鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析

1

作者 王圣文 张丹 +2 位作者 邬雨倩 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位

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猕猴桃高效栽培技术及病虫害防治措施

2

作者 刘加强 张克义 +2 位作者 武峰 王圣文 陈广超 《果农之友》 2024年第2期35-37,共3页

猕猴桃是半阴性、攀缘茎类果树,又称为奇异果、猕猴梨。其果实酸甜味美、富含多种氨基酸和蛋白质等营养元素,深受消费者的青睐,盛负“水果之王”的美称。近年来,消费者对猕猴桃优质果品的需求越来越多。为提高果实的品质和产量,提出从... 猕猴桃是半阴性、攀缘茎类果树,又称为奇异果、猕猴梨。其果实酸甜味美、富含多种氨基酸和蛋白质等营养元素,深受消费者的青睐,盛负“水果之王”的美称。近年来,消费者对猕猴桃优质果品的需求越来越多。为提高果实的品质和产量,提出从猕猴桃的栽培管理、整形修剪、施肥灌溉、果实采收及病虫害防治等方面,积极采取有效措施,才能真正实现猕猴桃的优质丰产,希望给种植猕猴桃的果农一点参考和帮助。 展开更多

关键词 猕猴桃 栽培技术 病虫害 防治措施

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大兴安岭太平沟钼矿床成矿年代学研究 被引量：21

3

作者 王圣文 王建国 +5 位作者 张达 祁小军 吴淦国 赵丕忠 杨宗锋 刘彦兵 《岩石学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2913-2923,共11页

太平沟钼矿床为大兴安岭地区新发现的斑岩型钼矿床。本文的同位素地质年代学研究获得获得含矿的蚀变二长花岗斑岩的钾长石^(40)Ar-^(39)Ar等时线年龄为127.5±4Ma,花岗斑岩锆石SHRIMP U-Pb年龄为131.5±1.1Ma,矿体辉钼矿Re-Os... 太平沟钼矿床为大兴安岭地区新发现的斑岩型钼矿床。本文的同位素地质年代学研究获得获得含矿的蚀变二长花岗斑岩的钾长石^(40)Ar-^(39)Ar等时线年龄为127.5±4Ma,花岗斑岩锆石SHRIMP U-Pb年龄为131.5±1.1Ma,矿体辉钼矿Re-Os等时线年龄为129.4±3.9Ma,表明斑岩成矿系统形成于131.5～127.5Ma,与早白垩世区域性燕山期大规模构造-岩浆事件一致。 展开更多

关键词 大兴安岭 太平沟斑岩型钼矿 ^(40)Ar-^(39)Ar年龄 锆石SHRIMP U-PB年龄 RE-OS年龄

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基于模糊深度Q网络的放煤智能决策方法 被引量：1

4

作者 杨艺 王圣文 +1 位作者 崔科飞 费树岷 《工矿自动化》 CSCD 北大核心 2023年第4期78-85,共8页

在综放工作面放煤过程中,由于煤尘和降尘水雾对工作人员视线的影响,人工控制放煤存在过放、欠放问题。针对该问题,将液压支架尾梁看作智能体,把放煤过程抽象为马尔可夫最优决策,利用深度Q网络(DQN)对放煤口动作进行决策。然而DQN算法中... 在综放工作面放煤过程中,由于煤尘和降尘水雾对工作人员视线的影响,人工控制放煤存在过放、欠放问题。针对该问题,将液压支架尾梁看作智能体,把放煤过程抽象为马尔可夫最优决策,利用深度Q网络(DQN)对放煤口动作进行决策。然而DQN算法中存在过估计问题,因此提出了一种模糊深度Q网络(FDQN)算法,并应用于放煤智能决策。利用放煤过程中煤层状态的模糊特征构建模糊控制系统,以煤层状态中的煤炭数量和煤矸比例作为模糊控制系统的输入,并将模糊控制系统的输出动作代替DQN算法采用max操作选取目标网络输出Q值的动作,从而提高智能体的在线学习速率和增加放煤动作奖赏值。搭建综放工作面放煤模型,对分别基于DQN算法、双深度Q网络(DDQN)算法、FDQN算法的放煤工艺进行三维数值仿真,结果表明:FDQN算法的收敛速度最快,相对于DQN算法提高了31.6%,增加了智能体的在线学习速率;综合煤矸分界线直线度、尾梁上方余煤和放出体中的矸石数量3个方面,基于FDQN算法的放煤效果最好;基于FDQN算法的采出率最高、含矸率最低,相比基于DQN算法、DDQN算法的采出率分别提高了2.8%,0.7%,含矸率分别降低了2.1%,13.2%。基于FDQN算法的放煤智能决策方法可根据煤层赋存状态对液压支架尾梁动作进行调整,较好地解决了放煤过程中的过放、欠放问题。 展开更多

关键词 综放工作面 智能放煤 深度强化学习 模糊深度Q网络 模糊控制 马尔可夫

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内蒙古太平沟钼矿床流体包裹体特征及成矿动力学背景 被引量：11

5

作者 王建国 张静 +4 位作者 王圣文 张达 祁小军 吴淦国 赵丕忠 《岩石学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2621-2630,共10页

太平沟斑岩型钼矿床位于大兴安岭北段,处于东西向古生代古亚洲构造成矿域和北北东向中新生代滨西太平洋构造成矿域的转换、叠合部位。该矿床形成于131.5～127.5Ma,是大陆内部构造-岩浆活化的产物,成矿系统发育于早白垩世初期华北及中国... 太平沟斑岩型钼矿床位于大兴安岭北段,处于东西向古生代古亚洲构造成矿域和北北东向中新生代滨西太平洋构造成矿域的转换、叠合部位。该矿床形成于131.5～127.5Ma,是大陆内部构造-岩浆活化的产物,成矿系统发育于早白垩世初期华北及中国东部构造体制由挤压向伸展转变的背景下。太平沟钼矿的流体成矿过程包括早、中、晚3个阶段,分别以石英-黄铜矿-黄铁矿、石英-黄铁矿-辉钼矿和石英-碳酸盐组合为特征。石英中发育水溶液型、含/富CO_2型和含子矿物型流体包裹体,子矿物包括石盐、黄铜矿等,但晚阶段仅发育水溶液型包裹体。成矿早、中、晚各阶段流体包裹体的均一温度分别集中在320～390℃、240～320℃和140～200℃,盐度变化为从>66.8 wt%NaCl eqv.、2.4 wt%～33.8 wt%NaCl eqv.到<10 wt%NaCl eqv.。流体系统由早阶段的高温、高盐度、富CO_2的岩浆热液,经流体沸腾、CO_2逸失、温度降低等过程导致大量金属硫化物沉淀,演化为晚阶段低温、低盐度、贫CO_2的大气降水热液。 展开更多

关键词 内蒙古 钼矿床 流体包裹体 特征 成矿动力学 Inner Mongolia Mo deposit fluid inclusions 石英 内部构造 子矿物 溶液型 黄铜矿 黄铁矿 系统发育 成矿域 NaCl 金属硫化物 斑岩型钼矿 中新生代

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中国北方大陆及邻区岩石圈演化及与大规模成矿作用关系 被引量：11

6

作者 邱瑞照 周肃 +10 位作者 谭永杰 祁世军 高鹏 李文渊 陈秀法 王靓靓 陈正 元春华 韩九曦 王圣文 冯艳芳 《中国地质》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期544-563,共20页

根据地质和地球物理特征,中国北方大陆可区分为造山带型和裂谷型两类岩石圈,其中造山带型又可区分出分别代表古生代、中生代和新生代物质结构的造山带型岩石圈:在从空间上,自西向东分别由以天山为代表的新生代造山带型、以额济纳旗为代... 根据地质和地球物理特征,中国北方大陆可区分为造山带型和裂谷型两类岩石圈,其中造山带型又可区分出分别代表古生代、中生代和新生代物质结构的造山带型岩石圈:在从空间上,自西向东分别由以天山为代表的新生代造山带型、以额济纳旗为代表的古生代造山带型、以大兴安岭为代表的燕山期造山带型和张广才岭为代表的新生代裂谷型岩石圈组成,反映了古生代形成的中亚造山带在中新生代大陆动力学过程中的分异演化,导致不同类型岩石圈形成和陆壳、岩石圈地幔物质组成、结构的不均一性,以及构成大规模成矿作用大体上以E110°为界,西部主要为晚古生代,东部主要为中生代的格局。简要讨论了不同岩石圈类型的壳幔物质、结构的地质含义,以及区域找矿方向和深部找矿空间问题。 展开更多

关键词 岩石圈类型 深部过程 大规模成矿作用 区域找矿方向和深部找矿空间 中国北方大陆及邻区

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中亚地区矿产资源勘查开发方向 被引量：6

7

作者 邱瑞照 周肃 +13 位作者 李文渊 祁世军 尤孝才 高鹏 陈秀法 王靓靓 陈玉明 陈正 元春华 韩九曦 冯艳芳 王明燕 王圣文 肖晓牛 《地质通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期307-313,共7页

概要地介绍了中亚地区的构造分区特点、优势矿产资源和主要成矿时期。在区域成矿分析的基础上,强调围绕大规模成矿作用进行地质过程解析的重要性,更好地为资源潜力评价和勘查开发选区提供依据。

关键词 勘查开发 资源潜力 大规模成矿作用 地质过程解析 中亚地区

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钢渣粉-水泥复合体系水化热及动力学研究 被引量：5

8

作者 高志扬 王圣文 +2 位作者 吕兴栋 李响 蒋科 《长江科学院院报》 CSCD 北大核心 2018年第12期138-142,共5页

为了研究钢渣粉对水泥水化的影响,通过水化热和水化动力学模拟,研究了钢渣粉掺量及细度对水泥早期水化进程及反应机理的影响。结果表明:与纯水泥相比,细钢渣粉缩短诱导期,粗钢渣粉延长诱导期;细钢渣掺量为15%时,加速期缩短,细钢渣掺量超... 为了研究钢渣粉对水泥水化的影响,通过水化热和水化动力学模拟,研究了钢渣粉掺量及细度对水泥早期水化进程及反应机理的影响。结果表明:与纯水泥相比,细钢渣粉缩短诱导期,粗钢渣粉延长诱导期;细钢渣掺量为15%时,加速期缩短,细钢渣掺量超过15%时,加速期延长;钢渣比表面积增大或掺量增加,第3放热峰提前;总放热量随钢渣掺量增加而降低,随比表面积增大而提高;结晶成核与晶体生长控制加速期,钢渣粉掺入会降低反应阻力,且反应阻力随着钢渣粉掺量的增加,先降低后略微增大;粗钢渣粉-水泥复合体系的反应阻力大于细钢渣粉-水泥复合体系;稳定期反应进程受扩散控制,扩散阻力随着掺量增加先增大后降低;钢渣粉比表面积增大,扩散阻力增大。研究成果为钢渣粉-水泥复合体系水化动力学进一步的研究提供了基础。 展开更多

关键词 钢渣粉-水泥复合体系 钢渣粉掺量 细度 水化热 水化动力学

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河北丰宁大西沟金矿流体地球化学研究 被引量：3

9

作者 邓磊 王建国 +2 位作者 王圣文 曹烨 熬翀 《中国地质》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期184-193,共10页

笔者利用显微测温、成分及氢氧同位素测试对大西沟金矿流体包裹体参数以及成矿流体性质进行了较为深入的探讨,结果显示,大西沟金矿与矿化关系密切的石英中,包裹体可以分为气体包裹体、气液包裹体、液体包裹体3种类型,其中气液包裹体、... 笔者利用显微测温、成分及氢氧同位素测试对大西沟金矿流体包裹体参数以及成矿流体性质进行了较为深入的探讨,结果显示,大西沟金矿与矿化关系密切的石英中,包裹体可以分为气体包裹体、气液包裹体、液体包裹体3种类型,其中气液包裹体、液体包裹体最为常见。包裹体均一温度主要集中在175℃～275℃,盐度为2%～7%,流体密度为0.804～0.959g/cm^3,成矿深度为1.01～2.24 km。流体包裹体气相成分主要为H_2O和CO_2;包裹体液相成分中阳离子以Na^+为主,Ca^(2+)、K^+次之,阴离子以SO_4^(2-)、Cl^-为主,仅含微量的F^-。石英中δ^(18)O水值是2.1‰～5.8‰,δD值为-87‰～-103.67‰,反映成矿流体来源于岩浆水与大气降水。通过气体逸度的计算,大西沟金矿成矿流体中金主要以[Au (HS)_2]^-络合物的形式迁移,混合作用和热液蚀变作用是导致金沉淀与富集的主要因素。 展开更多

关键词 流体包裹体 成矿流体 地球化学 大西沟金矿 河北

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灌排两用地下节水灌溉技术的研究与应用 被引量：1

10

作者 王圣文 李路华 王正中 《节水灌溉》 北大核心 2010年第11期56-58,共3页

灌排两用地下节水灌溉技术可以有效的提高田间水分的利用率,具有"旱时吸水,涝时排水"的功能,达到旱涝保收的目的;并且该灌溉技术能够降低病虫害的发生,减少因肥料流失造成的水污染,克服了目前几种常见的灌溉技术的缺陷。

关键词 灌排两用 地下灌溉 水分利用率 旱涝保收 随水施肥

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多级连续消力池的布置与水力计算方法 被引量：6

11

作者 王圣文 吴洪亮 《水利与建筑工程学报》 2011年第5期105-107,138,共4页

某些中小型水库工程由于地形或地质条件的限制,既不适合采取挑流式消能,又不宜采用底流式消能,在这种情况下,采取多级连续消力池消能也许是不错的选择。本文结合湖北省丹江口市金岗水库溢洪道的除险加固设计,系统地介绍了多级连续消力... 某些中小型水库工程由于地形或地质条件的限制,既不适合采取挑流式消能,又不宜采用底流式消能,在这种情况下,采取多级连续消力池消能也许是不错的选择。本文结合湖北省丹江口市金岗水库溢洪道的除险加固设计,系统地介绍了多级连续消力池的布置方案和水力计算方法。结果表明多级消力池消能方案,提高了工程消能率,降低了水流流速,提高了河床抗冲刷能力,并且多级消力池没有统一的形式、高度、尺寸等,可因地制宜根据各种工程特点来满足各自的经济技术要求。 展开更多

关键词 溢洪道 多级连续消力池 水力计算

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PBL教学在八年制外科见习带教中的应用 被引量：4

12

作者 张琳 翁胤仑 +5 位作者 祁方昉 曾育杰 王圣文 余珍燕 许冰 李春海 《中国继续医学教育》 2021年第26期38-42,共5页

目的探讨以临床胜任力为导向的以问题为基础(PBL)教学在八年制外科见习带教中的应用效果。方法研究对象选取2018年8月—2019年12月期间就读临床八年制的58名医学学生。以临床胜任力为导向的PBL教学模式将2015年级临床八年制30名学生分... 目的探讨以临床胜任力为导向的以问题为基础(PBL)教学在八年制外科见习带教中的应用效果。方法研究对象选取2018年8月—2019年12月期间就读临床八年制的58名医学学生。以临床胜任力为导向的PBL教学模式将2015年级临床八年制30名学生分为研究组,采取传统教学模式选取2014级临床八年制共28名学生分为对照组,通过自制调查表及评分表,比较两组教学效果,两组外科基本操作技能与教学满意度。结果两组教案的编写评分、增强知识掌握能力差异无统计学意义(P>0.05),除此之外,研究组增强合作能力、增强发散性思维能力、提高聆听、问诊技能、增强自主学习、查阅文献能力等8项评分均显著高于对照组(P<0.05);研究组学生理论出科考核成绩及穿脱术衣、手套成绩稍高于对照组(P>0.05),见习结束时,研究组学生消毒铺巾,缝合打结,伤口换药,止血包扎成绩均高于对照组(P<0.05);与对照组学生总满意度82.14%相比,研究组总满意度100%明显较高(P<0.05)。结论在八年制外科见习带教中采取以临床胜任力为导向的PBL教学有利于提高学生外科基本操作技能,提升学生临床胜任力,保证教学效果,保证学生对教学的满意度。 展开更多

关键词 临床胜任力 导向 基础教学 外科见习 带教 教学质量 教育

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过表达TAP1上调人胶质瘤细胞株U251 HLA-Ⅰ的表达 被引量：1

13

作者 欧阳乐平 张善义 +5 位作者 李军亮 许新科 翁胤仑 郑眉光 王圣文 李方成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期425-429,共5页

目的:探讨抗原提呈相关转运蛋白1(TAP1)过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法:培养U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空... 目的:探讨抗原提呈相关转运蛋白1(TAP1)过表达对人胶质瘤细胞株U251人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法:培养U251细胞,构建慢病毒载体并转染U251细胞,获得稳定高表达TAP1的细胞株并设立转染空载体对照组,分别收集U251细胞组、空载体对照组和TAP1基因转染细胞组细胞的蛋白和RNA,行real-time PCR和Western blotting分析过表达的TAP1对U251细胞HLA-Ⅰ表达的影响,并用流式细胞术分析U251细胞HLA-Ⅰ表面呈现的变化。结果:成功建立TAP1高表达U251细胞株,TAP1 mRNA和蛋白分别升高(8.73±1.07)倍和(11.71±0.83)倍。高表达的TAP1促进U251细胞HLA-A、HLA-B、HLA-C(重链)和β2微球蛋白(轻链)mRNA表达上调,分别升高(3.51±0.36)倍、(4.78±0.85)倍、(2.94±0.28)倍和(3.23±0.24)倍,HLA-Ⅰ蛋白表达升高(3.14±0.53)倍,同时U251细胞HLA-Ⅰ的表面呈现明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达TAP1能促进U251细胞HLA-Ⅰ表达及其在细胞表面呈现的提高。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 U251细胞 抗原提呈相关转运蛋白1 人类白细胞抗原Ⅰ

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硅粉对混凝土的高性能影响 被引量：6

14

作者 李路华 王海龙 +1 位作者 赵庆宽 王圣文 《山西水利科技》 2009年第3期28-30,共3页

将硅粉掺入水泥拌制硅灰混凝土,可以改善混凝土许多方面的性能,大大提高了其耐久性。近年来硅灰混凝土在水利工程中得到了广泛的应用,创造了巨大的社会效益和经济效益。

关键词 硅粉 活性粉末混凝土 水利工程 高效益

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花生防霉的安全水分控制点 被引量：3

15

作者 王圣文 《检验检疫学刊》 1993年第6期6-7,共2页

食品的水活度值与细菌和霉菌等微生物的生长和繁殖有着密切的关系。不同种类的微生物对水活度的要求和适应性是不同的,如细菌生长要求最低水活度在0.90～0.95,而霉菌则在0.65～0.80。花生属低水食品,主要危害微生物是霉菌,所以只要控制... 食品的水活度值与细菌和霉菌等微生物的生长和繁殖有着密切的关系。不同种类的微生物对水活度的要求和适应性是不同的,如细菌生长要求最低水活度在0.90～0.95,而霉菌则在0.65～0.80。花生属低水食品,主要危害微生物是霉菌,所以只要控制水活度在0.75以下,便能防止发霉变质。 展开更多

关键词 水活度 花生属 防霉 霉菌生长 水分测定 花生栽培 无霉 相关系数 水活性 令尹

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矿渣水泥在建筑及水利工程中的应用 被引量：1

16

作者 李路华 王海龙 王圣文 《甘肃水利水电技术》 2009年第3期38-39,56,共3页

矿渣水泥不仅能将冶炼废物再利用,解决固体矿渣废物的出路问题,为资源再利用和可持续发展做出贡献,而且矿渣水泥某些方面性能比其他品种水泥更好,近年来在建筑工程及水利工程中得到了广泛的应用,创造了巨大的社会效益和经济效益。

关键词 矿渣水泥 可持续发展 高性能 实际应用

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造球机大盘与轴承连接螺栓松动原因分析

17

作者 王圣文 马敬勋 +2 位作者 宫迎春 刘宝松 张述洪 《山东冶金》 CAS 2010年第5期75-75,77,共2页

φ7.5m造球机的造球盘与轴承连接螺栓频繁出现松动和断裂,影响了造球机的正常生产。对连接螺栓进行动、静受力分析,发现预紧力达不到要求。选择10.9级高强度螺栓,将造球盘大盘与轴承安装固定后,四周进行焊接。改造后,造球盘运行平稳,至... φ7.5m造球机的造球盘与轴承连接螺栓频繁出现松动和断裂,影响了造球机的正常生产。对连接螺栓进行动、静受力分析,发现预紧力达不到要求。选择10.9级高强度螺栓,将造球盘大盘与轴承安装固定后,四周进行焊接。改造后,造球盘运行平稳,至今已近4a无检修螺栓或更换螺栓的记录。 展开更多

关键词 造球机 造球盘 螺栓 受力分析

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啤酒花防霉控制点的测定方法 被引量：1

18

作者 王圣文 《检验检疫学刊》 1993年第6期43-44,共2页

食品的水活度值与细菌和霉菌等微生物的生长和繁殖有着密切的关系。通常说的食品含水量,包括食品中含有的结合水和游离水的总量。由于微生物只能利用食品中的游离水,为了更好地说明食品中的水份性质和状态,以及微生物能利用的程度。

关键词 水活度 游离水 微生物能 防霉 食品保藏 水分测定 结合水 食品水分 空隙度 相关系数

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猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定

19

作者 张丹 卢舒婷 +8 位作者 卢辰赫 王子仪 徐丽华 陈伊玄 王圣文 金子安 倪成章 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页

为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以... 为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清(多抗血清),再通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示:经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)和低温诱导,成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白,在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×10^(6),与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV感染细胞中的N蛋白均具有良好的WB和IFA反应性。交叉反应性结果显示:该多克隆抗体能与α属冠状病毒中不同亚型的FCoV以及犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的N蛋白发生反应,但不与β属冠状病毒中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, SARS-CoV-2)和γ属冠状病毒中的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的N蛋白发生反应。综上所述,以pCold TF原核系统表达的可溶性重组N蛋白具有良好的免疫原性,以该蛋白制备的FCoV N蛋白兔多抗血清能识别多种来自不同物种的α属冠状病毒N蛋白,但与β、γ属冠状病毒N蛋白没有交叉反应性,这为进一步研究FCoV复制机制以及开发高效的抗原和抗体检测技术奠定了基础。 展开更多

关键词 猫冠状病毒 核衣壳蛋白 可溶性表达 多克隆抗体 交叉反应性

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猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位

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作者 王子仪 金子安 +5 位作者 卢辰赫 乔治 王圣文 颜焰 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期744-754,共11页

冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru... 冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。 展开更多

关键词 猫冠状病毒 非结构蛋白3 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位

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