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中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基克隆、表达及功能初步鉴定
1
作者 陶颖 杨东亮 +4 位作者 王宝菊 刘艺 桂文甲 李智 樊和斌 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期278-283,共6页
目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c... 目的克隆中国旱獭Ⅰ型干扰素受体β亚基(mhIFNAR2)的基因,并进行抗体制备及功能鉴定。方法应用RT-PCR技术,从中国旱獭脾组织中扩增得到序列,克隆至原核表达载体p RSET-B,表达重组蛋白,电泳和Western Blot法鉴定;重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠制备其胞外段多克隆抗体,免疫组化、免疫荧光和Western Blot法鉴定;再通过si RNA阻断的方法检测其功能。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果从mhIFNAR2扩增出149~1300 bp片段,其同源性在分析的种属中以土拨鼠最高,可达98.05%。成功地构建了表达胞外段mhIFNAR2_((50-181aa))蛋白的原核表达质粒,命名为pRSET-B.mhIFNAR2;其表达重组蛋白分子量27 kD,纯化后纯度约为95%,浓度约为160μg/mL。用纯化的重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠后,获得1∶1000的特异性多克隆抗体,用免疫组化及免疫荧光可见细胞膜、细胞质有表达。合成的三条siRNA,其中有一条起始于277位点的siRNA(siRNA277)与空白对照及阴性对照相比,可以沉默目的基因的表达,并能减弱干扰素的信号通路(P值均<0.05)。结论获得mhIFNAR2的部分序列,成功地制备出抗mhIFNAR2胞外段多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性,并能用于免疫组化、免疫荧光及Western Blot的检测。用siRNA277可以抑制目的基因的表达,并能阻断干扰素的信号通路。 展开更多
关键词 受体 干扰素αβ 克隆 乙型肝炎
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首席教师负责制在八年制医学生感染病学教学改革中的探索和实践
2
作者 叶翩 郑昕 +5 位作者 杨东亮 赵雷 王宝菊 卢银平 季湘年 童巧霞 《中国高等医学教育》 2024年第1期21-22,25,共3页
目的:探讨首席教师负责制在八年制医学生感染病学教学改革中的探索和实践效果。方法:在2008-2011级临床医学八年制学生的感染病学临床教学及早期见习中实施。结果:试验组的学习兴趣和各方面学习综合能力均有所提高。结论:首席教师负责... 目的:探讨首席教师负责制在八年制医学生感染病学教学改革中的探索和实践效果。方法:在2008-2011级临床医学八年制学生的感染病学临床教学及早期见习中实施。结果:试验组的学习兴趣和各方面学习综合能力均有所提高。结论:首席教师负责制可增强学生的学习积极性,提高学生对医学知识的掌握程度,在今后的教学过程中值得推广。 展开更多
关键词 首席教师负责制 八年制医学生 感染病学 教学改革
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乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭发病机制及治疗进展 被引量：6
3
作者 张斌 迪丽胡玛尔·扎依尔 +4 位作者 张诗雨 朱彬 黄红明 田进 王宝菊 《中国肝脏病杂志（电子版）》 CAS 2023年第1期28-33,共6页
乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)是一种短期病死率极高的临床综合征,其发病机制尚不完全明确,除肝移植外尚无有效的治疗措施。肝移植常受限于肝源不足、治疗费用高昂... 乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)是一种短期病死率极高的临床综合征,其发病机制尚不完全明确,除肝移植外尚无有效的治疗措施。肝移植常受限于肝源不足、治疗费用高昂等因素,因此内科综合治疗(包括人工肝支持系统)就成为提高患者短期生存率的重要手段。本文将重点阐述HBV-ACLF的发病机制及内科综合治疗相关进展。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 肝衰竭 慢加急性 肠道菌群
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山东省聊城市无规定动物疫病区的建设
4
作者 刘晓 李莹 +4 位作者 袁静 车晓囡 张翠翠 王宝菊 刘承军 《养殖与饲料》 2024年第2期116-119,共4页
为强化动物防疫体系建设,降低动物疫病发病率,有力促进现代畜牧业高质量发展,山东省聊城市探索健全防疫机构队伍、动物疫病预防、动物卫生监督、应急管理“四大体系”,高标准推进无规定动物疫病区建设。2022年8月,农业农村部发布公告(第... 为强化动物防疫体系建设,降低动物疫病发病率,有力促进现代畜牧业高质量发展,山东省聊城市探索健全防疫机构队伍、动物疫病预防、动物卫生监督、应急管理“四大体系”,高标准推进无规定动物疫病区建设。2022年8月,农业农村部发布公告(第584号)山东省免疫无口蹄疫区和免疫无高致病性禽流感区通过国家评估,聊城市全境建成无规定动物疫病区。通过无规定动物疫病区建设,保障了畜牧业健康持续发展,提升了畜牧产品竞争力,使全市畜产品质量安全和公共卫生安全水平不断提高。 展开更多
关键词 无规定动物疫病疫区建设 防疫机构队伍 动物疫病预防 动物卫生监督 应急管理
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泌乳早期日粮中添加甘草多糖对奶牛生产性能及血清指标的影响
5
作者 赵成莹 袁静 +5 位作者 王宝菊 刘恒煜 刘承军 周广驰 李志强 刘晓 《中国乳业》 2024年第8期93-97,共5页
[目的]探索泌乳早期日粮中添加甘草多糖对奶牛生产性能及血清指标的影响。[方法]采用随机数字表法将60头体格健康、年龄和胎次相近的经产泌乳早期(产后21 d)奶牛,分成4组,每组15头,每组设置3个重复,每个重复5头,分别为对照组、试验Ⅰ组... [目的]探索泌乳早期日粮中添加甘草多糖对奶牛生产性能及血清指标的影响。[方法]采用随机数字表法将60头体格健康、年龄和胎次相近的经产泌乳早期(产后21 d)奶牛,分成4组,每组15头,每组设置3个重复,每个重复5头,分别为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。对照组只饲喂基础日粮,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组在饲喂基础日粮的基础上,分别添加0.3%、0.6%和0.9%甘草多糖,并在正式试验周期21 d内检测生产性能及血清指标。[结果]与对照组相比,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的干物质采食量、产奶量和体重变化均明显升高,且差异显著(P<0.05);试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组的饲料转化率明显降低,且差异显著(P<0.05);试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组血清中的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的含量均明显升高,且差异显著(P<0.05);试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组血清中的丙二醛含量明显降低,且差异显著(P<0.05)。[结论]泌乳早期日粮中添加甘草多糖能提升奶牛的生产性能,具有较好的抗氧化能力,其中甘草多糖的最佳使用量为0.9%。 展开更多
关键词 泌乳早期 甘草多糖 奶牛 生产性能 血清指标
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乳品掺假检测技术研究进展
6
作者 赵成莹 袁静 +5 位作者 王宝菊 刘恒煜 刘承军 周广驰 李志强 刘晓 《中国乳业》 2024年第3期77-82,共6页
掺假问题一直是影响乳品质量安全的重要因素,从最初往乳品中掺入氮素、植物性蛋白、三聚氰胺等物质,再到如今用“低价乳”掺入“高价乳”中进行售卖,各种掺售问题层出不穷。发展快速、高效、高质量的乳品掺假检测技术尤为重要。目前较... 掺假问题一直是影响乳品质量安全的重要因素,从最初往乳品中掺入氮素、植物性蛋白、三聚氰胺等物质,再到如今用“低价乳”掺入“高价乳”中进行售卖,各种掺售问题层出不穷。发展快速、高效、高质量的乳品掺假检测技术尤为重要。目前较常见的检测技术基本是基于乳中脂肪、蛋白质和核酸等特性。本文对乳品检测技术中的电泳、近红外光谱、液相色谱、气相色谱、酶联免疫吸附法、低场核磁共振等进行综合概述,以促进乳品掺假检测技术发展,保证乳品质量安全。 展开更多
关键词 乳品 检测 掺假 质量
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HBV感染与复制模型的建立及应用 被引量：1
7
作者 王宝菊 朱彬 +1 位作者 郭伟娜 杨东亮 《临床肝胆病杂志》 CAS 2017年第8期1458-1464,共7页
乙型肝炎是危害人类健康的重要传染病,目前的抗病毒治疗,如干扰素、核苷和核苷酸类药物仍无法治愈慢性乙型肝炎。因此,亟待阐明HBV复制和致病机制,探索新的治疗靶点,进而研发新的治疗药物或方案。合适的HBV感染与复制模型是上述研究的... 乙型肝炎是危害人类健康的重要传染病,目前的抗病毒治疗,如干扰素、核苷和核苷酸类药物仍无法治愈慢性乙型肝炎。因此,亟待阐明HBV复制和致病机制,探索新的治疗靶点,进而研发新的治疗药物或方案。合适的HBV感染与复制模型是上述研究的基础。由于HBV具有严格的种属限制性及组织亲嗜性,使得HBV感染与复制模型的研发受到一定限制。在国家传染病科技重大专项资助下,国内研究者建立了一系列的细胞和动物模型,就此并结合近年来国内外研究进展进行简要综述。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 细胞模型 疾病模型 动物
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分子技术在感染性疾病诊断中的应用
8
作者 王宝菊 杨东亮 《世界感染杂志》 2001年第5期459-462,共4页
关键词 分子技术 感染性疾病 诊断 临床应用 核酸扩增系统 核酸探针杂交技术
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中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染的组织学研究 被引量：14
9
作者 李新宇 王宝菊 +4 位作者 孟忠吉 汪由坤 赵西平 陆蒙吉 杨东亮 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第6期570-573,共4页
应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份 喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示 旱獭肝组织中嗜肝病毒s... 应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份 喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示 旱獭肝组织中嗜肝病毒s抗原、c抗原的阳性率分别为26％(13／50)、36％(18／50);在抗原双阳性的10份肝组织标本 中有c基因的阳性表达,阳性率为50％。c抗原定位于肝细胞胞浆和／或胞核,呈散在、片簇状分布,c基因定位于肝细 胞的细胞核,阳性细胞散在分布。50份标本中5份出现肝炎的病理改变,与抗原检出间无明显相关性。使用WHV 的病毒检测系统证实青海地区喜马拉雅旱獭可能存在类似WHV的嗜肝病毒感染,从组织学的角度为中国青海地区 喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染提供证据,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染的动物模型。 展开更多
关键词 青海喜马拉雅旱獭 正嗜肝 DNA 病毒属 土拔鼠肝炎病毒 原位杂交 免疫组化
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喜马拉雅旱獭血液生化指标测定 被引量：10
10
作者 刘海青 王宝菊 +5 位作者 张静宵 范微 刘巴睿 张发荣 加洛 陶元清 《四川动物》 北大核心 2015年第5期764-766,共3页
本文首次测定了人工饲养条件下喜马拉雅旱獭Marmota himalayana的血液生化值。结果显示雄性喜马拉雅旱獭谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著高于雌性(P<0.05);人工喂养1年后,喜马拉雅旱獭血清谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、... 本文首次测定了人工饲养条件下喜马拉雅旱獭Marmota himalayana的血液生化值。结果显示雄性喜马拉雅旱獭谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著高于雌性(P<0.05);人工喂养1年后,喜马拉雅旱獭血清谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和肌酐(CREA)水平降低,提示饲料中可适当增加蛋白的含量;冬眠后血清总蛋白(TP)含量明显下降,白蛋白水平略低于冬眠前。不同性别、年龄、不同饲养时间喜马拉雅旱獭其他指标差异均无统计学意义,说明建立的喜马拉雅旱獭人工饲养管理方法可保证动物血液生化指标的稳定性,所测血液生化指标值也可作为喜马拉雅旱獭饲养管理和疫病检测判断的参考依据。 展开更多
关键词 喜马拉雅旱獭 血液 生化指标
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肠道菌群影响慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及相关肝病的研究进展 被引量：4
11
作者 邓辉 张斌 +7 位作者 朱彬 迪丽胡玛尔·扎依尔 王伟仙 郭春霞 杨东亮 郑昕 王俊忠 王宝菊 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期1143-1147,共5页
HBV、HCV感染常可进展为肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌等终末期肝病,危及患者生命。近年来研究发现肠道菌群与慢性病毒性肝病关系密切。本文就肠道菌群与慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及其相关肝病之间的相关性,以及靶向肠道菌群治疗慢性乙型... HBV、HCV感染常可进展为肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌等终末期肝病,危及患者生命。近年来研究发现肠道菌群与慢性病毒性肝病关系密切。本文就肠道菌群与慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及其相关肝病之间的相关性,以及靶向肠道菌群治疗慢性乙型肝炎及其相关肝病的研究进展进行了综述,以期为临床治疗慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及其相关肝病提供更多思考。 展开更多
关键词 肝炎病毒 胃肠道微生物组 肝硬化 肝功能衰竭 治疗学
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RNA干扰抑制人乙型肝炎病毒复制的研究 被引量：6
12
作者 张正茂 田拥军 +4 位作者 孟忠吉 雷延昌 李新宇 王宝菊 杨东亮 《中国病毒学》 CAS CSCD 2006年第4期348-352,共5页
采用表达shRNA的载体构建了表达针对病毒HBsAgmRNA保守区的shRNA的质粒psiHBs,利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价RNA干扰对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg,用ELISA检测细胞培养上清和血清中的HBsAg,... 采用表达shRNA的载体构建了表达针对病毒HBsAgmRNA保守区的shRNA的质粒psiHBs,利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价RNA干扰对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg,用ELISA检测细胞培养上清和血清中的HBsAg,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,最后通过免疫组化的方法检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。结果显示pHBV1.3和psiHBs共转染HepG2后,与对照组相比病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平下降了90%以上,并且shRNA的作用效率存在序列特异性和剂量依赖性。在高压注射小鼠模型中,psiHBs表达的shRNA使小鼠血清中HBsAg的水平下降了80%以上,免疫组化检测显示,小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了75.1%,而且shRNA的抑制作用至少能持续4d。研究显示载体表达的shRNA无论是在细胞或是在小鼠模型中都能对HBV的复制和基因的表达发挥序列特异性的抑制作用。本研究为我们下一步实现由RNAi介导的基因治疗提供了理论和技术支持。 展开更多
关键词 RNA干扰 sbRNA乙型肝炎病毒 高压注射小鼠模型
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喜马拉雅旱獭血液生理指标测定 被引量：8
13
作者 陶元清 范微 +1 位作者 王忠东 王宝菊 《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第5期625-626,共2页
首次测定了45只人工饲养条件下喜马拉雅旱獭的血液生理值。结果显示人工饲养条件下除淋巴细胞和中性粒细胞百分率因动物年龄不同而有显著性差异外(P<0.05),不同性别、不同饲养时间喜马拉雅旱獭的白细胞数、白细胞分类计数百分率、红... 首次测定了45只人工饲养条件下喜马拉雅旱獭的血液生理值。结果显示人工饲养条件下除淋巴细胞和中性粒细胞百分率因动物年龄不同而有显著性差异外(P<0.05),不同性别、不同饲养时间喜马拉雅旱獭的白细胞数、白细胞分类计数百分率、红细胞、血小板、血红蛋白和平均血红蛋白浓度等7项指标都没有显著性差异,说明建立的旱獭人工饲养管理方法可保证动物的血液生理指标的稳定性,所测血液生理指标也可作为喜马拉雅旱獭饲养管理和疫病检测判断的参考依据。 展开更多
关键词 喜马拉雅旱獭 血液 生理指标
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pRNA介导的RNA干扰抑制HBV表达和复制的研究 被引量：4
14
作者 张正茂 田拥军 +3 位作者 杨燕 王宝菊 郭培宣 杨东亮 《中国病毒学》 CAS CSCD 2006年第6期599-603,共5页
为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测... 为了研究由pRNA携带的siRNA(HBVsi18-42)所介导的RNAi过程能有效地抑制HBV的基因表达和病毒复制,我们利用细胞模型和高压注射小鼠模型评价HBVsi18-42对HBV复制和基因表达的抑制作用。通过Western印迹检测细胞内的HBsAg含量,用ELISA检测细胞培养上清和小鼠血清中的HBsAg水平,采用Southern印迹检测HBV的复制中间体,通过免疫组织化学检测肝组织切片中HBcAg的表达情况。试验结果显示,HBVsi18-42能以剂量依赖的方式在293T细胞中抑制HBsAg的表达以及在HepG2细胞中下调病毒HBsAg和HBeAg的表达和病毒复制中间体的水平。在小鼠模型中,注射后的3d内HBVsi18-42使小鼠血清中HBsAg的水平分别下降了98.98%、77.07%和60.73%,免疫组织化学检测显示,在注射后的第3天小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数减少了79.1%。初步结果显示HBVsi18-42无论是在细胞或是在小鼠模型中都能下调HBV的复制和基因的表达。本研究为我们下一步实现由pRNA介导的靶向RNAi及基因治疗提供了理论和技术支持。 展开更多
关键词 RNA干扰 PRNA 乙型肝炎病毒
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旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原表达的免疫组化研究 被引量：6
15
作者 张珺 王宝菊 +2 位作者 孟忠吉 汪由坤 杨东亮 《华中医学杂志》 CAS 2003年第5期231-232,F004,共3页
目的 从组织学和免疫学角度寻找旱獭嗜肝病毒感染的证据。方法 应用免疫组织化学技术以土拨鼠肝炎病毒表面抗原抗体检测101份旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原的表达,同时观察旱獭肝组织常规病理改变,并对抗原检出与病理组织改变的关系进... 目的 从组织学和免疫学角度寻找旱獭嗜肝病毒感染的证据。方法 应用免疫组织化学技术以土拨鼠肝炎病毒表面抗原抗体检测101份旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原的表达,同时观察旱獭肝组织常规病理改变,并对抗原检出与病理组织改变的关系进行相关分析。结果 旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原检出率为82.2％(83/101)。阳性抗原颗粒定位于肝细胞胞浆和/或胞膜,阳性细胞呈散在、簇状和片状分布。101份肝组织标本中14份出现肝炎的病理改变,且与抗原检出之间存在明显的相关性(r=0.92)。结论 首次应用免疫组织化学技术证实早獭存在类似土拨鼠肝炎病毒的嗜肝病毒感染,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染动物模型。 展开更多
关键词 新疆旱獭 嗜肝病毒 免疫组化 抗原表达 病理组织学 动物模型 乙型肝炎病毒 HBV
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乙型肝炎病毒急性感染小鼠模型的建立 被引量：11
16
作者 孟忠吉 李磊 +7 位作者 李新宇 张正茂 张振华 田拥军 王宝菊 张珺 雷延昌 杨东亮 《中国病毒学》 CSCD 2005年第6期565-569,共5页
采用高压水注射方法,通过尾静脉将具有复制能力的HBV质粒导入BABL/cJ小鼠体内,应用real-time PCR、ELISA、RIA、Southern Blot、Northern Blot,以及免疫组化等方法,检测小鼠病毒血症、血清和肝组织中HBV 抗原表达动态变化、肝组织中HBV... 采用高压水注射方法,通过尾静脉将具有复制能力的HBV质粒导入BABL/cJ小鼠体内,应用real-time PCR、ELISA、RIA、Southern Blot、Northern Blot,以及免疫组化等方法,检测小鼠病毒血症、血清和肝组织中HBV 抗原表达动态变化、肝组织中HBV转录和复制情况,以及小鼠免疫应答状况。结果HBV基因可以在小鼠体内表 达和复制,并诱导小鼠产生特异性免疫应答,其应答模式及HBV清除过程与人类的HBV急性感染类似。实验显 示高压注射具有复制能力的HBV质粒可以在小鼠体内建立HBV急性感染模型,这种模型可以用于HBV病毒 学、免疫学以及抗病毒药物筛选等方向的研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 动物模型 高压水注射
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土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2
17
作者 张振华 田拥军 +4 位作者 李磊 王宝菊 孟忠吉 陆蒙吉 杨东亮 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期567-570,577,F0002,共6页
目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方... 目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。 展开更多
关键词 土拨鼠肝炎病毒 核心蛋白 原核表达 多克隆抗体 抗原抗体交叉反应
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TTV HCV重叠感染时TTV无明显致肝损伤作用 被引量：3
18
作者 赵西平 沈汉馨 +3 位作者 王宝菊 杨燕 杨东亮 郝连杰 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第1期86-87,共2页
我们采用套式PCR方法回顾性研究了一组接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者的TTV感染状况,对TTV重叠感染时丙型肝炎肝组织病变及干扰素治疗状况进行分析。研究结果对评价TTV致病性具有一定意义。 1 材料和方法 1.1材料病例及治疗:29例慢... 我们采用套式PCR方法回顾性研究了一组接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者的TTV感染状况,对TTV重叠感染时丙型肝炎肝组织病变及干扰素治疗状况进行分析。研究结果对评价TTV致病性具有一定意义。 1 材料和方法 1.1材料病例及治疗:29例慢性丙型肝炎患者,均为肝功能持续异常超过6mo,血清抗HCV及HCV RNA阳性,乙型肝炎标志阴性。男16例,女13例,平均年龄34.6岁。采用α-2a干扰素300万u,或组合干扰素(CIFN)9μg或15μg,3次·d^(-1)cc,共24wk(5例用药12wk),停药后随访24wk以上。疗效判断标准为,ALT应答:ALT恢复正常;病毒应答:HCV 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 重叠感染 聚合酶链反应 干扰素Α
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慢性乙型肝炎患者肝组织及外周血单核细胞内IFN-α／β受体的表达及其临床意义 被引量：2
19
作者 樊和斌 郭亚兵 +4 位作者 王宝菊 朱幼芙 吴爱华 侯金林 杨东亮 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期979-981,共3页
目的慢性乙型肝炎患者肝组织的炎症程度是影响干扰素应答率的独立因素,本研究的目的系从干扰素受体的角度来探讨其机制,此外了解外周血单核细胞干扰素受体与慢性乙型肝炎感染的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法,检测15... 目的慢性乙型肝炎患者肝组织的炎症程度是影响干扰素应答率的独立因素,本研究的目的系从干扰素受体的角度来探讨其机制,此外了解外周血单核细胞干扰素受体与慢性乙型肝炎感染的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法,检测15健康对照、16例慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞及另外21例慢性乙型肝炎患者肝组织内的干扰素受体的表达并进行定量分析。结果15例健康对照、16例慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞干扰素受体的表达量分别为(21.4060±4.7658)、(23.8365±3.3329)(P=0.374);另外21例慢性乙型肝炎患者根据肝脏病理的炎症程度分为3组G1(5.6913±1.8422)、G2(7.4706±5.3572)、G3(25.1307±7.0700)(P=0.000)。结论慢性乙型肝炎患者肝组织内干扰素受体的表达量与肝组织的病理炎症程度相关,可能是其对干扰素应答率高的原因,而外周血单核细胞干扰素受体的表达与HBV感染无关。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 干扰素受体 外周血单核细胞 肝组织
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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2
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作者 王超 田拥军 +5 位作者 张娥娟 吴洪坤 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期467-470,共4页
目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（... 目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（DE3）pLacI内进行诱导表达，运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体，并采用酶联免疫吸附实验（ELISA），Western blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果：成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒，并纯化得到了相对分子质量（Mr）约为28000的目的蛋白，用之免疫BALB／c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论：获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高，免疫反应性强；获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性，为DHBV的检测和研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 原核表达载体 多克隆抗体
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