片断有17个碱基的重叠区,通过PCR扩增得到抗菌肽Thanatin基因,将此基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,然后将重组质粒pGEX-Thanatin转化E.coliBL 21,经IPTG诱导进行... 根据大肠杆菌的密码子偏好性,人工设计并合成了3条寡核苷酸片段,相邻片断有17个碱基的重叠区,通过PCR扩增得到抗菌肽Thanatin基因,将此基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,然后将重组质粒pGEX-Thanatin转化E.coliBL 21,经IPTG诱导进行融合表达。通过SDS-PAGE分析,融合蛋白GST-Thanatin表达成功。 展开更多

关键词 THANATIN 融合蛋白 表达 抗菌肽

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甘蓝型油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究分析 被引量：3

6

作者 汪小福 刘仁虎 +3 位作者 陈笑芸 王伏林 关晶晶 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期276-280,共5页

为了解甘蓝型油菜(Brassica napus)中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的表达和分布情况,文章首先分析了油菜和拟南芥中PEPC基因之间的关系,同时参照拟南芥中4条PEPC基因扩增了针对甘蓝型油菜的探针,Southern blot结果表明,甘蓝型油菜... 为了解甘蓝型油菜(Brassica napus)中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因的表达和分布情况,文章首先分析了油菜和拟南芥中PEPC基因之间的关系,同时参照拟南芥中4条PEPC基因扩增了针对甘蓝型油菜的探针,Southern blot结果表明,甘蓝型油菜中PEPC基因肯定多于4条,而RT-PCR分析了不同时期种子中的PEPC基因的表达情况,表明PEPC基因在种子成熟过程中油脂、储藏蛋白质等贮存物质的积累有一定作用。 展开更多

关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 甘蓝型油菜 拟南芥

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日本转基因产品溯源管理模式 被引量：13

7

作者 汪小福 厉建萌 +2 位作者 陈笑芸 徐俊锋 郑蔚然 《浙江农业科学》 2010年第4期701-704,共4页

介绍日本通过食品卫生法、转基因食品标识法及农林水产省的转基因标识公告初步建立的转基因食品可追溯性管理框架。厚生劳动省负责转基因产品的审批,向公众说明产品经过了安全评估,负责转基因产品的IP管理。农林水产省负责转基因产品标... 介绍日本通过食品卫生法、转基因食品标识法及农林水产省的转基因标识公告初步建立的转基因食品可追溯性管理框架。厚生劳动省负责转基因产品的审批,向公众说明产品经过了安全评估,负责转基因产品的IP管理。农林水产省负责转基因产品标识规范的执行及环境释放审批。日本通过标识分类、标签系统、阈值管理和非转基因产品IP身份管理来实现转基因食品的溯源。 展开更多

关键词 日本 转基因食品 溯源 标签

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牛肉及其制品中掺入鸡肉、鸭肉和猪肉的多重数字PCR快速检测方法研究 被引量：21

8

作者 杨华 汪小福 +2 位作者 肖英平 魏巍 徐俊锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期994-1000,共7页

利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,... 利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,在对9个实际样品的检测中,所在样品的微滴生成数都在10 000以上,满足数字PCR中泊松公式分析的要求,同时9个样品的检测结果与已知信息完全相符。 展开更多

关键词 数字PCR 肉源性成分检测 多重检测 快速检测

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培养基营养条件对棉铃红粉病菌菌丝生长和孢子形成的影响 被引量：9

9

作者 潘月敏 高智谋 +3 位作者 纪文飞 郭敏 代海敏 汪小福 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第B08期68-72,共5页

鉴定了安徽省棉铃红粉病的病原菌为粉红单端孢菌[Trichotheciumroseum(Pers.)Link],研究了不同培养基、碳源、氮源对该菌生长速率及产孢量的影响。结果表明,该菌在马铃薯淀粉培养基上生长最好,产孢量在PDA培养基上最高;该菌在以甘油为... 鉴定了安徽省棉铃红粉病的病原菌为粉红单端孢菌[Trichotheciumroseum(Pers.)Link],研究了不同培养基、碳源、氮源对该菌生长速率及产孢量的影响。结果表明,该菌在马铃薯淀粉培养基上生长最好,产孢量在PDA培养基上最高;该菌在以甘油为碳源的培养基上生长最快,产孢量最高;在以蛋白胨为氮源的培养基上生长最快,产孢量最高。 展开更多

关键词 棉铃红粉病菌 培养基 碳源 氮源 菌丝生长 产孢量

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转基因作物的非预期效应及其检测 被引量：7

10

作者 张焕春 陈笑芸 +3 位作者 汪小福 杨桂玲 徐俊锋 李玥莹 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期125-132,共8页

随着转基因产业的飞速发展,转基因食品的安全性逐步引起人们的广泛关注。外源基因的非预期效应可能引起转基因食品的营养成分发生改变,甚至产生一些新的毒性物质,可能对人类和动物健康以及环境形成潜在的危害,是转基因食品安全性评价的... 随着转基因产业的飞速发展,转基因食品的安全性逐步引起人们的广泛关注。外源基因的非预期效应可能引起转基因食品的营养成分发生改变,甚至产生一些新的毒性物质,可能对人类和动物健康以及环境形成潜在的危害,是转基因食品安全性评价的重要内容之一。由于外源基因的非预期效应具有潜在性,非预见性,因此以"实质等同性"为基础的定向评价方法很难充分考虑到由遗传修饰引起的非预期效应。文章主要阐述了转基因植物整合位点的分布和机制、转基因作物可能产生的非预期效应,以及利用基因芯片技术、蛋白质组定量分析技术、代谢组分析技术分别从mRNA水平、蛋白质水平、代谢水平上比较转基因作物和非转基因作物基因表达的差异,在食品安全评价中会是完善定向方法的补充方案,对转基因食品的安全性评价至关重要。 展开更多

关键词 转基因作物 非预期效应 基因芯片 蛋白质组 代谢组

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不同TAIL-PCR通用引物在转基因大豆、水稻、油菜侧翼序列分离中的应用评价 被引量：5

11

作者 陈笑芸 汪小福 +4 位作者 刘仁虎 张小明 周育 缪青梅 徐俊锋 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期922-928,共7页

为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩... 为研究不同转基因作物T-DNA插入位点侧翼序列分离中所用的通用简并引物对TAIL-PCR的影响,本研究使用5个通用简并引物分别对8个转基因大豆、30个转基因水稻和2个转基因油菜株系进行了TAIL-PCR分析,结果表明,5个简并引物在TAIL-PCR中的扩增效果存在显著差异,同一简并引物在不同转基因物种的扩增效果显著不同。AD1引物在转基因水稻和转基因油菜中扩增效果较好,AD2引物在转基因水稻、油菜和转基因大豆中扩增效果均较好,AD3引物在转基因水稻中扩增出1个株系,在转基因油菜中扩增出1个株系,但AD3引物与pFGC5941 T-DNA RB上游有匹配,不适用于以pFGC5941为载体的转基因材料分析。AD4和AD5 2个引物在3个转基因物种的扩增均较差。对AD1和AD2两个引物的TAIL-PCR扩增产物进行测序,结果表明,扩增产物均对应转基因材料的侧翼序列。研究表明,不同通用引物在不同转基因事件中侧翼序列的分离效果差异较大,通用引物AD1和AD2TAIL-PCR成功率最高。不同通用引物的应用效果不仅与不同物种有关,也与外源基因的插入位点有关,而且还与载体序列匹配程度相关。为提高TAIL-PCR中T-DNA插入位点侧翼序列分离成功率,建议同时采用多个通用引物平行扩增。 展开更多

关键词 TAIL-PCR 简并引物 转基因大豆 转基因水稻 转基因油菜 侧翼序列

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转Cry1Ab水稻纯合体快速准确的PCR鉴定方法 被引量：6

12

作者 张焕春 汪小福 +3 位作者 李玥莹 陈笑芸 缪青梅 徐俊锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期549-554,共6页

转Cry1Ab基因水稻Bt22为一种新型的转基因抗虫水稻,本研究介绍了一种筛选纯合转基因植株Bt22的PCR方法。根据外源序列在Bt22中插入位点的两侧旁邻序列设计引物,建立了转基因抗虫水稻Bt22品系特异的定性PCR检测方法,该方法灵敏度可达0.01... 转Cry1Ab基因水稻Bt22为一种新型的转基因抗虫水稻,本研究介绍了一种筛选纯合转基因植株Bt22的PCR方法。根据外源序列在Bt22中插入位点的两侧旁邻序列设计引物,建立了转基因抗虫水稻Bt22品系特异的定性PCR检测方法,该方法灵敏度可达0.01 ng,在此基础上组合各引物建立了筛选转基因水稻Bt22纯合体的多重PCR方法,结果表明该方法简单高效,便于操作。 展开更多

关键词 转基因水稻 特异性定性PCR 多重PCR 纯合性检测

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液相色谱—串联质谱法(LC-MS/MS)测定固态红曲米(粉)中橘青霉素 被引量：5

13

作者 吉小凤 周育 +4 位作者 徐俊锋 汪小福 齐沛沛 李锐 陈笑芸 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期841-847,共7页

使用液相色谱—串联质谱法,建立了一种萃取溶剂少、操作简单、灵敏性高,适合固态红曲米（粉）中痕量橘青霉素测定的方法。样品经甲醇提取后,以甲醇∶水（含0.1%甲酸和2 mmol·L^-1乙酸铵）体积比为90∶10作流动相在液相色谱柱上进... 使用液相色谱—串联质谱法,建立了一种萃取溶剂少、操作简单、灵敏性高,适合固态红曲米（粉）中痕量橘青霉素测定的方法。样品经甲醇提取后,以甲醇∶水（含0.1%甲酸和2 mmol·L^-1乙酸铵）体积比为90∶10作流动相在液相色谱柱上进行分离,质谱采用电喷雾源（ESI）正离子方式,选择反应监测模式（SRM）下对橘青霉素实现定性和定量分析。橘青霉素的标准品在0.1-100μg·L^-1范围线性良好,y=6 E＋07x＋30800,R^2=0.999,不同浓度添加回收试验所得样品回收率为80.9%-107.3%,方法的精密度（RSD）为2.0%,样品检测限为5μg·kg^-1。同时将该方法应用于12个从不同地域购买的红曲米（粉）产品,其中10个样品受到橘青霉素的污染,污染量为0.14-44.24 mg·kg^-1。 展开更多

关键词 橘青霉素 红曲米(粉) 液相色谱—串联质谱

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转Bt基因水稻种子中Bt蛋白含量测定方法的研究 被引量：1

14

作者 陈笑芸 汪小福 +3 位作者 周育 缪青梅 方敬 徐俊锋 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期121-124,共4页

采用ELISA技术检测转Bt基因水稻中Bt蛋白的含量,判断水稻样品中是否含有转基因成分。利用研磨、酶标、孵育等技术对样品进行前处理。采用阳性质控物浓度等倍稀释方法,建立标准曲线,相关系数为0.997 4。用一系列不同转基因含量的标准基... 采用ELISA技术检测转Bt基因水稻中Bt蛋白的含量,判断水稻样品中是否含有转基因成分。利用研磨、酶标、孵育等技术对样品进行前处理。采用阳性质控物浓度等倍稀释方法,建立标准曲线,相关系数为0.997 4。用一系列不同转基因含量的标准基体材料,分析方法的最低检测限,灵敏度达0.1%。通过对我国进入生产性试验的转Bt基因水稻品系TT51-1和科丰6号的测试,表明该方法与普通PCR方法真实性和灵敏度一致,可以广泛应用于转Bt基因水稻及其粗加工产品的转基因成分检测。为转基因生物安全监管和安全性评价提供技术支撑。 展开更多

关键词 BT蛋白 转基因水稻 快速检测 灵敏度

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转g10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33转化体特异性检测方法的建立 被引量：2

15

作者 缪青梅 赵杨 +3 位作者 徐晓丽 徐俊锋 汪小福 陈笑芸 《生物技术进展》 2020年第6期696-703,共8页

转g 10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33是由浙江大学研发的耐除草剂大豆品系,目前已进入生产性试验阶段。到目前为止尚无文献报道对该转基因新品种的检测方法,因此亟需建立精准的定量检测方法为农业转基因生物安全管理提供技术支持。根... 转g 10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33是由浙江大学研发的耐除草剂大豆品系,目前已进入生产性试验阶段。到目前为止尚无文献报道对该转基因新品种的检测方法,因此亟需建立精准的定量检测方法为农业转基因生物安全管理提供技术支持。根据耐除草剂大豆ZUTS-33品系外源基因插入位点特异序列设计引物和TaqMan探针,利用优化的实时荧光定量PCR检测方法评价该引物对和探针的特异性、准确度、精确度和重复性,并确定此检测方法的检测极限(limit of detection,LOD)和定量极限(limit of quantity,LOQ)。实验结果显示,研究所建立的转基因大豆ZUTS-33转化体特异性实时荧光定量PCR检测方法具有高度的品系鉴定特异性,准确度、精确度均符合要求,重复性较好,且检测方法的LOD达到20拷贝,LOQ达到40拷贝。研究结果为转g 10-epsps基因耐除草剂大豆ZUTS-33的身份识别和检测监测提供了有效的方法。 展开更多

关键词 转基因大豆 g 10-epsps基因 ZUTS-33 实时荧光定量PCR 定量检测

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热加工过程对转基因水稻检测的影响 被引量：1

16

作者 黄赛楠 汪小福 +3 位作者 徐俊锋 陈笑芸 缪青梅 李玥莹 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期213-218,共6页

热加工会导致食品中DNA的降解和破坏,为研究热加工过程对转基因水稻检测的影响,试验采用水煮、高温灭活、高温烘干和微波4种外源模拟热加工的方法处理目前我国3种转基因水稻(KF6,KMD1和TT51-1)。并按照国家标准对相应的参数进行检测,内... 热加工会导致食品中DNA的降解和破坏,为研究热加工过程对转基因水稻检测的影响,试验采用水煮、高温灭活、高温烘干和微波4种外源模拟热加工的方法处理目前我国3种转基因水稻(KF6,KMD1和TT51-1)。并按照国家标准对相应的参数进行检测,内源基因SPS,CaMV35S启动子,NOS终止子和抗虫基因Bt,4种参数的PCR扩增结果显示,热加工过程无论对内源基因和外源插入基因的检测都有影响,表明现行的标准对转基因水稻加工品的检测存在局限,同时我们重新设计了针对抗虫基因Bt的引物用于检测热加工处理的样品,扩增结果优于标准引物。 展开更多

关键词 转基因检测 热加工 转基因水稻

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DNA的不同提取方法对转基因产品定值的影响

17

作者 王鹏飞 蒋滢 +4 位作者 徐俊锋 汪小福 陈笑芸 缪青梅 李玥莹 《沈阳师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第2期273-276,共4页

国内外非常重视转基因产品的检测工作,主要依赖于DNA的PCR方法进行检测,其检测结果可靠、稳定、灵敏度较高。尤其在转基因产品的定值实验中,荧光定量PCR的应用起到重要的作用,但是DNA的质量是保证荧光定量PCR定值准确的关键。实验以100... 国内外非常重视转基因产品的检测工作,主要依赖于DNA的PCR方法进行检测,其检测结果可靠、稳定、灵敏度较高。尤其在转基因产品的定值实验中,荧光定量PCR的应用起到重要的作用,但是DNA的质量是保证荧光定量PCR定值准确的关键。实验以100%的克螟稻为材料,用CTAB法、商品化的Promega、Qiagen以及TIANGEN提取试剂盒,分别提取克螟稻基因组DNA,经过核酸蛋白分析仪初步测定浓度、纯度以及离子浓度后,分别以水稻内源基因PLD和克螟稻特异性转化体引物及探针实施荧光定量PCR实验,以100%克螟稻为盲样实施定值,来确定一种更适合荧光定量PCR定值实验的DNA提取方法,最终确定Qiagen和TIANGEN提取试剂盒满足荧光定量PCR对100%的克螟稻标准物质定值实验的要求。 展开更多

关键词 克螟稻 荧光定量PCR 提取方法

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基于数字PCR的不同品种鸭组织中线粒体与核DNA拷贝数差异研究 被引量：10

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作者 纪艺 徐晓丽 +4 位作者 姜媛媛 汪小福 徐俊锋 李玥莹 陈笑芸 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期86-91,共6页

肉和肉制品是人类生活的重要营养来源,但近年来肉制品中发生的掺假使假事件屡见不鲜,使得肉品的质量安全问题已经成为全世界关注的热点话题。以核酸为目标的动物源鉴定是当前普遍使用的方法。在核酸检测中,常用线粒体基因或核基因作为靶... 肉和肉制品是人类生活的重要营养来源,但近年来肉制品中发生的掺假使假事件屡见不鲜,使得肉品的质量安全问题已经成为全世界关注的热点话题。以核酸为目标的动物源鉴定是当前普遍使用的方法。在核酸检测中,常用线粒体基因或核基因作为靶标,缺乏统一标准。以绍兴鸭和北京鸭等不同品种及生鲜组织(鸭血、鸭胸肉、鸭肝、鸭皮、鸭心和鸭腿肉)为实验材料,提取DNA后利用微滴式数字PCR开展线粒体和核DNA拷贝数的比较研究,以两者拷贝数及其比值的变异系数为判定依据。结果显示,核DNA的拷贝数在不同品种鸭组织间相对稳定,且变异系数小于线粒体DNA,表明核DNA是开展鸭肉制品掺假定量检测的最适DNA来源。鸭腿肉中线粒体/核DNA拷贝数比值的变异系数最小,表明线粒体DNA作为靶基因的鸭肉掺假比例定量检测时,鸭腿肉来源的肉制品是最佳选择。 展开更多

关键词 线粒体DNA 核基因 拷贝数 数字PCR 肉类掺假

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CaMV35S启动子及其在转基因作物中的应用和检测 被引量：9

19

作者 汤婷 谢实龙 +3 位作者 祝旋 徐俊锋 唐俊 汪小福 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期161-170,共10页

花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)是植物基因工程中应用最广泛的启动子之一,它在转基因植物的安全评价及检测研究中具有重要意义。了解CaMV35S启动子的起源及其发展情况,是开展转基因安全评价和检测的前提。文章对CaMV35S启动子的发展... 花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)是植物基因工程中应用最广泛的启动子之一,它在转基因植物的安全评价及检测研究中具有重要意义。了解CaMV35S启动子的起源及其发展情况,是开展转基因安全评价和检测的前提。文章对CaMV35S启动子的发展历史及其结构、功能作了简要描述,分析总结了CaMV35S启动子在转基因作物中的应用情况和目前对其相应的检测方法。针对目前在转基因作物中检测CaMV35S启动子存在的问题,认为今后转基因相关作物的序列信息及检测数据需要交流和共享,同时各个检测机构或实验室之间需要展开数据共享与共同验证,从而建立针对CaMV35S启动子的相对统一的标准检测方法。 展开更多

关键词 CaMV35S启动子 转基因作物 增强子 PCR

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不同植物DNA条形码对铁皮石斛鉴定能力的评价 被引量：7

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作者 陈文强 汪小福 +3 位作者 陈笑芸 彭城 徐俊锋 蔡健 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第22期131-139,共9页

为选择适合准确鉴定铁皮石斛的DNA条形码,以25份铁皮石斛样品和10份其他不同种类石斛为实验材料,利用目前常用的9条植物DNA条形码(ITS2、nad1、matK、ycbL、psbK-psbI、trnL-trnF、trnG-trnS、rbcL和trnH-psbA)对这些石斛材料进行分子... 为选择适合准确鉴定铁皮石斛的DNA条形码,以25份铁皮石斛样品和10份其他不同种类石斛为实验材料,利用目前常用的9条植物DNA条形码(ITS2、nad1、matK、ycbL、psbK-psbI、trnL-trnF、trnG-trnS、rbcL和trnH-psbA)对这些石斛材料进行分子鉴定。结果显示,9条DNA条形码的扩增率和测序成功率均很高,通用性很强。其中,rbcL与trnH-psbA的种内最大遗传距离大于种间最小遗传距离,不符合条形码的基本要求,其余条形码遗传距离均符合种内最大遗传距离小于种间最小遗传距离的要求。种间变异顺序为ITS2>trnL-trnF>trnG-trnS>psbK-psbI>ycf1b>matK>nad1,其中ITS2的进化速率最快,变异率最高(25.1%)。ITS2和trnL-trnF对本实验中石斛材料的分辨率达到90.1%,建议ITS2+trnL-trnF作为铁皮石斛种质资源鉴定的DNA条形码。本研究为利用DNA条形码技术鉴别铁皮石斛及其近源种石斛提供了参考和分子依据。 展开更多

关键词 铁皮石斛 DNA条形码 分子鉴定 遗传距离

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