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基于上转换纳米材料的免疫检测技术应用
1
作者 黄惠威 李丽华 +3 位作者 罗林 沈玉栋 雷红涛 徐振林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期355-368,共14页
免疫分析法具有简便、快速、准确等特点,广泛应用于医学、食品、环境等领域检测,将免疫分析方法与纳米材料相结合可以提高免疫分析的性能。与传统纳米材料相比,上转换纳米颗粒(upconversion nanoparticles,UCNPs)具有光稳定性好、发光... 免疫分析法具有简便、快速、准确等特点,广泛应用于医学、食品、环境等领域检测,将免疫分析方法与纳米材料相结合可以提高免疫分析的性能。与传统纳米材料相比,上转换纳米颗粒(upconversion nanoparticles,UCNPs)具有光稳定性好、发光寿命长和狭窄及可调整的发射带等优秀的光学性质,与免疫分析相结合可显著降低背景噪声,提高分析灵敏度。本文简要介绍了UCNPs的发光机制,对UCNPs的合成和表面修饰方法进行了总结,并详细论述荧光共振能量转移、内滤效应、磁分离技术、上转化连接免疫吸附技术和上转换免疫层析技术五种基于UCNPs的免疫检测技术,最后对该技术所面临的挑战和前景进行总结和展望,以期为UCNPs免疫检测技术的发展提供理论指导。 展开更多
关键词 上转换纳米颗粒 合成方法 表面修饰方法 免疫检测技术
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毒蕈中α-鹅膏毒肽的中毒机制及检测技术研究进展 被引量：1
2
作者 易思嘉 罗林 +4 位作者 陈子键 雷红涛 沈玉栋 王弘 徐振林 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第20期129-139,共11页
α-鹅膏毒肽是毒蕈中分布广、含量高且毒性极强的蘑菇毒素,其性质十分稳定,一般的加热烹饪方式难以使之失活,误食含有该毒肽的毒蕈可引发中毒效应,具体表现为呕吐、腹泻等严重胃肠道反应甚至可导致肝肾功能衰竭,其发病迅速且目前没有特... α-鹅膏毒肽是毒蕈中分布广、含量高且毒性极强的蘑菇毒素,其性质十分稳定,一般的加热烹饪方式难以使之失活,误食含有该毒肽的毒蕈可引发中毒效应,具体表现为呕吐、腹泻等严重胃肠道反应甚至可导致肝肾功能衰竭,其发病迅速且目前没有特效药可以解毒,对食品安全和人类的生命健康安全造成了极大的威胁。传统的检测方法存在设备不便携、成本昂贵、检测速度慢等弊端,因此,通过了解α-鹅膏毒肽的致毒机制和建立准确、高效、便捷的检测技术对于有效防范α-鹅膏毒肽中毒事件的发生意义重大。本文简要综述了α-鹅膏毒肽的中毒症状、中毒机制、现有的解毒方式,着重阐述了α-鹅膏毒肽的检测技术研究进展,并对未来快速免疫检测技术的发展进行了展望,以期为治疗α-鹅膏毒肽中毒和保障人类的生命健康安全提供有效的帮助。 展开更多
关键词 蘑菇 毒蕈 α-鹅膏毒肽 中毒机制 检测方法
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水果及环境水样中苯醚甲环唑的高灵敏免疫分析方法研究
3
作者 陈梓豪 张咏仪 +6 位作者 杨金易 曾道平 贺颖 徐振林 王弘 孙远明 沈玉栋 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期768-774,共7页
采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA)。基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件... 采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA)。基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原与抗体质量浓度组合为62.5 ng/mL和0.318μg/mL,一抗竞争反应缓冲溶液为含0.05%Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBST,pH 7.4),一抗竞争反应时间为20 min,酶标二抗稀释液为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),酶标二抗反应时间为30 min。在该条件下,苯醚甲环唑的线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.49~3.90 ng/mL,半数抑制浓度(IC_(50))为1.38 ng/mL,检出限(LOD)为0.33 ng/mL。在柑橘、葡萄、香蕉、草莓田水、湖水和河水样品中的平均加标回收率为72.3%~132%,相对标准偏差(RSD)不大于13%,对10种结构和功能类似物的交叉反应率(CR)均小于0.2%。该方法准确可靠,可用于水果及环境水样中苯醚甲环唑的快速筛查和残留检测。 展开更多
关键词 苯醚甲环唑 单克隆抗体 酶联免疫分析 水果 水样
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食品危害物重组抗体的亲和力提升策略研究进展
4
作者 王锋 谢曦 +5 位作者 马路凯 王琴 肖更生 沈玉栋 徐振林 王弘 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第3期306-313,共8页
重组抗体作为新一代基因工程抗体,以其结构简单、易表达和修饰改造等特点被广泛应用于食品危害物的免疫快速检测。然而,重组抗体制备技术的非定向性和非精准性导致抗体的亲和力不高,严重影响并限制了重组抗体的应用,因此,当前研究亟需... 重组抗体作为新一代基因工程抗体,以其结构简单、易表达和修饰改造等特点被广泛应用于食品危害物的免疫快速检测。然而,重组抗体制备技术的非定向性和非精准性导致抗体的亲和力不高,严重影响并限制了重组抗体的应用,因此,当前研究亟需提升重组抗体亲和力。本文概述食品危害物重组抗体的制备技术,分别从重组抗体突变进化、突变库筛选、常规多价抗体制备、抗体融合蛋白的自组装等方面阐述重组抗体的亲和力提升策略,并探讨该领域目前的技术瓶颈和发展方向。 展开更多
关键词 食品危害物 免疫检测 重组抗体 亲和力提升
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基于吖啶酯-磁微球的自动化学发光免疫法检测赭曲霉毒素A
5
作者 林健聪 梁科 +5 位作者 柳彬 吴民富 罗林 雷红涛 沈玉栋 徐振林 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第3期313-322,共10页
该研究建立了一种基于吖啶酯-磁微球的自动化学发光免疫法(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)检测牛奶中的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)。采用磁微球偶联二抗,吖啶酯标记OTA-BSA偶联物,优化了磁微球浓度、OTA抗体浓度、吖啶酯标记... 该研究建立了一种基于吖啶酯-磁微球的自动化学发光免疫法(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)检测牛奶中的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)。采用磁微球偶联二抗,吖啶酯标记OTA-BSA偶联物,优化了磁微球浓度、OTA抗体浓度、吖啶酯标记物浓度、抗体和标记物稀释液、反应时间、样品预处理条件等各种CLIA方法的试验条件。结果表明,CLIA方法对OTA的检出限为6.38 ng/kg,半抑制浓度(IC_(50))为31.40 ng/kg,线性范围为11.23~99.20 ng/kg,批内和批间的变异系数<8%;测定牛奶样品中的OTA时,检出限为25.52 ng/kg,IC_(50)为125.60 ng/kg,线性范围为44.92~396.80 ng/kg,添加回收率为95.08%~105.83%;对赭曲霉毒素B、赭曲霉毒素C的交叉反应率为6.52%和24.57%,对其他真菌毒素均无明显的交叉反应;对牛奶样品的检测结果与高效液相色谱-串联质谱法一致;且CLIA方法的试剂能在2~8℃稳定保存9个月以上。该研究建立的CLIA方法,具有灵敏、准确、快速和操作便捷等特点,检测时长仅30 min,尤其适用于大规模牛奶样品中OTA残留的快速筛查。 展开更多
关键词 牛奶 赭曲霉毒素A 真菌毒素 化学发光免疫分析法
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基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利
6
作者 何晓婷 陈子键 +6 位作者 黄松 肖泽苗 刘佳 钟敏 王弘 沈玉栋 徐振林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第8期307-316,共10页
为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法(colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA)应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明:胶体金... 为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法(colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA)应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明:胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下,纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L,其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理,利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性,省去了有机溶剂吹干程序,加标样品平均回收率介于80.1%~109.6%之间,且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测,所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势,可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。 展开更多
关键词 纳米抗体 腐霉利 胶体金免疫层析 快速检测
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隐孔雀石绿半抗原与全抗原设计、合成及鉴定 被引量：10
7
作者 沈玉栋 王宇 +3 位作者 孙远明 雷红涛 王弘 肖治理 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期263-266,共4页
从偶联位点、偶联活性基团的性质及半抗原的合成与偶联方法分析,设计了系列不同结构的半抗原和人工抗原及其合成方法。以N,N-二甲基苯胺、苯甲醛衍生物为原料,Amberlyst15树脂为催化剂,在温和条件下合成出3种隐孔雀石绿半抗原;进一步采... 从偶联位点、偶联活性基团的性质及半抗原的合成与偶联方法分析,设计了系列不同结构的半抗原和人工抗原及其合成方法。以N,N-二甲基苯胺、苯甲醛衍生物为原料,Amberlyst15树脂为催化剂,在温和条件下合成出3种隐孔雀石绿半抗原;进一步采用活泼酯和重氮化法分别将获得的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联,形成相应全抗原。半抗原和全抗原分别经减压硅胶柱色谱及透析纯化后,采用质谱、核磁共振及紫外扫描光谱等分析手段进行了鉴定,结果表明半抗原及免疫全抗原均合成成功,满足了进一步免疫、筛选高质量抗体和建立检测方法的需要。同时,采用分子模拟手段对抗原表面半抗原决定簇的前线分子轨道分布情况进行了仿真模拟分析,讨论了前线轨道的分布可能对抗体特性造成的影响,为进一步的半抗原构效关系研究提供理论支持。 展开更多
关键词 孔雀石绿 半抗原 全抗原 合成 鉴定
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食品质量与安全专业的发展及构想 被引量：27
8
作者 沈玉栋 柳春红 +2 位作者 孙远明 吴青 肖治理 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2014年第3期264-267,共4页
食品质量与安全直接关系公众的健康,与之紧密相关的食品质量与安全专业随着社会对食品安全的关注以及公众对生活质量的追求而成为当前的热门专业,其发展之快在中国高教历史上实属罕见。通过专业调查资料,分析全中国及中国华南农业大学... 食品质量与安全直接关系公众的健康,与之紧密相关的食品质量与安全专业随着社会对食品安全的关注以及公众对生活质量的追求而成为当前的热门专业,其发展之快在中国高教历史上实属罕见。通过专业调查资料,分析全中国及中国华南农业大学食品质量与安全专业的现状,指出专业建设中存在的问题,并对专业发展提出相应的策略和思路。 展开更多
关键词 食品质量与安全专业 发展 构想
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呋喃西林代谢物荧光偏振免疫检测方法研究 被引量：11
9
作者 沈玉栋 张世伟 +4 位作者 蔡肇婷 雷红涛 肖治理 王弘 孙远明 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期27-31,36,共6页
利用新制备的抗体首次建立了呋喃西林代谢物氨基脲(SEM)的荧光偏振免疫分析(FPIA)方法。通过设计合成新的SEM半抗原CEPSEM(2-(4-((2-carbamoylhydrazono)methyl)phenoxy)aceticacid),偶联载体蛋白后免疫新西兰大白兔,制备了亲和力高、... 利用新制备的抗体首次建立了呋喃西林代谢物氨基脲(SEM)的荧光偏振免疫分析(FPIA)方法。通过设计合成新的SEM半抗原CEPSEM(2-(4-((2-carbamoylhydrazono)methyl)phenoxy)aceticacid),偶联载体蛋白后免疫新西兰大白兔,制备了亲和力高、特异性好的多克隆抗体。结合新设计合成的荧光示踪物CEPSEM-HDF建立了SEM的FPIA方法。结果表明:在示踪物浓度为0.5nmol/L,抗体稀释度为1/100的优化条件下,IC50为47.9μg/L,检出限为8.3μg/L,线性范围为15.8～145.7μg/L。该方法特异性强(和其它相关兽药交叉反应小于0.1%),稳定性好(批内相对标准偏差小于2.5%,批间相对标准偏差小于6.3%)。 展开更多
关键词 呋喃西林 示踪物 荧光偏振免疫分析(FPIA)
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浅谈大学新生班主任的重要性 被引量：8
10
作者 沈玉栋 王弘 《文教资料》 2009年第19期186-187,共2页
本文针对“90后”大学新生在学习、生活和思想上出现的各种问题，逐一提出解决方案，旨在将素质教育全方位渗透到学习、生活和思想的细节中，引导大学新生树立起自我教育的理念，全面提高大学新生的综合能力，为高校学生工作打下坚实的... 本文针对“90后”大学新生在学习、生活和思想上出现的各种问题，逐一提出解决方案，旨在将素质教育全方位渗透到学习、生活和思想的细节中，引导大学新生树立起自我教育的理念，全面提高大学新生的综合能力，为高校学生工作打下坚实的基础。 展开更多
关键词 大学新生 班主任 普遍问题 工作重心
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酶联免疫吸附分析实验在食品分析教学中的实施 被引量：3
11
作者 沈玉栋 李瑞婷 《科技创新导报》 2013年第13期149-149,151,共2页
该文通过对酶联免疫吸附分析(ELISA)实验在食品分析教学中实施情况进行探讨。介绍了该实验的基本原理以及实施过程,并以在食品安全检测领域中较常用的竞争ELISA为例,论述了用ELISA检测食品中有害小分子化学物质的实验步骤。为有关院校开... 该文通过对酶联免疫吸附分析(ELISA)实验在食品分析教学中实施情况进行探讨。介绍了该实验的基本原理以及实施过程,并以在食品安全检测领域中较常用的竞争ELISA为例,论述了用ELISA检测食品中有害小分子化学物质的实验步骤。为有关院校开展ELISA实验提供指导和借鉴。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附分析 综合性实验 教学
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基于QuEChERS前处理技术的水产品中喹诺酮类药物多残留ELISA检测方法的建立 被引量：23
12
作者 杨金易 张燕 +5 位作者 曾道平 王弘 徐振林 沈玉栋 雷红涛 孙远明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期292-298,共7页
建立了水产品中3种喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星）兽药多残留的新型Qu ECh ERS前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法。基本流程为样品经90%乙腈（1%乙酸）均质提取离心后,上清液依次用C18净化、静置沉淀蛋白后用于测定... 建立了水产品中3种喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星）兽药多残留的新型Qu ECh ERS前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法。基本流程为样品经90%乙腈（1%乙酸）均质提取离心后,上清液依次用C18净化、静置沉淀蛋白后用于测定,该前处理方法灵敏、快速、经济、实用性强。测试曲线线性范围为0.107~177.896ng/m L,检出限为0.0087μg/kg,IC50值为4.34ng/m L。样品批内和批间平均回收率分别为94.10%、93.70%,批内变异系数为4.09%~8.41%,批间变异系数2.78%~7.99%。检测结果与HPLC的相关系数R2=0.9897,表明酶联免疫检测方法及样品前处理方法适合喹诺酮类药物多残留检测。 展开更多
关键词 QU ECH ERS ELISA 多残留 喹诺酮 水产品
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化学发光酶免疫分析测定鱼肉中呋喃它酮代谢物方法研究 被引量：16
13
作者 戴尽波 徐振林 +5 位作者 刘凤银 杨金易 孙远明 王弘 雷红涛 沈玉栋 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期871-875,共5页
建立了呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）间接竞争化学发光酶免疫分析（ic CLEIA）检测方法,通过单因素实验优化了包被原浓度、抗体稀释倍数、反应缓冲体系及浓度、竞争反应时间等参数,结果表明ic CLEIA最佳反应条件... 建立了呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）间接竞争化学发光酶免疫分析（ic CLEIA）检测方法,通过单因素实验优化了包被原浓度、抗体稀释倍数、反应缓冲体系及浓度、竞争反应时间等参数,结果表明ic CLEIA最佳反应条件为：包被抗原浓度为10 ng/m L,抗体稀释60000倍,最佳竞争时间为50 min,体系缓冲液0.01 mol/L PBS（p H 7.4）。在优化的条件下,本方法的线性检测范围为0.026~3.52μg/L,IC50为0.29μg/L,检出限（LOD,IC10）为0.012μg/L。对鱼肉样品的平均添加回收率在101.4%~115.5%之间。建立的ic CLEIA方法可用于实际样品中AMOZ残留检测。 展开更多
关键词 呋喃它酮 5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮 间接竞争化学发光酶免疫分析 多克隆抗体 鱼肉
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化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留 被引量：16
14
作者 孙文佳 沈玉栋 +4 位作者 孙远明 雷红涛 王弘 曾道平 杨金易 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1397-1402,共6页
采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果表明,最佳反... 采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果表明,最佳反应条件为包被抗原浓度为0.05!g/L;氯丙嗪抗体稀释32000倍;体系缓冲液为含10%甲醇、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)。本方法的IC50为0.12!g/L;检出限为0.02!g/L;线性范围0.02～24.78!g/L;批内和批间相对标准偏差均小于10%。与其它结构类似物没有明显交叉反应。猪肉检测的平均回收率为87.4%～105.6%,与高效液相色谱方法的相关性良好。本方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性。 展开更多
关键词 氯丙嗪 间接竞争 化学发光酶免疫方法 氯丙嗪残留 猪肉
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硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性 被引量：15
15
作者 谢桂勉 孙远明 +4 位作者 徐振林 李永祥 雷红涛 王弘 沈玉栋 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2193-2198,共6页
通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建... 通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建立检测硫代磷酸二乙酯类农药的间接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,分析探讨了免疫半抗原结构对抗体特性的影响,并阐述了包被半抗原结构对ELISA灵敏度的影响规律.结果表明,手臂取代位置在苯环对位且手臂较短的免疫原具有较好的免疫效果,同时异源包被可以显著提高ELISA方法的灵敏度.由抗体PAb-H1和包被原H6-OVA建立的间接竞争ELISA方法可以同时检测7个广泛使用的有机磷农药,其半抑制浓度(IC50)分别为蝇毒磷(0.013 mg/L)、对硫磷(0.348 mg/L)、喹硫磷(0.022 mg/L)、三唑磷(0.035 mg/L)、甲拌磷(0.751 mg/L)、除线磷(0.850 mg/L)及辛硫磷(1.301mg/L),最低检测限符合国内外相关有机磷药物最大允许残留限量标准(MRLS)的检测要求. 展开更多
关键词 有机磷农药 类特异性抗体 异源包被 酶联免疫分析
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虾肉中呋喃它酮代谢物化学发光酶免疫分析方法的建立 被引量：12
16
作者 杨武英 董洁娴 +5 位作者 沈玉栋 杨金易 王弘 徐振林 杨星星 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1816-1821,共6页
采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,建立了虾肉中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)残留的间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法。检测所用抗体是基因重组的抗AMOZ衍生物单链抗体。优化的icCLEI... 采用对碘苯酚增强的HRP-鲁米诺-H2O2化学发光体系,建立了虾肉中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(AMOZ)残留的间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法。检测所用抗体是基因重组的抗AMOZ衍生物单链抗体。优化的icCLEIA最佳工作条件为:AMOZA-OVA包被浓度62.5μg/L,抗AMOZ衍生物单链抗体最佳稀释度为1∶10,竞争免疫反应时间45 min,HRP酶标记羊抗鼠抗体最佳稀释度为1∶10000,孵育时间50 min。本方法的IC50为1.38μg/L;灵敏度为0.09μg/L;线性范围为0.26～9.08μg/L(IC20～IC80);批内和批间相对标准偏差均小于15%;抗AMOZ衍生物单链抗体与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物均没有交叉反应,特异性良好。4个不同添加量的AMOZ加标样品的平均回收率分别为72.2%,73.4%,72.6%和78.6%。与HPLC-MS/MS法测定值进行比较发现,两种方法相关性良好(R2=0.9997)。本方法可用于水产品中AMOZ残留的快速检测。 展开更多
关键词 呋喃它酮代谢物AMOZ 刀额新对虾 间接竞争化学发光酶免疫分析 辣根过氧化物酶
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呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法 被引量：14
17
作者 任海涛 沈玉栋 +5 位作者 徐振林 杨金易 雷红涛 肖治理 王弘 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期745-751,共7页
本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68×1010 L/mol)和高特异性(与其它... 本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68×1010 L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1%)抗AOZ单克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响。另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5-OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(dcELISA)检测方法。结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503μg/L,定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.06～14.0μg/L,检出限(IC10)达0.017μg/L;dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6μg/L,检出限为0.056μg/L。两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测。 展开更多
关键词 呋喃唑酮 单克隆抗体 酶联免疫法 异源包被
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细交链孢菌酮酸酶联免疫吸附分析方法研究 被引量：10
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作者 杨星星 刘细霞 +3 位作者 王弘 徐振林 沈玉栋 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1347-1352,共6页
采用水合肼和乙醛酸依次对细交链孢菌酮酸(Tenuazonic acid,TeA)进行衍生化,设计合成了含有氮杂共轭双键偶联手臂,可增强免疫效果的半抗原TeAHGA。通过偶联载体蛋白BSA后的免疫原TeAHGA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制备了特异性识别TeA水... 采用水合肼和乙醛酸依次对细交链孢菌酮酸(Tenuazonic acid,TeA)进行衍生化,设计合成了含有氮杂共轭双键偶联手臂,可增强免疫效果的半抗原TeAHGA。通过偶联载体蛋白BSA后的免疫原TeAHGA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制备了特异性识别TeA水合肼衍生物TeAH的多克隆抗体;优化确立了ELISA最佳反应条件(TeAH-OVA为异源包被原、包被浓度0.156"g/L、药物稀释及反应缓冲液为PBS、一抗反应时间40min、二抗反应时间20min),建立了TeA间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,其抑制中浓度(IC50)为1.61"g/L,检出限(LOD)为0.08"g/L,定量线性检测范围为0.19～12.89"g/L(IC20～IC80)。番茄、面粉样品平均添加回收率分别为67.2%～89.8%和74.8%～93.7%。 展开更多
关键词 细交链孢菌酮酸 异源包被 半抗原 多克隆抗体 免疫分析
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氟甲喹单克隆抗体制备、鉴定及间接竞争酶联免疫吸附分析法 被引量：12
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作者 王宇 沈玉栋 +3 位作者 徐振林 雷红涛 王弘 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期313-317,共5页
以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)... 以氟甲喹(FLU)为原料,合成4个碳原子手臂的半抗原(FLUABA),采用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,通过免疫Balb/c小鼠及细胞融合,获得1株稳定分泌抗氟甲喹单克隆抗体的杂交瘤细胞株DB6-E7,其抗体亚类为IgG1,亲和力常数(KA)为8.19×108L/mol。将氟甲喹、FLUABA及6个碳原子手臂的半抗原FLUACA分别与卵清白蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,研究异源包被对间接竞争ELISA灵敏度的影响。结果表明,异源包被可显著提高ELISA方法的灵敏度。基于最佳异源包被(FLU-OVA)的酶联免疫吸附分析法的IC50为26.33μg/L,检出限为4μg/L,定量检测范围为8.0～114μg/L(IC20～IC80)。与喹诺酮类药物及结构类似物几乎不存在交叉反应,特异性高。此方法可满足畜禽产品中氟甲喹残留的快速筛查。 展开更多
关键词 氟甲喹 单克隆抗体 异源包被 酶联免疫吸附分析法
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对硫磷化学发光酶联免疫吸附分析方法的建立和评价 被引量：18
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作者 邓浩 孔德彬 +4 位作者 杨金易 徐振林 沈玉栋 杨星星 孙远明 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第2期247-252,共6页
建立了基于多克隆抗体的对硫磷间接竞争化学发光酶联免疫吸附分析方法(icCLEIA)。以三氯硫磷为原料,经三步取代反应合成对硫磷半抗原,通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原和包被抗原。经免疫新... 建立了基于多克隆抗体的对硫磷间接竞争化学发光酶联免疫吸附分析方法(icCLEIA)。以三氯硫磷为原料,经三步取代反应合成对硫磷半抗原,通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原和包被抗原。经免疫新西兰大白兔,获得对硫磷抗血清。通过优化条件参数,建立了对硫磷的icCLEIA分析方法。本方法的检测线性范围为0.24～15.83!g/L;半抑制浓度IC50为1.14!g/L;检出限为0.09!g/L;对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为74.6%～121.0%。本方法可用于实际样品中痕量对硫磷残留检测。 展开更多
关键词 对硫磷 化学发光酶联免疫吸附分析 农药残留
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