高良姜与混淆品大高良姜的rDNA ITS区序列分析 被引量：8

1

作者 牛宪立 姬可平 +3 位作者 唐立波 刘星 吕国庆 吴群 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期199-202,共4页

利用改良的CTAB法提取药材的基因组DNA,运用通用引物对高良姜及混淆品大高良姜rDNAITS区进行PCR扩增,对产物进行直接测序并对测序结果进行聚类分析。结果表明,经ClustalX软件序列比对后发现二者ITS的长度范围在568～576bp,有32处变异位... 利用改良的CTAB法提取药材的基因组DNA,运用通用引物对高良姜及混淆品大高良姜rDNAITS区进行PCR扩增,对产物进行直接测序并对测序结果进行聚类分析。结果表明,经ClustalX软件序列比对后发现二者ITS的长度范围在568～576bp,有32处变异位点,主要集中在ITS1区和ITS2区,聚类分析表明高良姜与大高良姜各聚为一支,表明高良姜与大高良姜两种植物碱基序列有较大的差异。 展开更多

关键词 高良姜 RDNA ITS区序列

下载PDF 职称材料

白木香rDNA ITS序列测序鉴定的初步研究 被引量：14

2

作者 牛宪立 姬可平 吕国庆 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期167-169,共3页

以改良的CTAB法提取白木香的基因组DNA,运用通用引物对其rDNA的ITS区进行PCR扩增,并对扩增产物分别进行直接测序和克隆测序。结果表明,白木香rDNA的ITS区序列存在稳定而又明显的差异,白木香rDNA序列差异可能主要集中在ITS1区,存在5处变... 以改良的CTAB法提取白木香的基因组DNA,运用通用引物对其rDNA的ITS区进行PCR扩增,并对扩增产物分别进行直接测序和克隆测序。结果表明,白木香rDNA的ITS区序列存在稳定而又明显的差异,白木香rDNA序列差异可能主要集中在ITS1区,存在5处变异位点,ITS2区存在1处变异位点。 展开更多

关键词 白木香 RDNA ITS区序列

下载PDF 职称材料

黄连浸出液对脑缺血小鼠海马区细胞总蛋白和SOD的影响 被引量：3

3

作者 牛宪立 苏良辰 +3 位作者 姬可平 王晓明 魏妮娜 周放林 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期291-295,共5页

通过黄连浸出液对脑缺血小鼠灌胃,测定海马区细胞总蛋白和SOD的含量变化,探讨黄连对缺血性脑损伤的保护和修复作用。对36只小鼠随机分为实验组、对照组和正常组,以黄连水浸出液(0.1mg/g)灌胃实验组,分别于不同时间段取小鼠海马组织制备... 通过黄连浸出液对脑缺血小鼠灌胃,测定海马区细胞总蛋白和SOD的含量变化,探讨黄连对缺血性脑损伤的保护和修复作用。对36只小鼠随机分为实验组、对照组和正常组,以黄连水浸出液(0.1mg/g)灌胃实验组,分别于不同时间段取小鼠海马组织制备组织匀浆,采用BCA法和WST-1法分别测总蛋白含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果显示实验组海马组织中的总蛋白含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力高于对照组低于正常组(p<0.05);在24h时间段实验组两项指标与对照组差距达最高值。由此推测黄连浸出液对提高小鼠脑缺血海马组织总蛋白含量和SOD活力有一定的作用。 展开更多

关键词 黄连 小鼠 海马细胞 缺血性脑损伤 SOD

下载PDF 职称材料

纤维素酶法提取天花粉多糖的工艺优化 被引量：4

4

作者 牛宪立 姬可平 +2 位作者 钟静君 魏妮娜 彭丽萍 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第7期164-166,171,共4页

为综合利用天花粉,在单因素试验的基础上,采取正交试验,以天花粉多糖的得率为指标,对影响天花粉多糖提取的酶用量、pH、提取温度和提取时间进行优化。结果表明:各因素对天花粉多糖提取率影响的顺序为酶用量>提取温度>pH>提取... 为综合利用天花粉,在单因素试验的基础上,采取正交试验,以天花粉多糖的得率为指标,对影响天花粉多糖提取的酶用量、pH、提取温度和提取时间进行优化。结果表明:各因素对天花粉多糖提取率影响的顺序为酶用量>提取温度>pH>提取时间。其最佳工艺是提取温度60℃,酶用量0.2%,pH为5.0,提取1.5h,该条件下的天花粉多糖得率为5.48%。 展开更多

关键词 天花粉 多糖 纤维素酶 提取工艺

下载PDF 职称材料

rDNA ITS区序列分子标记技术在植物学研究中的应用 被引量：23

5

作者 牛宪立 姬可平 +1 位作者 吴群 吕国庆 《生物信息学》 2009年第4期268-271,共4页

在植物学研究中,人们越来越多地采用核糖体DNA内转录间隔区(ITS)作为分子标记。本文对近10年来rDNA ITS序列在植物系统发育、分类与鉴定、种质资源以及病虫害的鉴定与防治中的应用等方面的研究进展进行了综述,并对ITS序列的应用前景进... 在植物学研究中,人们越来越多地采用核糖体DNA内转录间隔区(ITS)作为分子标记。本文对近10年来rDNA ITS序列在植物系统发育、分类与鉴定、种质资源以及病虫害的鉴定与防治中的应用等方面的研究进展进行了综述,并对ITS序列的应用前景进行了初步探讨。 展开更多

关键词 RDNA 内转录间隔区(ITS) 分子标记技术 植物鉴定

下载PDF 职称材料

3种药用红树植物rDNA ITS序列初步研究 被引量：5

6

作者 牛宪立 吴群 姬可平 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期109-110,116,共3页

应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA... 应用改良CTAB法分别提取生长于珠海和海南的3种药用红树植物秋茄、老鼠簕和桐花树的基因组DNA,以真核生物rDNA ITS区的通用引物分别对其rDNA ITS区进行nPCR扩增及测序,并对测序结果进行对位排列。结果表明,不同来源的药用红树植物的rDNA ITS序列上存在扩增碱基差异,rDNA ITS测序结果可作为鉴定药用红树植物种质资源的分子标记之一。 展开更多

关键词 RDNA 红树植物 nPCR 测序 种质资源

下载PDF 职称材料

贵州苗药头花蓼rDNA ITS序列分析 被引量：2

7

作者 牛宪立 梅露露 +2 位作者 姬可平 王晓明 魏妮娜 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期143-145,共3页

以改良CTAB法提取头花蓼的基因组DNA，采用通用引物对不同来源头花蓼的rDNAITS序列进行PCR扩增、测序和聚类分析。结果表明，不同来源头花蓼有13处变异位点，序列长度变异范围为661--666bp，序列差异主要集中在ITSl区与ITS2区。rDNAITS... 以改良CTAB法提取头花蓼的基因组DNA，采用通用引物对不同来源头花蓼的rDNAITS序列进行PCR扩增、测序和聚类分析。结果表明，不同来源头花蓼有13处变异位点，序列长度变异范围为661--666bp，序列差异主要集中在ITSl区与ITS2区。rDNAITS序列可作为分子水平鉴定头花蓼的参考依据。 展开更多

关键词 头花蓼 RDNA ITS序列 聚类分析

下载PDF 职称材料

贵州苗药头花蓼的rbcL序列分析 被引量：2

8

作者 牛宪立 魏妮娜 +2 位作者 梅露露 彭冬冬 曾婷婷 《贵州农业科学》 CAS 2018年第4期111-113,共3页

为头花蓼的分子生物学鉴定提供依据,用改良的CTAB法提取贵州不同产地野生和栽培的头花蓼基因组DNA,采用通用引物对不同来源的头花蓼的rbcL序列进行PCR扩增,对扩增产物进行碱基序列测定,运用Clustal X和DNAMAN软件对目的序列进行序列比... 为头花蓼的分子生物学鉴定提供依据,用改良的CTAB法提取贵州不同产地野生和栽培的头花蓼基因组DNA,采用通用引物对不同来源的头花蓼的rbcL序列进行PCR扩增,对扩增产物进行碱基序列测定,运用Clustal X和DNAMAN软件对目的序列进行序列比对和聚类分析。结果表明:改良的CTAB法可有效提取植物总DNA(OD260/OD280为1.1~2.0),rbcL序列长度为979~985bp,目的序列具有高度同源性;测序结果提交NCBI获得GenBank序列号为GP215865-870。rbcL序列信息可作为分子水平鉴定头花蓼的参考依据。 展开更多

关键词 头花蓼 RBCL序列 聚类分析

下载PDF 职称材料

贵州山慈菇及混伪品ITS序列分析 被引量：1

9

作者 牛宪立 魏妮娜 +1 位作者 姬可平 谢奎 《遵义医学院学报》 2018年第3期309-313,319,共6页

目的提取贵州山慈菇及混伪品的总DNA后,并对ITS序列进行PCR扩增,测序,采用序列对比软件对山慈菇及混伪品的ITS进行聚类分析,寻找出山慈菇的变异位点,为山慈菇的基源鉴定和品质评价提供分子依据。方法运用改良CTAB法提取总DNA,PCR扩增IT... 目的提取贵州山慈菇及混伪品的总DNA后,并对ITS序列进行PCR扩增,测序,采用序列对比软件对山慈菇及混伪品的ITS进行聚类分析,寻找出山慈菇的变异位点,为山慈菇的基源鉴定和品质评价提供分子依据。方法运用改良CTAB法提取总DNA,PCR扩增ITS序列后送入公司测序并作序列同源性分析。结果贵州山慈菇及混伪品的ITS、ITS2序列经比对后,存在变异位点。山慈菇与4个金果榄比较,分别有208个、206个、205个、206个突变位点,与2个青牛胆比较分别有187个、194个突变位点,与白及比较有70个突变位点;从ITS序列构建的NJ系统发育树图显示,山慈菇与其混伪品白及、金果榄之间差异较为显著,系统发育树也显示它们聚到不同的分枝上。结论 ITS区序列为中药真品鉴定及道地药材的质量鉴定奠定了理论基础。 展开更多

关键词 山慈菇 变异位点 ITS序列 分子标记 分子鉴定

下载PDF 职称材料

黄芪种子rRNA基因间隔区序列测定及分析

10

作者 牛宪立 吴群 姬可平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第24期13162-13163,共2页

[目的]通过对黄芪种子进行rRNA基因内转录间隔区碱基序列的测定,建立其分子水平的鉴定标记。[方法]以改良CTAB法提取黄芪种子DNA,利用合成的通用引物对其rRNA基因内转录间隔区进行nPCR扩增,将扩增产物进行碱基序列测定。[结果]琼脂糖凝... [目的]通过对黄芪种子进行rRNA基因内转录间隔区碱基序列的测定,建立其分子水平的鉴定标记。[方法]以改良CTAB法提取黄芪种子DNA,利用合成的通用引物对其rRNA基因内转录间隔区进行nPCR扩增,将扩增产物进行碱基序列测定。[结果]琼脂糖凝胶电泳证实黄芪种子中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物存在,经测序后得到了黄芪种子rRNA基因内转录间隔区的碱基序列。[结论]rRNA基因内转录间隔区碱基测序技术可作为分子水平鉴定植物性中药材的又一有效途径。 展开更多

关键词 黄芪 RRNA基因 nPCR 测序 分子鉴定

下载PDF 职称材料

动物性中药材地龙DNA条形码初步研究 被引量：19

11

作者 吕国庆 牛宪立 姬可平 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期114-116,共3页

利用通用引物对中药材地龙的COⅠ、16S rDNA片断进行PCR扩增、测序、分析,并构建系统进化树,将获得的中药材地龙COⅠ、16S rDNA片断序列提交到GenBank中的DNA Barcoding数据库进行分析。结果显示:(1)中药材地龙COⅠ片断的长度为682 bp,... 利用通用引物对中药材地龙的COⅠ、16S rDNA片断进行PCR扩增、测序、分析,并构建系统进化树,将获得的中药材地龙COⅠ、16S rDNA片断序列提交到GenBank中的DNA Barcoding数据库进行分析。结果显示:(1)中药材地龙COⅠ片断的长度为682 bp,其中变异位点(SNP多态位点)有179个,多态位点约占片断总长的26%,碱基A+T的含量为58.8%、G+C的含量为41.2%。16S rDNA片断的长度为503 bp,其中变异位点有70个,多态位点约占片断总长的14%,碱基A+T的含量为62.4%、G+C的含量为37.6%;(2)获得COⅠ序列的登录号为HQ405769-HQ405776,16S rDNA序列的登录号为HQ405777-HQ405783;(3)中药材地龙DNA中COⅠ序列的基因多态性比16S rDNA序列更显著,适合做为中药材地龙的DNA条形码。 展开更多

关键词 中药材 地龙 DNA条形码 线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ) 16SrRNA基因(16SrDNA)

下载PDF 职称材料

ITS序列作为DNA条形码在中药鸡骨草中的应用 被引量：6

12

作者 王晓明 牛宪立 +1 位作者 魏妮娜 姬可平 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期603-608,共6页

以广西和广东的九种中药鸡骨草（Abrus cantoniensis）为材料,利用改良的 CTAB 法进行总 DNA 的提取,应用通用引物对其 rDNA 的内转录间隔区（ITS）序列进行 PCR 扩增,得到9种植物的 ITS 序列,对所得序列进行分析并申请登录到 GenBank,... 以广西和广东的九种中药鸡骨草（Abrus cantoniensis）为材料,利用改良的 CTAB 法进行总 DNA 的提取,应用通用引物对其 rDNA 的内转录间隔区（ITS）序列进行 PCR 扩增,得到9种植物的 ITS 序列,对所得序列进行分析并申请登录到 GenBank,已获得登录号.结果表明,序列的全长为692~702 bp,其中 ITS2为211~212 bp;中药鸡骨草的混淆品小叶黑面神（Breynia vitis-idaea）和其同科同属植物相思子（Abrus precato-rius）的 ITS2序列与中药鸡骨草差异很大;用遗传距离和建立邻接树这两种方法对序列进行分析,都证明了ITS2序列可以作为豆科植物的 DNA 条形码序列;ITS2序列的种间差异为豆科植物的种间鉴别和建立比较合理的 DNA 条形码体系提供较好的依据. 展开更多

关键词 中药 鸡骨草 ITS序列 DNA条形码

下载PDF 职称材料

人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化 被引量：3

13

作者 邵敏 王新颖 +4 位作者 张青峰 牛宪立 王燕 周鹤峰 葛正龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1629-1632,共4页

目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对... 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。 展开更多

关键词 蔗糖酶 Α-葡萄糖苷酶 大肠杆菌 基因表达 蛋白纯化

原文传递

建立我国中药材DNA条形码数据库方法的探讨和前景展望 被引量：4

14

作者 吕国庆 姬可平 +2 位作者 牛宪立 吴群 梅露露 《新乡医学院学报》 CAS 2010年第4期416-418,共3页

中药鉴定是中药学的核心。我国的中药材种类繁多,资源丰富,由于来源复杂,真伪难辨,传统的中药鉴定技术有各种不足。近些年出现的DNA条形码可以很好地应用于中药材的鉴定。建立一个中药材的DNA条形码数据库对我国中药材鉴定是非常有益的... 中药鉴定是中药学的核心。我国的中药材种类繁多,资源丰富,由于来源复杂,真伪难辨,传统的中药鉴定技术有各种不足。近些年出现的DNA条形码可以很好地应用于中药材的鉴定。建立一个中药材的DNA条形码数据库对我国中药材鉴定是非常有益的,可以极大地提高中药材的鉴定水平,促进中药的现代化。DNA条形码在动物中采用线粒体基因已经确定,但是植物中还没有广泛认同的条形码标准片段。由于中药材绝大多数是植物,目前植物类中药材条形码的研究倾向于用一种或多种条形码联合应用。 展开更多

关键词 中药鉴定 DNA条形码 DNA分子鉴定技术 细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ 叶绿体基因

下载PDF 职称材料

matK序列作为DNA条形码在中药鸡骨草中的应用 被引量：5

15

作者 王晓明 姬可平 +1 位作者 牛宪立 魏妮娜 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期132-134,共3页

采用改良的CTAB法提取来自不同地区的9种中药鸡骨草的总DNA，利用豆科植物通用引物对matK序列进行PCR扩增，将扩增得到的序列提交到GeneBank中获得登录号。最后将所有序列进行聚类分析，计算种问及种内遗传距离．建立系统发育邻接树。... 采用改良的CTAB法提取来自不同地区的9种中药鸡骨草的总DNA，利用豆科植物通用引物对matK序列进行PCR扩增，将扩增得到的序列提交到GeneBank中获得登录号。最后将所有序列进行聚类分析，计算种问及种内遗传距离．建立系统发育邻接树。结果表明，marK序列的全长为889-895bp；不同植物之间的遗传距离较大，同种植物之间的遗传距离较小，且最大的种内遗传距离小于最小的种间遗传距离。因此，matK序列可以作为豆科植物的DNA条形码。 展开更多

关键词 MATK序列 DNA条形码 鸡骨草

下载PDF 职称材料

不同地区毛鸡骨草与鸡骨草rbcL序列差异分析 被引量：2

16

作者 魏妮娜 王晓明 +1 位作者 牛宪立 姬可平 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期137-139,共3页

应用改良CTAB法提取不同产地毛鸡骨草与鸡骨草的总DNA,PCR扩增其rbcL序列并测序,应用MEGE5.1软件作序列同源性分析,计算遗传距离并构建系统发育邻接树。结果表明,毛鸡骨草与鸡骨草各具为一支,有亲缘关系,可见rbcL序列可成功区分两者。因... 应用改良CTAB法提取不同产地毛鸡骨草与鸡骨草的总DNA,PCR扩增其rbcL序列并测序,应用MEGE5.1软件作序列同源性分析,计算遗传距离并构建系统发育邻接树。结果表明,毛鸡骨草与鸡骨草各具为一支,有亲缘关系,可见rbcL序列可成功区分两者。因此,rbcL序列可以作为鸡骨草的DNA条形码。 展开更多

关键词 鸡骨草 毛鸡骨草 RBCL序列

下载PDF 职称材料

广东孑遗植物水松rDNA ITS序列分析 被引量：1

17

作者 彭莉萍 牛宪立 +2 位作者 姬可平 魏妮娜 王燕 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第10期217-220,共4页

为鉴定广东水松的遗传多样性,应用改良CTAB法分别提取广东不同地区的孑遗植物水松基因组DNA,以真核生物rDNA ITS序列的通用引物分别对其ITS区进行PCR扩增及测序后进行比对、分析,将得到的序列申请登录入GenBank核苷酸数据库。结果表明... 为鉴定广东水松的遗传多样性,应用改良CTAB法分别提取广东不同地区的孑遗植物水松基因组DNA,以真核生物rDNA ITS序列的通用引物分别对其ITS区进行PCR扩增及测序后进行比对、分析,将得到的序列申请登录入GenBank核苷酸数据库。结果表明：广东地区不同来源水松的rDNA ITS序列长度均为988bp,相互之间仅有2~3个碱基差异,说明该序列可作为从分子水平鉴别水松种质资源的参考标记。珠海、中山和广州地区孑遗植物水松GenBank核苷酸数据库登录号分别是KF977874、KF977876和KF977875。 展开更多

关键词 孑遗植物 水松 PCR ITS 广东

下载PDF 职称材料

硕士研究生分子生物学实验技术教学改革初探 被引量：2

18

作者 邵敏 王燕 +2 位作者 吕延成 钟世军 牛宪立 《基础医学教育》 2012年第4期284-286,共3页

为提高硕士研究生分子生物学实验技术的教学质量,在教学内容的选择、教学方法的改进、实验设施的分配与利用、考核体制的建立等方面进行改革,取得了较好效果,为研究生今后的科学研究和实际应用奠定基础。

关键词 分子生物学 实验教学 教学改革 硕士研究生

下载PDF 职称材料

广东淇澳岛3种红树rDNA ITS序列分析 被引量：1

19

作者 彭莉萍 牛宪立 +1 位作者 姬可平 王燕 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第11期29-32,共4页

为红树林植物引进优良种质资源,用改良CTAB法分别提取生长于广东珠海淇澳岛红树林湿地公园的3种红树基因组DNA,以真核生物rDNA ITS序列的通用引物分别对其ITS区进行PCR扩增后测序,对测序结果进行比对、分析。结果表明,不同来源红树的rDN... 为红树林植物引进优良种质资源,用改良CTAB法分别提取生长于广东珠海淇澳岛红树林湿地公园的3种红树基因组DNA,以真核生物rDNA ITS序列的通用引物分别对其ITS区进行PCR扩增后测序,对测序结果进行比对、分析。结果表明,不同来源红树的rDNA ITS序列存在扩增碱基差异,无瓣海桑、尖叶卤蕨和猫尾木的rDNA ITS序列长度分别为731bp、615bp和707bp,将3种红树植物ITS序列测定结果提交到GenBank,获得了登录号分别为KJ161168,KJ161166,KJ161167。 展开更多

关键词 红树 PCR ITS序列

下载PDF 职称材料

中药材地龙DNA提取方法的比较分析 被引量：1

20

作者 吕国庆 姬可平 +1 位作者 牛宪立 梅露露 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第5期2629-2630,共2页

以地龙为例,对中药材DNA的几种常用提取方法进行了比较分析,为中药的鉴定提供参考。

关键词 中药材 地龙 DNA提取 比较

下载PDF 职称材料