杨树抗逆转录因子基因内SSR标记的开发 被引量：3

1

作者 王保垒 王博文 +2 位作者 陈清清 李百炼 张德强 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期67-74,共8页

利用直接测序法开发小叶杨抗逆转录因子基因内一套新的核基因组SSR标记。通过对3个抗逆转录因子共21个成员在36个小叶杨基因型个体中的序列比较分析后共检测到31个SSR多态性位点,SSR出现的频率为1/1916bp。在小叶杨自然群体中,SSR多态... 利用直接测序法开发小叶杨抗逆转录因子基因内一套新的核基因组SSR标记。通过对3个抗逆转录因子共21个成员在36个小叶杨基因型个体中的序列比较分析后共检测到31个SSR多态性位点,SSR出现的频率为1/1916bp。在小叶杨自然群体中,SSR多态性位点的碱基重复呈现出2～5碱基形式,基元重复次数变异范围为3～20次,其中以二碱基重复的位点较多,占总数的51.6%。在此基础上,依据SSR位点两侧的保守序列,设计31对SSR位点PCR扩增引物对。利用设计的引物检测所开发的SSR位点在杨属内22个基因型个体中PCR扩增的有效性及SSR位点的保守性。PCR扩增结果显示,93.5%的SSR位点能够在杨属内至少4个派内有效扩增,每对引物组合可检测到SSR多样性位点数3～12个,平均6个。基于抗逆转录因子基因内开发的SSR标记位点为分子标记辅助小叶杨抗逆性状育种提供工具。 展开更多

关键词 杨树 抗逆性状 转录因子 基因内SSR标记

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毛白杨PtDREB2A基因的克隆、表达及单核苷酸多态性分析 被引量：6

2

作者 郭琦 王保垒 +2 位作者 王博文 李百炼 张德强 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期49-56,共8页

利用基因特异的PCR引物由毛白杨受干旱胁迫后构建的cDNA文库中扩增获得一PtDREB2A cDNA克隆,并进行测序和序列分析,结果表明:PtDREB2A cDNA片段总长为946 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为864 bp,可编码长度为287个氨基酸残基... 利用基因特异的PCR引物由毛白杨受干旱胁迫后构建的cDNA文库中扩增获得一PtDREB2A cDNA克隆,并进行测序和序列分析,结果表明:PtDREB2A cDNA片段总长为946 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为864 bp,可编码长度为287个氨基酸残基的蛋白质,所推导的蛋白质氨基酸序列在AP2/ERF结构功能域与拟南芥AtDREB2A和水稻OsDREB2A蛋白的同源性分别为80.3%和83.3%。组织特异性Realtime-PCR结果显示,PtDREB2A在杨树根、茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式不同:PtDREB2A在叶片表达丰度最高,在树干皮层及根部组织表达丰度中等,而在顶端分生组织及主干韧皮部、形成层与木质部表达丰度最低。非生物胁迫及激素诱导差异表达显示,PtDREB2A不仅受高温、低温、干旱与盐诱导表达,还受到激素IAA,NAA及GA3的上调表达,但与ABA的诱导无关。组合利用MEGA4.0和DnaSP4.50.4软件对毛白杨45株基因型个体的PtDREB2A序列进行比对和分析,共检测到49个单核苷酸多态性(SNP)位点,SNP频率为1/18 bp,多样性指数π为0.010 48。在外显子区域,共检测到46个SNP位点,其中19个为同义突变,27个为错义突变。 展开更多

关键词 毛白杨 DREB2A基因 非生物胁迫 单核苷酸多态性

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毛白杨木材形成功能基因内SSR标记的开发及评价 被引量：5

3

作者 杜庆章 王博文 +4 位作者 王保垒 张曼 李百炼 张志毅 张德强 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期8-15,共8页

利用直接测序法开发木材形成功能基因内一套新的核基因组SSR标记。通过对参与木材形成的16个基因在40个毛白杨基因型个体中的序列比较分析,共检测到20个SSR多态性位点。在毛白杨自然群体中,SSR多态性位点的碱基重复呈现出二碱基、三碱... 利用直接测序法开发木材形成功能基因内一套新的核基因组SSR标记。通过对参与木材形成的16个基因在40个毛白杨基因型个体中的序列比较分析,共检测到20个SSR多态性位点。在毛白杨自然群体中,SSR多态性位点的碱基重复呈现出二碱基、三碱基、五碱基、六碱基与七碱基形式,基元重复次数变异范围为2～34次,其中以二碱基重复的位点较多,占总数的55.0%。在此基础上,依据SSR位点两侧的保守序列,设计20对SSR位点PCR扩增引物对。利用设计的引物检测开发的SSR位点在杨属内15个基因型个体中PCR扩增的有效性及SSR位点的保守性。PCR扩增结果显示,90.0%的SSR位点能够在杨属至少2个派内有效扩增,每对引物组合可检测到SSR多样性位点数为3～9个,平均5.3个。开发的这些SSR位点在功能基因内不同区域的分布频率不同。 展开更多

关键词 毛白杨 木材形成 基于基因的SSR标记

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小鼠卵母细胞化学去核及手工构建核移植胚胎 被引量：5

4

作者 赵禹 刘军 +3 位作者 王保垒 张拓 刘根胜 张涌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期102-106,共5页

为优化脱羰秋水仙碱(DC)诱导去核程序,研究以DC去核卵母细胞为核受体的、无透明带体细胞核移植方法在小鼠体细胞核移植中的应用,试验比较了乙醇、SrCl2两种激活方法及脱羰秋水仙碱处理开始时间对小鼠MⅡ期卵母细胞去核效率的影响;将DC... 为优化脱羰秋水仙碱(DC)诱导去核程序,研究以DC去核卵母细胞为核受体的、无透明带体细胞核移植方法在小鼠体细胞核移植中的应用,试验比较了乙醇、SrCl2两种激活方法及脱羰秋水仙碱处理开始时间对小鼠MⅡ期卵母细胞去核效率的影响;将DC诱导去核成功的卵母细胞去除透明带,与胎儿成纤维细胞粘合、电融合和SrCl2激活后,体外培养重构胚。结果显示,7%乙醇激活后0 min起始DC处理可得到最高的诱导去核率(66.4%);而在8 mmol/L SrCl2中激活15 min后用DC处理可得到最高的诱导去核率(64.3%);目前重构胚可以体外发育到8-细胞。试验结果首次证明了SrCl2在小鼠卵母细胞DC诱导去核中的作用效果与乙醇相当,初步证明了将DC诱导去核技术与无透明带技术相结合手工克隆生产小鼠重构胚的可能性,它的成功将大大简化核移植程序。 展开更多

关键词 小鼠 化学去核 无透明带 手工克隆

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HBMD-60/13-90S混凝土输送泵液压系统调试 被引量：2

5

作者 张建中 师恩浩 +4 位作者 李小俊 徐运祥 郝允梁 陈丽 王保垒 《煤矿机械》 2017年第5期25-26,共2页

混凝土输送设备的控制方式主要是液控,液压系统的安装调试非常重要,其决定设备能否正常使用。详细介绍了HBMD-60/13-90S混凝土输送泵液压系统调试操作方法,包括搅拌系统压力的设定,摆缸压力的设定,主油泵压力的设定。

关键词 混凝土输送泵 系统压力 摆缸压力 主油泵压力

原文传递

某特种越野车制动性能研究 被引量：1

6

作者 王保垒 黄妙华 《专用汽车》 2009年第1期50-51,共2页

某特种越野车采用气顶液制动系,制动结构复杂,相应ABS的开发所需成本高、周期长,为了提高整车制动性能,通过分析其制动特征和不同ABS的选配方案及布置形式,选配、安装合适的ABS。

关键词 特种越野车 气顶液制动系 ABS

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加工中心床身的设计及分析

7

作者 陈丽 王保垒 +1 位作者 徐运祥 师恩浩 《南方农机》 2018年第6期34-34,共1页

床身支撑加工中心的其它部件,对立式加工中心整机的动态特性具有重要影响。分析设计出的床身是否能够满足工作需要是非常重要的。利用ANSYS Workbench软件建立三维模型,对床身进行了静态特性和动态特性的分析,进行分析,可以找到床身的... 床身支撑加工中心的其它部件,对立式加工中心整机的动态特性具有重要影响。分析设计出的床身是否能够满足工作需要是非常重要的。利用ANSYS Workbench软件建立三维模型,对床身进行了静态特性和动态特性的分析,进行分析,可以找到床身的薄弱环节,对其优化改进提供了依据,从而得到较优的床身结构。 展开更多

关键词 床身 静态特性 动态特性 床身结构

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Numb基因不同亚型对乳腺癌细胞MCF-7增殖和迁移能力的影响 被引量：2

8

作者 苏杭 王保垒 +1 位作者 李华顺 朱晨光 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期476-485,共10页

[目的]探讨Numb基因的4种不同亚型对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.[方法]应用转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术敲除乳腺癌细胞MCF-7中Numb基因,分别将p65,p66,p71和p72这4种Num... [目的]探讨Numb基因的4种不同亚型对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响.[方法]应用转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术敲除乳腺癌细胞MCF-7中Numb基因,分别将p65,p66,p71和p72这4种Numb亚型的表达载体转染进Numb-KO MCF-7细胞,应用CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测Numb基因及其4种亚型对MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响.[结果]利用TALEN技术可以有效敲除MCF-7细胞中Numb基因,Numb-KO MCF-7组细胞的增殖和侵袭能力明显高于正常MCF-7细胞,Numb亚型p72对Numb-KO MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用,Numb亚型p65,p66,p71和p72均对Numb-KO MCF-7细胞的迁移有明显抑制作用. 展开更多

关键词 乳腺癌 Numb基因 亚型 增殖 迁移

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物态振荡

9

作者 王保垒 《中国人体科学》 1995年第4期183-187,共5页

通过对特异辐射、派生的电磁辐射、常态、异态以及它们之间相互关系的初步分析；提出了特异现象的常态－异态之间的物态振荡假说；试图解释那些令人困惑的ＰＫ实验。

关键词 物态振荡 特异辐射 电磁辐射 异态 常态

全文增补中

特异物质本性与量子电动力学：—特异功能的物理问题

10

作者 王保垒 《中国人体科学》 1993年第1期33-40,共8页

关键词 特异物质本性 量子辐射 特异功能

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共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响 被引量：5

11

作者 王保垒 赵禹 +3 位作者 刘军 权富生 华松 张涌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期733-738,共6页

本研究探讨了共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响。将小鼠的受精卵体外随机分别置于含颗粒细胞(试验组I)、输卵管上皮细胞(试验组Ⅱ)、输卵管组织块(试验组Ⅲ)的KSOM培养液中作为试验组进行共培养,同时设立对照组A(体外培养,仅... 本研究探讨了共培养对小鼠囊胚质量及其表观遗传修饰的影响。将小鼠的受精卵体外随机分别置于含颗粒细胞(试验组I)、输卵管上皮细胞(试验组Ⅱ)、输卵管组织块(试验组Ⅲ)的KSOM培养液中作为试验组进行共培养,同时设立对照组A(体外培养,仅含KSOM)和对照组B(体内培养)。比较各组受精卵的卵裂率和囊胚发育率;并应用碘化丙啶和Hoechest333258对囊胚进行染色,利用ICM/TE值评价各组胚胎体外发育的质量;同时将囊胚进行免疫荧光染色,观察其基因组甲基化和组蛋白乙酰化的水平。结果表明,与对照组A相比,试验组的卵裂率和囊胚发育率均有显著提高(P<0.05);同时其囊胚细胞数目及内细胞团细胞数与滋养层细胞数比值(ICM/TE)值均显著高于对照组A(P<0.05);各试验组囊胚基因组甲基化水平与对照组A差异不显著(P>0.05),但各体外培养组均与对照组B差异显著(P<0.05);试验组组蛋白乙酰化水平与对照组A、B差异均不显著(P>0.05)。共培养能够有效促进小鼠胚胎的体外发育,提高囊胚的发育质量,但是仍不能克服由体外培养造成的基因组甲基化异常。 展开更多

关键词 小鼠 共培养 基因组甲基化 组蛋白乙酰化 表观遗传

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HBD-3基因的乳腺特异性表达载体的构建及真核表达 被引量：3

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作者 彭巍 兰志刚 +2 位作者 马晶晶 王保垒 张涌 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期968-974,共7页

为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体p... 为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD。脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3-4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达。 展开更多

关键词 人β-防御素 3 奶牛β-酪蛋白 EGFP 报告基因 供体细胞 核移植

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