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基因工程菌高密度发酵工艺研究进展 被引量：18
1
作者 涂桂云 李敏 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期49-52,共4页
阐述了基因工程菌高密度发酵工艺的几个主要影响因素 ,包括重组菌构建、培养条件、生长抑制因子以及它们的控制技术。通过高密度发酵可以提高细胞生长密度、目的蛋白的表达含量。在高密度发酵过程中 ,会产生一些有害抑制代谢副产物 ,但... 阐述了基因工程菌高密度发酵工艺的几个主要影响因素 ,包括重组菌构建、培养条件、生长抑制因子以及它们的控制技术。通过高密度发酵可以提高细胞生长密度、目的蛋白的表达含量。在高密度发酵过程中 ,会产生一些有害抑制代谢副产物 ,但通过分批补料可以降低影响。 展开更多
关键词 发酵 分批补料 生长抑制因子 基因工程菌 工艺 大肠杆菌
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RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化 被引量：16
2
作者 李敏 黄建坤 +1 位作者 涂桂云 黄曦 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第6期1006-1010,共5页
蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 ... 蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。 展开更多
关键词 RGD 蜘蛛拖丝蛋白 表达产物 基因 多聚体 吻合 首次 IPTG 诱导表达 纯化
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RGD蛛丝蛋白基因工程菌高密度发酵条件的研究 被引量：8
3
作者 李敏 涂桂云 +1 位作者 黄智华 黄曦 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1206-1209,共4页
蜘蛛丝因其独特的机械特性,成为自然界性能优良的天然蛋白质纤维。基因工程技术是获取蛛丝蛋白的有效途径。为规模化制备重组RGD-蛛丝蛋白基因工程菌pN SR-16表达产物,通过摇瓶培养确定pN SR-16生长和表达的最优化条件,并在此基础上进... 蜘蛛丝因其独特的机械特性,成为自然界性能优良的天然蛋白质纤维。基因工程技术是获取蛛丝蛋白的有效途径。为规模化制备重组RGD-蛛丝蛋白基因工程菌pN SR-16表达产物,通过摇瓶培养确定pN SR-16生长和表达的最优化条件,并在此基础上进行分批补料高密度培养。控制碳源、氮源的流加,发酵液溶解氧浓度和菌体比生长速率,使pN SR-16最终发酵菌体OD600达到57.15,重组丝蛋白表达产物占总蛋白量的20.8%。 展开更多
关键词 重组蛛丝蛋白 工程菌 高密度发酵
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重组蛛丝蛋白pNSR-16/聚乙烯醇复合材料的研究 被引量：4
4
作者 陈登龙 房乾 +2 位作者 涂桂云 黄曦 李敏 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1194-1196,共3页
研究基因重组蛛丝蛋白pNSR-16与聚乙烯醇(PVA)共混复合材料。结果表明高分子量的PVA-124对蛛丝蛋白的改性效果较好;IR分析表明PVA-124分子能促进pNSR-16分子构象由无规卷曲向β-折叠转化;SEM观察表明pNSR-16与PVA-124相容性好;体外细胞... 研究基因重组蛛丝蛋白pNSR-16与聚乙烯醇(PVA)共混复合材料。结果表明高分子量的PVA-124对蛛丝蛋白的改性效果较好;IR分析表明PVA-124分子能促进pNSR-16分子构象由无规卷曲向β-折叠转化;SEM观察表明pNSR-16与PVA-124相容性好;体外细胞培养初步证明了复合支架材料具有生物相容性。 展开更多
关键词 重组蜘蛛丝蛋白pNSR-16 聚乙烯醇 复合材料 生物相容性
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重组拖丝蛋白基因在大肠杆菌中表达条件的优化 被引量：3
5
作者 章文贤 李敏 +2 位作者 涂桂云 吴雪伟 周志华 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第2期58-60,共3页
对已构建的重组蜘蛛拖丝蛋白基因表达菌株 p NS2 ,以 IPTG为诱导剂 ,建立最适表达条件 .在 LB培养基中添加质量分数为 0 .1 %的甘氨酸和丙氨酸 ,菌体培养至密度 A6 0 0 =0 .5～ 0 .7时加入浓度为 0 .2 mmol/ L的 IPTG,诱导 5 h,可得到... 对已构建的重组蜘蛛拖丝蛋白基因表达菌株 p NS2 ,以 IPTG为诱导剂 ,建立最适表达条件 .在 LB培养基中添加质量分数为 0 .1 %的甘氨酸和丙氨酸 ,菌体培养至密度 A6 0 0 =0 .5～ 0 .7时加入浓度为 0 .2 mmol/ L的 IPTG,诱导 5 h,可得到表达量占可溶性总蛋白质 2 7.2 %的较好结果 . 展开更多
关键词 重组拖丝蛋白 基因表达 基因重组 大肠杆菌 表达条件 蜘蛛丝 诱导剂 培养基
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组织工程新材料蜘蛛拖丝蛋白的重组培养 被引量：2
6
作者 章文贤 李敏 +1 位作者 涂桂云 黄智华 《中国临床康复》 CAS CSCD 2003年第20期2782-2784,共3页
目的通过对重组蜘蛛拖丝蛋白基因工程菌pNS2生长的培养基进行优化,为获取大量蜘蛛拖丝蛋白提供条件。方法采用单因子试验和正交试验对培养基进行优化。结果获得优化的培养基组成:葡萄糖5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、磷酸二氢钾(KH2PO4)15.0g/... 目的通过对重组蜘蛛拖丝蛋白基因工程菌pNS2生长的培养基进行优化,为获取大量蜘蛛拖丝蛋白提供条件。方法采用单因子试验和正交试验对培养基进行优化。结果获得优化的培养基组成:葡萄糖5.0g/L、蛋白胨5.0g/L、磷酸二氢钾(KH2PO4)15.0g/L、微量元素母液15.0g/L、硫酸镁(MgSO4)0.8g/L、柠檬酸1.7g/L。培养基优化后,工程菌的生长量提高了60.6%。结论优化的培养基为基因工程菌pNS2大规模生产蜘蛛拖丝蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 组织工程 蜘蛛拖丝蛋白 生物相容性材科 培养基 正交试验 生物医学工程
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基因重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合支架材料的制备 被引量：2
7
作者 魏梅红 涂桂云 +1 位作者 陈登龙 李敏 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2008年第3期189-191,共3页
目的探讨致孔剂NaCl粒径和比例、变性剂和聚乙烯醇（PVA）等因素对基因重组蛛丝蛋白-PVA复合支架材料形态及性能的影响。方法基因重组蛛丝蛋白溶解于98％甲酸，采用冷冻干燥粒子滤沥法制备重组蛛丝蛋白-PVA复合多孔支架；采用扫描电子... 目的探讨致孔剂NaCl粒径和比例、变性剂和聚乙烯醇（PVA）等因素对基因重组蛛丝蛋白-PVA复合支架材料形态及性能的影响。方法基因重组蛛丝蛋白溶解于98％甲酸，采用冷冻干燥粒子滤沥法制备重组蛛丝蛋白-PVA复合多孔支架；采用扫描电子显微镜观察支架的形态；采用单纤维强力试验机测试支架机械性能。结果乙醇作变性剂制得的多孔支架力学性能较好，支架的断裂应力、断裂比强度均提高5倍以上，断裂伸长率可达12．21％。以粒径〈500tzm的NaCl为致孔剂制得的多孔支架力学性能较好。高分子材料PVA能明显改善重组蛛丝蛋白多孔支架的性能。结论重组蛛丝蛋白-PVA复合支架材料有望在组织工程领域得以应用。 展开更多
关键词 重组蛛丝蛋白 冷冻干燥 聚乙烯醇 支架
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