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大口黑鲈肠道益生菌的分离与鉴定 被引量：4
1
作者 赵浩航 康旭 +7 位作者 黄子威 温依铭 汪志文 喻大鹏 甘桢 夏洪丽 夏立群 鲁义善 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期62-68,共7页
【目的】分离鉴定大口黑鲈(Micropterus salmoides)肠道益生菌,评估分离菌用作饲料添加剂的益生潜力。【方法】采集大口黑鲈肠道样本,采用稀释涂布法分离细菌,经16S rRNA序列比对和生化试验鉴定种属,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活... 【目的】分离鉴定大口黑鲈(Micropterus salmoides)肠道益生菌,评估分离菌用作饲料添加剂的益生潜力。【方法】采集大口黑鲈肠道样本,采用稀释涂布法分离细菌,经16S rRNA序列比对和生化试验鉴定种属,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活性和药敏特性等鉴定。【结果】从大口黑鲈肠道分离菌株84株,经测序、blast比对,筛选出3株同源性最高的菌株MS-1、MS-2、MS-3,分别鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。3株分离菌均为γ-溶血,不具有生物膜,疏水性50%~93.3%,自凝集性43.6%~69.2%;可在pH 2.0~12.0环境和5.0 g/L胆盐中存活;经高温处理后仍可生长;3株菌对大多数抗生素敏感。【结论】芽孢杆菌MS-1、MS-2和MS-3抗逆性高,黏附性能及饲料学安全性高,可作为大口黑鲈养殖中潜在益生菌。 展开更多
关键词 大口黑鲈 肠道微生物 益生菌 分离与鉴定 芽孢杆菌
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罗非鱼TRAF3基因的表达及功能研究 被引量：1
2
作者 夏洪丽 汪志文 +6 位作者 黎源 陈文捷 龙梦 喻大鹏 程俊 夏立群 鲁义善 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期308-315,共8页
肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子3(TRAF3)是多种免疫途径中的关键调控因子。从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)中克隆获得了TRAF3基因,命名为OnTRAF3(GeneBank No.MN258118),该基因包含1个环指结构域、1个锌指结构域、1个卷曲螺旋和M... 肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子3(TRAF3)是多种免疫途径中的关键调控因子。从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)中克隆获得了TRAF3基因,命名为OnTRAF3(GeneBank No.MN258118),该基因包含1个环指结构域、1个锌指结构域、1个卷曲螺旋和MATH结构域。多序列比对表明,OnTRAF3与其他已知的TRAF3蛋白具有高度的相似性,尤其是MATH结构域。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析显示,OnTRAF3在各组织中广泛分布,且在脑、皮肤、肠和鳃中表达量较高。在无乳链球菌诱导后,多个组织中的OnTRAF3表达量出现了不同程度的上调,说明OnTRAF3参与了罗非鱼的抗菌免疫应答。亚细胞定位实验显示,OnTRAF3分布在HEK293的细胞质和细胞核中。此外,荧光素酶报告基因实验结果显示,野生型(WT)OnTRAF3可显著激活NF-κB信号,而coiled-coil和MATH结构域缺失后,依然能够显著激活NF-κB活性,而RING和Zinc缺失后,该激活作用则明显减弱,表明RING和Zinc结构域是OnTRAF3在免疫信号通路中行使功能的关键结构域。研究为探索TRAF3在罗非鱼免疫应答中的功能提供了重要的基础。 展开更多
关键词 TRAF3 免疫反应 NF-κB信号 尼罗罗非鱼
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尼罗罗非鱼NITR基因的克隆鉴定与组织表达分析 被引量：2
3
作者 汪志文 黄瑜 +3 位作者 张海艳 汤菊芬 简纪常 鲁义善 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期145-152,共8页
从尼罗罗非鱼脾脏组织中克隆获得新型免疫受体(NITR,Novel immune-type receptor)基因的编码区序列(Gen Bank登录号:KX989509;命名为On-NITR),该基因c DNA全长1 119 bp,ORF为1 026 bp,可编码341个氨基酸,理论分子量为37.38k D,等电点为8... 从尼罗罗非鱼脾脏组织中克隆获得新型免疫受体(NITR,Novel immune-type receptor)基因的编码区序列(Gen Bank登录号:KX989509;命名为On-NITR),该基因c DNA全长1 119 bp,ORF为1 026 bp,可编码341个氨基酸,理论分子量为37.38k D,等电点为8.28。通过NCBI BLAST比对发现罗非鱼NITR与其他已报道的物种NITR氨基酸序列相似度为27%-46%。氨基酸序列分析显示:On-NITR具有1个信号肽区域、2个胞外Ig-domain区、1个跨膜结构域,以及1个胞质尾区,该胞质尾区含有NITR典型的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和一个ITIM类似基序itim,且具有较高的保守性。荧光定量PCR分析显示,On-NITR在健康尼罗罗非鱼组织中均有表达,在肠道、皮肤、肝脏表达水平较高,在胸腺、鳃、脾脏、心脏、脑组织中的表达量较低,在头肾组织中的表达量最低。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 NITR蛋白 基因克隆 组织表达分析
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一种适用于流式细胞术的简便红细胞裂解法 被引量：1
4
作者 汪志文 王华 周学武 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1211-1213,共3页
目的　探讨一种简便、快捷的红细胞列解法 ,以适宜应用流式细胞仪对白细胞亚群进行检测和分选。方法　采用常规试剂配置不同浓度应用液 ,按步骤完成红细胞裂解过程 ,上机检测。同时采用密度梯度离心法提取单核细胞和粒细胞 ,比较两者上... 目的　探讨一种简便、快捷的红细胞列解法 ,以适宜应用流式细胞仪对白细胞亚群进行检测和分选。方法　采用常规试剂配置不同浓度应用液 ,按步骤完成红细胞裂解过程 ,上机检测。同时采用密度梯度离心法提取单核细胞和粒细胞 ,比较两者上机检测的结果。结果　在流式细胞仪检测的细胞点图上 ,可见采用红细胞裂解法处理的标本白细胞成簇分布 ,淋巴细胞、单核细胞、粒细胞群清晰可辩 ,通过测定各群细胞上标记的特异性荧光 ,可进一步分离出淋巴、单核和粒细胞的亚群 ,细胞纯化程度高。采用密度梯度离心法纯化的粒细胞或单核细胞 ,在细胞点图上可见细胞散在分布 ,不成群 ,纯化程度低。其原因可能是该方法中长时间离心、改变血液渗透压、反复离心洗涤等步骤影响了白细胞的形态结构有关。结论　本实验介绍的红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求 ,价格低廉 ,是一种简便快捷。 展开更多
关键词 红细胞裂解法 流式细胞术 白细胞亚群
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PI和Annexin V/PI法在创伤后脊髓凋亡细胞分选中的应用 被引量：3
5
作者 汪志文 沈岳 《创伤外科杂志》 2001年第3期237-238,共2页
探讨创伤后脊髓凋亡细胞的流式细胞仪分选方法。使用PI和AnnexinV/PI检测法进行细胞凋亡的检测和分选 ,并进行结果的比较。提示AnnexinV/PI是目前较为理想的细胞凋亡检测和分选方法。
关键词 创伤 脊髓 细胞凋亡 流式细胞术
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用流式细胞术监测原位心脏移植病人术后的T细胞及亚群的变化
6
作者 汪志文 马铮 +1 位作者 李磊 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期277-277,286,共2页
关键词 原位心脏移植 流式细胞术 T细胞 T细胞亚群
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介绍一种适用于流式细胞术的简便的红细胞裂解法 被引量：2
7
作者 汪志文 周学武 《中国检验医学与临床》 2001年第1期42-42,46,共2页
关键词 流式细胞术 红细胞裂解法 血液检验
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实验性创伤后脊髓凋亡细胞的流式细胞仪分选方法
8
作者 汪志文 沈岳 《中国检验医学与临床》 2001年第1期9-10,共2页
目的：探讨创伤后脊髓凋亡细胞的流式细胞仪分选方法。方法：使用PI和Annexin V/PI检测法进行细胞凋亡的检测和分选。结果：Annexin V/PI检测法细胞凋亡的检出率显著高于PI法（P＜0．05），并可区正常细胞，凋亡细胞和死亡细胞。结论：A... 目的：探讨创伤后脊髓凋亡细胞的流式细胞仪分选方法。方法：使用PI和Annexin V/PI检测法进行细胞凋亡的检测和分选。结果：Annexin V/PI检测法细胞凋亡的检出率显著高于PI法（P＜0．05），并可区正常细胞，凋亡细胞和死亡细胞。结论：Annexin V/PI是目前较为理想的细胞凋亡检测和分选方法。 展开更多
关键词 创伤 脊髓凋亡细胞 流式细胞仪 分选方法 ANNEXIN V/PI 动物实验
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胸部撞击后肺组织细胞凋亡的变化及其意义 被引量：4
9
作者 董蕻 Liu Bao-song +1 位作者 刘宝松 汪志文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期193-195,共3页
目的　探讨胸部撞击后肺损伤特点、肺组织细胞凋亡分布特征及其在肺损伤发生中的作用。方法　建立大鼠重度肺撞击伤模型，采用流式细胞术、免疫组化和形态学方法观察肺病理变化和细胞凋亡情况。结果　撞击侧肺（右肺）发生明显的出血、... 目的　探讨胸部撞击后肺损伤特点、肺组织细胞凋亡分布特征及其在肺损伤发生中的作用。方法　建立大鼠重度肺撞击伤模型，采用流式细胞术、免疫组化和形态学方法观察肺病理变化和细胞凋亡情况。结果　撞击侧肺（右肺）发生明显的出血、充血、水肿，光镜下可见肺组织较广泛的出血和结构破坏。对侧肺（左肺）伤情明显轻于右肺。伤后24 h双侧肺组织中细胞凋亡率均显著高于伤前水平（P<0.05）。右肺伤后48　h迅速升高，72　h达峰值，之后逐渐下降，伤后1周接近伤前水平。左肺组织细胞凋亡率显著低于右肺（P<0.05），在伤后48 h达高峰，72 h明显降低并接近伤前水平。右肺伤后24 h细胞凋亡以支气管、血管内皮和肺泡上皮为主，72 h以炎性细胞为主。结论　支气管、血管内皮和肺泡上皮是应力波作用的主要部位，该区域发生的细胞凋亡是肺水肿及继发性肺损伤的发生的重要原因之一。 展开更多
关键词 细胞凋亡 胸部撞击伤 肺组织
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还原型谷胱甘肽对亚砷酸钠诱导的内皮细胞凋亡的保护作用 被引量：3
10
作者 肖南 刘韧 +2 位作者 田昆仑 刁有芳 汪志文 《细胞生物学杂志》 CSCD 2000年第4期209-212,共4页
本文主要观察还原型谷胱甘肽(GSH)对亚砷酸钠(Ars)诱导的培养内皮细胞凋亡的保护作用。体外培养人内皮细胞株ECV-304,用4×10^(-5)、8×10^(-5)、1.6×10^(-4)mol/LArs及5×10^(-5)mol/LGSH作用,24小时后用流式细胞仪... 本文主要观察还原型谷胱甘肽(GSH)对亚砷酸钠(Ars)诱导的培养内皮细胞凋亡的保护作用。体外培养人内皮细胞株ECV-304,用4×10^(-5)、8×10^(-5)、1.6×10^(-4)mol/LArs及5×10^(-5)mol/LGSH作用,24小时后用流式细胞仪进行凋亡细胞定量、ICAM-1表达及氧化状态的测定。结果Ars以剂量依赖方式引起ECs的凋亡,增加ICAM-1表达,降低氧化状态;GSH可使8×10^(-5)和1.6×10^(-4)mol/LArs引起的调亡分别降低30.2％和52.1％(P<0.01,P<0.05);GSH还明显降低Ars引起的ECs I-CAM-1的表达,但对4×10^(-5)mol/LArs引起者作用不明显,GSH可升高ECs的氧化状态,而且对4×10^(-5)mol/LArs引起者最为明显。结果表明GSH对Ars引起的ECs凋亡有保护作用,且可能与调节ICAM-1表达有关。 展开更多
关键词 内皮细胞 凋亡 还原型谷胱甘肽 保护作用 Ars
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大鼠内毒素血症时外周血及肺泡内PMN死亡方式及呼吸爆发的检测 被引量：1
11
作者 肖南 刘韧 +2 位作者 田昆仑 刁有芳 汪志文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1188-1190,共3页
目的　观察大鼠内毒素血症时肺组织中及外周血中性粒细胞 (PMN)凋亡、坏死及功能改变的差异。方法　Wistar大鼠 2 5只 ,腹腔注射内毒素 (LPS) (O55∶B5,5mg/kg)造成内毒素血症 ,分别在给予LPS前 (对照 )及给予LPS后 2、4、8、1 2h(每组 ... 目的　观察大鼠内毒素血症时肺组织中及外周血中性粒细胞 (PMN)凋亡、坏死及功能改变的差异。方法　Wistar大鼠 2 5只 ,腹腔注射内毒素 (LPS) (O55∶B5,5mg/kg)造成内毒素血症 ,分别在给予LPS前 (对照 )及给予LPS后 2、4、8、1 2h(每组 5只动物 )取血及支气管肺泡灌洗 ,密度梯度法分离PMN ,用流式细胞仪测定凋亡和坏死比例以及呼吸爆发功能的改变。结果　内毒素血症时 ,外周血和支气管肺泡灌洗液中PMN凋亡细胞比例相似。但与对照相比 ,外周血PMN坏死比例明显增加 ,呼吸爆发能力明显受抑 ,而支气管肺泡灌洗液PMN坏死比例显著减少 ,呼吸爆发能力显著增强。结论　在内毒素血症时 ,扣押于肺组织中的PMN在凋亡和坏死上表现出与外周血PMN不同的改变 ,其结果是组织中PMN存活PMN增加 ,并持续处于活化状态 ,这与PMN造成组织损伤有关。 展开更多
关键词 中性粒细胞 凋亡 坏死 呼吸爆发 内毒素血症
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严重创伤后血清β-内啡肽与PMNs上CD18、CD54分子含量的变化 被引量：1
12
作者 姚元章 简华刚 +4 位作者 李磊 程晓斌 黄显凯 吕菊芬 汪志文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期896-898,共3页
目的　探讨严重创伤病人血清 β 内啡呔 ( β end)及外周血多形核粒细胞 (PMNs)CD18、CD5 4含量变化。方法　 65例严重创伤病人按ISS分为两组 :ISS≥ 2 0分组 (n =3 6) ;ISS <2 0分组 (n =2 9)。使用放射免疫分析技术和流式细胞术分... 目的　探讨严重创伤病人血清 β 内啡呔 ( β end)及外周血多形核粒细胞 (PMNs)CD18、CD5 4含量变化。方法　 65例严重创伤病人按ISS分为两组 :ISS≥ 2 0分组 (n =3 6) ;ISS <2 0分组 (n =2 9)。使用放射免疫分析技术和流式细胞术分别检测 65例严重创伤病人入院时、伤后 1、3、7d血清皮质醇、β end浓度和PMNs上CD18、CD5 4的平均荧光通道变化 ,11例健康志愿者为对照组。结果　创伤病人血清皮质醇浓度在伤后2 4h内较对照组高 (P <0 .0 1) ,但创伤组间无差异。β end浓度在入院时达高峰 ,随后迅速下降 ,伤后第 72h恢复正常 ;伤后 2 4h内ISS≥ 2 0分组较ISS <2 0分组更高 (P <0 .0 5 )。PMNs上CD18、CD5 4含量在伤后各时相点与对照组比较差异显著 (P <0 .0 1) ;伤后最初 3d内 ,ISS≥ 2 0分组较ISS <2 0分组明显增高 (P <0 .0 1)。结论　β end、细胞粘附分子可能间接参与了创伤后PMNs的活化过程 ,其浓度和含量变化与损伤严重程度相平行 ;监测其动态变化有益于伤情评估。 展开更多
关键词 Β-内啡肽 CD18 CD54 ISS 创伤
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冲击伤动物的肌酸激酶、乳酸脱氢酶及其同工酶活性探讨 被引量：1
13
作者 陈荣德 王正国 +1 位作者 杨志焕 汪志文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期403-404,共2页
冲击伤是军事医学和灾害医学的一个重要课题。冲击伤致伤机理,特别是冲击波的靶器官,肺损伤的研究较多,但冲击伤的酶代谢报道甚少,本文探讨冲击伤后肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶的改变,并就其机理作初步讨论。 1 材料与方法... 冲击伤是军事医学和灾害医学的一个重要课题。冲击伤致伤机理,特别是冲击波的靶器官,肺损伤的研究较多,但冲击伤的酶代谢报道甚少,本文探讨冲击伤后肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶的改变,并就其机理作初步讨论。 1 材料与方法 实验动物为成年狗49只,平均体重12.3±1.8kg,除2只雌性外,其余为雄性。实验日晨禁食,皮下注射硫酸阿托品0.25mg,以3％戊巴比妥钠22.9±3.82mg/kg静脉麻醉,作股动静脉插管。 展开更多
关键词 冲击伤 肌酸激酶 同功酶 LDH
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促甲状腺素释放激素对失血致低血容量性休克大鼠心肺功能的影响 被引量：1
14
作者 熊仁平 周元国 汪志文 《中国危重病急救医学》 CSCD 1999年第7期400-403,共4页
目的：探讨促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ）抗失血致低血容量性休克的作用和对呼吸频率（ＲＲ）、平均动脉压（ＭＡＰ）、血气参数及酸碱平衡紊乱的影响。方法：复制失血致低血容量性休克大鼠模型，观察ＴＲＨ治疗前、后及各组各时间点大... 目的：探讨促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ）抗失血致低血容量性休克的作用和对呼吸频率（ＲＲ）、平均动脉压（ＭＡＰ）、血气参数及酸碱平衡紊乱的影响。方法：复制失血致低血容量性休克大鼠模型，观察ＴＲＨ治疗前、后及各组各时间点大鼠ＲＲ、ＭＡＰ、血气和酸碱平衡等各参数的变化。结果：ＴＲＨ组给药后ＭＡＰ即刻升高，５分钟ＭＡＰ达（１４．０±１．３）ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ），较低血容量性休克（ＨＳ）组增高３２％（ｔ＝２．５３１，Ｐ＜０．０５）；休克组大鼠在伤后３６０分钟ＭＡＰ仍较低，ＴＲＨ治疗组ＭＡＰ还比休克组高４２％（ｔ＝３．０１４，Ｐ＜０．０５）。休克组和ＴＲＨ治疗组失血后ＲＲ明显减慢，ＴＲＨ给药后５分钟ＲＲ升为（８０±９）次／ｍｉｎ，较休克组升高７８％（ｔ＝３．８９２，Ｐ＜０．０１）；伤后３６０分钟，ＴＲＨ组ＲＲ达（９９±９）次／ｍｉｎ，比休克组高７１％（ｔ＝３．４５６，Ｐ＜０．０１）。ＴＲＨ降低了肺体指数和肺含水率；升高ｐＨ、ＨＣＯ－３，改善酸中毒和酸碱失衡。结论：ＴＲＨ在失血致低血容量性休克治疗过程中有重要作用，能有效减轻休克的严重程度。 展开更多
关键词 低血容量性休克 血气分析 酸碱平衡 TRH
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多发伤病人外周血PMNs ICAM-1、LFA-1表达的变化及意义 被引量：1
15
作者 姚元章 李磊 +3 位作者 简华刚 杨欣建 程晓斌 汪志文 《创伤外科杂志》 1999年第1期15-17,共3页
目的观察多发伤病人外周血多形核中性粒细胞（PMNs）ICAM-1、LFA－1表达变化。方法使用流式细胞术分别检测37例多发伤病人入院时、伤后1、3、7天外周静脉血PMNsICAM-1、LFA－1的平均荧光通道（MFC）变化，13例健康志愿者作为对照组。结... 目的观察多发伤病人外周血多形核中性粒细胞（PMNs）ICAM-1、LFA－1表达变化。方法使用流式细胞术分别检测37例多发伤病人入院时、伤后1、3、7天外周静脉血PMNsICAM-1、LFA－1的平均荧光通道（MFC）变化，13例健康志愿者作为对照组。结果多发伤病人PMNsICAM－1、LFA－1表达在创伤后各时相点上与对照组比较有显著差异（P＜0．001）。在伤后最初3天内，ISS≥16分组较ISS＜16分组明显增高（P＜0．01）。在伤后并发MODS、创伤性失血性休克的病人中，PMNsICAM-1、LFA-1表达较非MODS、创伤性失血性休克病人显著增高（P＜0．001）。结论严重创伤后细胞粘附分子I-CAM-1，LFA-1的上调表达与损伤严重程度相平行。其动态变化监测对伤情预后的判断可能具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 多发伤 细胞粘附分子 预后 外周血 PMNS ICAM-1
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大鼠创伤后腹腔巨噬细胞亚群的变化及与IL-6、TNFα的关系
16
作者 谢志坚 李磊 +3 位作者 胡承香 张玉纯 汪志文 熊晓东 《创伤外科杂志》 2002年第4期231-234,共4页
目的　探讨创伤后免疫功能紊乱状态与巨噬细胞亚群的关系。方法　采用创伤失血模型 ,运用流式细胞仪分析单克隆抗体ED1、ED2单克隆抗体双标记表达情况 ,测定腹腔巨噬细胞 (pM)培养上清白细胞介素 6 (IL 6 )、肿瘤坏死因子 (TNFα)含... 目的　探讨创伤后免疫功能紊乱状态与巨噬细胞亚群的关系。方法　采用创伤失血模型 ,运用流式细胞仪分析单克隆抗体ED1、ED2单克隆抗体双标记表达情况 ,测定腹腔巨噬细胞 (pM)培养上清白细胞介素 6 (IL 6 )、肿瘤坏死因子 (TNFα)含量 (ELISA法 )。结果　正常大鼠pM分为ED1+ ED2 -亚群、ED1+ED2 + 亚群 ,无单纯的ED2 + 巨噬细胞亚群 ,创伤后ED1+ ED2 -亚群比例增加 ,ED1+ ED2 + 亚群比例降低 ,同时TNFα、IL 6分泌增加 ,内毒素 (LPS)刺激可增加TNFα、IL 6分泌水平。结论　创伤后细胞因子分泌紊乱可能与ED1+ ED2 展开更多
关键词 创伤 巨噬细胞亚群 单克隆抗体 细胞因子
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胎牛脑活素注射液的研究 被引量：5
17
作者 侯淦泉 王厚行 +1 位作者 汪志文 向春 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1996年第2期53-56,共4页
依据Paparizov等的改良法提取胎牛脑活素,工艺简单,提取率高。本法制备的脑活素含有24种氨基酸,以1ml/0.5g脑组织的提取液计,氨基酸含量30mg/ml,多肽为10mg/ml,乙酰胆碱活性为1200 mmol/L。经多种疾病试用证明有显著疗效。
关键词 胎牛脑活素 注射液 乙酰胆碱 研究
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罗非鱼无乳链球菌传播途径与逃避宿主免疫防御策略 被引量：9
18
作者 黎源 王蓓 +4 位作者 汪志文 蔡小辉 汤菊芬 鲁义善 简纪常 《广东农业科学》 CAS 2017年第7期132-140,共9页
罗非鱼是我国重要的养殖鱼类之一,近年来频繁暴发的链球菌病严重影响了我国罗非鱼养殖业的健康发展。无乳链球菌是罗非鱼链球菌病的主要病原之一,阐明其感染机制和免疫逃避机制,对预防与治疗该病至关重要。对鱼源无乳链球菌的侵染途径... 罗非鱼是我国重要的养殖鱼类之一,近年来频繁暴发的链球菌病严重影响了我国罗非鱼养殖业的健康发展。无乳链球菌是罗非鱼链球菌病的主要病原之一,阐明其感染机制和免疫逃避机制,对预防与治疗该病至关重要。对鱼源无乳链球菌的侵染途径、肠道的定植策略以及逃避宿主免疫监视机制等方面的研究成果进行综述,为深入研究无乳链球菌与宿主之间的相互作用提供参考,为罗非鱼链球菌病的综合防控奠定理论基础。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 传播途径 肠道定植 免疫逃避
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尼罗罗非鱼CD247基因克隆及其组织表达分析 被引量：6
19
作者 樊博琳 黎源 +3 位作者 汪志文 鲁义善 王蓓 简纪常 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第6期6-12,共7页
【目的】克隆尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)CD247基因(Gen Bank登录号:MF975639;On-CD247),分析On-CD247的生物信息学特征及其在正常和经灭活无乳链球菌注射刺激的尼罗罗非鱼组织中的表达。【方法】设计CD247基因引物并对CD247基... 【目的】克隆尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)CD247基因(Gen Bank登录号:MF975639;On-CD247),分析On-CD247的生物信息学特征及其在正常和经灭活无乳链球菌注射刺激的尼罗罗非鱼组织中的表达。【方法】设计CD247基因引物并对CD247基因片段进行扩增,运用荧光定量PCR技术分析尼罗罗非鱼CD247组织分布。【结果与结论】CD247基因编码区为453 bp,编码150个氨基酸,理论分子质量为16.9 ku,等电点为6.33,在跨膜区域有保守的ASP27、Asp35残基,胞内具有三段保守的免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。On-CD247序列与红笛鲷(Lutjanus sanguineus)相似性最高,为74.0%,与其他鱼类的相似性介于35.8%～73.0%之间。On-CD247在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,其中在胸腺中表达量最高,其次是皮肤、肌肉、鳃,在头肾中表达量最低。经灭活无乳链球菌刺激后,On-CD247的表达量在胸腺、头肾和肠道中均显著上调,而在脾脏中却显著下调,且有明显的时序性。胸腺、头肾和肠道均在3 h表达量最高,脾脏在12 h表达量最低,头肾中的表达量也在12 h回落,表明On-CD247表达可被无乳链球菌所诱导。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 CD247 基因 克隆 组织表达 无乳链球菌
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尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化 被引量：7
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作者 牛金中 黄瑜 +5 位作者 汤菊芬 鲁义善 汪志文 郑琦 蔡佳 简纪常 《广东海洋大学学报》 CAS 2018年第2期80-84,共5页
【目的】补体3(Complement3,C3)在罗非鱼的抗病感染中有重要作用,研究C3基因判断原核表达及表达条件。【方法】根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,经连接、转化等后,使用限制性... 【目的】补体3(Complement3,C3)在罗非鱼的抗病感染中有重要作用,研究C3基因判断原核表达及表达条件。【方法】根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,经连接、转化等后,使用限制性核酸内切酶EcoRI和XhoI对克隆成功的C3基因片段以及原核表达载体pGEX-4T进行双酶切,构建重组质粒pGEX-4T-C3,导入大肠杆菌进行原核表达,并优化表达条件,并对纯化目的蛋白进行Western Blot鉴定。【结果】C3基因片段的重组质粒pGEX-4T-C3构建成功。罗非鱼C3基因片段编码区长度为1 341 bp。获得的目的蛋白分子质量为75 ku,与预期结果相符。最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.2 mmol/L以及37℃;目的蛋白主要以包涵体的形似存在。重组蛋白可以与GST-Tag单克隆抗体特异性结合,说明成功获得罗非鱼C3片段的重组蛋白。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 补体3 原核表达 条件优化
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