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永生化猪视网膜色素上皮细胞的建立及初步应用
1
作者 唐青海 刘博 +6 位作者 谢金文 魏凤 谷英华 高翠翠 曹宗喜 张艳 王文秀 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2024年第2期22-31,共10页
【目的】建立永生化猪视网膜色素上皮细胞系,为病毒学研究提供一种新的细胞材料。【方法】合成猪腺病毒3型E1基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo中,构建E1基因真核表达质粒pCI-neo-E1,进行PCR和测序鉴定。提取pCI-neo-E1质粒,转染原代... 【目的】建立永生化猪视网膜色素上皮细胞系,为病毒学研究提供一种新的细胞材料。【方法】合成猪腺病毒3型E1基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo中,构建E1基因真核表达质粒pCI-neo-E1,进行PCR和测序鉴定。提取pCI-neo-E1质粒,转染原代猪视网膜色素上皮细胞,用新霉素G418筛选猪永生化视网膜色素上皮细胞系(RPECs)。检测RPECs的角蛋白18和19,通过细胞计数测定其生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,并对其进行染色体核型分析。分别将猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV77毒株、猪圆环病毒2型(PCV2)DBN-SX07株和猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株接种RPECs,同时将PEDV CV77毒株接种绿猴肾细胞(Vero细胞),将PCV2 DBN-SX07株接种猪肾细胞(PK15细胞),将PRV Bartha-K61株接种仓鼠肾成纤维细胞(BHK细胞),观察细胞病变效应(CPE),并采用间接免疫荧光法测定病毒的滴度。【结果】PCR和测序结果显示,真核表达质粒pCI-neo-E1构建成功。将pCI-neo-E1转染原代猪视网膜色素上皮细胞,经G418筛选得到永生化细胞株,该细胞株表达角蛋白18和19,传代50代仍保持上皮样细胞形态,增殖活性良好,细胞周期及染色体核型特征与正常的二倍体细胞一致。PEDV CV77毒株感染猪RPECs 24 h后,CPE明显,滴度为10^(5.25)TCID_(50)/mL,低于其在Vero细胞中的滴度(10^(8.125) TCID_(50)/mL)。PCV2 DBN-SX07毒株感染猪RPECs后可产生明显CPE,病毒滴度为10^(6.125)TCID_(50)/mL,略高于其在PK15细胞上的滴度(106.0 TCID_(50)/mL)。PRV Bartha-K61毒株感染猪RPECs后,CPE明显,病毒滴度为10^(8.75)TCID_(50)/mL,略低于其在BHK上的滴度(108.875 TCID_(50)/mL)。【结论】成功构建了永生化猪视网膜细胞系,可用于猪源病毒的培养,尤其是培养PCV2可产生明显CPE,易于观察,为后续开展疫苗工艺的提升提供了一种新的细胞材料。 展开更多
关键词 猪视网膜色素上皮细胞 永生化 猪流行性腹泻病毒 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒
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猪NLRP3基因Real-time PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
2
作者 刘博 张倩 +6 位作者 莫玲 林盼盼 谷英华 刘海隆 蔡青云 张艳 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2023年第9期19-23,共5页
根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了NLRP3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma h... 根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了NLRP3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平。最佳引物浓度为0.15μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%~0.184%,批间变异系数为0.221%~0.594%,重复性好。该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mRNA拷贝数达18000左右,可持续42 d。表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持。 展开更多
关键词 NLRP3基因 实时荧光定量PCR 猪肺炎支原体
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二磷酸腺苷抑制率指导轻型脑卒中或高危短暂性脑缺血发作双联抗血小板方案
3
作者 王晓辉 崔小丽 +4 位作者 王文秀 李志伟 胡军 陈红男 常莎 《中国实用神经疾病杂志》 2023年第1期7-12,共6页
目的探讨二磷酸腺苷(ADP)抑制率指导轻型脑卒中或高危短暂性脑缺血发作(TIA)患者调整双联抗血小板方案的可行性和安全性。方法选取2020-01—2022-03在陕西省人民医院接受治疗的轻型脑卒中或高危TIA患者268例,所有患者在发病24 h内采用... 目的探讨二磷酸腺苷(ADP)抑制率指导轻型脑卒中或高危短暂性脑缺血发作(TIA)患者调整双联抗血小板方案的可行性和安全性。方法选取2020-01—2022-03在陕西省人民医院接受治疗的轻型脑卒中或高危TIA患者268例,所有患者在发病24 h内采用阿司匹林联合氯吡格雷进行抗血小板治疗,治疗3 d后检测ADP抑制率,根据ADP抑制率分为A组、B组和C组。A组患者不调整治疗方案,B组和C组患者在医师指导下选择原方案治疗或将氯吡格雷改为替格瑞洛。观察出院时间、治疗期间的血小板反应指数(PRI)和血小板-纤维蛋白凝块强度(MAADP)、出血事件和不良反应以及随访3个月的再发脑卒中率。结果A组119例患者中未调整治疗方案,B组79例患者中40例调整了治疗方案,C组70例患者中36例调整了治疗方案。A组患者的住院时间、MAADP、PRI、再发脑卒中率均低于B组和C组(P<0.05),B组和C组的住院时间、MAADP、PRI、再发脑卒中率比较差异无统计学意义(P>0.05)。B组和C组中调整治疗方案患者的住院时间、MAADP、PRI、再发脑卒中率均低于未调整治疗方案者(P<0.05)。B组和C组中调整治疗方案患者的住院时间、MAADP、PRI、再发脑卒中率与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组患者均未发生出血事件。各组患者的不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ADP抑制率>70%的轻型脑卒中或高危TIA患者采用阿司匹林联合氯吡格雷方案治疗可取得满意的治疗效果,ADP抑制率较低的患者更换治疗方案可获益。 展开更多
关键词 短暂性脑缺血发作 轻型脑卒中 抗血小板 二磷酸腺苷抑制率 阿司匹林 氯吡格雷 替格瑞洛
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日粮脂肪水平对鲤生长、血清生化指标、糖代谢及抗氧化能力的影响
4
作者 王文娟 孟骞骞 +5 位作者 李美静 姚祖兵 王宇江 吴满瑭 张梦勤 王文秀 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期1908-1916,共9页
为探讨日粮脂肪水平对鲤生长、血清生化指标、糖代谢酶活性及抗氧化能力的影响,本试验配制了3.68%、7.60%、11.52%、15.44%4种日粮脂肪水平。以(17.91±0.16)g幼鲤为研究对象,开展了58 d的饲养试验。结果发现,随着日粮脂肪水平的增... 为探讨日粮脂肪水平对鲤生长、血清生化指标、糖代谢酶活性及抗氧化能力的影响,本试验配制了3.68%、7.60%、11.52%、15.44%4种日粮脂肪水平。以(17.91±0.16)g幼鲤为研究对象,开展了58 d的饲养试验。结果发现,随着日粮脂肪水平的增加,幼鲤的粗脂肪含量上升,水分含量下降。随日粮脂肪水平的升高,幼鲤血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量上升。15.44%日粮脂肪水平幼鲤的6-磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶活性及乳酸含量均显著高于3.68%日粮脂肪水平幼鲤(P<0.05)。15.44%日粮脂肪水平幼鲤肝胰脏的过氧化氢酶活性显著高于其他3个日粮脂肪水平(P<0.05)。由此可见,日粮脂肪水平过高会导致鲤生长性能下降,影响鱼体组成及糖酵解,造成氧化应激。 展开更多
关键词 幼鲤 生长性能 血清生化指标 糖代谢 氧化应激
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高光谱图像结合卷积神经网络的马铃薯干腐病潜育期识别
5
作者 张凡 王文秀 +3 位作者 王春山 周冀 潘阳 孙剑锋 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期480-489,共10页
马铃薯是世界第四大粮食作物,具有丰富的营养价值。但其在贮藏和运输过程中易被镰刀真菌侵染而产生干腐病,最终造成巨大资源浪费和经济损失,因此实现马铃薯干腐病的早期快速无损检测是必要的。在样品被病原菌侵染时,经历了健康—潜育期... 马铃薯是世界第四大粮食作物,具有丰富的营养价值。但其在贮藏和运输过程中易被镰刀真菌侵染而产生干腐病,最终造成巨大资源浪费和经济损失,因此实现马铃薯干腐病的早期快速无损检测是必要的。在样品被病原菌侵染时,经历了健康—潜育期—轻度病害—重度病害的阶段,其中潜育期的样品难以识别,主要源于病害发生时间较短,表面未形成肉眼可见的病斑,与健康样品相似。为了实现马铃薯干腐病潜育期的识别,结合高光谱成像和深度学习展开马铃薯干腐病早期诊断研究。以健康和不同腐败程度马铃薯为实验对象,获取健康和不同病害等级的马铃薯高光谱图像。然后基于ENVI人工选取健康部位和不同腐败程度样品的病斑部位为感兴趣区域(ROI),并计算ROI的平均光谱值作为该样品的最终光谱信息。以光谱数据作为输入变量,病害等级作为输出变量,建立卷积神经网络(CNN)模型,并对其网络结构进行优化,对比分析不同模型的预测结果,筛选出最优网络层模型为Model_3_3。并基于此结构进行学习率的优化,得到Model_0.0001识别效果最好,其总体准确率、精度、灵敏度和特异性分别为99.68%、99.76%、98.82%、99.54%。为了进一步突显CNN应用于马铃薯干腐病潜育期识别的优势,建立了最小二乘支持向量机(LS-SVM)、随机森林(RF)、K-近邻法(KNN)和线性判别分析(LDA)模型。结果显示,四种常规算法模型的识别准确率分别为90.77%、92.30%、93.10%和92.34%,其中对潜育期样品识别率分别为91.00%、85.58%、94.18%和90.33%。对于总体准确率,CNN模型较几种常规方法提高了6.58%~8.91%;对于潜育期样品的识别,CNN模型较常规方法提高了5.55%~14.15%。研究表明,高光谱成像技术结合CNN可以有效实现马铃薯干腐病潜育期识别,为提高马铃薯病害早期诊断的智能化水平提供了参考方法。 展开更多
关键词 马铃薯 干腐病 高光谱成像技术 卷积神经网络 潜育期
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壳聚糖/姜黄素光动力复合涂膜对金黄色葡萄球菌的抑菌效果及机理
6
作者 张鹏敏 王文秀 +3 位作者 孙剑锋 陈志周 马倩云 王颉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期233-243,共11页
本研究采用壳聚糖为原料,利用离子相互作用增强姜黄素光动力抑菌效果,并从形态特征、细胞膜功能、能量代谢和DNA结构等方面入手阐释该涂膜在细胞水平上对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果表明,壳聚糖显著提高了抑菌效果,含姜黄素质量浓度... 本研究采用壳聚糖为原料,利用离子相互作用增强姜黄素光动力抑菌效果,并从形态特征、细胞膜功能、能量代谢和DNA结构等方面入手阐释该涂膜在细胞水平上对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果表明,壳聚糖显著提高了抑菌效果,含姜黄素质量浓度15 mg/L的涂膜溶液经波长为420 nm蓝光光照5 min后,金黄色葡萄球菌菌落总数下降6.89(lg(CFU/mL)),并且姜黄素质量浓度和光照时间是影响该技术抑菌效果的主要因素。光动力灭活处理产生具有强氧化性的活性氧从而破坏细胞膜,促使细胞膜通透性增加,进而出现细胞内容物泄漏以及细胞皱缩的现象。同时也导致细胞内活性氧含量上升,破坏内源酶结构,引发细菌防御系统崩溃,DNA和蛋白质等大分子被氧化分解,从而导致金黄色葡萄球菌死亡。由此可见,壳聚糖/姜黄素光动力涂膜有应用于控制金黄色葡萄球菌食源性污染的潜力。 展开更多
关键词 光动力灭活 姜黄素 壳聚糖 金黄色葡萄球菌 抑菌机理
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免予行政处罚制度的适用研究——以种业执法为例
7
作者 王文秀 《江苏商论》 2024年第3期131-136,共6页
“治国无其法则乱,守法而不变则衰”。伴随着时代变化,“良法善治”的精神内涵日益丰富,柔性执法,法律既要有硬度也要有温度等法治需求不断提出。面对社会出现的执法罚款问题,执法机关积极回应,践行《中华人民共和国行政处罚法》第三十... “治国无其法则乱,守法而不变则衰”。伴随着时代变化,“良法善治”的精神内涵日益丰富,柔性执法,法律既要有硬度也要有温度等法治需求不断提出。面对社会出现的执法罚款问题,执法机关积极回应,践行《中华人民共和国行政处罚法》第三十三条免予行政处罚制度要求,出台免罚清单,对于满足条件的违法行为作出免予行政处罚决定。本文以种业执法领域关于免予行政处罚的探索入手,分析存在的问题。通过对问题的研究,提出规范免罚清单设置、完善执法程序、加强配套制度建设等建议。 展开更多
关键词 免予行政处罚 免罚清单 完善方向
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植物糖原的提取纯化、结构修饰及应用研究进展
8
作者 王蕊 吕肖瑞 +4 位作者 张鹏敏 王文秀 孙剑锋 马倩云 王颉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第3期285-294,共10页
植物糖原是一种从植物的含糖突变籽粒中提取的碳水化合物聚合物,是天然的树枝状葡聚糖纳米颗粒大分子,安全性极高。植物糖原外紧内松的高度分支结构不仅赋予了其高保水性、低黏度、良好的分散稳定性、抗氧化性、抗菌性和成膜性等优异性... 植物糖原是一种从植物的含糖突变籽粒中提取的碳水化合物聚合物,是天然的树枝状葡聚糖纳米颗粒大分子,安全性极高。植物糖原外紧内松的高度分支结构不仅赋予了其高保水性、低黏度、良好的分散稳定性、抗氧化性、抗菌性和成膜性等优异性能,还有优异的负载能力。因此,近年来植物糖原逐渐成为国内外研究的热点之一。然而,到目前为止鲜见关于植物糖原的提取纯化、结构分析和综合利用的报道。因此,本综述重点介绍植物糖原的结构与性质,继而探讨植物糖原的最新提取方法,并详细综述了其在食品领域中的应用,且对未来的研究前景进行了展望,旨在为扩大植物糖原的应用范围提供理论参考。 展开更多
关键词 植物糖原 纳米颗粒 提取 研究进展
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股权让与担保的认定及实现
9
作者 王文秀 《争议解决》 2024年第3期51-57,共7页
股权让与担保是通过虚假股权转让实现真实担保目的的非典型担保制度,是商事主体发挥股权融资功能、获得融资资金的常见增信措施,但是在实务中一直争议很大,近年来逐渐纳入法律规制中。本文依据主要债务的有无、有无设定股权买卖价格及... 股权让与担保是通过虚假股权转让实现真实担保目的的非典型担保制度,是商事主体发挥股权融资功能、获得融资资金的常见增信措施,但是在实务中一直争议很大,近年来逐渐纳入法律规制中。本文依据主要债务的有无、有无设定股权买卖价格及其金额是否合理并已付清、债权方是否为公司运营管理的直接参与者等要素来判断股权转让的性质,并通过股权让与担保与股权转让、股权代持以及与明股实债的辨析对其作出更准确的界定。关于股权让与担保的效力,本文认为,受让方按合同约定并不享有股东权利,也无法参与公司的运营管理,因此其内部行为无效;而股权转让担保的外部效力,在破产和执行情况下应当考虑平衡担保人、担保权人以及所有相关各方的利益。最后关于股权让与担保的实现,法律认可了清算型债权清偿模式的合法性,流质型股权让与担保只有在进行了产权的变更登记之后,担保权人才可申请采用拍卖、变卖等方式行使优先受偿权。 展开更多
关键词 让与担保 优先受偿权 内部行为 股东权利 股权转让 法律认可 非典型担保 融资资金
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基于物联网技术的工厂智能化电气实验平台构建
10
作者 王文秀 《电气时代》 2024年第2期34-36,共3页
对现状与需求进行深入分析与讨论,设计了工厂智能化电气实验平台,并对工厂智能化电气实验平台进行构建。通过案例分析,证明该平台在提高电气实验效果方面具有显著优势,大幅提升电气实验的准确性与效率,有效降低生产事故的发生率,提升电... 对现状与需求进行深入分析与讨论,设计了工厂智能化电气实验平台,并对工厂智能化电气实验平台进行构建。通过案例分析,证明该平台在提高电气实验效果方面具有显著优势,大幅提升电气实验的准确性与效率,有效降低生产事故的发生率,提升电网的生产质量与效率。 展开更多
关键词 生产事故 物联网技术 实验平台构建 案例分析 现状与需求 智能化电气 质量与效率 显著优势
原文传递
从消极修辞探析《孔乙己》《列夫·托尔斯泰》的语言特色
11
作者 王文秀 《中学语文》 2024年第9期108-109,共2页
消极修辞是强调文章事理逻辑顺畅、语言表达准确、意义明确、词句平匀、安排稳密的一种修辞方式。从消极修辞角度探析《孔乙己》与《列夫·托尔斯泰》,可以更清晰地了解文本内容与语言特色,把握词语的形象色彩。
关键词 《孔乙己》 《列夫·托尔斯泰》 消极修辞 语言特色
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基于分布式智能的配电网馈线故障处理技术的应用
12
作者 王文秀 《自动化应用》 2023年第20期33-35,共3页
传统的馈线故障检测方法主要依赖于现场巡检的方式,但该方式存在人为误差较大、成本高昂的问题。因此,如何提高配电网馈线故障检测效率和准确性成为当前的研究热点。本文提出了一种基于分布式智能的配电网馈线故障处理技术,该技术可以... 传统的馈线故障检测方法主要依赖于现场巡检的方式,但该方式存在人为误差较大、成本高昂的问题。因此,如何提高配电网馈线故障检测效率和准确性成为当前的研究热点。本文提出了一种基于分布式智能的配电网馈线故障处理技术,该技术可以快速定位和诊断馈线故障,有效缩短了故障排除时间,降低了维护成本,实现了对馈线故障位置及原因的自动识别与分析。 展开更多
关键词 分布式智能 自动定位 故障处理技术
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秦淮河江宁段浮游植物群落结构调查
13
作者 李云 金伟 +3 位作者 鲍婷 王文秀 黄鸿兵 代培 《水产养殖》 CAS 2024年第4期20-24,共5页
为了解长江禁捕后秦淮河江宁段浮游植物群落结构特征,于2023年5、10和12月,对秦淮河6个采样点的浮游植物群落结构进行调查。结果表明,共鉴定浮游植物7门61属105种,其中绿藻门物种数最多(48种),硅藻门次之(32种)。秦淮河江宁段浮游植物... 为了解长江禁捕后秦淮河江宁段浮游植物群落结构特征,于2023年5、10和12月,对秦淮河6个采样点的浮游植物群落结构进行调查。结果表明,共鉴定浮游植物7门61属105种,其中绿藻门物种数最多(48种),硅藻门次之(32种)。秦淮河江宁段浮游植物优势种共12种,其中硅藻门物种数最多,为5种。浮游植物平均密度为3.79×106 ind./L,密度主体为隐藻门,平均生物量为3.78 mg/L,生物量主体为硅藻门;不同调查时间秦淮河江宁段浮游植物群落结构存在一定差异,物种组成上,5和10月较为相似,均以绿藻门为主体,12月份则以硅藻门为主体。密度贡献率上,5月份绿藻门和硅藻门相对较高,10月份隐藻门最高,12月份硅藻门最高。生物量贡献率上,5和12月份均以硅藻门最高,10月份则以甲藻门最高。指出,秦淮河江宁段水质为轻型至中度污染,整体上,秦淮河水质状况良好。 展开更多
关键词 浮游植物 秦淮河 群落结构 水质评价
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犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备
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作者 薛姣雄 赵婷芳 +9 位作者 张倩 唐青海 高翠翠 赵铖 张妍 全飞杨 刘婷 杨灿 杨海 王文秀 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第11期2568-2583,共16页
为表达犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S 1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构... 为表达犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S 1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白;纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原,免疫蛋鸡,用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体,通过Western blot检测抗体滴度,用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示,S1蛋白全长无表达,CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈特异性反应,胃蛋白酶处理后制备的小分子抗体Fab可以有效阻断CCV的感染性。综上,本研究成功表达了CCV S1的2个截短片段蛋白,制备了卵黄抗体及其小分子抗体Fab,为进一步开展犬冠状病毒病的诊断和防治技术研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 原核表达 佐剂 卵黄抗体 小分子抗体Fab
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基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响
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作者 郁丽 王湄 +2 位作者 王文秀 曹丽平 何前松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期207-211,共5页
目的 基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响,为揭示运用锦鸡儿异黄酮治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。方法 建立小鼠神经元细胞(HT22)糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型,通过Western blot检测糖氧剥夺... 目的 基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响,为揭示运用锦鸡儿异黄酮治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。方法 建立小鼠神经元细胞(HT22)糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型,通过Western blot检测糖氧剥夺/复氧复糖不同时间HT22神经元细胞中PARP1和PARG表达情况,选择通路变化最佳时间点。分别使用芒柄花素、PARP1抑制剂(PJ34)和PARG抑制剂处理OGD/R后的HT22细胞,设置6个组,分别为对照组、对照组+芒柄花素组、OGD/R组、OGD/R+芒柄花素组、OGD/R+PJ34组、OGD/R+PARG抑制剂组。对照组HT22细胞正常培养,不进行OGD/R处理;采用免疫荧光、Western blot法检测各组细胞凋亡因子、相关蛋白表达水平。结果 在糖氧剥夺/复氧复糖3 h后,HT22细胞中PARP1通路激活最明显,在OGD/R 3 h条件下,芒柄花素、PJ34或PARG抑制剂处理后可提高E3泛素连接酶(Iduna),抑制PARP1、PARG通路蛋白表达,并降低AIF和P53表达,提高AKT蛋白磷酸化水平。结论 HT22小鼠神经元细胞在OGD/R条件下,芒柄花素可通过提高Iduna蛋白表达抑制PARP1/AIF/Akt信号通路减轻HT22小鼠神经元细胞损伤。 展开更多
关键词 芒柄花素 糖氧剥夺/复氧复糖 神经元损伤 PARP1信号通路
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鸭甲型肝炎病毒3型和鸭圆环病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 于新友 李天芝 +2 位作者 苗立中 谢金文 王文秀 《中国家禽》 北大核心 2023年第12期47-52,共6页
为建立同时检测鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)和鸭圆环病毒(DuCV)的双重荧光定量PCR方法,试验根据NCBI中收录的DHAV-3 VP1和DuCV cap基因序列,分别设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了同时检测DHAV-3和DuCV的双重荧光定量PCR,对该... 为建立同时检测鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)和鸭圆环病毒(DuCV)的双重荧光定量PCR方法,试验根据NCBI中收录的DHAV-3 VP1和DuCV cap基因序列,分别设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了同时检测DHAV-3和DuCV的双重荧光定量PCR,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,并采用该方法对临床样品进行检测。结果显示:建立的方法不与其他常见鸭病原发生交叉反应,对DHAV-3和DuCV的检测灵敏度分别为3.8 copies/μL和7.3 copies/μL,批内和批间变异系数均小于2%,从65份临床样品中分别检出DHAV-3和DuCV阳性样品11份和28份,与现有地方标准符合率分别为95.4%和90.8%。研究表明,建立的双重荧光定量PCR特异性强、敏感性高、重复性好,可用于DHAV-3和DuCV的快速检测。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒3型 鸭圆环病毒 双重荧光定量PCR
原文传递
猪视网膜上皮细胞的分离培养与鉴定
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作者 张艳 谢金文 +4 位作者 刘博 曹宗喜 谷英华 魏凤 王文秀 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期54-59,共6页
旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞,筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果:消化法分离的细胞约1周长成单层,组织块贴壁法约... 旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞,筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果:消化法分离的细胞约1周长成单层,组织块贴壁法约2周长满单层,但活力更高;PRCs主要形态为长梭形和大理石样,呈现为2种形态细胞混合生长;差速消化法纯化细胞后,经间接免疫荧光鉴定细胞角蛋白(CK18和CK19),确定该细胞为上皮细胞;细胞接种猪圆环病毒2型(PCV2)可产生明显病变。综上,本试验成功分离获得PRECs,含胎牛血清浓度为12%的α-MEM为最优培养基,该细胞支持PCV2增殖并产生明显的细胞病变,为进一步建立稳定传代的猪视网膜上皮细胞系及研究PCV2感染及致病机理提供基础。 展开更多
关键词 猪视网膜上皮细胞 组织块贴壁法 细胞角蛋白
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基于STM32F7和OpenMV的智能分类回收垃圾桶设计
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作者 张弛 牛帅 王文秀 《科技与创新》 2024年第3期49-51,54,共4页
随着资源的不断减少和人们环保意识的不断增强,垃圾分类已经刻不容缓。为此,基于STM32F7开发板和OpenMV为主体设计了一款集垃圾判别、分类、自动投放与报警提示于一体的垃圾智能回收系统。其中,以STM32F7为核心处理器,通过OpenMV摄像头... 随着资源的不断减少和人们环保意识的不断增强,垃圾分类已经刻不容缓。为此,基于STM32F7开发板和OpenMV为主体设计了一款集垃圾判别、分类、自动投放与报警提示于一体的垃圾智能回收系统。其中,以STM32F7为核心处理器,通过OpenMV摄像头模块实现对垃圾图像的获取及判别分类。系统识别出垃圾种类后,通过控制机械结构将垃圾投放至相应的垃圾槽。当垃圾槽满、存在有毒气体或者火光烟雾,被MQ-2传感器检测到后,SDR4超声波模块会自动提醒相关人员。 展开更多
关键词 物联网 垃圾分类 迁移学习 STM32
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天然源性佐剂在肿瘤疫苗中的应用进展与未来发展趋势
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作者 李树珍 朱珲 +8 位作者 贾毅敏 叶演 陈婷 孙存 王文秀 李杰平 邹全明 曾浩 孙红武 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1090-1095,共6页
肿瘤已成为导致死亡的主要原因,而肿瘤疫苗可增强患者免疫应答,成为治疗和预防的重要手段。然而肿瘤疫苗大部分为重组亚单位蛋白抗原,免疫原性差,难在免疫系统受损的患者中诱导强烈的免疫应答,从而影响肿瘤疫苗上市批准。疫苗中的核心... 肿瘤已成为导致死亡的主要原因,而肿瘤疫苗可增强患者免疫应答,成为治疗和预防的重要手段。然而肿瘤疫苗大部分为重组亚单位蛋白抗原,免疫原性差,难在免疫系统受损的患者中诱导强烈的免疫应答,从而影响肿瘤疫苗上市批准。疫苗中的核心成分佐剂可极大增强机体免疫应答的强度、速度和持续时间,从而成为开发理想肿瘤疫苗的关键所在。现大多肿瘤疫苗采用传统铝、MF59和AS系列等佐剂,且产品和专利均被国外大型公司垄断。我们对新型佐剂的长期研究发现,天然源性佐剂具有众多独特的优势,如具有来源广泛,生物相容性好,可促进树突状细胞的成熟和免疫细胞因子的分泌,显著增强肿瘤疫苗免疫应答等。本文对天然源性多糖、皂苷、黄酮类化合物、植物病毒样颗粒等重要佐剂在肿瘤疫苗中的应用及其未来发展方向进行综述,期望能为开发出具有我国自主知识产权的新型原创型疫苗佐剂奠定科学的理论基础。 展开更多
关键词 肿瘤疫苗 疫苗佐剂 多糖 皂苷 黄酮 植物病毒样颗粒
原文传递
基于可见/近红外光谱生鲜肉多品质参数检测装置研发 被引量：13
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作者 王文秀 彭彦昆 +3 位作者 孙宏伟 王凡 田芳 陈兴海 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第23期290-296,共7页
为了解决生鲜肉多个品质参数快速、无损、同时检测的问题,该文利用双波段（350-1 100 nm和1 000-2 500 nm）可见/近红外光谱技术,结合硬件单元和编写的软件控制程序,研发了多品质参数同时检测装置,实现对双波段光谱信息的同时采集、实... 为了解决生鲜肉多个品质参数快速、无损、同时检测的问题,该文利用双波段（350-1 100 nm和1 000-2 500 nm）可见/近红外光谱技术,结合硬件单元和编写的软件控制程序,研发了多品质参数同时检测装置,实现对双波段光谱信息的同时采集、实时处理、显示以及保存。基于该检测装置,采集覆盖生鲜肉多个品质参数的可见/近红外光谱信息（350-2 500 nm）,经过平滑和标准正态变量变换（standard normal variate,SNV）预处理后,分别基于单波段和双波段光谱数据,与国家标准方法测定的猪肉颜色（L＊、a＊、b＊）、p H值、挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）、含水率、蒸煮损失和嫩度建立偏最小二乘（partial least square,PLS）预测模型。在此基础上,利用竞争性自适应加权算法（competitive adaptive reweighted sampling,CARS）筛选特征变量,建立简化的PLS模型,对各个品质参数的预测集相关系数分别为0.962 5、0.933 6、0.938 9、0.941 5、0.936 3、0.912 3、0.920 0和0.901 9,预测误差为0.628 7、0.757 6、0.547 1、0.078 2、2.835 4 mg/（100 g）、0.380 9%、2.560 0%和6.896 7 N。结果表明,该装置可以实现生鲜肉多个品质参数的同时检测,研究结果可为实时获取肉品品质信息,实现肉品评定和分级提供参考。 展开更多
关键词 光谱分析 无损检测 模型 双波段 可见/近红外光谱 生鲜肉 多参数
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