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金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建
1
作者 石姚佳 田湉 +3 位作者 熊廷蓉 王于 张笑恺 邹全明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期815-821,共7页
目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够... 目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列。金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况。最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果。结果通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h。筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能。结论成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 巨噬细胞 胞内感染 分泌蛋白
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印苦楝内酯靶向RNF114治疗金黄色葡萄球菌急性肺炎
2
作者 孙慧 田湉 +4 位作者 熊廷蓉 邹全明 张笑恺 杨宪 王于 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1353-1360,共8页
目的探究印苦楝内酯(nimbolide,NIM)治疗金黄色葡萄球菌急性肺炎作用机制。方法通过气管插管构建小鼠金葡菌急性肺炎模型,NIM治疗后,观察小鼠生存率差异,平板培养分析肺部荷菌量变化,ELISA检测肺组织炎性细胞因子表达差异;ELISA及Wester... 目的探究印苦楝内酯(nimbolide,NIM)治疗金黄色葡萄球菌急性肺炎作用机制。方法通过气管插管构建小鼠金葡菌急性肺炎模型,NIM治疗后,观察小鼠生存率差异,平板培养分析肺部荷菌量变化,ELISA检测肺组织炎性细胞因子表达差异;ELISA及Western Blot检测腹腔原代巨噬细胞感染金葡菌后,NIM对炎症细胞因子的表达水平及炎症通路激活的影响;慢病毒shRNA敲低原代腹腔巨噬细胞RNF114蛋白水平,通过ELISA及Western Blot探究NIM是否通过RNF114抑制炎症反应。结果金葡菌感染小鼠肺部后可导致急性死亡,NIM显著提高了小鼠生存率,下调小鼠肺部炎症细胞因子水平,但短期内不影响金葡菌肺部定植;巨噬细胞感染结果表明,NIM可能通过调控RNF114功能,下调ERK的磷酸化水平抑制MAPK通路激活,进而抑制炎症细胞因子的表达。结论NIM可能通过调控巨噬细胞RNF114功能,抑制MAPK通路激活进而抑制小鼠肺部炎症细胞因子的表达,最终抑制金葡菌急性肺部高炎症导致的小鼠死亡。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 Nimbolide 巨噬细胞 RNF114
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验证性实验中的探索性教学——以RNA的细胞化学—Brachet反应为例 被引量：1
3
作者 庞敏 胡凯 熊廷蓉 《安徽农学通报》 2017年第5期135-136,共2页
细胞生物学实验是学生了解细胞相关的知识和技能最直接有效的手段。该文以RNA的细胞化学—Brachet反应的原理为基础,在验证性实验教学的基础上,经过内容的处理和过程的改进后增加了验证性实验的探究趣味,对帮助学生提高创新思维能力、... 细胞生物学实验是学生了解细胞相关的知识和技能最直接有效的手段。该文以RNA的细胞化学—Brachet反应的原理为基础,在验证性实验教学的基础上,经过内容的处理和过程的改进后增加了验证性实验的探究趣味,对帮助学生提高创新思维能力、语言表达能力、问题解决能力都起到了非常积极的作用。在此基础上总结出:验证性实验与探究性实验两者各有优势,对学生教学中有着各自不可替代的作用。 展开更多
关键词 RNA 验证性实验 探索性实验
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金黄色葡萄球菌分泌蛋白LukG抑制巨噬细胞炎症反应 被引量：1
4
作者 高琳 刘璐璇 +3 位作者 熊廷蓉 张笑恺 张睿 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期645-651,共7页
目的利用同源重组法构建金黄色葡萄球菌LukG(leukotoxin G)基因敲除株,探究LukG缺失对金黄色葡萄球菌刺激巨噬细胞炎症反应的影响。方法用双荧光素酶报告基因检测LukG蛋白对NF-κB通路的作用;利用USA300野生株和LukG敲除株(ΔLukG/USA3... 目的利用同源重组法构建金黄色葡萄球菌LukG(leukotoxin G)基因敲除株,探究LukG缺失对金黄色葡萄球菌刺激巨噬细胞炎症反应的影响。方法用双荧光素酶报告基因检测LukG蛋白对NF-κB通路的作用;利用USA300野生株和LukG敲除株(ΔLukG/USA300)感染小鼠原代腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA转录水平,Western blot检测IκB-α及p-p65表达水平;利用USA300和ΔLukG/USA300气管插管感染小鼠肺部,观察生存率差异,稀释涂板法测定肺部荷菌量,HE染色法观察肺组织病理学变化,ELISA法检测肺组织匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量。结果分泌蛋白LukG能够明显抑制NF-κB通路的激活;感染原代腹腔巨噬细胞后;相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组TNF-α、IL-6和IL-1β的转录水平升高(P<0.05),IκB-α表达下调,p-p65表达上调;气管插管感染小鼠后,相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组生存率提高(P<0.05),肺组织荷菌量降低(P<0.05),病变程度减轻,炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达量升高(P<0.05)。结论金黄色葡萄球菌可能通过分泌LukG蛋白抑制巨噬细胞NF-κB通路进而下调炎性细胞因子的表达,达成免疫逃逸进而成功感染宿主。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 LukG 巨噬细胞 NF-ΚB通路
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施硫调节基质pH值对蓝莓幼苗生长、养分含量的影响 被引量：10
5
作者 黄科 孙向成 +3 位作者 何光明 熊廷蓉 刘奕清 邹勇 《重庆师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期166-168,F0003,共4页
蓝莓（Vacciniumspp．）属杜鹃花科（Ericaeae）越橘属（Vaccinium）小浆果。蓝莓果实中花青素含量高，有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目、抗癌等独特功效。
关键词 蓝莓 硫 发育 营养成分
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