水稻抗稻瘟病基因Pi2的KASP标记开发与应用 被引量：3

1

作者 赵传超 丛森 +6 位作者 梁思怡 谢华斌 陆文宇 肖武名 黄明 郭涛 王加峰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期725-734,共10页

【目的】水稻稻瘟病抗性基因Pi2对稻瘟病生理小种具有广谱抗性,开发Pi2的KASP分子标记并对其评价,为抗稻瘟病水稻品种分子育种提供简便、可靠的基因分型检测方法。【方法】利用593份自然群体中筛选出的不同抗性和亲缘关系的2份材料H-74... 【目的】水稻稻瘟病抗性基因Pi2对稻瘟病生理小种具有广谱抗性,开发Pi2的KASP分子标记并对其评价,为抗稻瘟病水稻品种分子育种提供简便、可靠的基因分型检测方法。【方法】利用593份自然群体中筛选出的不同抗性和亲缘关系的2份材料H-74和H-78,针对Pi2基因核心区域的SNP位点开发成KASP标记Pi2-C3。【结果】利用标记Pi2-C3对自然群体中的84份材料进行KASP基因分型,结果表明,该标记可以准确地将不同水稻材料的Pi2位点分为抗病基因型、杂合基因型和感病基因型,是一种高效鉴定抗稻瘟病基因Pi2的方法。利用标记Pi2-C3对阳江市病圃材料进行检测,结合表型调查结果发现,检测到含有Pi2基因的46份材料均表现出不同程度的稻瘟病抗性,表明该标记可以用于检测材料在病圃的发病情况。【结论】本研究采用KASP技术,开发了能准确检测Pi2基因的特异性分子标记Pi2-C3,并建立一套水稻Pi2基因的KASP基因分型体系,对提高抗性育种效率,改良抗稻瘟病水稻品种具有重要应用价值。 展开更多

关键词 水稻 稻瘟病 Pi2基因 KASP标记 分子标记 抗性基因 基因分型

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水稻多胺氧化酶基因(OsPAO4)CRISPR/Cas9编辑突变体的创制

2

作者 林春姿 黄其伟 +5 位作者 侯艳 高上 韩志开 韦淡虹 陈淳 王加峰 《广东农业科学》 CAS 2023年第3期1-10,共10页

【目的】稻瘟病是水稻生产上的重要限制因素,挖掘与利用抗病基因是实现水稻高产稳产的重要保障。前期研究发现,稻瘟病抗性相关osa-miR-21可能通过靶向调控多胺氧化酶基因OsPAO4调节水稻稻瘟病抗性,但目前多胺氧化酶(Polyamine oxidases,... 【目的】稻瘟病是水稻生产上的重要限制因素,挖掘与利用抗病基因是实现水稻高产稳产的重要保障。前期研究发现,稻瘟病抗性相关osa-miR-21可能通过靶向调控多胺氧化酶基因OsPAO4调节水稻稻瘟病抗性,但目前多胺氧化酶(Polyamine oxidases,PAOs)在水稻抗病中的功能研究尚未见报道。为进一步探究其在水稻抗病中的可能生物学功能,本研究利用CRISPR/Cas9编辑技术对水稻OsPAO4基因进行定点编辑并对其后代突变体进行分析。【方法】在OsPAO4第2外显子处设计了1个20 bp的编辑靶点,将靶点核苷酸片段克隆至pRGEB32载体,获得OsPAO4编辑载体。随后,利用农杆菌介导法转化水稻Pik-H4 NIL愈伤组织中,经过再生培养、潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T_(0)代植株靶位点附近DNA序列进行PCR和测序分析。【结果】OsPAO4基因被成功编辑,最终获得25个转基因阳性植株,并在T_(0)代产生多种突变类型:3株纯合突变、18株杂合突变和4株未发生编辑的植株。此外,T_(0)代杂合突变ospao4-8的颖壳颜色由紫色变为深灰色,且ospao4突变体中过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性有所升高,推测OsPAO4可能参与水稻的基础免疫过程。【结论】创制了多种类型ospao4突变体材料,初步确定OsPAO4可能参与水稻免疫过程的调控,为进一步深入揭示OsPAO4基因的具体生物学功能和分子调控机制奠定了重要基础。 展开更多

关键词 水稻 OsPAO4 CRISPR/Cas9 基因编辑 多胺氧化酶

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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

3

作者 高上 满淼淼 +2 位作者 赵华 张丽娜 王加峰 《安徽农业科学》 CAS 2023年第9期73-76,共4页

[目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用。为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技... [目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用。为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑。[方法]在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点,构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体,并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T 0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析,分析ospux2的突变类型。[结果]成功获得了ospux2的敲除突变体材料,对突变类型的分析发现,转基因编辑后代共存在7种突变类型,以缺失突变为主,其中一种纯合突变类型在OsPUX2第一个外显子的第115号碱基处缺失了一个C碱基,导致蛋白的翻译在第84个氨基酸处提前终止。[结论]该研究获得ospux2突变株系对进一步研究该基因的功能具有重要意义。 展开更多

关键词 水稻 U-BOX OsPUX2 CRISPR/Cas9 基因编辑

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基于CRISPR/Cas9技术的水稻千粒重基因tgw6突变体的创建 被引量：31

4

作者 王加峰 郑才敏 +4 位作者 刘维 罗文龙 王慧 陈志强 郭涛 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1160-1167,共8页

利用CRISPR/Cas9技术对调控水稻产量千粒重基因TGW6定点编辑,获得了一套有重要育种价值的tgw6突变体。设计了分别由U3、U6a和U6b启动子驱动、长20 bp的guide RNA(g RNA)靶点以靶向编辑TGW6基因的外显子,首先将这3个靶点一起组装到p YLCR... 利用CRISPR/Cas9技术对调控水稻产量千粒重基因TGW6定点编辑,获得了一套有重要育种价值的tgw6突变体。设计了分别由U3、U6a和U6b启动子驱动、长20 bp的guide RNA(g RNA)靶点以靶向编辑TGW6基因的外显子,首先将这3个靶点一起组装到p YLCRISPR/Cas9-MT(I)载体上,然后利用农杆菌介导侵染水稻材料H447(R819/玉针香//R819的BC3F6);提取T0代转基因植株的基因组DNA并对编辑位点附近的DNA片段进行PCR检测及测序分析。结果表明,T0代材料中tgw6的突变频率高达90%,其中纯合缺失突变率约占51%。对T1代纯合缺失突变体的千粒重性状的调查分析结果表明,部分tgw6的缺失突变能显著提高千粒重(大于5%)。不同类型tgw6突变体的成功创建不仅丰富了tgw6的变异类型,为水稻的高产稳产奠定了重要的材料基础,还证实了CRISPR/Cas9技术在水稻基因工程育种中高效、易操作的特点。 展开更多

关键词 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 TGW6 千粒重

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水稻NBS-LRR类抗稻瘟病蛋白Pik-h的互作蛋白筛选 被引量：9

5

作者 王加峰 刘浩 +1 位作者 王慧 陈志强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期482-490,共9页

【目的】利用酵母双杂交系统,以组成抗稻瘟病基因Pik-h的2个紧密连锁且功能独立的Pikh-1和Pikh-2蛋白为诱饵,在水稻叶片中筛选与之互作的蛋白,以便深入研究抗病基因Pik-h介导的抗病反应途径。【方法】以含抗稻瘟病基因Pik-h的近等基因系... 【目的】利用酵母双杂交系统,以组成抗稻瘟病基因Pik-h的2个紧密连锁且功能独立的Pikh-1和Pikh-2蛋白为诱饵,在水稻叶片中筛选与之互作的蛋白,以便深入研究抗病基因Pik-h介导的抗病反应途径。【方法】以含抗稻瘟病基因Pik-h的近等基因系IRBL8为材料,取稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）GD0193接种12和24 h后的水稻叶片,等量混合后提取总RNA,按照酵母双杂交试剂盒（Make Your Own＂Mate＆Plate＂Library System）的要求构建水稻叶片靶标c DNA文库。利用快速重组克隆的方法构建p GBKT7-Pikh1和p GBKT7-Pikh2诱饵载体,并分别将它们转化至酵母菌株Y2H Gold,提取细胞总蛋白后利用Western blot检测Pikh1和Pikh2的表达情况,并对这2个诱饵载体自激活和毒性分析后进行酵母双杂交筛选。提取SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His/X-α-Gal筛选平板培养基上呈蓝色的酵母单克隆的质粒,将其分别与对应的诱饵载体共转化酵母菌株Y2H Gold,涂布于筛选平板培养基上进行互作的重复验证,将通过重复验证的质粒测序分析所得的序列比对水稻基因组数据库以确定目的基因,并对这些基因进行gene ontology（GO）注释分析以确定其分子功能、生物过程及细胞组成。【结果】靶标c DNA文库的库容量约为2.2×10~6,插入片段长度均大于400 bp,表明水稻c DNA文库质量高。诱饵载体p GBKT7-Pikh1和p GBKT7-Pikh2均能在酵母细胞中正确表达出对应的Pikh1及Pikh2蛋白,无自激活活性而且对酵母无毒性作用,符合文库筛选的要求。利用含有诱饵载体的酵母菌株Y2H Gold与靶标文库菌株Y187结合（Mating）的方式筛选,获得13个与Pikh-1相互作用的蛋白、5个与Pikh-2相互作用的蛋白,其中有2个与Pikh-1及Pikh-2同时存在相互作用。这些蛋白包括4个在逆境响应或激素信号转导过程中起到重要作用的（辅）转录因子、3个信号蛋白、4个参与光合作用的叶绿体蛋白、1个含有U-BOX结构域的蛋白及4个未知功能蛋白。【结论】成功构建了适宜于研究抗病基因（R基因）介导反应途径的酵母双杂交c DNA文库,筛选出Pik-h的互作蛋白,为进一步研究Pik-h或其他抗稻瘟病基因介导的抗病机制打下了基础。 展开更多

关键词 水稻 稻瘟病菌 酵母双杂交 互作蛋白 Pik-h 筛选

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分泌型卷曲相关蛋白5与肥胖及糖尿病的相关性研究进展 被引量：4

6

作者 王加峰 张有成 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期2406-2408,共3页

分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)5是SFRP家族中的一员,是一种新型的抗炎脂肪因子。已有研究表明,SFRP5的表达与糖尿病、肥胖相关,其可竞争性结合Wnt信号通路胞外配体Wnt5a蛋白,从而抑制Wnt信号通路,改善胰岛素抵抗,调节糖脂代谢。本文对SFRP5... 分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)5是SFRP家族中的一员,是一种新型的抗炎脂肪因子。已有研究表明,SFRP5的表达与糖尿病、肥胖相关,其可竞争性结合Wnt信号通路胞外配体Wnt5a蛋白,从而抑制Wnt信号通路,改善胰岛素抵抗,调节糖脂代谢。本文对SFRP5与肥胖及糖尿病的相关性研究成果进行综述,为今后提高对2型糖尿病的诊治提供思路。 展开更多

关键词 分泌型卷曲相关蛋白5 肥胖症 糖尿病 胰岛素抵抗

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基于网络药理学和分子对接分析黄芪-当归治疗高血压病潜在机制 被引量：1

7

作者 刘珊 王文越 +4 位作者 王晓龙 李珩玉 王加峰 滕佳林 王永春 《中国中医药图书情报杂志》 2023年第5期18-25,共8页

目的基于网络药理学和分子对接探讨黄芪-当归药对治疗高血压的作用机制。方法采用TCMSP数据库筛选黄芪、当归活性成分,SwissTargetPrediction数据库获取对应靶点,通过GeneCards、DrugBank及DisGeNET数据库获取高血压病相关靶点,并与黄芪... 目的基于网络药理学和分子对接探讨黄芪-当归药对治疗高血压的作用机制。方法采用TCMSP数据库筛选黄芪、当归活性成分,SwissTargetPrediction数据库获取对应靶点,通过GeneCards、DrugBank及DisGeNET数据库获取高血压病相关靶点,并与黄芪-当归作用靶点取交集,得到其治疗高血压病潜在靶点。将交集靶点利用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,通过DAVID6.8数据库对靶点进行GO及KEGG富集分析。使用AutoDock4.2.6软件将主要活性成分与核心靶点进行分子对接验证。结果得到黄芪-当归药对活性成分29个,活性成分与高血压病交集靶点189个,GO富集分析得到生物过程285个、细胞组分36个、分子功能65个,KEGG富集分析得到100条通路。分子对接结果显示,11个主要活性成分与5个核心靶点(VEGFA、MAPK1、PIK3CA、SRC、AKT1)均具有较好的亲和力。结论黄芪-当归主要活性成分熊竹素、山柰酚、槲皮素、异鼠李素、阿魏酸等可能通过HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、黏着斑、cAMP等信号通路,作用于VEGFA、MAPK1、PIK3CA、SRC、AKT1等靶点治疗高血压。 展开更多

关键词 黄芪 当归 高血压病 网络药理学 分子对接 作用机制

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水稻幼穗分化期的抗旱性研究与综合评价 被引量：13

8

作者 杨瑰丽 杨美娜 +3 位作者 黄翠红 曲志恒 陈志强 王加峰 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期140-145,共6页

利用56个不同来源的水稻品系,在温室抗旱筛选平台通过孕穗期干旱胁迫,测定光合作用、蒸腾速率、抗活性氧等8个生理指标,结合隶属函数分析方法对所有材料进行综合抗旱能力评价,并调查了待测品系在干旱处理与对照条件下主要产量相关的农... 利用56个不同来源的水稻品系,在温室抗旱筛选平台通过孕穗期干旱胁迫,测定光合作用、蒸腾速率、抗活性氧等8个生理指标,结合隶属函数分析方法对所有材料进行综合抗旱能力评价,并调查了待测品系在干旱处理与对照条件下主要产量相关的农艺性状。干旱处理后的气孔阻抗值和冠层温度显著高于正常处理,表明水稻幼穗分化期干旱胁迫处理主要影响水稻的光合和蒸腾作用。利用主成分分析和隶属函数分析方法对水稻品系抗旱性进行了综合评价,最终筛选出3个幼穗分化期高抗水稻品系。同时,对产量相关农艺性状的分析结果表明,产量性状中的结实率与综合抗旱能力D值显著相关,可作为衡量水稻幼穗分化期抗旱性的产量性状指标。 展开更多

关键词 水稻 幼穗分化期 干旱胁迫 综合抗旱能力 农艺性状

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水稻抗稻瘟病蛋白Pik_2-H4基因的克隆及互作蛋白的筛选 被引量：6

9

作者 刘浩 王加峰 +2 位作者 孙大元 王慧 陈志强 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期156-160,共5页

Pik2-H4是从水稻高抗稻瘟病株系H4中克隆的广谱型抗稻瘟病基因。Pik2-H4基因的CDS全长序列3066 bp,与日本晴中的等位基因相比,其序列存在较大差异。Pik2-H4属于NBS-LRR类基因,其蛋白序列含有NBARC结构域及富亮氨酸重复序列。采用酵母双... Pik2-H4是从水稻高抗稻瘟病株系H4中克隆的广谱型抗稻瘟病基因。Pik2-H4基因的CDS全长序列3066 bp,与日本晴中的等位基因相比,其序列存在较大差异。Pik2-H4属于NBS-LRR类基因,其蛋白序列含有NBARC结构域及富亮氨酸重复序列。采用酵母双杂交系统,以Pik2-H4蛋白为诱饵从水稻cDNA表达文库中钓取互作蛋白质,并成功筛选到3个与Pik2-H4有相互作用的蛋白质(LOC-Os08g39300、LOC-Os03g25960、LOC-Os09g29130)。本研究结果有助于进一步了解由Pik2-H4介导的水稻抗稻瘟病反应机理。 展开更多

关键词 Pik2-H4 克隆 酵母双杂交 互作蛋白

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水稻矮秆基因研究进展 被引量：5

10

作者 刘浩 王加峰 +4 位作者 孙大元 郭涛 刘永柱 王慧 陈志强 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第22期139-144,共6页

20世纪矮秆基因的利用使水稻育种发生了革命性的变化,随后大量的矮杆基因被不断挖掘,相关的研究给生产上带来了巨大的经济效益。目前,水稻的植株高度仍是育种中备受关注的性状之一。植株高度的降低有效地增强了水稻的抗倒伏能力,其可变... 20世纪矮秆基因的利用使水稻育种发生了革命性的变化,随后大量的矮杆基因被不断挖掘,相关的研究给生产上带来了巨大的经济效益。目前,水稻的植株高度仍是育种中备受关注的性状之一。植株高度的降低有效地增强了水稻的抗倒伏能力,其可变性为理想株型的选育奠定了基础,理想株型能够提高植株光合作用,进一步提高水稻单产;另一方面,对水稻矮化机理的研究有助于利用植物内源激素在生产上调节作物高度。对水稻矮秆基因的遗传、矮化机理、矮秆基因克隆、矮秆基因调控理想株型等几个方面进行了综述,并对已经报道的调控水稻株高的基因进行了全面总结;同时,对广东省已审定的水稻品种的株高以及现行品种当中矮秆基因遗传来源等问题进行了统计与分析,最后对未来水稻矮秆突变体的实际应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 水稻 矮秆基因 株型 突变体

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利用CRISPR/Cas9技术创建OsCOL9水稻突变体 被引量：5

11

作者 刘维 刘浩 +4 位作者 董双玉 古丰玮 陈志强 王加峰 王慧 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期42-48,共7页

CRISPR/Cas9系统可对植物的内源基因进行有效定点编辑,为作物的遗传育种提供了新的方向。以感病水稻品种丽江为材料,抗病基因OsCOL9为靶基因,探索该系统对水稻内源基因定点编辑效率以及获得有研究意义的突变体。OsCOL9基因CDS序列全长1 ... CRISPR/Cas9系统可对植物的内源基因进行有效定点编辑,为作物的遗传育种提供了新的方向。以感病水稻品种丽江为材料,抗病基因OsCOL9为靶基因,探索该系统对水稻内源基因定点编辑效率以及获得有研究意义的突变体。OsCOL9基因CDS序列全长1 266 bp,编码一个422 aa蛋白,分子量大小约为45.6 k Da,蛋白质结构的N端含有B-box结构域,C端含有CCT(CONSTANS、CONSTANS-Like、TOC1)结构域。设计4个长20 nt的guide RNAs(gRNAs)靶点,靶向编辑OsCOL9基因的CDS起始区域以及外显子的末端,分别由U3、U6a、U6b以及U6c启动子驱动,提取T1转基因植株的基因组DNA并对编辑位点附近的DNA片段进行序列分析。结果表明,T1材料中OsCOL9的碱基缺失数最多可达59 bp,突变次数最多可达11次,取得较好的基因编辑效果。同时本试验出现了脱靶效应,因此着重探讨了降低脱靶效应的方法。由于CRISPR/Cas9系统在进行基因编辑时没有外源基因的导入,加上该技术的快捷、简便,对生物技术与传统育种的结合具有重要实践意义。 展开更多

关键词 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 OsCOL9

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水稻叶鞘原生质体转化体系的构建及Pik-H4和AvrPik-H4蛋白的瞬时表达 被引量：4

12

作者 刘维 刘浩 +4 位作者 董双玉 古丰玮 陈志强 王加峰 王慧 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第23期4575-4584,共10页

【目的】探索水稻叶鞘原生质体最佳游离时间以及转化时间,提高瞬时表达效率,在蛋白水平对目的基因进行检测且大批量表达。探索该系统表达抗稻瘟病蛋白Pik1-H4、Pik2-H4及无毒蛋白Avr Pik-H4的可行性,对目的基因的功能进行分析。【方法... 【目的】探索水稻叶鞘原生质体最佳游离时间以及转化时间,提高瞬时表达效率,在蛋白水平对目的基因进行检测且大批量表达。探索该系统表达抗稻瘟病蛋白Pik1-H4、Pik2-H4及无毒蛋白Avr Pik-H4的可行性,对目的基因的功能进行分析。【方法】以高抗稻瘟病品种H4及对照品种中二软占作为试验材料,利用1/2 MS培养基种植水稻幼苗25℃恒温培养7—10 d。利用纤维素酶及离析酶对水稻叶鞘进行酶解,血球计数板分别统计游离1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 h的细胞数目获得最佳的酶解时间。将目标基因Pik1-H4、Pik2-H4及Avr Pik-H4分别与GFP融合,构建瞬时表达载体,利用PEG介导转入水稻叶鞘原生质体。设置转化10、12、14、16、18、20、22和24 h,分别提取细胞总RNA,UBQ管家基因为对照,设计GFP特异性扩增引物,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测GFP的相对表达量,探索最佳的转化时间。通过激光共聚焦扫描显微镜对目标基因进行亚细胞定位观察,推测基因功能。提取细胞总蛋白,以Anti-GFP为一抗用Western blot对目标蛋白表达进行验证。【结果】相对室温土壤栽培,营养丰富且均衡的1/2 MS培养基恒温种植的水稻幼苗质量更优质,活力更高。游离时间的长短对游离效率影响较大,游离的最佳时间为4—6 h,在3—4 h细胞游离数目增长速度最快,4—6 h细胞数量趋于平稳,6 h以后细胞总量呈现下降趋势,特别是7 h以后,显微下细胞碎片增多,细胞死亡速度加快。检测GFP的相对表达量,获得最佳转化时间为14—16 h,16 h达到最高值,之后逐渐下降。随着时间的推移,荧光显微镜下观察到GFP蛋白发出的荧光逐渐淬灭。亚细胞定位观察发现Avr Pik-H4蛋白主要被定位于水稻细胞膜上,初步推测是一种膜蛋白,通过某种形式运输到宿主细胞作为激发子触发一系列反应。Pik-H4是高效广谱抗稻瘟病基因,分为Pik1-H4和Pik2-H4两个部分,Pik1-H4主要定位在内质网,Pik2-H4主要定位在质体,从定位结果初步推定Pik1-H4可能主要参与Avr Pik-H4蛋白的识别反应,Pik2-H4主要起到调控下游抗病的作用。Western blot结果显示目标蛋白表达成功,分子大小正确。Pik1-H4和Avr Pik-H4的表达量高于Pik2-H4,说明分子量的大小不是影响转化效率的关键因素。【结论】水稻叶鞘原生质体瞬时表达系统具有高效快速的特点,通过对游离及转化时间的探索为水稻瞬时表达体系的广泛实践应用提供参考。目标基因的成功表达为Pik-H4与无毒蛋白互作机制的研究提供了有价值的理论依据。 展开更多

关键词 水稻 原生质体 亚细胞定位 Western杂交

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水稻NBS-LRR类抗稻瘟病基因研究进展 被引量：8

13

作者 刘浩 陈志强 王加峰 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期664-670,共7页

稻瘟病是水稻生产上危害最严重的病害之一,针对该病的抗性基因在水稻中大多编码NBS-LRR类抗病蛋白质,该类蛋白质能够识别病原菌关联分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMP),参与调控效应蛋白质激活免疫反应(Effector-tri... 稻瘟病是水稻生产上危害最严重的病害之一,针对该病的抗性基因在水稻中大多编码NBS-LRR类抗病蛋白质,该类蛋白质能够识别病原菌关联分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMP),参与调控效应蛋白质激活免疫反应(Effector-triggered immunity,ETI)。NBS-LRR类蛋白质结构多样、功能复杂,它们在植物抗病过程中扮演了重要的角色。本文主要对NBS-LRR类蛋白质的结构与功能、NBS-LRR类抗稻瘟病基因的克隆进展、NBS-LRR类蛋白质介导的信号传递途径以及目前研究中存在的问题进行了介绍。 展开更多

关键词 稻瘟病 NBS-LRR蛋白质 抗性基因 信号传导

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丁酸钠在动物生产中的应用研究 被引量：5

14

作者 王加峰 杨国明 +1 位作者 赵彦光 胡洪 《饲料研究》 CAS 2008年第4期11-12,共2页

饲用抗生素所引发的诸多食品安全问题日益引起人们的重视,开发应用新型饲料添加剂成为关键问题。丁酸钠作为一种新一代的饲料添加剂,在动物生产中的应用越来越广泛。

关键词 丁酸钠 酸化剂 抗生素 饲料添加剂

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VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性 被引量：5

15

作者 阮小蕾 王加峰 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-422,共5页

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病机制

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水稻单倍体诱导基因Os MATL突变体的创制与分析 被引量：4

16

作者 文钦 贾思思 +4 位作者 王加峰 黄翠红 王慧 陈志强 郭涛 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期827-836,共10页

MTL基因是玉米中控制单倍体诱导性状的关键基因,该基因在作物中的功能高度保守。OsMATL是MTL在水稻中的同源基因,已有研究证实该基因的突变可以诱导水稻单倍体产生,但不同遗传背景下,OsMATL基因的突变效应有待明确。本研究以日本晴(粳稻... MTL基因是玉米中控制单倍体诱导性状的关键基因,该基因在作物中的功能高度保守。OsMATL是MTL在水稻中的同源基因,已有研究证实该基因的突变可以诱导水稻单倍体产生,但不同遗传背景下,OsMATL基因的突变效应有待明确。本研究以日本晴(粳稻)和华航48(籼稻)为材料,利用CRISPR/Cas9技术对OsMATL基因启动子区和编码区的不同位点进行编辑,成功获得OsMATL基因不同遗传背景系列突变体。分析了不同突变位点对结实率的影响,发现OsMATL基因编码区突变后结实率为2%~15%,且存在不同类型的败育籽粒,而启动子区域的大片段缺失对结实率没有显著影响;此外,籼稻背景突变体的结实率高于粳稻突变体。本研究创制的不同类型OsMATL突变体为进一步研究水稻孤雌生殖单倍体诱导的机制提供了基础材料。 展开更多

关键词 水稻 单倍体诱导基因 突变体

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基于QTL-seq的水稻粒质量QTL定位及候选基因分析 被引量：2

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作者 王豪 张健 +4 位作者 王加峰 杨瑰丽 郭涛 陈志强 王慧 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期18-28,共11页

利用实验室收集的优良种质资源籼稻亲本B91及B233分析影响粒质量的关键表型性状,挖掘粒质量相关的遗传位点与候选基因,进一步了解多基因调控粒型性状的遗传基础,以期在种质资源改良中加以应用。以2个籼稻亲本B91和B233及杂交繁育的F2群... 利用实验室收集的优良种质资源籼稻亲本B91及B233分析影响粒质量的关键表型性状,挖掘粒质量相关的遗传位点与候选基因,进一步了解多基因调控粒型性状的遗传基础,以期在种质资源改良中加以应用。以2个籼稻亲本B91和B233及杂交繁育的F2群体为研究材料,对B91和B233籽粒颖壳和胚乳进行扫描电镜观察,测定两亲本灌浆速率;对B91和B233构建的F2分离群体进行QTL-seq分析,通过注释基因表达位置以及预测功能进一步筛选出粒质量候选基因。结果表明,根据籽粒颖壳和胚乳扫描电镜观察,B233与B91粒长、粒宽、粒厚的差异是由细胞大小和细胞数量共同决定的,且与B91相比B233籽粒饱满度较差。通过灌浆参数的比较,B233起始生长势,活跃灌浆时间,最大灌浆速率等指标均大于B91。QTL-seq分析共得到了430 762个有效SNP位点,发现了位于6条染色体上共8个QTL。主要关注正阈值区内的5个QTL,对正阈值区QTL位点内△(SNP-index)>0.7的SNP位点进行了筛选,选出在基因中非同义突变及剪接位点上的SNP突变23个基因,同时挑选出Indel突变基因共11个。根据NCBI网站对注释基因的转录表达分析及基因功能预测筛选出6个可能为调控粒质量性状的候选基因,其中基因Os04g0617600、Os04g0619600编码蛋白起到蛋白激酶或转录调节因子作用,Os04g0624600、Os04g0631000调控碳水化合物的合成与分解,Os04g0653100调控生物大分子的运输,同时也是花粉壁细胞的重要组成成分,Os02g0611450可能调控生物大分子的合成和细胞周期。综上,水稻粒长、粒宽、粒厚及饱满度均直接影响水稻籽粒质量,通过扫描电镜观察,灌浆速率调查从细胞水平和生理水平解释粒质量差异。通过QTL-seq结合注释基因转录表达分析及功能预测等手段可以更高效的筛选出粒质量的候选基因。水稻粒质量可能受到蛋白磷酸化、转录调节相关基因的影响。 展开更多

关键词 水稻 粒质量基因 QTL-seq 数量性状基因座 SNP-index

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利用信息化实现实验室智慧安全管理的对策思考 被引量：2

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作者 黄翠红 周丹华 王加峰 《产业与科技论坛》 2023年第13期247-248,共2页

针对当今高校扩招以及“双一流”学科审核评估需要,开展利用信息技术进行实验室安全管理的探索,摸索全新的信息现代化管理模式,进而提升管理水平,使实验室管理达到科学、规划、安全及高效。通过建立创新实验室管理模式、加强实验室的安... 针对当今高校扩招以及“双一流”学科审核评估需要,开展利用信息技术进行实验室安全管理的探索,摸索全新的信息现代化管理模式,进而提升管理水平,使实验室管理达到科学、规划、安全及高效。通过建立创新实验室管理模式、加强实验室的安全防护,使实验室物品的采购和使用更加科学合理,提高物品存取使用效率,实现实验管理的平台化和网络化。 展开更多

关键词 信息技术 实验室管理 安全防护

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AT-hook基因及其在植物开花调控中的研究进展 被引量：1

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作者 李津璇 郭敏 +1 位作者 王加峰 杨瑰丽 《中国农学通报》 2021年第27期77-81,共5页

AT-hook基因是能够编码与双链DNA小沟中富含AT碱基的序列特异性结合的一类基因,其所编码的蛋白含有以甘氨酸-精氨酸-脯氨酸(GRP)三个氨基酸残基为中心的DNA结合蛋白基序。笔者通过对AT-hook基因的特点和功能及其在拟南芥及水稻等高等植... AT-hook基因是能够编码与双链DNA小沟中富含AT碱基的序列特异性结合的一类基因,其所编码的蛋白含有以甘氨酸-精氨酸-脯氨酸(GRP)三个氨基酸残基为中心的DNA结合蛋白基序。笔者通过对AT-hook基因的特点和功能及其在拟南芥及水稻等高等植物开花中的调控作用综述。AT-hook基因不仅参与植物的生长发育及逆境胁迫与激素信号应答,同时在花器官的形成以及植物开花中也起着重要的调控作用。该基因在花器官组织中的表达量最高,影响成花素基因的表达,且其编码蛋白能够通过改变染色质状态或招募蛋白复合体在表观水平上调控植物开花相关基因的转录,从而影响植物开花。该基因可能为植物开花的表观遗传调控提供了新的途径。 展开更多

关键词 AT-hook基因 水稻 拟南芥 发育调控 开花调控

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远程红外测温仪在窑炉上的应用分析 被引量：2

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作者 储李德 张丹林 王加峰 《新世纪水泥导报》 CAS 2014年第2期9-11,共3页

在窑炉上安装远程红外测温仪可为操作人员提供大量的实时和历史数据,通过对这些数据的分析,能提前预知某种情况的发生,能有利于问题的早发现、早处理。操作人员需要了解的是一段时间内,窑表面温度的变化趋势,它的发展方向,以及它的连续... 在窑炉上安装远程红外测温仪可为操作人员提供大量的实时和历史数据,通过对这些数据的分析,能提前预知某种情况的发生,能有利于问题的早发现、早处理。操作人员需要了解的是一段时间内,窑表面温度的变化趋势,它的发展方向,以及它的连续性,而不是刻意追求当前温度的精度。 展开更多

关键词 远程红外测温仪 维护 使用 温度

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