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视神经损伤后视网膜细胞凋亡的研究 被引量：6
1
作者 狄静芳 史剑波 +1 位作者 曾耀英 徐锦堂 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1999年第4期88-93,共6页
目的：探讨凋亡在视神经撞击和挤压损伤导致视网膜神经节细胞死亡中的作用。方法：应用活细胞悬液荧光染色法和流式细胞仪 Ｐ Ｉ染色法检测损伤后视网膜神经元凋亡的形态和数量。结果：荧光染色法见视野内有散在细胞出现核染色质凝聚现... 目的：探讨凋亡在视神经撞击和挤压损伤导致视网膜神经节细胞死亡中的作用。方法：应用活细胞悬液荧光染色法和流式细胞仪 Ｐ Ｉ染色法检测损伤后视网膜神经元凋亡的形态和数量。结果：荧光染色法见视野内有散在细胞出现核染色质凝聚现象（ 不规则核块） ，流式细胞仪 Ｄ Ｎ Ａ 直方图见正常对照组有直而高的 Ｇ０／ Ｇ１ 峰和低平的 Ｇ２ 峰，在 Ｇ０／ Ｇ１ 之前有一细胞群体，大约占细胞总数的１６３ ％ ，损伤组在 Ｇ０／ Ｇ１ 之前有一低小的亚二倍体峰，大约占全部细胞的４８３ ％ 。结论：视神经不完全损伤后存在视网膜神经元的凋亡，这一结论可为视神经外伤的临床治疗提供实验依据。 展开更多
关键词 视网膜神经元 凋亡 视神经损伤
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IL-10与放线菌酮诱导K562细胞凋亡
2
作者 狄静芳 曾山 +2 位作者 冯铮 曾耀英 曹艳英 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2001年第4期10-13,共4页
目的 :研究IL - 10对放线菌酮 (CHX)诱导K5 62细胞凋亡所产生的调节作用。方法 :采用碘化丙啶 (PI)染色流式细胞仪分析 ,形态学观察及DNA凝胶电泳检测K5 62细胞。结果 :CHX组K5 62凋亡细胞达 5 8 3% ,CHX加IL - 10组达 75 8%。结论 :(1... 目的 :研究IL - 10对放线菌酮 (CHX)诱导K5 62细胞凋亡所产生的调节作用。方法 :采用碘化丙啶 (PI)染色流式细胞仪分析 ,形态学观察及DNA凝胶电泳检测K5 62细胞。结果 :CHX组K5 62凋亡细胞达 5 8 3% ,CHX加IL - 10组达 75 8%。结论 :(1)CHX能诱导K5 62细胞凋亡。 (2 )IL- 10和CHX联合使用诱导K5 62细胞凋亡的作用增强。 展开更多
关键词 白细胞介素10 放线菌酮 细胞凋亡 形态学 流式细胞仪 肿瘤治疗 红白血病
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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用 被引量：53
3
作者 肇静娴 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 王南 狄静芳 曾山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-111,共3页
目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或C... 目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 + T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4 + T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术 。 展开更多
关键词 活体染料羧基荧光素乙酰乙酸 CFDA-SE 淋巴细胞 细胞增殖 荧光抗体标记 流式细胞术
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具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突变体的表达、纯化及性质 被引量：4
4
作者 狄静芳 贺进田 +2 位作者 徐瑞光 陈希 赵宝华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1186-1191,共6页
【目的】为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体。研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析。【方法】将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达。阳离子交换、凝胶过... 【目的】为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体。研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析。【方法】将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达。阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应。【结果】PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%。酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率。本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 葡激酶 RGD 抗血小板聚集
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外伤性视神经损伤手术时机选择的实验研究 被引量：31
5
作者 史剑波 文卫平 +3 位作者 许庚 徐锦堂 狄静芳 夏潮涌 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期368-370,397,共4页
[目的]通过视神经外伤后视网膜形态的变化,了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的相关关系。[方法]建立外伤性视神经损伤和不同时间减压动物模型,对视网膜神经节细胞(RGCs)、视网膜等进行了定量分析。[结果]正常对照组RGCs相对体积... [目的]通过视神经外伤后视网膜形态的变化,了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的相关关系。[方法]建立外伤性视神经损伤和不同时间减压动物模型,对视网膜神经节细胞(RGCs)、视网膜等进行了定量分析。[结果]正常对照组RGCs相对体积数密度(体密度,V_v)为0.072,小细胞所占比例为49.5％,视网膜厚度为108.9μm,节细胞以内层的厚度为19.5μm;48h减压组RGCs体密度为0.052,小细胞占比例为66.8％,视网膜总厚度为101.9μm,节细胞以内层厚度为16.9μm;14d减压组RGCs体密度为0.042,小细胞占比例为76.4％,视网膜总厚度为96.5μm,节细胞以内层为15.5μm。[结论]48h减压较14d减压可以较好的保存RGCs和视网膜的形态,外伤性视神经损伤后应该尽早解除周围因素对视神经的压迫。 展开更多
关键词 外伤性视神经损伤 视神经减压术 手术时机 视网膜神经节细胞
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天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究 被引量：16
6
作者 何贤辉 曾耀英 +3 位作者 孙荭 曾洁铭 徐丽慧 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期200-203,T001,共5页
目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞... 目的 :研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白 (TCS)诱导人类白血病细胞株HL - 6 0细胞发生凋亡的作用及放线菌酮 (CHX)对此作用的影响。方法 :采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL - 6 0细胞发生凋亡的情况。结果 :流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡现象 ,TCS (2 0mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为 48 7%± 2 3% ( x±s) ,明显高于对照组的凋亡率 (6 3%± 1 0 % ) (P <0 0 5 ) ,而CHX (5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为 6 5 3%± 3 9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实 ,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变 ,如染色体凝缩、核碎裂等 ;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX (0 2mg/L)处理可显著加强TCS的作用 ,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL - 6 0细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论 :TCS能够诱导HL - 6 0细胞发生明显的凋亡 ,CHX可加强这种作用。 展开更多
关键词 天花粉素 放线菌酮 细胞凋亡 流式细胞术 白血病 HL-60细胞
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靛蓝和靛玉红对小鼠T细胞活化与增殖的影响 被引量：10
7
作者 王通 曾耀英 +4 位作者 肇静娴 胡英杰 江逊 狄静芳 冯铮 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期444-447,共4页
目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠... 目的:研究靛蓝(IB)和靛玉红(IR)对小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子表达情况;通过2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐(WST-1)法测定细胞增殖;通过CFDA-SE染色流式细胞术检测增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)。结果:小鼠T细胞离体培养6 h后,对照组活化比率为(14.25±2.25)%,在ConA的刺激下小鼠T细胞活化显著(35.25±2.31)%(P<0.01),IB和IR分别显著降低活化,(26.88±0.99)%和(23.98±2.25)%(P<0.01)。在ConA的刺激下,小鼠T细胞WST-1吸收度(1.28±0.09)显著高于对照组(0.33±0.02)(P<0.01)。IB和IR分别显著降低了ConA引起的WST-1吸收度增加(P<0.01)。在培养48 h后,空白对照组CFDA-SE流式细胞术检测结果仅显示单一亲代峰(parent),PI为1.0。ConA刺激下小鼠T细胞明显增殖,出现子一代和子二代峰,PI为1.36。在IB或IR作用下,ConA介导的小鼠T细胞增殖明显下降,亲代峰细胞数增多,子一代和二代的细胞数降低,PI均为1.22,低于ConA组。结论:靛蓝和靛玉红均可以显著的抑制ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖。 展开更多
关键词 靛蓝 靛玉红 T淋巴细胞 活化 增殖 流式细胞术
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豚鼠视网膜正常结构的定量研究 被引量：26
8
作者 史剑波 徐锦堂 +1 位作者 夏潮涌 狄静芳 《眼科研究》 CAS CSCD 1999年第2期98-100,共3页
目的定量研究正常豚鼠视网膜神经节细胞（ＲＧＣ）核和视网膜厚度。方法应用图像分析技术测量ＲＧＣ核的平均体积和体密度、视网膜各层结构厚度。结果ＲＧＣ核的平均体积为１７４μｍ３，按核体积分布直方图分成大、中、小３群，平均体... 目的定量研究正常豚鼠视网膜神经节细胞（ＲＧＣ）核和视网膜厚度。方法应用图像分析技术测量ＲＧＣ核的平均体积和体密度、视网膜各层结构厚度。结果ＲＧＣ核的平均体积为１７４μｍ３，按核体积分布直方图分成大、中、小３群，平均体积分别为３６３．５，１８５．３，８０．０μｍ３，所占比例分别为２０．９％，２８．６％，４９．５％；节细胞外界内层、内核内网层、光感受细胞层、视网膜全层的厚度分别为１９．４５，４５．５３，４３．９６，１０８．９４μｍ。结论采用ＲＧＣ核体积、体密度参数和视网膜各结构层厚度的测量是全面了解视网膜形态的敏感指标。 展开更多
关键词 豚鼠 视网膜 神经节细胞 RGC核 厚度
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尖锐湿疣患者外周血自然杀伤细胞活性的研究 被引量：11
9
作者 李振 曾耀英 +4 位作者 蔡小嫦 何贤辉 徐丽慧 曾山 狄静芳 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期145-147,共3页
目的　从自然杀伤细胞 (NK)内分泌γ 干扰素和CD6 9表达等层次 ,探讨尖锐湿疣 (CA)患者的细胞免疫状态 ,为临床免疫治疗提供指引。方法　用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞 (PBMC) ,进行细胞培养和免疫荧光染色 :①PDB刺激PBMC ,2... 目的　从自然杀伤细胞 (NK)内分泌γ 干扰素和CD6 9表达等层次 ,探讨尖锐湿疣 (CA)患者的细胞免疫状态 ,为临床免疫治疗提供指引。方法　用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞 (PBMC) ,进行细胞培养和免疫荧光染色 :①PDB刺激PBMC ,2h、12h、2 4h后收获细胞 ,进行anti CD5 6 FITC与anti CD6 9 PE免疫标记 ;②PDB、Ionomycin和Monensin刺激PBMC ,4h收获细胞 ,用anti CD5 6 PE与anti IFN γ FITC细胞内染色 ,最后利用流式细胞仪对标记细胞进行分析。结果　NK细胞受体外刺激后 ,长病程组各时点的CD6 9阳性细胞百分率分别是 ( 2 5 .73± 2 .99) %、( 5 7.0 8±4.74) %、( 6 7.0 7± 2 .5 2 ) % ,与对照组各时点相比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而短病程组各时点与对照组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。长病程组的IFN γ阳性NK细胞比率是 ( 34.6 9± 3 .36 ) % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。短病程组与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　短病程患者NK细胞活化和功能均正常 ,但长病程者NK细胞活化明显不足和功能严重障碍。本试验结果为长病程患者的免疫治疗提供理论依据和新的指引。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 外周血 自然杀伤细胞活性 γ—干扰素 CD69 细胞免疫状态 临床免疫治疗
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免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系(英文) 被引量：8
10
作者 林羿 曾耀英 +6 位作者 曾山 何贤辉 狄静芳 詹美意 关洁宾 肇静娴 全世明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期282-287,共6页
目的 :研究反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)模型CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平 ,并评价淋巴细胞免疫治疗 (lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后... 目的 :研究反复自然流产 (recurrentspontaneousabortion ,RSA)模型CBA/J×DBA/ 2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平 ,并评价淋巴细胞免疫治疗 (lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系。方法 :评价CBA/J×DBA/ 2、C57BL/ 6×DBA/ 2和BALB/c×DBA/ 2小鼠胚胎和鼠仔的预后 ,绘制出生后 1 - 2 1d鼠仔离乳前生长曲线和Kaplan -Meier生存分析曲线。并且采用PE -CD69和FITC -DX5双色流式细胞术检测在有或无LIT的情况下 ,母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平。此外 ,对CD1 6/CD32 +NK细胞亚群等也进行检测。结果 :在孕期母鼠体重平均增长幅度、平均每窝产仔数、新生鼠仔出生第 1d平均体重和胚胎吸收率等方面 ,CBA/J×DBA/ 2小鼠与生殖力正常的对照组相比均有显著差异。在CBA/J×DBA/ 2小鼠中 ,代表活化型NK细胞的CD69+ DX5+ 细胞比率也显著高于对照组。而有效的LIT能够显著降低CD69在母胎交界面NK细胞表面的表达水平 ,并相应地显著降低胚胎吸收率。结论 :CD69+ DX5+ 细胞在胚胎被排斥的机制中可能具有重要作用。 展开更多
关键词 小鼠 习惯性流产 天然杀伤细胞 NK细胞 CD69 影响 鼠胚 鼠仔 预后 免疫治疗
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麒麟菜中蕨藻红素抗肿瘤活性研究 被引量：16
11
作者 杨宜婷 岑颖洲 +1 位作者 肇静娴 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期851-852,共2页
目的 :探讨把蕨红藻素 (caulerpin)发展成为抗肿瘤药物的可能性。方法 :检测caulerpin对细胞株HL6 0的细胞毒作用及诱导细胞凋亡作用。结果 :Caulerpin对HL6 0细胞有一定的细胞毒和细胞诱导凋亡作用。结论
关键词 麒麟菜 抗肿瘤活性 蕨藻红素 药物筛选试验 细胞凋亡
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正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究 被引量：13
12
作者 李振 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 蔡小嫦 曾山 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期302-304,共3页
目的 :探讨CD4+ T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞 (PBMC)和血浆 ,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中 ,并在植物血凝素 (PHA ,2 0mg L)的刺激下进... 目的 :探讨CD4+ T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞 (PBMC)和血浆 ,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中 ,并在植物血凝素 (PHA ,2 0mg L)的刺激下进行培养 ,培养 2 4、48、72h后收获细胞 ,分别用双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对CD4+ T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果 :CD4+ T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1 Th2两个方向极化 ,2 4、48、72h后极化率分别达到 (13 2 8± 1 5 9) % (12 70± 1 6 5 ) %、(17 19± 1 0 3) % (17 5 0± 1 30 ) %、(19 49± 2 87) % (18 5 8± 1 49) % ;而只有PHA刺激的极化率很低 ,两组有显著性差异 (P <0 0 1) ;Th1∶Th2之比约等于 1。结论 :正常成人外周血CD4+ T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化 ,而且Th1 Th2细胞处于等值的平衡状态。 展开更多
关键词 T淋巴细胞 趋化因子 流式细胞术 TH1/TH2细胞亚群
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喘可治延长小鼠异基因移植皮片存活时间与CD4^+CD25^+调节性T细胞相关性研究 被引量：13
13
作者 王幼萍 曾耀英 +5 位作者 肇静娴 赵莉 邢飞跃 狄静芳 江逊 李海仙 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期765-767,共3页
目的:研究喘可治抑制小鼠异基因皮片移植排斥作用与小鼠体内CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞(CD4 +CD2 5 + Tr)变化的相关性。方法:建立小鼠同种异基因与同基因皮片移植模型,通过腹腔注射给药喘可治(CKZ)观察其对皮片移植存活时间的影响,并利... 目的:研究喘可治抑制小鼠异基因皮片移植排斥作用与小鼠体内CD4 + CD2 5 + 调节性T细胞(CD4 +CD2 5 + Tr)变化的相关性。方法:建立小鼠同种异基因与同基因皮片移植模型,通过腹腔注射给药喘可治(CKZ)观察其对皮片移植存活时间的影响,并利用3色免疫荧光标记和流式细胞术分析受鼠外周血CD4 + CD2 5 + Tr变化规律。结果:同种异基因移植CKZ组的移植皮片存活时间显著长于同种异基因移植对照组,分别为(19 .5±2 .3)d和(10 . 2±2 .2 )d ,P <0 . 0 1;在同种异基因皮片移植后,受体外周血CD4 + CD2 5 + Tr占CD4 + T细胞百分率明显升高,术后8d达到高峰(P <0 . 0 1) ,然后出现下降趋势,其中同种异基因移植对照组在术后13d时已回落至正常水平,而同种异基因移植CKZ组在术后2 3d时仍维持在高于移植前水平;在同基因皮片移植后,CKZ组与对照组外周血CD4 + CD2 5 +Tr水平均无明显升高(P >0 . 0 5 )。结论:喘可治可延长小鼠同种异基因移植皮片存活时间,通过升高CD4 + CD2 5 + Tr水平而发挥免疫抑制效应可能是其机制之一。 展开更多
关键词 喘可治 CD4^+CD25^+调节性T细胞 移植 皮肤 流式细胞术
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蛋白激酶C抑制剂对T细胞表达IL-2及IFN-γ的影响 被引量：8
14
作者 何贤辉 曾耀英 +3 位作者 徐丽慧 孙荭 李振 狄静芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期522-525,共4页
目的 :研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和γ -干扰素 (INF -γ)的影响。方法 :在莫能菌素 (monensin)存在时 ,以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (I)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以流... 目的 :研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和γ -干扰素 (INF -γ)的影响。方法 :在莫能菌素 (monensin)存在时 ,以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (I)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以流式细胞术胞内细胞因子检测法分析H7和棉酚对CD3+ T细胞表达IL - 2和IFN -γ水平的影响。结果 :PDB +I处理PBMC 4h后 ,表达IL - 2和IFN -γ的CD3+ T细胞百分率分别为 16 6 4± 2 0 4和 2 5 81±3 5 3( x±s) ,而对照组二者的比率为 1 0 6± 0 2 2及 3 12± 0 77(P <0 0 5 )。棉酚 (5 0 μmol/L)可明显抑制IL - 2及IFN-γ的表达 ,抑制后表达率分别为 2 0 8± 0 12及 9 0 1± 1 90。H7作用比棉酚强 ,5 0 μmol/L的H7抑制后的IL - 2及IFN -γ阳性T细胞比率分别为 0 4 3± 0 0 6和 2 4 0± 0 2 7。结论 :PKC在CD3+ T细胞表达IL - 2及IFN -γ中发挥重要作用 ;PKC抑制剂H7及棉酚明显抑制IL - 2及IFN -γ的表达 ,提示H7和棉酚可通过抑制PKC活性 。 展开更多
关键词 蛋白激酶C抑制剂 T细胞 IL-2 IFN-Γ 影响 棉酚
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N-末端引入RGD序列的葡激酶突变体表达、纯化及性质研究 被引量：2
15
作者 狄静芳 贺进田 +2 位作者 徐瑞光 陈希 赵宝华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期99-104,共6页
为解决葡激酶存在的溶栓后再栓塞问题，利用PCR介导的定点突变技术，在野生型葡激酶（wt-SAK）N-末端的第3、4位氨基酸之间插入Arg-Gly-Asp（RGD）序列构建了葡激酶突变体MD2-SAK，另将N-末端的前3位氨基酸替换为RGD序列构建了葡激酶突... 为解决葡激酶存在的溶栓后再栓塞问题，利用PCR介导的定点突变技术，在野生型葡激酶（wt-SAK）N-末端的第3、4位氨基酸之间插入Arg-Gly-Asp（RGD）序列构建了葡激酶突变体MD2-SAK，另将N-末端的前3位氨基酸替换为RGD序列构建了葡激酶突变体MD4-SAK。将突变体基因分别连接表达载体pBV220，转化大肠杆菌DH5α，经过热激诱导后，突变体均以可溶性形式得到高效表达，表达蛋白占菌体总蛋白的50％以上。破菌上清液通过SP-Sepharose FF、Sephadex G-50和Q-Sepharose FF三步连续的色谱层析纯化得到纤溶活性分别为10．1×10^4AU／mg、11．2×10^4AU／mg，纯度均大于96％的突变体蛋白。进一步研究了突变体的性质，结果表明葡激酶突变体不仅保留了野生型葡激酶的纤溶酶原激活活性，并具有较强的抗血小板聚集活性。同时发现，葡激酶突变体的N-末端序列会影响其N-末端甲硫氨酸的酶切加工。 展开更多
关键词 葡激酶 Arg-Gly-Asp(RGD) 抗血小板聚集
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环孢菌素A对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理学评价 被引量：8
16
作者 全世明 曾耀英 +3 位作者 何贤辉 曾山 狄静芳 肇静娴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期225-227,共3页
目的　应用血清免疫药理学技术 ,探讨环孢菌素A(CsA)对T细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CsA免疫调节的分子机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　分离小鼠淋巴结细胞 ,分别与CsA、5 %CsA血清预孵后 ,加入多克隆刺激剂继续培养共 2 4h... 目的　应用血清免疫药理学技术 ,探讨环孢菌素A(CsA)对T细胞体外活化的影响 ,以进一步揭示CsA免疫调节的分子机制 ,为临床用药提供理论依据。方法　分离小鼠淋巴结细胞 ,分别与CsA、5 %CsA血清预孵后 ,加入多克隆刺激剂继续培养共 2 4h。收获细胞 ,进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术分析T细胞上CD6 9分子的表达情况。结果　在CsA和 5 %CsA血清作用下 ,ConA活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (2 4 15± 3 38) %和 (2 3 6 8±6 89) % ,与相应对照组 [分别为 (6 4 6 7± 5 88) %和 (6 4 35± 10 13) % ]相比较均有显著差异 (P <0 0 1) ;在CsA和5 %CsA血清作用下 ,PDB活化的T细胞CD6 9表达的百分率分别为 (78 86± 7 70 ) %和 (80 0 5± 9 91) % ,与相应对照组 [分别为 (84 79± 6 87) %和 (79 6 8± 4 17) % ]相比较均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　CsA(410nmol/L)和含CsA血清均可强烈抑制ConA刺激的T细胞活化 ,而对PDB刺激的T细胞活化无抑制效应。 5 %CsA血清与CsA单纯药物体外实验的结果相一致 。 展开更多
关键词 环孢菌素A CD69 T淋巴细胞 血清免疫药理学
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小鼠眼内移植三种B16黑色素瘤细胞系的比较研究 被引量：8
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作者 赵军 李辰 +2 位作者 狄静芳 冯峥 赵松滨 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期914-916,T002,共4页
目的 :比较B16F0、B16F1、B16F10 3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于该肿瘤细胞系来源的C5 7BL/6小鼠前房内的进展情况。方法 :将此三种黑色素瘤细胞系培养后的活细胞悬液移植于C5 7BL/6小鼠前房内 ,观察并比较其眼球溃破时间、淋巴结和肺... 目的 :比较B16F0、B16F1、B16F10 3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于该肿瘤细胞系来源的C5 7BL/6小鼠前房内的进展情况。方法 :将此三种黑色素瘤细胞系培养后的活细胞悬液移植于C5 7BL/6小鼠前房内 ,观察并比较其眼球溃破时间、淋巴结和肺的转移及生存期。结果 :F10组移植肿瘤眼眼球溃破时间早于另两组 ,而F0组与F1组间无差异。在鼠前房移植肿瘤细胞后的 18d ,F1组及F10组鼠出现移植肿瘤眼同侧的颈部淋巴结转移 ,而F0组未出现类似情况 ;在鼠前房移植肿瘤细胞后的 2 8d ,3组均出现肺转移。F0组小鼠生存时间长于另两组 ,而F1组与F10组间无差异。结论 :3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于小鼠前房内后进展不同 。 展开更多
关键词 黑色素瘤 细胞系 对比研究 眼 小鼠
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紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析 被引量：5
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作者 彭桉平 曾耀英 +2 位作者 俞瑜 肇静娴 狄静芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期705-707,共3页
目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的... 目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。 展开更多
关键词 紫杉醇 T淋巴细胞 CD69 CD25 增殖 流式细胞术
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雷公藤多甙和FK506滴眼防治大鼠角膜移植免疫排斥反应的比较 被引量：11
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作者 邓宏伟 陈建苏 +3 位作者 李辰 姚晓明 赵松滨 狄静芳 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第3期440-443,共4页
目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。... 目的:观察雷公藤多甙(tripterygiitotorum,TⅡ)及FK506滴眼液局部应用对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法:建立大鼠角膜移植模型,随机按局部滴用药物分组成A,B,C组,用裂隙灯记录及比较各组移植排斥指数,并比较角膜排斥发生时间。分别于术后15d及30d行常规病理学检查。并通过免疫组化检查CD25,CD5+4在角膜植片基质中的表达。结果:0.3g/LTⅡ及0.5g/LFK506抑制角膜移植免疫排斥反应的效应均有效,两者相比效果无显著性差异。HE染色及免疫组化分析可见15d时各有效组角膜植片厚度基本正常,基质中仅有少量CD25,CD5+4阳性细胞表达、淋巴细胞浸润,新生血管少见。结论:TⅡ与FK506疗效近似。具有抑制高危角膜移植免疫排斥反应发生的临床应用价值。 展开更多
关键词 雷公藤多甙(TII) 角膜移植 移植物排斥
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鼻息肉组织T淋巴细胞IFN-γ、IL-4的表达 被引量：7
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作者 陈嵘 史剑波 +3 位作者 许庚 狄静芳 曾山 曾耀英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1623-1626,共4页
目的 :通过检测γ -干扰素 (IFN -γ)、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )两种细胞因子在鼻息肉组织T淋巴细胞(CD3+ 细胞 )中的表达 ,探讨鼻息肉的可能发病机制。方法 :采用流式细胞术检测 2 1例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T淋巴细胞IFN -γ... 目的 :通过检测γ -干扰素 (IFN -γ)、白细胞介素 - 4 (IL - 4 )两种细胞因子在鼻息肉组织T淋巴细胞(CD3+ 细胞 )中的表达 ,探讨鼻息肉的可能发病机制。方法 :采用流式细胞术检测 2 1例鼻息肉患者鼻息肉组织、外周血中T淋巴细胞IFN -γ、IL - 4的分泌情况 ,并与正常人下鼻甲粘膜及外周血进行比较。结果 :在正常人下鼻甲粘膜中几乎未见CD3+ IL - 4 + 和CD3+ IFN -γ+ 细胞。鼻息肉组织中有大量T淋巴细胞浸润 [(39.6 5± 2 0 8) % ],IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (13 6 0 6± 0 6 4 4 ) %、(32 938± 2 4 77) % ;患者外周血中IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (6 6 86±0 2 0 4 ) %、(6 4 312± 1 6 11) % ,与之相比 ,病人鼻息肉组织中IL - 4的含量显著高于外周血 (P <0 0 5 )而IFN -γ的含量明显低于外周血 (P <0 0 5 )。正常人外周血IL - 4、IFN -γ的含量分别为 (0 5 6 0± 0 0 5 1) % ,(0 2 4 6± 0 0 2 0 ) % ,与之相比 ,病人外周血中IL - 4、IFN -γ的含量均显著高于正常人 (P <0 0 5 )。结论 :鼻息肉患者鼻粘膜局部免疫异常 ,Th细胞因子分泌优势发生改变 ,造成鼻腔粘膜“微环境”改变 ,可能与鼻息肉的形成有密切关系。 展开更多
关键词 鼻息肉 T淋巴细胞 干扰索Ⅱ型 白细胞介素4 流式细胞术
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