目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用...目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用RT-qPCR、Western blot检测MLCK敲除效率;流式细胞术检测MLCK敲除对细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测MLCK敲除对细胞凋亡的影响。结果DNA测序显示在sgRNA序列识别处,MLCK碱基序列发生了缺失或替换;RT-qPCR和Western blot显示MLCK敲除细胞株mRNA和蛋白质水平低于对照组(P<0.0001);流式细胞术实验显示敲除MLCK对FaDu细胞的周期无明显变化,但凋亡率增加(P<0.0001);Western blot检测显示,MLCK敲除组Bax/Bcl-2(P<0.0001)和Cleaved Caspase-3/Caspase-3(P=0.0007)增加。结论敲除MLCK诱导细胞凋亡,但具体机制需进一步研究。展开更多
