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碳青霉烯类和喹诺酮类双重耐药核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立及试剂盒研制
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作者 潘蓓珍 杨继飞 +4 位作者 王岳峰 刘岩 周钰娇 马玉贺 孙丽媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2386-2390,2398,共6页
目的:建立双重核酸胶体金试纸条快速检测鲍曼不动杆菌(Ab)OXA和par C耐药基因的方法并研制试剂盒。方法:采用加热煮沸法提取Ab的DNA,根据NCBI选择Ab的OXA和par C基因序列作为靶基因片段,设计引物并分别用6-FAM、地高辛和生物素进行标记... 目的:建立双重核酸胶体金试纸条快速检测鲍曼不动杆菌(Ab)OXA和par C耐药基因的方法并研制试剂盒。方法:采用加热煮沸法提取Ab的DNA,根据NCBI选择Ab的OXA和par C基因序列作为靶基因片段,设计引物并分别用6-FAM、地高辛和生物素进行标记,研发耐药基因检测试剂,采用双重核酸胶体金试纸条实现快速、可视化检测。采用分子克隆、测序技术克隆阳性对照品评价试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性。结果:水煮法提取的Ab DNA浓度和纯度较好。克隆测序后的质粒DNA与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;试剂盒的特异性良好,仅Ab出现阳性,其他菌属等均为阴性;双重核酸胶体金试纸条中Ab的DNA浓度降到10-3ng/μl时仍出现红色线,与电泳的最低检测限10-2ng/μl相比,灵敏度高出10倍;试剂盒分别在第3、6和9个月进行检测,稳定性较好。结论:本研究建立的Ab双重耐药检测试剂盒可同时检测Ab的OXA和par C耐药基因,具有高灵敏度、强特异性、快速简便等优点,为临床Ab碳青霉烯类和喹诺酮类抗生素耐药检测提供了一种新型快速的检测方法。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 OXA par C 分子克隆 胶体金 核酸试纸条
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耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌生物膜形成与外排泵基因AdeABC表达的相关性研究
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作者 潘蓓珍 刘岩 +3 位作者 宿建胜 杨继飞 姜菲菲 孙丽媛 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期898-902,共5页
目的 研究鲍曼不动杆菌的生物膜形成,以及浮游态和生物膜状态下对外排泵基因AdeABC的相对表达量作用于碳青霉烯类抗生素耐药机制的影响。方法 将菌株经药物敏感性试验分为碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)组和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆... 目的 研究鲍曼不动杆菌的生物膜形成,以及浮游态和生物膜状态下对外排泵基因AdeABC的相对表达量作用于碳青霉烯类抗生素耐药机制的影响。方法 将菌株经药物敏感性试验分为碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)组和碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌(CSAB)组,采用结晶紫染色法检测两组生物膜形成能力;通过微量肉汤稀释法分别测定两组对亚胺培南的MIC、MBIC值,并计算MBIC/MIC的比值进一步比较分析生物膜菌和浮游菌的耐药性;同时提取CRAB组浮游态和生物膜态的RNA,通过RT-qPCR检测外排泵基因AdeABC相对表达量。结果 35株标本的生物膜阳性率为91.43%,其中CRAB组生物膜的阳性检出率为92%,生物膜阴性、弱阳性、阳性和强阳性分别占8%、48%、36%和8%。MBIC/MIC比值显示,形成生物膜后,鲍曼不动杆菌的耐药能力呈现不同程度的增加,CSAB组的耐药增加幅度以2倍的菌株最多;CRAB组的增加幅度以4倍的菌株最多。同时CRAB组RT-qPCR结果显示,生物膜较浮游态相比,外排泵基因adeA和adeB的相对表达量明显增高(P<0.01),外排泵基因adeC相对表达量则无差异(P>0.05)。结论 鲍曼不动杆菌碳青霉烯类耐药与生物膜密切相关,且生物膜态的鲍曼不动杆菌较浮游态可促进外排泵基因AdeABC的表达从而增强碳青霉烯类抗生素的耐药性。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 亚胺培南 生物膜 外排泵
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呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价 被引量：3
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作者 姜菲菲 宋伶俐 +3 位作者 潘蓓珍 王岳峰 李昊宇 孙丽媛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期222-230,共9页
目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行... 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。 展开更多
关键词 呼吸道感染 真菌 胶体金 核酸试纸条
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平贝母PCR-核酸试纸条快速检测方法的建立和评价
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作者 马玉贺 商聪慧 +7 位作者 马秋贺 李涛 刘悦 潘蓓珍 高丽君 李明成 夏薇 曲永梅 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1773-1778,共6页
本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复... 本研究针对平贝母的ITS2序列设计特异性鉴别引物,优化反应体系及条件,构建PCR-核酸试纸条实现可视化检测平贝母。通过分子克隆及测序技术,构建平贝母DNA阳性对照品,制定质量标准。对建立的方法进行性能评价,检测其灵敏度、特异性和重复性,对市售样品进行真伪鉴定。结果显示,基于ITS2序列可对平贝母及其混伪品进行区分。正品平贝母PCR产物滴定于试纸条上显示T、C线两条带,伪品与阴性对照只显示C线一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合。特异性为100%,PCR-核酸试纸条灵敏度可达0.1 ng·μL^(-1),高于凝胶电泳检测10倍。16个平贝母市售样品中11个合格,5个不合格。综上,本研究建立的平贝母PCR-核酸试纸条检测方法特异、快速、精准、可视化,可为平贝母检测提供新的技术思路。 展开更多
关键词 平贝母 分子克隆 ITS2序列 核酸试纸条 可视化
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