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猪去乙酰化酶SIRT3的克隆及表达 被引量：3
1
作者 王候光 马苗鹏 +13 位作者 黄魁英 李华周 明飞平 王伟芳 夏枫耿 罗梦晓 杨军 蔡海明 施巨清 黄朝远 楚品品 董建明 朱红霞 张玲华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期53-57,共5页
本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3,并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列;通过Ω-PCR,将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达和亲和... 本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3,并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列;通过Ω-PCR,将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达和亲和层析纯化;经免疫印迹分析初步评价SIRT3的抗原性和特异性。重组原核表达质粒pET28aSIRT3经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约39ku,能被相关抗体识别。结果表明,本试验成功在大肠杆菌中表达猪去乙酰化酶SIRT3,为对其进行进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 SIRT3 原核表达
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猪流行性腹泻的诊治
2
作者 王候光 《江西畜牧兽医杂志》 2015年第2期39-40,共2页
猪流行性腹泻是由病毒引起的一种急性肠道性传染病,仔猪一年四季都易感发病,多发于春冬两季,但北方冬季偏多（每年10月至次年2月）,南方春季偏多（每年12月至次年4月）。每个日龄阶段都有发生,因猪健康状况的不同,其至死率有所不同。
关键词 猪流行性腹泻 诊治 一年四季 健康状况 传染病 肠道 病毒 发病
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猪流行性腹泻的诊治
3
作者 王候光 《畜禽业》 2015年第5期78-79,共2页
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征,各种年龄的猪均易感。本病的流行特点、临诊症状和病理变化都与猪传染性胃肠炎(TGE)十分相似,但哺乳仔猪死亡率较高,在猪群中... 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征,各种年龄的猪均易感。本病的流行特点、临诊症状和病理变化都与猪传染性胃肠炎(TGE)十分相似,但哺乳仔猪死亡率较高,在猪群中的传播速度相对缓慢。猪流行性腹泻于1971年首次在英国发现,随后在许多国家都报道有该病,中国自20世纪80年代初以来陆续有本病发生的报道,并分离到病毒。 展开更多
关键词 流行性腹泻病毒 肠道传染病 呕吐 腹泻 哺乳仔猪
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保育猪的饲养管理要点
4
作者 王候光 《湖北畜牧兽医》 2017年第5期39-40,共2页
介绍了保育猪的饲养管理要点,即应做好圈舍消毒、进猪前猪舍的准备工作、进猪后的管理工作及转群前的准备工作等,通过良好的饲养管理,减少应激。
关键词 保育猪 饲养管理 应激
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CpG基序重组菌发酵培养基的优化
5
作者 李华周 叶明强 +8 位作者 黄志丰 邝哲师 赵祥杰 姜增固 马苗鹏 王候光 徐臣超 曹丁 张玲华 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期64-68,共5页
目的:为提高CpG基序重组菌的发酵水平,降低CpG重组质粒的生产成本,运用响应面法优化CpG重组菌发酵培养基。方法:利用Plackett-Burman试验筛选出影响发酵水平的3个最显著因素:糖蜜、玉米浆和工业蛋白胨。然后用响应面设计试验并优化得到... 目的:为提高CpG基序重组菌的发酵水平,降低CpG重组质粒的生产成本,运用响应面法优化CpG重组菌发酵培养基。方法:利用Plackett-Burman试验筛选出影响发酵水平的3个最显著因素:糖蜜、玉米浆和工业蛋白胨。然后用响应面设计试验并优化得到最显著因素的最佳浓度,并进一步通过发酵试验验证优化后的培养基。结果:得到一组具有较高菌浓及质粒产量且价格低廉的发酵用培养基:糖蜜4.5g/L,玉米浆8.5g/L,工业蛋白胨8.5g/L,甘油10mL/L,KH2PO41.5g/L,K2HPO42.3g/L,MgSO4.7H2O 0.25g/L,在此培养条件下,OD600实测值为0.6771,理论值为0.6643,两者接近,与标准LB培养基相比,质粒产量提高了15%左右。结论:最终筛选到的培养基具有较高的性价比。 展开更多
关键词 重组菌 响应面法 发酵 培养基 优化
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5'非翻译区序列改建提高抗菌肽PR39表达 被引量：5
6
作者 明飞平 杨军 +11 位作者 朱进美 邝哲师 李华周 夏枫耿 叶明强 王候光 赵祥杰 黄志丰 蔡海明 施巨清 马苗鹏 张玲华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期86-91,共6页
目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'... 目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到pPIC9K-PR39-D,再经PCR、酶切连接构建5'UTR已删除8个核苷酸GGATCCAA的新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E;pPIC9K-PR39-D-E转化到毕赤酵母SMD1168,经PCR鉴定及G418筛选,用0.5%的甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性,表达产物经反相层析及SP-Sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果:经Tricine-SDS-PAGE检测,在4.7kDa左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/L。获得的抗菌肽PR39对E.coli DH5α,有明显抑菌活性。结论:经改建后新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽PR39,为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 PR39 pPIC9K 5’UTR 分泌表达 抗菌活性
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