新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立

1

作者 魏家阳 李丽 +7 位作者 王国康 徐英英 曾哲 罗青平 邵华斌 温国元 商雨 潘兹书 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期30-35,共6页

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC... 为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞,成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定,结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统,为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 Mukteswar株 反向遗传操作系统

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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 被引量：9

2

作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 陈玉栋 闵平 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期466-470,共5页

将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证... 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 转移载体 绿色荧光蛋白 E2基因

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伪狂犬病毒TK基因转移载体构建及LacZ基因表达 被引量：3

3

作者 潘兹书 张楚瑜 +2 位作者 赵伟光 郑从义 丁建华 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 2000年第6期717-720,共4页

在扩增、克隆 PRV tk、g H基因的基础上 ,构建了包含 tk和 g H基因片段的转移载体质粒 p TK2 .5 .以PRV糖蛋白 g G启动子 ( Pg G)为控制外源基因表达的启动子 ,以 E.coli lac Z为报道基因 ,用其替换 p TK2 .5质粒tk区的 Sal I与 Xho I... 在扩增、克隆 PRV tk、g H基因的基础上 ,构建了包含 tk和 g H基因片段的转移载体质粒 p TK2 .5 .以PRV糖蛋白 g G启动子 ( Pg G)为控制外源基因表达的启动子 ,以 E.coli lac Z为报道基因 ,用其替换 p TK2 .5质粒tk区的 Sal I与 Xho I之间的序列 ,构建了转移载体质粒 p TK- L ac Z.瞬时表达证实 ,转染细胞的 p TK - lac Z质粒在野生型 PRV感染的情况下 ,能有效表达β- Gal酶活性 .将 p TK- lac Z转染 BHK 2 1细胞后再以 PRV感染进行同源重组 ,在 143TK- 细胞上经 5 -溴脱氧尿苷选择 ,Vero细胞纯化 ,X- Gal染色 ,蓝斑筛选 ,分离到重组体 PRV ( r PRV) .r PRV与野生型 PRV在细胞上具有类似的生长特性 ,且经过连续传代的 r PRV仍能稳定的表达β- 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 胸苷激酶基因 转移载体 LACZ基因

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猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析 被引量：4

4

作者 潘兹书 张楚瑜 +2 位作者 丁建华 罗满林 雷亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期38-43,共6页

对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334... 对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334个氨基酸组成的多肽。PRV HB株PK与PRV NIA3、PRV Ka、HSV 1、VZVPK基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98 7%、97 5 %、5 0 7%和 42 0 % ;基因编码区氨基酸序列的同源性分别为98 2 %、95 8%、37 7%和 37 2 %。PRVPK具有细胞丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒湖北株 蛋白激酶 核苷酸序列

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信阳绿茶茶多酚含量及浸出率 被引量：3

5

作者 潘兹书 袁红雨 龚国强 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 1995年第3期294-298,共5页

本文采用酒石酸亚铁比色法对优质信阳毛尖和次等茶叶中茶多酚（ＴＰ）含量进行测定，并探讨冲泡水温和冲泡时间对茶多酚浸出率的影响。实验结果表明：优质毛尖和次等茶叶的ＴＰ含量分别为２１．９６％～２３．５２％和１７．９８％～１... 本文采用酒石酸亚铁比色法对优质信阳毛尖和次等茶叶中茶多酚（ＴＰ）含量进行测定，并探讨冲泡水温和冲泡时间对茶多酚浸出率的影响。实验结果表明：优质毛尖和次等茶叶的ＴＰ含量分别为２１．９６％～２３．５２％和１７．９８％～１９．２６％。冲泡水温度和冲泡时间对ＴＰ浸出率均有显著影响。 展开更多

关键词 茶多酚 抗氧化剂 绿茶 浸出率

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伪狂犬病病毒基因工程疫苗的研究进展 被引量：3

6

作者 潘兹书 张楚瑜 《预防兽医学进展》 1999年第3期1-4,共4页

关键词 伪狂犬病病毒 基因工程疫苗 疫苗

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一株新培育的鸡新城疫病毒无毒耐热株-湖北92株的全基因组序列

7

作者 潘兹书 陈玉栋 +4 位作者 邵华斌 杨俊 熊忠良 温国元 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期530-530,共1页

关键词 鸡新城疫病毒 基因序列 序列分析 NDV

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伪狂犬病毒糖蛋白H基因片段的克隆、序列测定和分析

8

作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 赵伟光 丁建华 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 2000年第2期207-210,共4页

对伪狂犬病毒湖北地方株 (PRV HB株 )糖蛋白 H基因片段进行了扩增、克隆、序列测定和分析 ,比较了该序列与 PRV Ka株及 NIA- 3株三者之间的同源性 .结果显示 ,克隆片段长 1396 bp,G+C含量 75 .6 % ,包括糖蛋白 H (g H ) N端 2 83个氨基... 对伪狂犬病毒湖北地方株 (PRV HB株 )糖蛋白 H基因片段进行了扩增、克隆、序列测定和分析 ,比较了该序列与 PRV Ka株及 NIA- 3株三者之间的同源性 .结果显示 ,克隆片段长 1396 bp,G+C含量 75 .6 % ,包括糖蛋白 H (g H ) N端 2 83个氨基酸编码区及上游调控序列和胸苷激酶 (TK) C端 136个氨基酸编码区 .g H基因ORF上游调控区存在有 TATA框和 CAT框的真核启动子特征结构 .PRV HB株 g H基因片段序列与 PRV Ka株和 NIA- 3株相应序列的核苷酸同源性相同 ,为 99.6 % .推导的 g H多肽 N端第 1～ 30位氨基酸组成的肽段富含疏水性氨基酸 ,具有真核信号肽的序列特征 . 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 糖蛋白H基因 基因克隆 序列测定

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应用荧光定量PCR技术快速定量检测猪瘟病毒 被引量：24

9

作者 温国元 万超 +1 位作者 潘兹书 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期746-750,共5页

采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的... 采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的灵敏度,并且该方法避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率.因此,该方法以其快速、灵敏、低污染率的优点,会在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用. 展开更多

关键词 猪瘟病毒 荧光定量PCR 定量检测

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建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术 被引量：31

10

作者 陈玉栋 张楚瑜 +4 位作者 邹俊煊 潘兹书 陈立新 李田 郭长林 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期124-128,共5页

在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒苗 快速定量检测 荧光定量PCR技术 猪瘟

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中华鳖腮腺炎的病理组织学初步观察 被引量：6

11

作者 赵万鹏 潘兹书 +3 位作者 陈世锋 黄斌 张海宾 郭维孝 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 1998年第3期258-259,263,共3页

取具有典型鳃腺炎症状的中华鳖病材之肝、肠、肺、脾、肾等组织数块，Ｚｅｎｋｅｒ′ｓ液固定，石蜡包埋，ＨＥ染色，封固后进行病理组织学观察。观察结果表明，各内脏器官的实质细胞均发生不同程度的变性，甚至坏死崩解。肝血窦、脾红... 取具有典型鳃腺炎症状的中华鳖病材之肝、肠、肺、脾、肾等组织数块，Ｚｅｎｋｅｒ′ｓ液固定，石蜡包埋，ＨＥ染色，封固后进行病理组织学观察。观察结果表明，各内脏器官的实质细胞均发生不同程度的变性，甚至坏死崩解。肝血窦、脾红髓淤血，肠壁、肺泡隔、肾间质等结缔组织中的毛细血管充血，甚至破裂出血，造成局部组织有血细胞浸润。内脏血管广泛性淤血、充血甚至出血是中华鳖鳃腺炎的主要病理组织变化之一。 展开更多

关键词 中华鳖 腮腺炎 病理组织学

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复合中草药对鳖温和气单胞菌的抗菌作用 被引量：6

12

作者 赵万鹏 张海宾 潘兹书 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2000年第1期99-101,共3页

将１０ 余味中草药复合成３ 种配方，分别煎制成药汁后灌喂小白鼠（ 对照组以水代之） ．试验期共２０ｄ ．试验中期用从病鳖体内分离出的温和气单胞菌攻击小白鼠，以探讨不同配方的抗菌作用，从而为中草药在鳖病防治中的运用提供依据... 将１０ 余味中草药复合成３ 种配方，分别煎制成药汁后灌喂小白鼠（ 对照组以水代之） ．试验期共２０ｄ ．试验中期用从病鳖体内分离出的温和气单胞菌攻击小白鼠，以探讨不同配方的抗菌作用，从而为中草药在鳖病防治中的运用提供依据．结果显示，以板兰根、山楂等复合成的配方（１） 组，小白鼠总增重率最大，血清抗体效价最高，死亡率最低，抗菌效果较好． 展开更多

关键词 温和气单胞菌 复合中草药 抗菌作用 鳖病 防治

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新城疫病毒HB92株M基因的克隆和序列分析 被引量：2

13

作者 陈玉栋 潘兹书 +2 位作者 邵华斌 杨峻 张楚瑜 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期479-485,共7页

采用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)无毒耐热株 (HB92株 )M基因 ,将其克隆于 pGEM T载体 ,并进行了序列测定和分析 .结果显示 ,测定的M基因长 12 2 3个核苷酸 ,包含一个 10 95个核苷酸的开放阅读框(ORF) ,编码 36 4个氨基酸 .与已报... 采用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)无毒耐热株 (HB92株 )M基因 ,将其克隆于 pGEM T载体 ,并进行了序列测定和分析 .结果显示 ,测定的M基因长 12 2 3个核苷酸 ,包含一个 10 95个核苷酸的开放阅读框(ORF) ,编码 36 4个氨基酸 .与已报道的 10株NDVM基因比较 ,核苷酸同源性为 88.4 %～ 95 .8% ,氨基酸同源性为 89.8%～ 95 .3% ,HB92株与V4株M基因核苷酸的同源性最高 (达 95 .8% ) .NDVM蛋白分子中有 9对碱性氨基酸 ,在多肽的第 117～ 12 0位有一个含 4个氨基酸CKKS的特征性结构 .这些结果为揭示NDVHB92株的分子生物学背景 ,了解NDV的分子进化和遗传变异机理 ,进而开发利用HB92株奠定了基础 。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HB92株 M基因 基因克隆 序列分析 基质蛋白基因 分子进化 遗传变异机理 RT-PCR方法

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伪狂犬病病毒糖蛋白G基因的结构分析及其原核表达 被引量：3

14

作者 闵平 张楚瑜 潘兹书 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期166-171,共6页

利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷... 利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为 98%、84.1%。 32 0～ 380位之间的氨基酸序列存在较大差异。根据序列分析结果 ,选取 gG基因长短不同的两个片段分别克隆到原核表达载体 pET2 8a(+)进行表达。经SDS PAGE和Dot ELISA分析证实 ,表达出分子量大小分别约为 5 5kD和 6 3kD的特异性gG多肽 ,这为深入阐明PRV gG基因结构与功能及研制 gG 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 糖蛋白G 原核表达 核苷酸序列 氨基酸 序列 基因表达 基因结构

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快速检测伪狂犬病毒荧光定量PCR技术建立及应用 被引量：3

15

作者 万超 温国元 +4 位作者 潘兹书 张楚瑜 熊中良 杨峻 艾地云 《中国病毒学》 CSCD 2006年第5期485-489,共5页

以伪狂犬病毒(PRV)保守的gE基因序列为参考,设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针,结合RotorGene检测系统,建立一种快速定量检测伪狂犬病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为1.0×102-1.0×107拷贝/μL,灵敏度... 以伪狂犬病毒(PRV)保守的gE基因序列为参考,设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针,结合RotorGene检测系统,建立一种快速定量检测伪狂犬病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为1.0×102-1.0×107拷贝/μL,灵敏度达102拷贝/μLDNA,比常规PCR高10倍。检测的特异性明显高于常规PCR,同时避免了常规PCR因电泳造成的污染。应用该技术检测66例猪组织或鼻咽拭子样品,阳性42份,阳性检出率为63.6%(42/66)。与病毒分离培养、常规PCR相比较结果显示,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,该方法可用于猪场PRV感染的快速定量检测和肉类食品进出口检疫。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 荧光定量PCR 定量检测

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新城疫病毒HB92株NP基因序列测定和分析 被引量：1

16

作者 陈玉栋 潘兹书 +2 位作者 邵华斌 杨峻 张楚瑜 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2004年第1期47-53,共7页

对NDVHB92株NP基因进行了序列测定和分析.结果显示,NDVHB92株NP基因全长1744个核苷酸,开放阅读框共1470个核苷酸,编码489个氨基酸;与其他10株NDVNP基因核苷酸同源性为88.3%～99.1%,氨基酸同源性为91.0%～98.9%;但HB92株与其亲本株QV4的... 对NDVHB92株NP基因进行了序列测定和分析.结果显示,NDVHB92株NP基因全长1744个核苷酸,开放阅读框共1470个核苷酸,编码489个氨基酸;与其他10株NDVNP基因核苷酸同源性为88.3%～99.1%,氨基酸同源性为91.0%～98.9%;但HB92株与其亲本株QV4的核苷酸和氨基酸同源性只有90.3%和95.0%,不如与弱毒和中毒株的高;系统进化分析表明,HB92株与弱毒和中毒株的进化关系更近.以上结果表明,HB92株NP基因在序列上已远离无毒株而趋于向弱毒和中毒株进化. 展开更多

关键词 新城疫病毒 NP基因 序列分析 系统进化关系

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猪瘟病毒E^(rns)在杆状病毒系统中的表达和纯化 被引量：1

17

作者 罗雪莲 潘兹书 《氨基酸和生物资源》 CAS 2010年第4期1-4,共4页

采用Bac-to-Bac表达系统构建重组杆状病毒rAcV-MBP-Erns,感染Sf9昆虫细胞,经免疫荧光及Western blot分析证实MBP-Erns融合蛋白在Sf9细胞中高效表达。表达的MBP-Erns以可溶和包涵体两种形式存在。在Sf9细胞中规模化增殖重组病毒,经Amylos... 采用Bac-to-Bac表达系统构建重组杆状病毒rAcV-MBP-Erns,感染Sf9昆虫细胞,经免疫荧光及Western blot分析证实MBP-Erns融合蛋白在Sf9细胞中高效表达。表达的MBP-Erns以可溶和包涵体两种形式存在。在Sf9细胞中规模化增殖重组病毒,经Amylose Resin亲和层析纯化获得高纯度MBP-Erns,制备的MBP-Erns具有良好免疫原性,这些工作为研究该蛋白的生物学功能和免疫原性奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 Erns 杆状病毒表达系统

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温室鳖池的改进与排污效果的研究

18

作者 黄斌 任长江 +1 位作者 张海宾 潘兹书 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 2000年第1期104-106,共3页

分析了一般温室鳖池的设计弊端及其换水时的排污效果，和换水时对鳖正常活动的干扰．对温室鳖池的设计技术提出了有效的改进措施，从而在减少换水量的同时，提高了排污效果，并克服了换水对鳖活动的干扰．

关键词 温室鳖池 排污效果 改进 管理模式 换水

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Scaffold蛋白介导细胞信号转导专一性的定量分析

19

作者 邹秀芬 许志强 潘兹书 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期283-289,共7页

细胞使用相对有限的蛋白质组分传递大量的信号,因此不同的信号通常由相同的蛋白质组分传递。这些蛋白质组分是如何选择性地参与不同的信号通路,“高保真”地传递不同的刺激,从而产生特定的细胞应答,是目前细胞生物学领域中的研究热点和... 细胞使用相对有限的蛋白质组分传递大量的信号,因此不同的信号通常由相同的蛋白质组分传递。这些蛋白质组分是如何选择性地参与不同的信号通路,“高保真”地传递不同的刺激,从而产生特定的细胞应答,是目前细胞生物学领域中的研究热点和难点之一。鉴于Scaffold蛋白在确保信号转导专一性和保真性中的关键作用,作者基于酵母S.cerevisiae的生物学实验数据,建立了由Scaffold介导的丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)级联信号转导网络的数学模型。并对已报道的工作进行扩展,给出了多条信号级联网络的“专一性(specificity)”和“保真性(fidelity)”的精确数学定义,计算了MAPK信号网络的专一性和保真性的解析解。用这些解定量分析细胞信号转导的专一性和保真性与信号通路各种动力学参数(输入信号的强度和时间、反应率、磷酸化和去磷酸化系数、降解系数等)之间的关系,从理论上阐述Scaffold蛋白通过隔离(sequestration)和选择性激活(selectiveactivation)等机制增强信号转导网络的专一性和保真性。从而有助于加深对细胞信号转导及其调控过程的系统理解,为揭示某些因细胞信号转导异常所致疾病的发生机理,寻找治疗药物提供新的思路。 展开更多

关键词 信号转导 数学模型 专一性 保真性 Scaffold蛋白

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H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备 被引量：4

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作者 罗孟成 陶攀 +1 位作者 肖庚富 潘兹书 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期202-204,209,共4页

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗... 目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达。采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性。结果与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础。 展开更多

关键词 H5N1A型流感病毒 核蛋白NP 原核表达 多克隆抗体

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