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一种快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法 被引量：109
1
作者 温进坤 韩梅 +1 位作者 杜玮南 高社军 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期50-52,共3页
目的　建立一种快速制备大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法。方法　用大剂量 VD3及高脂饲料饲喂大鼠 2 4 d后 ,测血清甘油三酯、胆固醇含量 ,制作动脉切片进行形态学观察。结果　模型大鼠血清胆固醇及甘油三酯水平显著升高 ,动脉内膜细胞... 目的　建立一种快速制备大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法。方法　用大剂量 VD3及高脂饲料饲喂大鼠 2 4 d后 ,测血清甘油三酯、胆固醇含量 ,制作动脉切片进行形态学观察。结果　模型大鼠血清胆固醇及甘油三酯水平显著升高 ,动脉内膜细胞增生出现斑块状突起 ,中膜可见明显的钙化、平滑肌细胞增生及泡沫样细胞 ,相应的对照组未出现类似变化。结论　用高脂饲料及大剂量 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 动物模型 发病机制
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SM22α对血管平滑肌细胞肌动蛋白聚合和交联的调节 被引量：7
2
作者 温进坤 史建红 +2 位作者 郑斌 孟芳 韩梅 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期393-397,I0009,共6页
目的:探讨平滑肌22alpha(SM22α)调节血管平滑肌细胞(VSMC)骨架重构的分子机制。方法:血清饥饿法诱导VSMC由合成型转化成收缩型,转染pEGFP-SM22α表达质粒后观察SM22α在细胞中的分布及其与肌动蛋白纤丝(F-actin)的定位关系;应用反义技... 目的:探讨平滑肌22alpha(SM22α)调节血管平滑肌细胞(VSMC)骨架重构的分子机制。方法:血清饥饿法诱导VSMC由合成型转化成收缩型,转染pEGFP-SM22α表达质粒后观察SM22α在细胞中的分布及其与肌动蛋白纤丝(F-actin)的定位关系;应用反义技术封闭内源性SM22α表达,蛋白分步提取和Western blot分析检测敲减SM22α基因表达对肌动蛋白单体G-actin聚合的影响;F-actin体外交联实验观察SM22α对F-actin交联成束的影响。结果:SM22α在细胞中的分布与F-actin相一致;抑制内源性SM22α表达后,细胞中的SMα-actin主要以可溶性单体G-actin形式存在;F-actin体外交联实验结果表明,GST-SM22α蛋白纯品可促进F-actin交联形成粗大、束状的应力纤维,而敲减内源性SM22α的细胞裂解液促进F-actin交联的活性明显降低。结论:SM22α是参与VSMC细胞骨架重构的调节蛋白,不仅可促进G-actin聚合形成F-actin,而且还可加速F-actin交联成束,在VSMC骨架重构过程中起着十分重要的作用。 展开更多
关键词 平滑肌22α 血管平滑肌细胞 细胞骨架 肌动蛋白
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重组人EPO真核表达质粒在大鼠骨骼肌中的表达及其对贫血的治疗作用 被引量：5
3
作者 温进坤 郭庆 +2 位作者 韩梅 乔建明 汤健 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期26-29,共4页
目的和方法构建ＥＰＯ真核细胞表达载体（ｐｃＤ２ＥＰＯ），用缝线法和注射法将其直接导入肾性贫血大鼠股四头肌，观察ＥＰＯ在骨骼肌细胞中的表达及其对贫血的治疗作用。结果：ｐｃＤ２ＥＰＯ导入股四头肌２周后，骨骼肌细胞内出... 目的和方法构建ＥＰＯ真核细胞表达载体（ｐｃＤ２ＥＰＯ），用缝线法和注射法将其直接导入肾性贫血大鼠股四头肌，观察ＥＰＯ在骨骼肌细胞中的表达及其对贫血的治疗作用。结果：ｐｃＤ２ＥＰＯ导入股四头肌２周后，骨骼肌细胞内出现ＥＰＯｍＲＮＡ，提示被导入的ＥＰＯ基因在肌细胞内得到表达。贫血动物被治疗１周后，缝线组和注射组动物的ＨＧＢ和ＲＢＣ均显著升高；在第３周，缝线组的ＨＧＢ和ＲＢＣ接近健康大鼠的水平；至第４周，两个治疗组的ＨＧＢ和ＲＢＣ仍显著高于对照组。结论：经缝线法导入的ｐｃＤ２ＥＰＯ在骨骼肌中的表达效率及对贫血的治疗效果明显高于直接注射法。 展开更多
关键词 基因疗法 肾性贫血 骨骼肌 大鼠
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整合素β_3-粘着斑激酶信号途径的活化参与大鼠血管新生内膜的形成 被引量：5
4
作者 温进坤 韩梅 +2 位作者 程云会 杨长春 刘智敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1922-1925,共4页
目的:观察整合素β3-粘着斑激酶(FAK)等信号分子表达和活化与血管新生内膜形成之间的关系。方法:用球囊剥脱法制备血管狭窄模型;用W estern印迹和免疫组化染色检测骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和FAK等信号分子的蛋白水平及活化程度。结果:... 目的:观察整合素β3-粘着斑激酶(FAK)等信号分子表达和活化与血管新生内膜形成之间的关系。方法:用球囊剥脱法制备血管狭窄模型;用W estern印迹和免疫组化染色检测骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和FAK等信号分子的蛋白水平及活化程度。结果:血管内皮剥脱后,OPN、整合素β3和FAK蛋白水平均在血管内皮剥脱后3 d明显增加;术后7 d时达高峰,其中升高的FAK以磷酸化形式为主;14-21 d时,有所回降,但仍高于正常。其表达峰值均出现在血管平滑肌细胞向内膜快速迁移和增殖期,而且伴有细胞外基质降解加快。结论:细胞迁移是一个细胞和细胞外基质相互作用的复杂过程,整合素β3-FAK信号途径在维系该过程的协调统一方面具有重要作用。 展开更多
关键词 血管内膜 细胞外基质 结合素类 粘着斑激酶
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基因组和蛋白质组学与中医药研究 被引量：16
5
作者 温进坤 韩梅 《中西医结合学报》 CAS 2004年第5期323-325,共3页
基因组学和蛋白质组学技术是当今世界发展最快和影响最深远的生物高新技术之一。利用基因组学和蛋白质组学技术筛查中药作用的靶标、鉴定中药新的有效成分、研究中医药作用机制,可以弥补传统方法的缺陷。为此,将基因组学和蛋白质组学的... 基因组学和蛋白质组学技术是当今世界发展最快和影响最深远的生物高新技术之一。利用基因组学和蛋白质组学技术筛查中药作用的靶标、鉴定中药新的有效成分、研究中医药作用机制,可以弥补传统方法的缺陷。为此,将基因组学和蛋白质组学的理论和研究方法应用于中医药研究,对开辟中医药研究新领域,加快传统中医药与现代生命科学技术的对接,推动中医药走向世界具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 中医药研究 蛋白质组学技术 基因组学 中药 传统中医药 筛查 作用机制 新领域 意义 传统方法
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血管平滑肌细胞增殖调控机理的研究进展 被引量：18
6
作者 温进坤 石缨 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期149-152,共4页
高血压和动脉粥样硬化是以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要病理特征的疾病，研究ＶＳＭＣ增殖调控机制对揭示这类疾病的发病机理具有重要意义。本文介绍ＶＳＭＣ表型转化的基因标志、组蛋白Ｈ_１激酶ｐ３４^（ｃｄｃ２）和生长因... 高血压和动脉粥样硬化是以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为主要病理特征的疾病，研究ＶＳＭＣ增殖调控机制对揭示这类疾病的发病机理具有重要意义。本文介绍ＶＳＭＣ表型转化的基因标志、组蛋白Ｈ_１激酶ｐ３４^（ｃｄｃ２）和生长因子对ＶＳＭＣ增殖的调节作用等方面的研究进展。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 增殖调控 高血压 动脉粥样硬化
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内皮素基因的克隆与表达调控研究 被引量：4
7
作者 温进坤 张晨晖 +3 位作者 姚阿卿 魏素珍 周爱儒 汤健 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1994年第S1期24-28,共5页
为了阐明ＥＴ在高血压和动脉粥样硬化发病过程中的作用，研究ＥＴ基因表达的调控机制是必要的。本研究用ＰＣＲ方法分别合成ＥＴｃＤＮＡ和ＥＴ基因５’侧翼区ＤＮＡ片段后，以此为核酸杂交和检查ＤＮＡ和蛋白质相互作用的探针，观察了... 为了阐明ＥＴ在高血压和动脉粥样硬化发病过程中的作用，研究ＥＴ基因表达的调控机制是必要的。本研究用ＰＣＲ方法分别合成ＥＴｃＤＮＡ和ＥＴ基因５’侧翼区ＤＮＡ片段后，以此为核酸杂交和检查ＤＮＡ和蛋白质相互作用的探针，观察了肿瘤促进剂ＴＰＡ对ＥＴ基因表达的影响，探讨了ＴＰＡ和ｃ－ｊｕｎ在诱导ＥＴ基因表达之间的相互关系。 展开更多
关键词 内皮素基因表达 转录因子 c-fos/c-jun 内皮细胞
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益气活血法与血管平滑肌细胞基因表达调节 被引量：10
8
作者 温进坤 韩梅 《中西医结合学报》 CAS 2003年第1期12-14,共3页
多种心血管疾病的发生发展都与血瘀证有关 ,采用益气活血法作为治疗该类疾病的主要治则已广泛用于临床。研究证实 ,益气活血中药可调整舒缩血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达活性 ;并通过抑制血管平滑肌细胞表型转化和细胞增殖相关基... 多种心血管疾病的发生发展都与血瘀证有关 ,采用益气活血法作为治疗该类疾病的主要治则已广泛用于临床。研究证实 ,益气活血中药可调整舒缩血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达活性 ;并通过抑制血管平滑肌细胞表型转化和细胞增殖相关基因表达而减缓血管内膜增生程度。该类药物还具有调节细胞外基质代谢从而抑制基质重构和血管平滑肌细胞黏附与迁移的作用。本文将近年有关益气活血中药调节血管平滑肌细胞行为及其分子机制的研究作一评述。 展开更多
关键词 益气活血法 血管 平滑肌细胞 基因表达 治疗
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内皮素促进细胞增殖相关基因的表达和血管平滑肌细胞增殖 被引量：5
9
作者 温进坤 贾根深 魏素珍 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 1995年第1期5-8,共4页
通过３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察了内皮素－１对大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成及细胞增殖相关基因表达的形响。结果表明，内皮素－１作用于血管平滑肌细胞１２ｈ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入开始增加，２４ｈ达到峰值。在内皮素... 通过３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察了内皮素－１对大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成及细胞增殖相关基因表达的形响。结果表明，内皮素－１作用于血管平滑肌细胞１２ｈ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入开始增加，２４ｈ达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ进行快速瞬间表达，其表达活性在３０ｍｉｎ达到峰值，３ｈ后恢复到原来水平；Ｐ３４ｃｄｃ２激酶基因在内皮素－１刺激１２ｈ后表达活性开始增加，至２４ｈ仍维持在较高的水平。本文提示，内皮素－１对血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成的诱导作用与促进细胞增殖相关基因表达有关。 展开更多
关键词 内皮素 基因表达 血管平滑肌细胞 动脉粥样硬化
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基质金属蛋白酶与血管壁细胞外基质重建 被引量：12
10
作者 温进坤 韩梅 《生命的化学》 CAS CSCD 2002年第5期461-463,共3页
细胞外基质(ECM)不仅维持血管壁的完整性,而且还为血管细胞传递增殖、迁移、分化和凋亡的调控信号;基质金属蛋白酶(MMP)及其内源性抑制剂(TIMP)通过调节ECM合成与降解之间的动态平衡,使ECM维持正常的结构与功能。在高血压、动脉粥样硬... 细胞外基质(ECM)不仅维持血管壁的完整性,而且还为血管细胞传递增殖、迁移、分化和凋亡的调控信号;基质金属蛋白酶(MMP)及其内源性抑制剂(TIMP)通过调节ECM合成与降解之间的动态平衡,使ECM维持正常的结构与功能。在高血压、动脉粥样硬化和血管再狭窄的发生与发展过程中,MMP和TIMP的合成与分泌出现异常,由此所引起的ECM合成与降解失调使ECM迅速发生重建。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶 血管壁 细胞外基质重建 心血管疾病
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FOS／JUN介导佛波酯对内皮素基因表达的诱导作用 被引量：2
11
作者 温进坤 胡静 +3 位作者 乔亚明 张晨晖 周爱儒 汤健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第5期457-458,共2页
利用凝胶电泳迁移率改变实验、ＲＮＡ印迹和蛋白质印迹分析分别检查了ｃ－ｊｕｎ抗体对内皮素－１（ＥＴ－１）基因ＡＰ－１位点与核蛋白结合的影响及肿瘤促进剂佛波酯（ＴＰＡ）对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ基因表达的作用．结果发现，ｃ... 利用凝胶电泳迁移率改变实验、ＲＮＡ印迹和蛋白质印迹分析分别检查了ｃ－ｊｕｎ抗体对内皮素－１（ＥＴ－１）基因ＡＰ－１位点与核蛋白结合的影响及肿瘤促进剂佛波酯（ＴＰＡ）对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ基因表达的作用．结果发现，ｃ－ｊｕｎ抗体可使ＡＰ－１位点－核蛋白复合物的电泳迁移率发生改变，ＴＰＡ显著促进ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ基因表达和血管内皮细胞的ＡＰ－１结合活性．实验表明，ＴＰＡ对ＥＴ－１基因表达的诱导作用是通过促进ＡＰ－１转录因子ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ合成来介导的． 展开更多
关键词 内皮细胞 内皮素基因 佛波酯
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人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备 被引量：1
12
作者 温进坤 聂磊 +2 位作者 李静宜 程云会 韩梅 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期379-383,共5页
目的:用酵母表达重组人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制备兔抗人SM22α多克隆抗体。方法:利用PCR从pGEM3z-SM22α质粒扩增得到人SM22α基因编码区,重组至pPIC9构建酵母表达载体,转染巴斯德毕赤酵母,进行分泌型表达。表达产物经分步盐析和CM-... 目的:用酵母表达重组人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制备兔抗人SM22α多克隆抗体。方法:利用PCR从pGEM3z-SM22α质粒扩增得到人SM22α基因编码区,重组至pPIC9构建酵母表达载体,转染巴斯德毕赤酵母,进行分泌型表达。表达产物经分步盐析和CM-纤维素柱层析纯化后,免疫家兔,制备兔抗人SM22α多克隆抗体。结果:所构建的pPIC9-SM22α酵母表达载体转染酵母感受态细胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色体中,经甲醇诱导84 h,可实现SM22α的高效表达与分泌。用70%硫酸铵处理上清液,收集沉淀进行离子交换层析纯化后,经变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一分子量为22 kD的单一区带。用该纯化产物免疫家兔制备的兔抗人SM22α抗血清可用于检测人或大鼠血管壁中SM22α的表达水平。结论:重组人SM22α可在巴斯德毕赤酵母中进行高效表达与分泌,纯化蛋白可用于抗体制备,为研究SM22α功能提供了检测工具。 展开更多
关键词 平滑肌22α 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗血清
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一种新发现的肌特异基因表达调节因子:心肌素 被引量：2
13
作者 温进坤 韩梅 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期229-232,共4页
心肌素是一种新发现的特异性调节心肌和平滑肌基因表达的蛋白因子 ,与血清效应因子(SRF)一起构成肌细胞分化分子开关的组成成分。心肌素在胚胎及成年心肌和平滑肌细胞中均进行表达 ,是这两类细胞基因特异性表达及分化所必需的转录激活... 心肌素是一种新发现的特异性调节心肌和平滑肌基因表达的蛋白因子 ,与血清效应因子(SRF)一起构成肌细胞分化分子开关的组成成分。心肌素在胚胎及成年心肌和平滑肌细胞中均进行表达 ,是这两类细胞基因特异性表达及分化所必需的转录激活因子。 展开更多
关键词 心肌素 心肌细胞 平滑肌细胞 基因表达 分子机制 转录激活因子
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研究生分子生物学课程体系构建和教学内容优化的研究与实践 被引量：1
14
作者 温进坤 韩梅 +1 位作者 郑斌 刘智敏 《河北医科大学学报》 CAS 2005年第6期494-496,共3页
关键词 分子生物学 教学 课程 研究生
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不要低估血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化斑块形成中的作用 被引量：18
15
作者 温进坤 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2018年第7期649-654,共6页
血管内皮细胞、平滑肌细胞（SMC）和巨噬细胞共同参与动脉粥样硬化（As）斑块形成。近年研究表明,SMC来源的细胞占As斑块中细胞总数的70%以上。As斑块中的SMC通过自分泌细胞因子促进自身的增殖、迁移和炎症反应,通过旁分泌激活单核/巨... 血管内皮细胞、平滑肌细胞（SMC）和巨噬细胞共同参与动脉粥样硬化（As）斑块形成。近年研究表明,SMC来源的细胞占As斑块中细胞总数的70%以上。As斑块中的SMC通过自分泌细胞因子促进自身的增殖、迁移和炎症反应,通过旁分泌激活单核/巨噬细胞并将其募集到As损伤部位,同时通过其细胞膜表面表达的脂蛋白受体摄取脂质形成泡沫细胞。SMC在As斑块形成中扮演十分重要的角色,应进一步深化对SMC在As发生发展中的作用及作用机制的研究。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 斑块形成 作用机制
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血管重塑的细胞与分子机制及研究进展 被引量：6
16
作者 温进坤 《河北医药》 CAS 2002年第5期331-332,共2页
血管重塑(vascular remodelin)是指血管内径或血管内径和血管壁厚度的适应性变化,其结构变化包括血管平滑肌细胞增殖、迁移及细胞外基质(ECM)合成增加;功能变化表现为顺应性降低及对血管活性物质的反应性发生改变等.
关键词 血管重塑 分子机制 研究进展 血管平滑肌细胞 细胞增殖 动脉粥样硬化
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更新教育观念,加强教学研究,提升教学工作水平 被引量：2
17
作者 温进坤 《河北医科大学学报》 CAS 2005年第6期401-403,共3页
关键词 教育观念 教学研究 教学质量
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介绍一种脱嘌呤干扰足纹法 被引量：1
18
作者 温进坤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第1期59-61,共3页
报道了一种鉴定蛋白质与DNA的相互作用位点的新方法——脱嘌呤干扰足纹法,并用该方法鉴定大鼠脂酰-CoA氧化酶基因的表达调控部位。此方法基于用甲酸使DNA脱嘌呤后,再与核蛋白相互作用,然后通过凝胶电泳迁移率的改变,将游离DNA和与蛋白... 报道了一种鉴定蛋白质与DNA的相互作用位点的新方法——脱嘌呤干扰足纹法,并用该方法鉴定大鼠脂酰-CoA氧化酶基因的表达调控部位。此方法基于用甲酸使DNA脱嘌呤后,再与核蛋白相互作用,然后通过凝胶电泳迁移率的改变,将游离DNA和与蛋白质结合的DNA片段分开,再经六氢吡啶降解DNA中无嘌呤部位的磷酸酯键和进行电泳分析。此方法具有分辨率高、重复性好、干扰少等优点,适用于对结合位点中缺乏鸟苷酸的基因进行分析。 展开更多
关键词 脱嘌呤 干扰足 纹法
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磷酸化作用对转录因子活性的调节 被引量：1
19
作者 温进坤 《生命的化学》 CAS CSCD 1993年第5期15-17,共3页
转录因子是一类能与特异性DNA序列结合并调节基因转录的蛋白质因子。根据与DNA结合位点的不同和是否受环境因素(如生长因子和促细咆分裂剂等)的调节,转录因子可分为通用转录因子和转录调节因子。
关键词 转录因子 磷酸化作用 调节 转录
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红细胞生成素基因在大鼠体内的表达及表达产物的生物学效应
20
作者 温进坤 韩梅 +1 位作者 郭庆 汤健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期504-506,共3页
红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种由胎儿肝脏和成人肾脏产生的多肽类生长因子，在体内的表达具有严格的组织特异性，因此，慢性肾病所引起的贫血常常难以得到有效的治疗．随着基因治疗技术的不断成熟与完善... 红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种由胎儿肝脏和成人肾脏产生的多肽类生长因子，在体内的表达具有严格的组织特异性，因此，慢性肾病所引起的贫血常常难以得到有效的治疗．随着基因治疗技术的不断成熟与完善，尤其是近年一些实验室先后发现质粒... 展开更多
关键词 红细胞生成素 EPO 大鼠 表达产物
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