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藕田套养小龙虾关键技术
1
作者 周丽斌 沈小兵 +3 位作者 张凤翔 吴昊玥 王宁 万羽 《科学养鱼》 2024年第1期38-39,共2页
兴化地区“藕虾共作”是在不影响荷藕产量的前提下,通过在藕田里套养一定数量的小龙虾,实现“一水两用,一田双收”,在这种模式下,小龙虾以藕田的水草、生物饵料等为食,与此同时小龙虾的排泄物为藕田增加了有机肥料,形成良性循环。2017... 兴化地区“藕虾共作”是在不影响荷藕产量的前提下,通过在藕田里套养一定数量的小龙虾,实现“一水两用,一田双收”,在这种模式下,小龙虾以藕田的水草、生物饵料等为食,与此同时小龙虾的排泄物为藕田增加了有机肥料,形成良性循环。2017年沙沟镇荷藕种植套养小龙虾逐渐成规模、2019年全面推开藕虾共作、田沟共作生态复合型种养模式,面积达36300亩。 展开更多
关键词 良性循环 小龙虾 生物饵料 种养模式 藕田 套养 荷藕 有机肥料
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国内外结核菌聚合酶链反应试剂盒的临床检测结果比较
2
作者 沈小兵 陈保文 +3 位作者 王国治 孙桂芝 王苏民 夏颐 《药品评价》 CAS 2005年第5期374-376,共3页
目的用相同标本比较国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒的临床检测效果,并初步探讨结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒在临床应用中定量检测结核菌数量的可行性。方法用聚合酶链反应技术,荧光探针杂交技术、酶联免疫反应技术以及常规细... 目的用相同标本比较国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒的临床检测效果,并初步探讨结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒在临床应用中定量检测结核菌数量的可行性。方法用聚合酶链反应技术,荧光探针杂交技术、酶联免疫反应技术以及常规细菌学方法检测并经双盲编号的84份临床痰标本和8份含痰结核菌标准品。结果在59例结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出26例阳性和24例阳性,国外试剂盒检出24例阳性;在25例非结核病患者痰标本中,国产PCR-酶联免疫检测试剂盒与PCR荧光试剂盒分别检出21例真阴性和24例真阴性,国外试剂盒检出23例真阴性;细菌学各级别检查结果与PCR荧光检测CT值不呈递减关系。结论国内外结核菌聚合酶链反应诊断试剂盒对临床标本的检测结果无显著性差异;结核菌聚合酶链反应荧光诊断试剂盒尚不能定量检测痰标本中的结核菌数量,有待更多的临床数据加以证实。 展开更多
关键词 结核菌 聚合酶链反应 试剂盒 诊断 痰标本 荧光定量
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水热法调控羟基磷灰石微结构研究进展 被引量：9
3
作者 沈小兵 李波 +2 位作者 赵军 许为中 孙维均 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期6-10,共5页
羟基磷灰石由于具有优良的生物相容性和生物活性而被广泛应用于骨组织修复和替代领域。而磷灰石的不同微观结构对其力学性能和生物学性能具有较大的影响,因此对其微结构的控制显得至关重要。水热法是人为构建高温高压的密闭环境,通过添... 羟基磷灰石由于具有优良的生物相容性和生物活性而被广泛应用于骨组织修复和替代领域。而磷灰石的不同微观结构对其力学性能和生物学性能具有较大的影响,因此对其微结构的控制显得至关重要。水热法是人为构建高温高压的密闭环境,通过添加Ca源和P源,在较为极端的条件下合成具有较高的结晶性磷灰石晶粒。受仿生矿化的影响,高分子有机物由于具有磷灰石定向沉积的活性基团,因而被用于水热法制备形貌新颖的磷灰石粒子。综述了近年来不同种类有机物模板运用于水热法的制备方法,探讨了有机物调控磷灰石晶粒形貌和尺寸的规律以及展望了水热法制备羟基磷灰石发展趋势。 展开更多
关键词 羟基磷灰石 水热法 有机模板
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母牛分支杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生过氧化氢水平的影响 被引量：55
4
作者 王国治 赵桂芳 +5 位作者 刘勇 沈小兵 李晓明 庄玉辉 李国利 张小刚 《中国防痨杂志》 CAS 1996年第1期21-22,共2页
用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫BALB/c小鼠,检测小鼠腹腔巨噬细胞产生过氧化氢(H_2O_2)的水平,结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生H_2O_2水平明显高于未免疫小鼠(P<0.01)。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的BALB/c小鼠,腹腔巨噬细... 用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫BALB/c小鼠,检测小鼠腹腔巨噬细胞产生过氧化氢(H_2O_2)的水平,结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生H_2O_2水平明显高于未免疫小鼠(P<0.01)。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的BALB/c小鼠,腹腔巨噬细胞产生的H_2O_2水平差异不显著(P>O.1)。认为,母牛分支杆菌制剂作为结核病免疫治疗剂,其作用之一是活化巨噬细胞产生H_2O_2,从而达到杀菌目的。 展开更多
关键词 母牛分支杆菌 巨噬细胞 过氧化氢 结核病 治疗
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噬菌体生物扩增法与改良罗氏比例法在结核杆菌药敏检测中的比较 被引量：14
5
作者 彭丽 陈保文 +2 位作者 沈小兵 罗永艾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2005年第1期18-22,共5页
目的　采用噬菌体生物扩增法 (PhaB法 )与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验 ,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法。方法　分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测 5 2株结核分... 目的　采用噬菌体生物扩增法 (PhaB法 )与传统比例法对结核分枝杆菌临床株进行利福平、异烟肼药物敏感试验 ,建立一种快速、敏感、特异、价廉的结核杆菌药敏试验方法。方法　分别采用噬菌体生物扩增法和改良罗氏比例法检测 5 2株结核分枝杆菌临床株对利福平、异烟肼的敏感性 ,将二者结果进行比较。结果　比例法检测结果为利福平耐药株的 34株中 ,噬菌体生物扩增法检测结果为 32株耐药 ,2株敏感 ;1 8株敏感株中噬菌体方法检测结果为 1 7株敏感 ,1株耐药。噬菌体方法检测结核菌对利福平的灵敏度为 94 .1 %(32 / 34) ,特异度为 94 .4 %(1 7/ 1 8) ,符合率为 94 .2 %(49/5 2 )。比例法检测为异烟肼耐药的 38株菌中 ,噬菌体方法检测 35株耐药 ,3株敏感 ;1 4株异烟肼敏感株中 ,噬菌体方法检测 1 1株敏感 ,3株耐药。噬菌体方法检测异烟肼敏感性的灵敏度为 92 .1 %(35 /38) ,特异度为 78.6 %(1 1 / 1 4 ) ,符合率为 88.5 %(46 / 5 2 )。结论　用噬菌体生物扩增法可快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平的敏感性 ,灵敏度高 ,与WHO推荐使用的比例法符合率高 ,可在 4 8h得到结果。异烟肼耐药性检测用噬菌体方法的特异度不如利福平 ,有待进一步探讨其原因。 展开更多
关键词 噬菌体 异烟肼 利福平 耐药 扩增 特异度 结核分枝杆菌 生物 比例法 敏感
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我国卡介苗保护力评价参考体系建立的探讨 被引量：16
6
作者 陈保文 沈小兵 +4 位作者 都伟欣 苏城 杨蕾 卢锦标 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期150-153,共4页
目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验... 目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验Ⅰ与Ⅱ免疫后进行Mtb感染的时间间隔为5周(其中实验Ⅱ为实验Ⅰ的重复实验,实验Ⅰ中BCG组和对照组均入组8只豚鼠;实验Ⅱ中BCG组入组6只豚鼠,对照组入组8只豚鼠),实验Ⅲ为28周(BCG组入组5只豚鼠,对照组入组6只豚鼠),实验Ⅳ为60周(BCG组和对照组均入组8只豚鼠),感染剂量为每只豚鼠2×(102～103)CFU Mtb/ml,注射0.5ml,感染途径为皮下注射,感染后6周,进行豚鼠解剖,观察豚鼠肝脾肺的病变程度并进行脾脏Mtb的分离,计算脾脏Mtb分离数和对数值。结果 (1)BCG免疫5周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±3.8,较对照组(46.9±4.8)差异有显著统计学意义(t=-0.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.49±0.49,较对照组(5.41±0.18)差异有显著统计学意义(t=-9.43,P<0.01)。(2)BCG免疫5周重复实验组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为6.7±2.1,较对照组(36.3±6.0)差异有显著统计学意义(t=-4.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.38±0.38,较对照组(5.11±0.19)差异有显著统计学意义(t=-11.22,P<0.01)。(3)BCG免疫28周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±4.5,较对照组(57.5±6.2)差异有显著统计学意义(t=-6.24,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为2.16±0.93,较对照组(5.44±0.27)差异有统计学意义(t=-3.39,P<0.05)。(4)BCG免疫60周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为14.4±4.8,较对照组(56.9±5.0)差异有显著统计学意义(t=-6.16,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为1.46±0.69,较对照组(5.43±0.20)差异有显著统计学意义(t=-5.55,P<0.01)。结论卡介苗保护力评价参考体系可靠稳定,我国临床应用卡介苗在该体系呈现优良保护效果。 展开更多
关键词 卡介苗 治疗结果 疾病模型 动物 评价研究
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卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价 被引量：12
7
作者 赵爱华 李凤祥 +11 位作者 寇丽杰 李长贵 乔来艳 王鹏 陈保文 徐苗 都伟欣 沈小兵 苏城 卢锦标 杨蕾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期161-167,共7页
目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细... 目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌。单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率。经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数。同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性。结果BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+%为41%,培养基对照组(NCS)组为27%;t=-4.40,P<0.05];促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+TLR-9+%为2.8%,NCS组为1.1%;t=-5.92,P<0.05);上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+%为82%,NCS组为31%;t=-4.32,P<0.05);可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+I-A/I-E+TLR-9+IL-12+%为2.1%,NCS组为0.1%;t=4.80 P<0.05)。BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均<10;H1N1低剂量组滴度<中剂量组滴度<高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高。H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30%、50%、90%、100%、100%,显示佐剂可提高40%动物存活率。Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100%病变,疫苗组完全转阴的动物达到30%,而且病变指数<30的动物达到60%～70%。佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应。结论BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐剂的候选佐剂。 展开更多
关键词 分枝杆菌 牛 DNA 细菌 佐剂 免疫 可重复性 结果
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噬菌体D29对耐药结核病豚鼠的治疗作用 被引量：13
8
作者 彭丽 陈保文 +4 位作者 罗永艾 沈小兵 黎友伦 苏城 王国治 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第17期1576-1579,共4页
目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体... 目的:观察噬菌体D29对患耐药结核病豚鼠的治疗作用.方法:采用皮下攻击法建立耐药结核病豚鼠模型,建模成功后随机将动物分为对照组、利福平(RFP)组、联合化疗组、噬菌体组4组.分别给予生理盐水、RFP单独、多种抗结核药物联合灌胃、噬菌体D29滴鼻,3次/wk,隔日给药.于治疗4,7wk后观察各组动物的一般情况、脏器质量指数(WI)、脏器病理组织学改变.脾脏结核分枝杆菌定量培养,并用ELISA方法检测血液中IL-2,IL-4,IFN-γ含量.结果:RFP组、联合化疗组在给药4wk内,体质量增长量明显小于对照组(P<0.05),而噬菌体组的体质量增长正常,与对照组相比较差异不显著.治疗4wk时各治疗组的病变指数均低于对照组,其中噬菌体组病变程度最轻,荷菌量(CFU)最低,差异具有统计学意义(P<0.05).7wk时动物的均一性对照组、RFP组较差,噬菌体组、联合化疗组较好.病理组织学改变噬菌体组、联合化疗组肺脏以纤维化、增生结节为主,脾脏很少有干酪样坏死;对照组肺脏可见大量Langhans细胞,以增生结节为主,脾脏较多干酪样坏死;IL-2含量RFP组、噬菌体组、联合化疗组均高于对照组,其中以噬菌体组含量最高,差异具有统计学意义(P<0.05).各组IL-4,IFN-γ均无显著性差异.结论:噬菌体D29可减轻耐药结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器CFU,可改善机体细胞免疫功能,协同噬菌体杀灭机体内的结核菌,对豚鼠无副作用,有望作为新型抗结核药物的开发对象. 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 结核 抗药性 微生物 药效学 免疫
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结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力 被引量：12
9
作者 陈保文 徐苗 +3 位作者 徐敬华 沈小兵 苏城 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期468-470,共3页
目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力。方法构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。... 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力。方法构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5μg/ml11kD蛋白的效力与50IU/ml TB-PPD相当。结论重组11kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 重组11kD蛋白 效力
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母牛分支杆菌制剂对免疫功能低下小白鼠的免疫调节作用 被引量：18
10
作者 李国利 庄玉辉 +4 位作者 张晓刚 吴雪琼 王国治 赵桂芳 沈小兵 《中国防痨杂志》 CAS 1998年第4期194-196,共3页
不同剂量的母牛分支杆菌制剂应用于免疫功能低下的小鼠模型,检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率。吞噬指数及脾淋巴细胞增殖率。结果显示注射不同剂量的母牛分支杆菌制剂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数明显高于未注射该制剂对照组(P... 不同剂量的母牛分支杆菌制剂应用于免疫功能低下的小鼠模型,检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率。吞噬指数及脾淋巴细胞增殖率。结果显示注射不同剂量的母牛分支杆菌制剂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数明显高于未注射该制剂对照组(P<0.01),淋巴细胞增殖率也明显高于对照组(P<0.01或 P<0.05)。提示母牛分支杆菌制剂能明显激活巨噬细胞免疫功能,对脾淋巴细胞增殖有明显刺激作用,对调节及提高机体免疫应答水平是有益的,将其应用于结核病免疫治疗,是一种有前景的结核病免疫治疗制剂。 展开更多
关键词 母牛分支杆菌 巨噬细胞 结核病 免疫疗法
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噬菌体D29对感染敏感株结核分枝杆菌豚鼠的疗效 被引量：6
11
作者 彭丽 罗永艾 +4 位作者 陈保文 黎友伦 沈小兵 苏城 王国治 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期733-736,共4页
目的观察噬菌体D29对豚鼠感染结核分枝杆菌敏感株的治疗作用。方法采用皮下攻击法建立敏感结核病豚鼠模型,感染后动物被随机分为对照组、利福平(rifampin,RFP)组、噬菌体组。分别以不治疗、RFP25mg/kg灌胃、噬菌体D29108噬菌斑形成单位(... 目的观察噬菌体D29对豚鼠感染结核分枝杆菌敏感株的治疗作用。方法采用皮下攻击法建立敏感结核病豚鼠模型,感染后动物被随机分为对照组、利福平(rifampin,RFP)组、噬菌体组。分别以不治疗、RFP25mg/kg灌胃、噬菌体D29108噬菌斑形成单位(plaque-formingunit,PFU)/0.5ml滴鼻,每w3次,隔d给药。治疗4w后,每组取4～5只豚鼠进行解剖,观察动物一般情况、脏器肉眼病变程度、脏器重量指数、脏器病理组织学检查以及肺脏和脾脏结核分枝杆菌的定量培养。结果采用噬菌体、RFP治疗4w后豚鼠结核病模型的脏器病变指数显著低于对照组(P<0.05),噬菌体组的肺脏荷菌量显著低于对照组(P<0.05),RFP组的肺脏荷菌量低于对照组(P>0.05)。病理组织学上,噬菌体组豚鼠的肺脏以纤维化为主;脾脏很少有干酪样坏死,以增生性结节为主。对照组肺脏见大量Langhans细胞,以增生结节为主;脾脏较多干酪样坏死。结论噬菌体D29可减轻结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器荷菌量,具有与RFP接近,甚至更好的疗效,且对豚鼠无副作用,有可能作为新型抗结核药物的开发对象。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 分枝杆菌 结核 药效学
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无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的Ⅰ期临床研究 被引量：9
12
作者 叶隆昌 陈保文 +12 位作者 朱永东 徐苗 刘林飞 沈小兵 左于会 苏城 王兆军 殷玉和 汪华 马玉杰 张远涛 王国治 许卫国 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期565-568,共4页
目的:通过Ⅰ期临床研究探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(M.S疫苗)的人群安全性和耐受性,并初步观察该疫苗对结核病高危人群皮试反应强度的影响。方法:给55例健康志愿者注射不同剂量的疫苗(8.7,17.5和35.0μg),每例注射6次,每2周注射1次。通... 目的:通过Ⅰ期临床研究探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(M.S疫苗)的人群安全性和耐受性,并初步观察该疫苗对结核病高危人群皮试反应强度的影响。方法:给55例健康志愿者注射不同剂量的疫苗(8.7,17.5和35.0μg),每例注射6次,每2周注射1次。通过对受试者的随访、心率和血压测试、血液常规、尿液常规、肝功能、胸部X-片以及肝、胆、脾、胰的B超检查以及PPD皮肤试验,评估M.S疫苗的不良反应,并比较疫苗注射前后PPD反应强度的变化。结果:在55例、330例次M.S疫苗注射过程中,发生14例、17例次的轻度不良反应,包括局部疼痛、淋巴结肿大、发热、局部硬结、心慌、皮疹和乏力,轻度不良反应总发生率为25.5%(14/55),未发生中度及重度不良反应;PPD皮试强阳性者经不同剂量M.S疫苗的注射,PPD皮试反应强度均显著降低(P<0.05)。结论:M.S疫苗具有较高安全性,并可显著降低结核病高危人群PPD皮试反应的强度。 展开更多
关键词 耻垢分枝杆菌 疫苗 Ⅰ期临床研究
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母牛分枝杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响 被引量：6
13
作者 李晓明 庄玉辉 +5 位作者 李国利 张小刚 王国治 赵桂芳 刘勇 沈小兵 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期297-298,共2页
母牛分枝杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响李晓明，庄玉辉，李国利，张小刚（解放军结核病研究中心，北京１０００９１）王国治，赵桂芳，刘勇，沈小兵（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）母牛分枝杆菌（Ｍ... 母牛分枝杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响李晓明，庄玉辉，李国利，张小刚（解放军结核病研究中心，北京１０００９１）王国治，赵桂芳，刘勇，沈小兵（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）母牛分枝杆菌（Ｍｙｃｂｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｖａｃ... 展开更多
关键词 母牛分枝杆菌 制剂 免疫制剂 巨噬细胞 一氧化氮
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异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果评价 被引量：6
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作者 卢锦标 沈小兵 +4 位作者 苏城 杨蕾 都伟欣 王国治 陈保文 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第2期123-128,共6页
目的评价异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02（BCG-CpG复合佐剂，即BCG-CpG-DNA＋Al）对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果。方法选取30只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级豚鼠，在皮下注射结核分枝杆菌菌液[1000菌落形成单位... 目的评价异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02（BCG-CpG复合佐剂，即BCG-CpG-DNA＋Al）对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果。方法选取30只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级豚鼠，在皮下注射结核分枝杆菌菌液[1000菌落形成单位（CFU）／只]1周后，按不同治疗方式分成4个组：即AEC／BC02组（6只），采用AEC／BC02疫苗进行肌肉免疫；INH组（6只），采用异烟肼10mg进行灌胃治疗；INH＋AEC／BC02组，先采用异烟肼进行灌胃治疗2周后，再采用AEC／BC02疫苗进行肌肉免疫；生理盐水（NS）组（12只），作为阴性对照，仅注射NS。所有豚鼠在进行攻毒（注射结核分枝杆菌菌液）后第10周被解剖，以豚鼠肝、脾、肺脏病变指数评分评价脏器病变，并计算各脏器活菌载量（1gCFU）。结果AEC／BC02组、INH组和INH＋AEC／BC02组的整体脏器综合病变评分分别为（36．7±28．2）、（20．0±12．7）和（3．3±5．2）分，均低于NS组的（69．2±24．5）分，差异均有统计学意义（分别为q=4．37，P=0．023；q=6．61，P〈0．001；q=8．85，P〈0．001）；INH＋AEC／BC02组整体脏器综合病变评分低于AEC／BC02组，差异也有统计学意义（q=3．88，P=0．049）。INH＋AEC／BC02组的脾脏活菌载量为（1．06±1．64）lgCFU，低于INH组的（3．55±1．90）lgCFU、AEC／BC02组的（4．21±0．78）lgCFU及NS组的（4．73±0．79）lgCFU，差异均有统计学意义（分别为q=4．84，P=0．011；q=6．12，P=0．001；q=8．23，P〈0．001）。INH＋AEC／BC02组的肺脏活菌载量为（0．69±1．07）lgCFU，低于INH组的（2．66±1．70）lgCFU、AEC／BC02组的（3．01±0．90）lgCFU及NS组的（4．36±0．79）lgCFU，差异均有统计学意义（分别为q=4．43，P=0．021；q=5．21，P=0．006；q=9．50，P〈0．001）；INH组的肺脏活菌载量低于NS组，差异也有统计学意义（q=4．39，P=0．022）。结论异烟肼和AEC／BC02疫苗联合使用优于单一治疗方式，能够明显减轻动物脏器病变，降低脾脏和肺脏的活菌载量。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 异烟肼 疫苗 合成 药物疗法 联合 疾病模型 动物 对比研究
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重组结核分枝杆菌11kDa蛋白鉴别潜伏性结核感染与卡介苗接种的研究 被引量：5
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作者 赵爱华 康万里 +7 位作者 王国治 高正伦 都伟欣 卢锦标 沈小兵 苏城 徐苗 郑素华 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第8期821-825,共5页
目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防... 目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防治所和北京市大兴区结核病防治所,于2014年7月至2016年3月在以上3个区的高校和工厂招募健康志愿者。共计招募3001名志愿者,所有志愿者体检合格,均签订知情同意书。对所有志愿者采用Mantoux法进行重组11kDa蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1ml重组11kDa蛋白(10μg/ml)和0.1ml TB-PPD(50U/ml),观察注射后72h后的皮肤反应。于皮肤试验前采集所有志愿者的静脉血,进行体外γ-干扰素释放试验(IGRA)检测。采用"一致率(%)"和"一阶一致性系数(the first-order agreement coefficient,AC1)比较重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD试验及IGRA结果的差异。3001名志愿者均接受3种方法检测,其中475名3种检测结果均为阴性的受试者,采用数字表法按随机双盲的原则,以2∶1的比例接种卡介苗(318名;失访8例)和安慰剂(147名;失访2例),接种3个月后再次进行重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD皮肤试验及IGRA,采用"一致率(%)"和"AC1"比较其结果差异。结果健康志愿者潜伏性结核感染筛查中,IGRA阳性率(34.4%,1033/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=22.787,P<0.001);IGRA与重组11kDa蛋白的一致率为93.4%(2804/3001),AC1值为0.882(95%CI=0.866~0.898),两者有较好的一致性。TB-PPD阳性率(47.7%,1430/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=182.146,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为60.6%(1819/3001),AC1值为0.243(95%CI=0.207~0.279),两者的一致性较差。卡介苗接种鉴别研究中,接种卡介苗的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)与IGRA(3.1%,10/318)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.571,P=0.109);一致率为95.6%(304/318),AC1值为0.954(95%CI=0.929~0.979),两者有较好的一致性。重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)低于TB-PPD(56.3%,179/318),差异有统计学意义(χ^2=167.350,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为42.5%(135/318),AC1值为0.025(95%CI=-0.106~0.155),两者的一致性较差。接种安慰剂的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(4.1%,6/147)与IGRA(1.4%,2/147)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.667,P=0.109);一致率为95.9%(141/147),AC1值为0.957(95%CI=0.921~0.993),两者有较好的一致性。TB-PPD的阳性率(17.7%,26/147)高于重组11kDa蛋白(4.1%,6/147),差异有统计学意义(χ^2=15.385,P<0.001),一致率为82.3%(121/147),AC1值为0.781(95%CI=0.690~0.871),两者有较好的一致性。结论重组11kDa蛋白在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种方面与IGRA有很好的一致性,可作为潜伏性结核感染者筛查与卡介苗接种鉴别的候选诊断试剂。 展开更多
关键词 重组蛋白质类 潜伏性结核病 试剂盒 诊断 皮肤试验 卡介苗 诊断 鉴别
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人用皮内注射布氏菌活疫苗毒理及药效学研究 被引量：5
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作者 李恪梅 王秉翔 +6 位作者 薛晓红 肖忻 王燕 徐苗 陈保文 沈小兵 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期488-491,共4页
目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注... 目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的最大耐受量为1.0×10^9个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×10^9个菌的部位会在48 h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24～48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的. 展开更多
关键词 布氏菌疫苗 皮内注射 毒理 药效
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结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用 被引量：4
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作者 陈磊 徐苗 +7 位作者 都伟欣 陈保文 王志玉 王雅君 董娜 苏城 沈小兵 王国治 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期403-409,共7页
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化B... 目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定。纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况。结果成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 重组蛋白质 佐剂 AG85B HSPX
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母牛分支杆菌制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平的影响 被引量：11
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作者 李晓明 王国治 +6 位作者 赵桂芳 刘勇 沈小兵 庄玉辉 李国利 张小刚 吴雪琼 《中国防痨杂志》 CAS 1996年第3期122-124,共3页
一氧化氮（ＮＯ）在活化巨噬细胞抗某些肿瘤细胞和微生物上起重要作用。用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的水平，结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平明显高于未免疫... 一氧化氮（ＮＯ）在活化巨噬细胞抗某些肿瘤细胞和微生物上起重要作用。用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的水平，结果显示受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１－０．００１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，腹腔巨噬细胞产生的一氧化氮水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。因此认为，母牛分支杆菌制剂作为结核病免疫治疗剂其作用之一是活化巨噬细胞产生一氧化氮，从而达到杀菌的目的。 展开更多
关键词 母牛分支杆菌 巨噬细胞 一氧化氮 结核杆菌
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结核分枝杆菌接种菌量对异烟肼和利福平药敏试验的影响 被引量：8
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作者 黎友伦 陈保文 +2 位作者 沈小兵 罗永艾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第5期288-291,共4页
目的 比较接种不同菌量结核分枝杆菌（MTB）绝对浓度法药物敏感性（药敏）与比例法药敏的差异程度,为MTB药敏检测准确性提供参考.方法 选择临界敏感或临界耐药MTB菌株53株,用比浊法制作MTB菌悬液,10倍梯度稀释,10^-4、10^-5、10^-6mg/m... 目的 比较接种不同菌量结核分枝杆菌（MTB）绝对浓度法药物敏感性（药敏）与比例法药敏的差异程度,为MTB药敏检测准确性提供参考.方法 选择临界敏感或临界耐药MTB菌株53株,用比浊法制作MTB菌悬液,10倍梯度稀释,10^-4、10^-5、10^-6mg/mL菌悬液0.1ml接种于改良L-J培养基上作活菌计数,10^-2、10^-3 mg/ml菌悬液0.1ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作绝对浓度法药敏,10^-3、10^-5mg/ml菌悬液0.1ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作比例法药敏.结果 MTB活菌计数值多在5×10^6～5×10^7CFU/ml.10^-2、10^-3mg/ml菌悬液绝对浓度法药敏一致率INH、RFP分别达98.1%、100.0%;绝对浓度法与比例法药敏符合率INH、RFP均达90.6%～100.0%.结论 不同菌量MTB绝对浓度法药敏结果与比例法药敏结果比较一致性好,在常规药敏检测中不会影响结果的准确性. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 活菌计数 药敏试验
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结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的克隆表达及效价测定 被引量：6
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作者 都伟欣 陈保文 +2 位作者 沈小兵 苏城 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第4期221-224,共4页
目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区CFP10-ESAT6融合蛋白,测定融合蛋白对结核分枝杆菌致敏豚鼠的效价。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv为模板,采用Overlap PCR方法扩增CFP10-ESAT6融合基因,并克隆入pET-30a质粒,IPTG诱导工程菌表达... 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区CFP10-ESAT6融合蛋白,测定融合蛋白对结核分枝杆菌致敏豚鼠的效价。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv为模板,采用Overlap PCR方法扩增CFP10-ESAT6融合基因,并克隆入pET-30a质粒,IPTG诱导工程菌表达融合蛋白,离子层析柱分离纯化融合蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果结核分枝杆菌融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,融合蛋白占总菌体蛋白的30%以上,经离子层析柱纯化纯度达95%以上。重组蛋白可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,2.5μg/ml重组蛋白诱导豚鼠皮试反应与TB-PPD(50 IU/ml)等效。结论重组融合蛋白有望成为结核感染皮试诊断用新试剂。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 重组CFP10-ESAT6融合蛋白 豚鼠 皮试
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