家蚕不同茧色品种中cbp基因的结构和表达分析 被引量：6

1

作者 牛艳山 陈亚东 +5 位作者 席建 司马杨虎 段雪梅 梁海丽 甘丽萍 徐世清 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期942-950,共9页

类胡萝卜素结合蛋白(CBP)是唯一已被确认与家蚕黄色茧形成密切相关的主要蛋白质。文章选择12个有色茧和白茧蚕品种,调查了cbp基因结构、转录产物mRNA类型和丝腺类胡萝卜素紫外可见光吸收特征与其茧色的关系。结果表明:黄色茧蚕品种含有... 类胡萝卜素结合蛋白(CBP)是唯一已被确认与家蚕黄色茧形成密切相关的主要蛋白质。文章选择12个有色茧和白茧蚕品种,调查了cbp基因结构、转录产物mRNA类型和丝腺类胡萝卜素紫外可见光吸收特征与其茧色的关系。结果表明:黄色茧蚕品种含有2种或3种cbp基因结构,同时转录具有CBP功能性的完整mRNA和缺少第2外显子的mRNA;绿茧品种间cbp基因结构存在差异,转录缺少第2外显子的mRNA;白茧蚕品种cbp基因只有1种结构,转录缺少第2外显子的mRNA。文章在黄茧品种中新发现的cbp基因第1内含子序列可能具有茧色品种特异性,家蚕黄茧品种丝腺的紫外可见吸收光谱特征显著区别于绿茧和白茧品种,cbp基因的结构和表达特征与家蚕茧色密切相关。 展开更多

关键词 家蚕 天然彩色茧 类胡萝卜素结合蛋白(CBP) 基因结构和表达

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家蚕cbp基因的表达与幼虫体内类胡萝卜素的水平相关 被引量：3

2

作者 牛艳山 司马杨虎 徐世清 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第36期17986-17989,共4页

[目的]调查家蚕幼虫期类胡萝卜素水平的变化及cbp基因的mRNA表达特征。[方法]选取黄茧和绿茧品种家蚕3、4和5龄期幼虫的丝腺,参照Takara Trizol plus试剂说明提取总RNA,根据文献提供的cbp基因序列设计特异引物,采用RT-PCR方法调查不同... [目的]调查家蚕幼虫期类胡萝卜素水平的变化及cbp基因的mRNA表达特征。[方法]选取黄茧和绿茧品种家蚕3、4和5龄期幼虫的丝腺,参照Takara Trizol plus试剂说明提取总RNA,根据文献提供的cbp基因序列设计特异引物,采用RT-PCR方法调查不同茧色品种家蚕幼虫不同龄期丝腺中cbp基因mRNA的表达特征和主要组织中类胡萝卜素的水平变化。[结果]cbp基因的mRNA表达,在3和5龄期各品种家蚕均维持一定水平,但在4龄期表达量很低或不表达。同一组织的紫外可见光谱扫描结果显示,4龄期家蚕丝腺类胡萝卜素的含量极低,不同茧色品种cbp基因的mRNA表达也存在差异,绿茧品种仅表达1个缺失第2外显子的转录本,而所有黄色茧品种还可表达1个序列完整的转录本。[结论]家蚕体内类胡萝卜素的水平与cbp基因mRNA表达相关。 展开更多

关键词 天然彩色茧 类胡萝卜素结合蛋白 类胡萝卜素

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家蚕天然有色茧品种间色素差异及烘茧对茧层色素的影响 被引量：5

3

作者 席建 梁海丽 +3 位作者 司马杨虎 牛艳山 甘丽萍 徐世清 《丝绸》 CAS 北大核心 2010年第3期15-19,共5页

测定了不同茧色蚕品种的血液、丝腺、内外茧层中色素含量及成分的差异,调查了烘茧处理对茧层色素的影响。结果表明:绿茧品种几乎不含类胡萝卜素,而其血液中黄酮类化合物的成分与丝腺和茧层的不同;黄红茧系品种黄酮类化合物的含量高出类... 测定了不同茧色蚕品种的血液、丝腺、内外茧层中色素含量及成分的差异,调查了烘茧处理对茧层色素的影响。结果表明:绿茧品种几乎不含类胡萝卜素,而其血液中黄酮类化合物的成分与丝腺和茧层的不同;黄红茧系品种黄酮类化合物的含量高出类胡萝卜素10倍以上,其成分有异于绿色茧,另外茧层中类胡萝卜素的成分有异于血液和(或)丝腺。烘茧处理对绿茧、黄茧及红茧的色素含量和成分无不良影响。 展开更多

关键词 家蚕 天然有色茧 色素 烘茧

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家蚕黄茧候选基因Cameo1和Cameo2在不同茧色品种的表达差异与功能分析 被引量：1

4

作者 束梅影 陈亚东 +3 位作者 牛艳山 甘丽萍 司马杨虎 徐世清 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期897-904,共8页

外层黄茧C基因是家蚕对体内类胡萝卜素选择性吸收的关键基因之一。以13个黄红茧系品种(包括1个限性黄茧品种)、7个绿茧系品种、1个白色茧品种为材料,采用RT-PCR方法,检测和分析C基因的2个候选基因Cameo1和Cameo2在4龄和5龄幼虫不同组织... 外层黄茧C基因是家蚕对体内类胡萝卜素选择性吸收的关键基因之一。以13个黄红茧系品种(包括1个限性黄茧品种)、7个绿茧系品种、1个白色茧品种为材料,采用RT-PCR方法,检测和分析C基因的2个候选基因Cameo1和Cameo2在4龄和5龄幼虫不同组织的表达差异。结果表明,丝腺对黄茧色素类胡萝卜素的吸收不依赖于Cameo1基因的表达,Cameo1基因表达没有茧色和性别特异性,其蛋白产物可能没有直接参与黄茧色素吸收,而是作为B族清道夫受体家族(SCRB)成员在家蚕免疫系统中发挥作用;虽然Cameo2基因的蛋白产物介导了中肠中的黄色茧主要色素成分叶黄素的主动运输方式,但Came-o2基因不只是在家蚕黄色茧品种中肠的特异表达基因,Cameo2基因在家蚕中肠以外的组织表达特异性与这些组织的黄茧色素积累密切关联,生殖腺可能是比中肠和丝腺更加重要的Cameo2基因表达和作用的组织。 展开更多

关键词 家蚕 外层黄茧C基因 表达特征 基因功能

原文传递

一种基于荧光衍生法的色氨酸自动分析的研究 被引量：1

5

作者 牛艳山 马永健 孙慧斌 《现代科学仪器》 2007年第6期124-127,共4页

通过分析色氨酸衍生为去甲哈尔曼的反应中三氯乙酸浓度和反应试剂甲醛、三氯化铁的浓度及保温时间、保温温度的变化对衍生物荧光值的影响,找到了能得到较高荧光测定值而又对操作条件变动不敏感的该参数变动范围(平台区),为色氨酸自动化... 通过分析色氨酸衍生为去甲哈尔曼的反应中三氯乙酸浓度和反应试剂甲醛、三氯化铁的浓度及保温时间、保温温度的变化对衍生物荧光值的影响,找到了能得到较高荧光测定值而又对操作条件变动不敏感的该参数变动范围(平台区),为色氨酸自动化分析仪器的设计提供了重要的可行性依据。 展开更多

关键词 色氨酸衍生 荧光强度测定 三氯乙酸 甲醛 三氯化铁 反应时间 反应温度

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家蚕黄茧限性品种不同性别LongSAGE文库的构建与分析

6

作者 甘丽萍 刘仁华 +3 位作者 牛艳山 席建 司马杨虎 徐世清 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期2634-2641,共8页

为了调查家蚕丝物质生产过程中雌雄之间差异表达基因,本研究构建了家蚕黄茧色限性品种Ysh不同性别的丝腺与中肠LongSAGE文库,按照P<0.05和差异倍数大于2倍的标准,筛选出差异标签,借助家蚕全基因组公共数据库,通过参考文库、GLGI等方... 为了调查家蚕丝物质生产过程中雌雄之间差异表达基因,本研究构建了家蚕黄茧色限性品种Ysh不同性别的丝腺与中肠LongSAGE文库,按照P<0.05和差异倍数大于2倍的标准,筛选出差异标签,借助家蚕全基因组公共数据库,通过参考文库、GLGI等方法对这些标签进行注释。结果表明,雌性和雄性SAGE文库分别获得了96 713和98 126个标签次数,共筛选出了202个差异标签,其中108个标签在雌性中上调表达,94个标签在雄性中上调表达,最后有76个标签得到了基因注释,认为是家蚕5龄期幼虫雌雄之间差异表达的基因。本SAGE文库中提供的大量性别差异标签对于进一步阐明限性黄茧品种雌雄差异性状机理具有一定的参考价值。 展开更多

关键词 家蚕 黄茧限性品种 LongSAGE

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家蚕不同茧色品种中尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶(UGT)基因的表达差异

7

作者 王猛 牛艳山 +1 位作者 司马杨虎 徐世清 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期33-39,共7页

尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶(UGT)是动物糖基化作用的关键酶。黄酮类色素是家蚕天然彩色茧中主要色素之一,桑叶中的黄酮色素在蚕体内需通过糖基化修饰才能够进行生物转化。为了研究UGT对家蚕茧色的影响,选取在家蚕绿色茧品种大造丝腺或... 尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶(UGT)是动物糖基化作用的关键酶。黄酮类色素是家蚕天然彩色茧中主要色素之一,桑叶中的黄酮色素在蚕体内需通过糖基化修饰才能够进行生物转化。为了研究UGT对家蚕茧色的影响,选取在家蚕绿色茧品种大造丝腺或中肠中有表达的7个家蚕UGT基因(UGT59、UGT30、UGT60、UGT34、UGT86、UGT89、UGT65),用RT-PCR方法对这些基因在白茧品种C108和皓月、绿茧品种大造和G1、黄茧品种Y12和黄茧限性品种Ys的丝腺、中肠和生殖腺组织中的表达进行了定性与定量分析。结果显示,上述品种中UGT89和UGT65基因只在丝腺特异表达;UGT86基因在丝腺的表达量最高,无茧色特异性;UGT60和UGT34基因在有色茧品种的中肠组织特异性表达;UGT59和UGT30基因在绿茧品种的丝腺和中肠组织特异性高量表达,UGT30基因在不同茧色品种还存在mRNA转录本的差异,显示出茧色特异性。对限性黄茧品种Ys的调查显示,UGT60和UGT86基因的表达在生殖腺存在性别差异,而在丝腺和中肠组织没有性别差异。提示UGT60和UGT34基因的表达与天然彩色茧色素在中肠的吸收有关,UGT59和UGT30基因表达与绿茧色形成有关,而UGT60和UGT86基因在生殖腺的差异表达与性别可能存在关联。 展开更多

关键词 尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶 基因表达 茧色 家蚕

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纳米丝素颗粒药物缓释剂的研制及在治疗小鼠溃疡性结肠炎中的药物控制释放作用 被引量：7

8

作者 孙春光 谢世筠 +4 位作者 张芃 王梅仙 周芳 牛艳山 缪云根 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期706-712,共7页

利用天然丝素良好的生物相容性和生物可降解性,制备纳米丝素颗粒作为药物缓释载体。通过磷酸盐缓冲液及乙醇综合处理1 mg/mL丝素蛋白溶液得到颗粒直径比较均匀的纳米级丝素颗粒。电子显微镜下观察到丝素蛋白在pH 8.0的磷酸盐缓冲液作用... 利用天然丝素良好的生物相容性和生物可降解性,制备纳米丝素颗粒作为药物缓释载体。通过磷酸盐缓冲液及乙醇综合处理1 mg/mL丝素蛋白溶液得到颗粒直径比较均匀的纳米级丝素颗粒。电子显微镜下观察到丝素蛋白在pH 8.0的磷酸盐缓冲液作用下其链状胶束结构发生聚集而将药物包裹,自组装形成规则的直径为200～600 nm的球形颗粒,完成与药物的结合,即药物的搭载。在pH 8.0的缓冲液中,单纯柳氮磺吡啶(SASP)药物粉末在1 h左右即将药量的90%释放出来,而加入纳米丝素蛋白的丝素载体药物2 h释放出约60%的药物量,使达到最高药物浓度的时间比单纯药物粉末延长,从而延长药物作用时间,有利于机体对药物的有效吸收利用。将丝素载体药物用于治疗人工诱导小鼠慢性溃疡性结肠炎,结果丝素载体药物治疗组小鼠6～12 h血液药物浓度和结肠组织中的药物浓度降低幅度要低于单纯SASP药物治疗组小鼠,证实了纳米丝素蛋白具有良好的载药、释药功能。 展开更多

关键词 丝素蛋白 药物缓释载体 动物试验

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家蚕3-磷酸甘油脱氢酶基因BmGpd的结构特征与表达谱分析 被引量：2

9

作者 鲁延军 季明明 +3 位作者 牛艳山 张升祥 司马杨虎 徐世清 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期269-278,共10页

3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是真核细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性酶,具有能量传递等重要功能。家蚕Bombyxmori是重要的变态和能量代谢研究模式动物,为了明确GPDH在家蚕中的作用,本研究根据果蝇lethal(2)k05713的蛋白质序列,从家蚕C108... 3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是真核细胞的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性酶,具有能量传递等重要功能。家蚕Bombyxmori是重要的变态和能量代谢研究模式动物,为了明确GPDH在家蚕中的作用,本研究根据果蝇lethal(2)k05713的蛋白质序列,从家蚕C108品种克隆了2个完整的mRNA转录体,长度分别为3456bp和2979bp(GenBank登录号为GQ865685和GQ865686),具有相同的2166bpORF,编码721个氨基酸。克隆拼接了548bp的第9内含子后,参照大造品种的全基因组数据,推测出BmGpd基因全长27983bp(GenBank登录号为EF154335),包含16个外显子和15个内含子。编码蛋白具跨膜螺旋结构,pI为8.22,分子量为80.5kD,1～20氨基酸区域为信号肽序列。分子同源进化和蛋白质基序分析表明,BmGPD是家蚕中一种新GPDH成员,能在大肠杆菌Escherichiacoli中诱导大量表达。RT-PCR分析表明,BmGpd基因表达量在5龄中期最高,在3d的蛹中明显下调,进入滞育时表达量更低;血液中较低,中肠、丝腺、生殖腺和脂肪体中有大量表达。芯片表达谱显示,5龄第3天幼虫头和体壁中表达丰度最高,脂肪体和马氏管中最低,性别差异不显著。EST表达谱显示,4龄第2天中肠中表达丰度最高。RNAi结果显示,家蚕体内存在BmGpd基因产物代谢补偿途径。本研究为深入研究家蚕GPDH的表达调控以及与变态和能量代谢的关系创造了条件。 展开更多

关键词 家蚕 3-磷酸甘油脱氢酶 基因克隆 结构特征 表达谱

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应用于家蚕F2代分离群体的两种连锁作图方法的作图效果比较 被引量：2

10

作者 段雪梅 徐海明 +3 位作者 徐世清 牛艳山 蔡明文 司马杨虎 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期128-131,共4页

构建精细的家蚕分子连锁图谱需要合适的作图方法。应用Mapmaker/EXP3.0和F2lnkgsilk两种作图方法,对家蚕F2代91个个体为分离群体的300个AFLP标记和69个个体为分离群体的470个RAPD标记数据进行了比较分析。用F2lnkgsilk作图方法分析得到... 构建精细的家蚕分子连锁图谱需要合适的作图方法。应用Mapmaker/EXP3.0和F2lnkgsilk两种作图方法,对家蚕F2代91个个体为分离群体的300个AFLP标记和69个个体为分离群体的470个RAPD标记数据进行了比较分析。用F2lnkgsilk作图方法分析得到的分群数与Mapmaker/EXP3.0作图方法相比有所增加,而总的图距却显著增加,平均图距也有较大的增加,但产生的二联体数基本相同。就单个连锁群而言,两种作图分析方法的连锁标记及其数目80%以上相同,但是标记间的排列顺序70%以上有差异;用F2lnkgsilk作图方法分析得到的单个连锁群的总图距和平均图距也相应增大。 展开更多

关键词 家蚕 分子连锁图谱 Mapmaker/EXP3.0作图法 F21nkgsilk作图法

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昆虫细胞内N-糖基化途径及人源化糖蛋白表达 被引量：1

11

作者 胡嘉彪 张芃 +5 位作者 牛艳山 Bhaskar ROY 李兴华 杨华军 周芳 缪云根 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期722-728,共7页

虽然昆虫杆状病毒表达系统在蛋白表达领域得到了广泛的应用,但由于不能表达复杂的末端唾液酸化的N-糖链,使得该系统在生物制药行业的应用受到了很大的限制。通过比较哺乳动物细胞和昆虫细胞内糖基化途径可知,其起始步骤一致,之后再发生... 虽然昆虫杆状病毒表达系统在蛋白表达领域得到了广泛的应用,但由于不能表达复杂的末端唾液酸化的N-糖链,使得该系统在生物制药行业的应用受到了很大的限制。通过比较哺乳动物细胞和昆虫细胞内糖基化途径可知,其起始步骤一致,之后再发生分化,主要表现为3方面,即昆虫细胞内缺乏哺乳动物细胞所具备的N-乙酰葡萄糖氨转移酶II、半乳糖基转移酶/N-乙酰氨基半乳糖转移酶、α-2,3-唾液酸转移酶和α-2,6-唾液酸转移酶等延长N-糖链的糖基转移酶;另外,昆虫细胞内具有能够特异性地将蛋白质末端的N-乙酰氨基葡萄糖残基从GlcNAcMan3GlcNAc(±α3/6-Fuc)GlcNAc上切除的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶及核心α-1,3-岩藻糖基转移酶。本文从上述异同出发,综述了克服昆虫细胞内不能表达人源化糖蛋白这一缺陷所进行的N-糖基化途径的改造研究——主要集中在昆虫细胞内GlcNAcase的抑制和昆虫细胞内GnT2,GalT/GalNAcT,ST3及ST6等基因的导入等方面,结果表明经改造的昆虫细胞可表达人源化糖蛋白,这将极大地拓宽昆虫杆状病毒表达系统的应用领域。本文还探讨了选择特殊细胞系及特殊培养条件以在昆虫细胞内表达唾液酸化蛋白的可行性。 展开更多

关键词 昆虫细胞 哺乳动物细胞 糖蛋白 蛋白糖酰化途径 糖苷 人源化糖蛋白

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