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题名马铃薯卷叶病毒CP基因水溶性原核表达的研究
被引量：2
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作者
牛倩雅
辛佳
王晶珊
杨煜
李广存
郭宝太
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机构
青岛农业大学生命科学学院
山东省农业科学院蔬菜花卉研究所
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出处
《中国蔬菜》
北大核心
2015年第12期28-32,共5页
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基金
山东省农业产业体系薯类创新团队遗传育种岗位基金(SDAIT-10-011-03)
济南市国际科技合作计划项目(2014003054)
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文摘
采用两种策略增强了马铃薯卷叶病毒(PLRV)CP基因的水溶性原核表达。首先,用5种可表达出分子伴侣的质粒分别转化重组菌TOP10(p BAD-LRCP),获得了既含p BAD-LRCP又含分子伴侣质粒的转化子;诱导转化子中PLRVCP基因与分子伴侣基因同时表达,SDS-PAGE结果表明,从转化子提取的水溶性蛋白中有明显的PLRV重组CP条带,即分子伴侣增进了重组CP的水溶性表达。其次,将PLRV-CP基因定向插入p ColdⅠ中构建了该基因的冷激诱导原核表达载体p Cold-LRCP,15℃、IPTG诱导24h,SDS-PAGE分析表明,从重组菌BL21(p Cold-LRCP)提取的上清蛋白中有明显的PLRV重组CP条带。试验结果表明,分子伴侣与冷激蛋白基因csp A的启动子均可提高PLRV-CP基因的水溶性表达,且后者的表达水平高于前者。
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关键词
马铃薯卷叶病毒
CP基因
分子伴侣
冷激蛋白启动子
原核表达
重组蛋白
水溶性
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Keywords
Potato leafrollexpression
Recombinant protein
virus
CP gene
Chaperone
Cold-shock protein promoter
ProkaryotieWater-soluble
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分类号
S435.32
[农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名坛紫菜TPS基因的克隆及其原核表达
被引量：3
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作者
邓淑贞
王斌
高磊
牛倩雅
刘涛
翁曼丽
郭宝太
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机构
青岛农业大学生命科学学院
中国海洋大学海洋生命学院
中国科学院遗传与发育学研究所
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出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期66-73,共8页
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基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08009-100B)
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文摘
以叶状体总DNA为模板,用3对DNA引物进行PCR扩增,获得了坛紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PhTPS)3个重叠的片段,大小分别为1.3,1.1,0.7 kb。用pMD18-T载体克隆这些片段,经测序与序列拼接获得了该基因完整的ORF序列,其长度为2 727 bp。在已经构建条斑紫菜TPS基因原核表达载体pET22b-PyTPS的基础上,用PhTPS基因替代该表达载体中的PyTPS基因,获得了PhTPS基因的原核表达载体pET22b-PhTPS。重组菌BL21(pET22b-PhTPS)经IPTG诱导,SDS-PAGE显示获得了约100 kDa的特异性蛋白条带;目测及OD600的测定结果表明重组菌的耐盐性明显高于对照菌,即PhTPS基因的表达提高了重组菌的耐盐性。为利用PhTPS基因进行作物耐盐等抗逆转基因改良提供了依据。
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关键词
坛紫菜
TPS基因
原核表达
重组菌
耐盐性
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Keywords
Porphyra haitanensis
TPS gene
Prokaryotic expression
Recombinant E. coli
Salt tolerance
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分类号
Q781
[生物学—分子生物学]
P735
[天文地球—海洋生物学]
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题名条斑紫菜TPS基因TPP结构域的缺失突变
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作者
王晓杰
栾淑莉
李怡君
牛倩雅
郭宝太
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机构
青岛农业大学生命科学学院
青岛欧易生物科技有限公司
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出处
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2017年第3期196-199,215,共5页
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基金
山东省农业产业体系薯类创新团队遗传育种岗位基金(SDAIT-10-022-03)
山东省良种工程农业生物资源创新与利用项目(PTBR2013)
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文摘
条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶(TPS)基因(PyTPS)具有TPS及TPP双结构域,以该基因的原核表达载体pET22b-PyTPS为材料,利用双酶切片段替换法对该基因TPP结构域磷酸酶基序的编码框Box1与Box2进行了缺失突变。第一,用715bp缺失Box1的KpnI-EcoRI人工合成片段替换pET22b-PyTPS中相应的片段,获得了缺失Box1的突变基因PyTPS-Box1。第二,用661bp缺失Box2的EcoRI-HindII片段进行替换,获得了缺失Box2的突变基因PyTPS-Box2。第三,在缺失Box1后,再通过替换缺失Box2,获得了同时缺失Box1与Box2的突变基因PyTPS-Box1-Box2。本研究既获得了三种突变基因,又获得了其原核表达载体,为研究PyTPS基因的编码活性提供了材料,奠定了基础。
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关键词
条斑紫菜
TPS基因
TPP结构域
缺失突变
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Keywords
Porphyra yezoensis
TPS gene
TPP domain
deletion mutation
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分类号
Q319
[生物学—遗传学]
Q781
[生物学—分子生物学]
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