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牛种布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株生物学特性及其免疫原性研究
1
作者 徐朕宇 邓肖玉 +7 位作者 王月丽 孙灿 吴澳迪 曹剑 易继海 王勇 王震 陈创夫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2135-2145,共11页
布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失... 布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失,通过qRT-PCR检测布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株中的BtpA mRNA表达水平,并探究布鲁氏菌A19株和A19ΔBtpA缺失株在生长曲线、胞内生存、黏附侵袭和体外应激方面的差异。此外,将A19株和A19ΔBtpA缺失株免疫小鼠,在免疫后的第7、14、21、28和35天使用间接ELISA检测小鼠体内的布鲁氏菌特异性抗体水平;通过ELISpot检测免疫第21天时小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达水平,利用流式细胞术测定了小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞的分类情况。结果表明:成功构建了A19ΔBtpA缺失株,A19ΔBtpA缺失株中BtpA的转录水平显著低于A19株,A19ΔBtpA缺失株与亲本株在生长曲线、胞内生存和黏附侵袭方面呈现相似的趋势。而体外应激试验显示,高渗应激条件下A19ΔBtpA缺失株的存活菌量明显低于A19株(P<0.05)。免疫原性研究中,与PBS组相比,A19组和A19ΔBtpA组均可极显著诱导小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体(P<0.01);与A19组相比,A19ΔBtpA组淋巴细胞IFN-γ表达水平显著升高(P<0.05),使小鼠产生的IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值显著增高(P<0.05)。BtpA基因缺失不会影响布鲁氏菌A19体外胞内增殖,但可能参与布鲁氏菌抗高渗环境能力相关。此外,A19ΔBtpA缺失株比A19株更好地诱导Th1型免疫应答,诱导宿主产生与A19株相当的IgG特异性抗体,具有布鲁氏菌基因缺失疫苗的潜力。该研究将为进一步探究布鲁氏菌的致病机制和开发基因缺失株疫苗提供理论基础和数据支持。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 BtpA 生物学特性 免疫原性
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RT-3DE参数与射血分数保留心衰患者可溶性致癌抑制因子2水平及心功能分级的交互关系
2
作者 郭倩倩 李斌 +1 位作者 王月丽 于玮 《医学影像学杂志》 2024年第10期30-34,共5页
目的探讨实时三维超声心动图(RT-3DE)参数与射血分数保留心衰(HFpEF)患者血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)水平及心功能相关性。方法选取80例HFpEF患者作为HFpEF组,依据美国纽约心脏病协会(NYHA)分级分为:Ⅱ级(14例)、Ⅲ级(48例)、Ⅳ级(18... 目的探讨实时三维超声心动图(RT-3DE)参数与射血分数保留心衰(HFpEF)患者血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)水平及心功能相关性。方法选取80例HFpEF患者作为HFpEF组,依据美国纽约心脏病协会(NYHA)分级分为:Ⅱ级(14例)、Ⅲ级(48例)、Ⅳ级(18例),另选择100例同期于我院体检的健康志愿者作为对照组,采用酶联免疫吸附测定法检测所有患者的血清sST2水平,所有患者均行常规超声心动图和RT-3DE检查,记录左心室6、12、16节段到达收缩期最小容积时间最大差异值标准化值(TmsvDif%)、标准差标准化值(TmsvSD%)和左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末容积(LVESV)、左心室舒张末容积(LVEDV);分析各RT-3DE参数与血清sST2水平及心功能之间的相关性。结果不同心功能分级HFpEF患者LVEF均明显低于对照组,且心功能等级越高LVEF越低,差异有统计学意义(P<0.05);不同心功能分级HFpEF患者LVEDV、LVESV明显高于对照组,且心功能等级越高LVEDV、LVESV越高,差异有统计学意义(P<0.05);不同心功能分级HFpEF患者Tmsv 6-SD%、Tmsv12-SD%、Tmsv16-SD%及Tmsv 6-Dif%、Tmsv 12-Dif%、Tmsv 16-Dif%较对照组均明显延长,且心功能等级越高,患者左心室6、12、16节段TmsvSD%和TmsvDif%时间越长,差异有统计学意义(P<0.05);不同NYHA分级HFpEF血清sST2表达水平高于对照组,且心功能分级较高的HFpEF患者sST2水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,RT-3DE相关参数LVEDV、LVESV、Tmsv6-SD%、Tmsv12-SD%、Tmsv16-SD%、Tmsv 6-Dif%、Tmsv 12-Dif%、Tmsv 16-Dif%均与NYHA心功能分级存在显著正相关性(r=0.687,0.752,0.501,0.565,0.581,0.522,0.596,0.603;P<0.05),LVEF与NYHA心功能分级存在负相关性(r=-0.731,P<0.05)。LVEDV、LVESV与血清sST2表达存在显著正相关性(r=0.335,0.356;P均<0.05),LVEF与血清sST2、心功能分级存在负相关性(r=-0.313,P<0.05)。结论RT-3DE能够有效监测HFpEF患者左心房容积功能和左心室舒张功能变化情况,RT-3DE相关参数与心功能分级密切相关,对于心衰患者程度评估具有重要价值。 展开更多
关键词 实时三维超声心动图 射血分数保留心衰 可溶性致癌抑制因子2 心功能分级 超声检查
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妊娠合并主动脉夹层的临床及遗传学分析 被引量：2
3
作者 张可莹 李小燕 +4 位作者 刘旭霞 王月丽 李同勋 刘爱 张晓萍 《中国妇幼健康研究》 2023年第10期70-74,共5页
目的对临床表型疑似马凡综合征的5例妊娠期女性进行基因检测,鉴定其致病突变基因,辅助临床诊断和监控妊娠合并急性主动脉夹层(AAD)的发展。方法分析2016年1月至2022年1月期间由外院转诊至北京安贞医院的5例妊娠合并AAD患者的临床资料。... 目的对临床表型疑似马凡综合征的5例妊娠期女性进行基因检测,鉴定其致病突变基因,辅助临床诊断和监控妊娠合并急性主动脉夹层(AAD)的发展。方法分析2016年1月至2022年1月期间由外院转诊至北京安贞医院的5例妊娠合并AAD患者的临床资料。遗传学分析采用全外显子测序,利用一代测序对突变位点进行验证。结果5名体征疑似马凡综合征的患者在妊娠早期进行了全外显子测序。全外显子测序鉴定出患者存在FBN1基因的罕见变异(FBN1 c.T7754C;FBN1 c.T7465C;FBN1 c.G2638A;FBN1 c.C6169T;FBN1 c.A7048T)。患者年龄为27~33岁,AAD的发病孕周为8~38周。5例患者均接受了主动脉置换手术,恢复佳。2例提前终止妊娠,3例新生儿发育健康。结论妊娠合并AAD发病凶险,针对临床疑似马凡综合征的孕妇,需要提前进行基因诊断,以便能早期识别致病原因,为早期预防和诊疗提供重要依据。 展开更多
关键词 妊娠 主动脉夹层 妊娠结局 马凡综合征 FBN1基因 全外显子测序 基因检测
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长三角一体化视域下皖北城市语言景观研究——以阜阳市为例
4
作者 王月丽 刘月冉 《阜阳职业技术学院学报》 2024年第1期66-70,共5页
语言景观反映语言与社会语境的共变关系,体现城市公共空间治理水平,对城市语言生态环境建设、对外形象建构具有隐性调节作用。基于Trumper-Hecht的语言景观三维分析模型,对皖北阜阳市城市语言景观进行全面考察。研究表明,阜阳市语言景... 语言景观反映语言与社会语境的共变关系,体现城市公共空间治理水平,对城市语言生态环境建设、对外形象建构具有隐性调节作用。基于Trumper-Hecht的语言景观三维分析模型,对皖北阜阳市城市语言景观进行全面考察。研究表明,阜阳市语言景观呈现多模态化、多载体化特征,各类标牌中中文的高凸显度展现了国家意志、主流意识形态在当地社会生活中的隐性支配作用。地方政府应利用国家长三角一体化发展战略政策红利,从政策、制度、学术层面提升语言景观建设水平,助力中国式现代化城市发展。 展开更多
关键词 城市语言景观 皖北地区 长三角一体化
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“双减”政策背景下小学高段语文阅读教学策略研究
5
作者 王月丽 《教师》 2024年第11期42-44,共3页
在现代化教学背景下,我国为了减轻学生的学业负担,提出了“双减”政策,即减轻义务教育阶段学生过重作业负担和校外培训负担。这一政策的印发反映了社会对学生健康成长的关心与对传统教育方法的反思,特别是在小学高段,学生正处于关键的... 在现代化教学背景下,我国为了减轻学生的学业负担,提出了“双减”政策,即减轻义务教育阶段学生过重作业负担和校外培训负担。这一政策的印发反映了社会对学生健康成长的关心与对传统教育方法的反思,特别是在小学高段,学生正处于关键的认知发展阶段,如何进行有效的教学变得尤为重要,而语文学科作为培养学生语言能力和人文素养的核心课程,其教学策略直接关系到学生的综合素质培养。基于此,文章以“双减”政策为背景,从“双减”政策背景下小学高段语文阅读教学现存的问题入手,随后提出“双减”政策背景下小学高段语文阅读教学策略,以期为相关研究学者提供借鉴与参考。 展开更多
关键词 “双减” 小学高年级 语文阅读教学
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体外膈肌起搏联合呼吸训练对脑卒中后吞咽障碍患者吞咽和呼吸功能的影响 被引量：3
6
作者 陶林花 傅晓倩 +2 位作者 陆操 王月丽 傅建明 《浙江医学》 CAS 2024年第2期191-195,共5页
目的探讨体外膈肌起搏联合呼吸训练对脑卒中后吞咽障碍患者吞咽和呼吸功能以及卒中后相关性肺炎(SAP)的影响。方法选取2022年3月至2023年2月在嘉兴市第二医院康复医学中心住院的脑卒中后吞咽障碍患者60例为研究对象,采用随机数字表法分... 目的探讨体外膈肌起搏联合呼吸训练对脑卒中后吞咽障碍患者吞咽和呼吸功能以及卒中后相关性肺炎(SAP)的影响。方法选取2022年3月至2023年2月在嘉兴市第二医院康复医学中心住院的脑卒中后吞咽障碍患者60例为研究对象,采用随机数字表法分为联合治疗组和对照组,每组30例。两组患者均接受常规吞咽训练和呼吸训练,联合治疗组在此基础上接受体外膈肌起搏治疗。分别于治疗前及治疗4周后对两组患者进行吞咽功能评定[标准吞咽功能评定量表(SSA)、功能性经口摄食分级评估(FOIS)]和呼吸功能评定[用力肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV_(1))、峰值呼气流速(PEF)],并计算两组患者SAP发生率。结果治疗后两组患者SSA及FOIS评分均优于治疗前,且联合治疗组治疗后SSA及FOIS评分均优于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,两组患者FVC、FEV_(1)和PEF均优于治疗前,且联合治疗组FVC、FEV_(1)和PEF均优于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组患者SAP发生率分别为6.7%和20.0%,两组比较差异无统计学意义(P=0.255)。结论体外膈肌起搏联合呼吸训练能有效改善脑卒中后吞咽障碍患者的吞咽功能和呼吸功能,但防止SAP的发生效果并不明显。 展开更多
关键词 体外膈肌起搏 呼吸训练 脑卒中 吞咽障碍 肺炎
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不同有机肥替代比例施肥模式对水稻产量形成及氮肥利用的影响
7
作者 罗龙欣 段照 +4 位作者 祝海竣 梁玲玉 王月丽 文帅 王学华 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第11期94-100,共7页
以杂交中熟晚稻隆香优130为材料,在田间试验条件下,探讨不同有机肥替代比施肥模式对水稻产量形成及氮肥利用的影响。结果表明:(1)有机肥替代比为40%时,水稻的理论产量、实际产量较高;(2)有机肥替代比为40%时,水稻的千粒重、总粒数、结... 以杂交中熟晚稻隆香优130为材料,在田间试验条件下,探讨不同有机肥替代比施肥模式对水稻产量形成及氮肥利用的影响。结果表明:(1)有机肥替代比为40%时,水稻的理论产量、实际产量较高;(2)有机肥替代比为40%时,水稻的千粒重、总粒数、结实率、有效穗数较高;(3)有机肥替代比为0时,灌浆期与成熟期的茎干物质量、孕穗期与灌浆期的叶干物质量、灌浆期与成熟期的穗干物质量、孕穗期灌浆期和成熟期的整株干物质量较高;有机肥替代比为20%时,分蘖期与齐穗期的茎干物质量、齐穗期的叶干物质量、齐穗期的穗干物质量、分蘖期与齐穗期的整株干物质量较高;有机肥替代比为60%时,孕穗期的茎干物质量、分蘖期与成熟期的叶干物质量较高;(4)有机肥替代比为60%时,孕穗期的叶绿素相对含量较高;(5)有机肥替代比为40%时,氮肥贡献率较高;(6)有机肥替代比为40%时,氮肥农学利用率、氮肥偏生产力较高。 展开更多
关键词 水稻 有机肥替代 氮肥贡献率 干物质量 水稻产量形成
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布鲁氏菌外膜囊泡生物信息学分析及免疫原性评价 被引量：3
8
作者 徐朕宇 徐锦凤 +9 位作者 邓肖玉 王月丽 何金科 谢珊珊 王震 易继海 王勇 苗玉和 崔丽瑾 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2906-2914,共9页
【目的】探索布鲁氏菌外膜囊泡(OMVs)在亚单位疫苗上的应用前景,制备布鲁氏菌OMVs亚单位疫苗,评估布鲁氏菌OMVs的免疫原性。【方法】利用高速离心法制备羊种布鲁氏菌OMVs,通过透射电镜、SDS-PAGE和生物信息学分析对制备的OMVs进行形态... 【目的】探索布鲁氏菌外膜囊泡(OMVs)在亚单位疫苗上的应用前景,制备布鲁氏菌OMVs亚单位疫苗,评估布鲁氏菌OMVs的免疫原性。【方法】利用高速离心法制备羊种布鲁氏菌OMVs,通过透射电镜、SDS-PAGE和生物信息学分析对制备的OMVs进行形态和组分分析;使用纳米佐剂(LDH)和弗氏佐剂乳化OMVs后免疫小鼠,通过间接ELISA方法检测免疫后7、14、21、28和35 d小鼠血清中的特异性抗体,利用小鼠IgG ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠血清中IgG抗体水平,评估OMVs诱导产生的体液免疫水平;通过小鼠脾脏淋巴细胞分离与细胞因子白细胞介素4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)测定及小鼠外周血T淋巴细胞亚群的流式细胞术测定评估OMVs免疫小鼠的细胞免疫水平。【结果】成功提取并纯化了布鲁氏菌OMVs,其直径大小为20~160 nm。生物信息学分析结果显示,OMVs主要组成蛋白OMP25、OMP31、OMP16、OMP19、BP26及SOD均属于亲水性蛋白和抗原性蛋白,且存在多个B细胞和T细胞优势抗原表位。与PBS组相比,OMVs免疫小鼠后,不同佐剂组均可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体和IgG抗体(P<0.01);同时OMVs可显著诱导小鼠脾脏淋巴细胞产生IFN-γ(P<0.05),并促进了CD4^(+)T细胞的表达(P<0.05)。【结论】本研究证实了羊种布鲁氏菌OMVs具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应,为布鲁氏菌新型亚单位疫苗的开发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜囊泡(OMVs) 免疫原性
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布鲁氏菌重组L7/L12蛋白对小鼠免疫保护效果的评价 被引量：2
9
作者 谢珊珊 王月丽 +9 位作者 邓肖玉 席静 于水发 马忠臣 王震 孟闯 苗玉和 徐艺玫 易继海 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期72-78,87,共8页
为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果,本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因,构建重组质粒pET-22b-L7/L12,经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE... 为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果,本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因,构建重组质粒pET-22b-L7/L12,经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE与western blot检测。结果显示,获得了16 ku的重组L7/L12蛋白(rL7/L12),且纯化效果较好。将rL7/L12以100μg/只腹腔注射免疫6周龄SPF BALB/c小鼠,14 d后以50μg/只加强免疫。首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d分别对所有小鼠尾静脉采血,通过间接ELISA方法检测小鼠血清中的IgG抗体、其亚型(IgG1、IgG2a)抗体水平及二者比值;并利用ELISA方法检测首免后21 d和35 d两组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果显示,首免后14 d,小鼠血清中IgG抗体水平迅速升高,于首免后21 d达峰值并持续至首免后49 d(P<0.01),对照组小鼠则一直无抗体产生;首免后14 d,rL7/L12组小鼠血清中的IgG1抗体水平极显著高于IgG2a抗体水平(P<0.01),且IgG1/IgG2a大于1;但首免后42 d,rL7/L12组小鼠血清中IgG2a抗体水平极显著高于IgG1(P<0.01),IgG2a/IgG1比值大于1。表明在免疫前期,rL7/L12主要诱导小鼠的Th2型体液免疫反应,免疫后期主要诱导小鼠Th1型细胞免疫反应。首免后21 d和35 d,rL7/L12组小鼠IL-2和TNF-α含量极显著高于PBS对照组(P<0.01),首免后35 d,该组小鼠抑炎因子IL-10的含量极显著低于PBS对照组(P<0.01)。首免后21 d和35 d,分别剖杀每组小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,利用ELISpot法检测各组小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的分泌水平。结果显示,首免后21 d,rL7/L12组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平有所升高,但与PBS对照组无显著差异(P>0.05);但免疫后35 d,rL7/L12组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌水平显著高于PBS对照组(P<0.05)。上述结果表明,rL7/L12免疫后期刺激小鼠机体产生Th1型细胞免疫反应,与抗体检测结果相符。首免后42 d通过腹腔注射途径以100μL(含1×10^(5)cfu/只)的羊种布鲁氏菌新疆流行株043攻击小鼠,攻毒后观察死亡情况,15 d后剖杀全部小鼠,通过检测其脾脏指数及脾脏载菌量(cfu)评价rL7/L12对小鼠的保护效果,结果显示,攻毒后15 d PBS对照组小鼠精神沉郁,但两组小鼠均无死亡;rL7/L12组小鼠的脾指数和脾脏载菌量均显著低于PBS对照组(P<0.05)。本研究结果首次表明,rL7/L12免疫小鼠后能够刺激小鼠的Th2型体液免疫反应和Th1型细胞免疫反应,且以Th1型细胞免疫反应为主。本研究为布鲁氏菌L7/L12亚单位疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 保护效果 ELISPOT
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一例马凡综合征家系患者的临床表现及遗传学分析 被引量：2
10
作者 孔志华 郭俊 +3 位作者 王月丽 李小燕 张晓萍 陈丽 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2023年第2期189-194,共6页
目的:通过对1例超声心动图表现为主动脉夹层、二尖瓣前叶脱垂并有主动脉夹层家族史的马凡综合征患者进行基因检测,明确其可能的致病变异基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法:对先证者行全外显子测序,利用生物信息学方法分析遗... 目的:通过对1例超声心动图表现为主动脉夹层、二尖瓣前叶脱垂并有主动脉夹层家族史的马凡综合征患者进行基因检测,明确其可能的致病变异基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法:对先证者行全外显子测序,利用生物信息学方法分析遗传性主动脉瘤相关基因,依据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南鉴定候选致病突变;收集患者家系成员共计11人样本,利用Sanger测序对患者及家系成员的候选致病位点进行检测。结果:高通量测序结果提示患者携带原纤维蛋白1基因(FBN1)(NM_000138.5)c.7412delC杂合变异,位于60号外显子,Sanger测序结果表明该变异在家系内与疾病共分离。该位点为移码突变;依据ACMG指南,该变异为致病性变异[致病变异分类非常强(PVS1)+中等证据2(PM2)+辅助证据1(PP1)]。结论:该马凡综合征家系的致病原因为FBN1基因的c.7412delC突变,本研究为该家系的分子诊断、分子分型及后续遗传咨询及治疗选择提供了理论依据,丰富了中国马凡综合征患者FBN1基因的变异谱。 展开更多
关键词 马凡综合征 FBN1基因 临床表现 全外显子测序
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猪轮状病毒VP4基因重组腺病毒的构建及抗体水平评价 被引量：1
11
作者 肖莉 牛小杰 +3 位作者 刘庆庆 王月丽 陈创夫 易继海 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期260-269,共10页
【目的】构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列(登录号:MH898990.1)合成PoRV VP4基因,将得... 【目的】构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列(登录号:MH898990.1)合成PoRV VP4基因,将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4;腺病毒穿梭载体经过PmeⅠ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4,对重组质粒进行PacⅠ酶切鉴定,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4,对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50);通过RT-PCR检测其体外表达情况,Western blotting检测其反应原性;将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫,收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带,测序结果正确,表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功,测得rAd-VP4病毒滴度为106.5TCID50,Western blotting结果表明,重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达,蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明,在用106.5TCID50rAd-VP4免疫后的第35和42天,小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于105.3TCID50TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平(P<0.05);106.5TCID50rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于105.5和104.5TCID50rAd-VP4(P<0.05),而105.5TCID50rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于106.5和104.5TCID50rAd-VP4(P<0.05)。106.5TCID50rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著(P>0.05)。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4,其病毒滴度为106.5TCID50。106.5和105.5TCID50rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平,2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) 重组腺病毒载体 IGG抗体水平
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木纳格葡萄沙枣复合果酒发酵工艺优化及抗氧化活性分析
12
作者 宋晶晶 王月丽 +3 位作者 张亚南 姜蕾 侯吉超 吴江超 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第9期130-134,共5页
该试验以木纳格葡萄和沙枣(Elaeagnus angustifolia)为原料制备木纳格葡萄沙枣复合果酒,通过单因素和正交试验对复合果酒的发酵工艺进行优化,并对复合果酒抗氧化活性进行分析。结果表明,木纳格葡萄沙枣复合果酒的最佳发酵工艺为初始糖度... 该试验以木纳格葡萄和沙枣(Elaeagnus angustifolia)为原料制备木纳格葡萄沙枣复合果酒,通过单因素和正交试验对复合果酒的发酵工艺进行优化,并对复合果酒抗氧化活性进行分析。结果表明,木纳格葡萄沙枣复合果酒的最佳发酵工艺为初始糖度24°Bx,酵母接种量0.4%,发酵时间7 d,发酵温度24℃,在此条件下发酵制得的木纳格葡萄沙枣复合果酒呈橙黄色,酒体清亮,果香浓郁,酒香醇厚,酒精度为10.3%vol,感官评分为85.2分。发酵后的复合果酒2,2'-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS+)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟基自由基清除能力较发酵前均提高,总酚、总黄酮、黄烷-3-醇含量均显著提高(P<0.05),表明木纳格葡萄沙枣复合果酒具有一定的抗氧化活性。 展开更多
关键词 木纳格葡萄 沙枣 复合果酒 发酵工艺 抗氧化活性
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冠状病毒与宿主细胞受体相互作用的研究进展
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作者 李红欢 乔彦杰 +5 位作者 邓肖玉 杨宁宁 席静 王月丽 易继海 陈创夫 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期79-83,共5页
冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒,具有复杂的进化历史,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒亚科,冠状病毒属,这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^([1])。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒,... 冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒,具有复杂的进化历史,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒亚科,冠状病毒属,这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^([1])。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒,成熟的冠状病毒直径为60~220 nm,分为4个不同的属:α、β、γ和δ冠状病毒(图1)。冠状病毒粒子多呈现球形或不规则形,其基因组大小介于26 000~32 000 bp,长度约为30 kb^([2]),包含6~11个开放阅读框(Open reading frame,ORF),第一个ORF占整个基因组约67%,编码16种非结构蛋白(Nonstructural protein)^([3]),其余的ORF编码辅助蛋白和结构蛋白。4种主要的结构蛋白为刺突表面糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)^([4])(图2A、2B)。S蛋白在结合宿主细胞上的受体中起着至关重要的作用,也决定了病毒的宿主向性^([5,6])。冠状病毒可以通过S蛋白的突变或与其他毒株重组获得与新的宿主受体结合的能力,从而发生组织或宿主嗜性的改变。冠状病毒受体特异性的改变决定了病毒的进化方向和跨种间传播。冠状病毒因其跨越多种宿主物种屏障的灵活性而闻名,具有传播人兽共患疾病的能力。 展开更多
关键词 冠状病毒科 基因组大小 核衣壳蛋白 结构蛋白 冠状病毒属 类病毒 基质蛋白 包膜蛋白
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多菌种发酵石榴酵素工艺的优化
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作者 候吉超 姜蕾 +2 位作者 宋晶晶 王月丽 程秀峰 《食品安全导刊》 2024年第15期132-136,共5页
本研究利用单因素实验和均匀设计从5种乳酸菌(保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳双歧杆菌)中筛选合适的菌种,并优化其比例用于生产石榴酵素,利用正交实验优化石榴酵素发酵工艺。结果表明,复合菌中菌种组成及其质... 本研究利用单因素实验和均匀设计从5种乳酸菌(保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳双歧杆菌)中筛选合适的菌种,并优化其比例用于生产石榴酵素,利用正交实验优化石榴酵素发酵工艺。结果表明,复合菌中菌种组成及其质量比例为植物乳杆菌∶乳酸片球菌∶乳双歧杆菌=1.625∶1.250∶1.100,最佳发酵条件为白砂糖添加量13%,发酵时间36 h,发酵温度38 ℃,菌种添加量3%,在该条件下发酵的石榴酵素颜色鲜红,口感微甜,风味独特。 展开更多
关键词 石榴 酵素 复合菌 均匀实验
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发酵型雪菊乳饮料的稳定性研究
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作者 张亚南 苏婷婷 +2 位作者 宋晶晶 王月丽 阿尔孜古丽·尼牙孜 《食品安全导刊》 2024年第14期125-128,共4页
以发酵型雪菊乳饮料为研究对象,分别加入黄原胶、羧甲基纤维素钠、卡拉胶、蔗糖酯、果胶5种稳定剂进行单因素试验,以沉淀率为评价指标,筛选出影响较大的因素进行正交试验,以期获得最佳复合稳定剂组合,从而提高其稳定性。结果表明,当稳... 以发酵型雪菊乳饮料为研究对象,分别加入黄原胶、羧甲基纤维素钠、卡拉胶、蔗糖酯、果胶5种稳定剂进行单因素试验,以沉淀率为评价指标,筛选出影响较大的因素进行正交试验,以期获得最佳复合稳定剂组合,从而提高其稳定性。结果表明,当稳定剂羧甲基纤维素钠的用量为0.10%,蔗糖酯的用量为0.35%,果胶的用量为0.35%时,雪菊乳饮料的稳定性最佳,其沉淀率为0.19%,色泽为黄绿色,未分层,牛奶香与花香和谐,香味浓厚,无异味,无黏稠感。 展开更多
关键词 雪菊乳饮料 稳定剂 沉淀率
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布鲁菌对不同分化类型巨噬细胞JAK-STAT6信号通路的影响 被引量：6
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作者 王月丽 易继海 +5 位作者 王震 唐燕 童志霞 徐锦凤 张辉 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期836-841,共6页
为研究布鲁菌侵染巨噬细胞过程中,对后者不同分化类型细胞中JAK-STAT6信号通路和细胞因子表达变化的影响,本研究利用小鼠巨噬细胞系RAW264.7,经40 ng/m L的IL-4体外作用24 h将其诱导为M2型巨噬细胞,采用细胞免疫荧光方法,检测M2巨噬细... 为研究布鲁菌侵染巨噬细胞过程中,对后者不同分化类型细胞中JAK-STAT6信号通路和细胞因子表达变化的影响,本研究利用小鼠巨噬细胞系RAW264.7,经40 ng/m L的IL-4体外作用24 h将其诱导为M2型巨噬细胞,采用细胞免疫荧光方法,检测M2巨噬细胞极化状态;通过荧光定量PCR(q RT-PCR)方法,检测布鲁菌疫苗株M5侵染不同类型(M0和M2型)巨噬细胞中JAK1、STAT6基因mRNA转录情况;采用ELISA方法检测M5侵染不同类型巨噬细胞上清中IL-10、INF-γ的表达情况。细胞免疫荧光检测结果显示,IL-4诱导24 h后,巨噬细胞表面标志CD206荧光表达量超过90%,表明巨噬细胞极化为M2型;q RT-PCR结果显示,M5侵染M0型巨噬细胞后能够引起JAK1、STAT6 mRNA转录水平持续降低,在24 h和48 h时其转录水平最低,二者差异极显著(p<0.01);而M5侵染M2型巨噬细胞后,与未极化组(M0型)相比,JAK1、STAT6的mRNA转录水平增高,同时存在时间差异性,侵染8 h时,二者mRNA转录水平最高,差异极显著(p<0.01)。ELISA结果显示,M5侵染巨噬细胞后,极化组(M2型)与未极化组(M0型)巨噬细胞相比,INF-γ的表达量差异不显著(p>0.05),而IL-10的表达量上调且在侵染48 h达到最大值,差异显著(p<0.05)。上述结果表明,在IL-4的诱导下巨噬细胞可以从未极化的M0型极化为M2型;布鲁菌M5侵染M0型巨噬细胞中JAK1、STAT6的转录水平下调,但上调M2型巨噬细胞JAK1、STAT6的转录水平并促进下游细胞因子IL-10的分泌。本研究为探究布鲁菌引起持续感染的机制研究奠定了基础,同时为布鲁菌病药物靶标开拓了新的研究方向。 展开更多
关键词 布鲁菌 巨噬细胞极化 JAK-STAT6信号通路
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miR-145a-3p通过靶向ATG14调控布鲁氏菌诱导的RAW264.7自噬 被引量：1
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作者 王月丽 邵志然 +3 位作者 易继海 王勇 王震 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1117-1125,共9页
【目的】探究miR-145a-3p对布鲁氏菌诱导的巨噬细胞(RAW264.7)自噬及其对布鲁氏菌胞内生存的影响。【方法】首先合成自噬相关miRNA miR-145a-3p的模拟物(miR-145a-3p mimics)和抑制剂(miR-145a-3p inhibitor)及对照模拟物(NC mimics),... 【目的】探究miR-145a-3p对布鲁氏菌诱导的巨噬细胞(RAW264.7)自噬及其对布鲁氏菌胞内生存的影响。【方法】首先合成自噬相关miRNA miR-145a-3p的模拟物(miR-145a-3p mimics)和抑制剂(miR-145a-3p inhibitor)及对照模拟物(NC mimics),转染至GFP-RFP-RAW264.7细胞中,然后用布鲁氏菌侵染该细胞24 h,通过激光共聚焦显微镜观察miR-145a-3p对自噬的影响;运用TargetScan、miRBase等生物信息学软件预测miR-145a-3p的靶蛋白;通过构建PmirGLO-ATG14-3′UTR和PmirGLO-ATG14-3′UTR-mutation重组质粒,用SacⅠ和KpnⅠ进行双酶切鉴定,并利用双荧光素酶报告系统验证miR-145a-3p与自噬相关基因(autophagy-related gene 14,ATG14)的靶向关系;将RAW264.7细胞培养至60%汇合时,分别转染miR-145a-3p mimics、miR-145a-3p inhibitor和NC mimics,转染7 h后用布鲁氏菌侵染,添加PBS作为未感染对照,培养24 h收集细胞,利用实时荧光定量PCR、Western blotting检测miR-145a-3p对ATG14 mRNA和蛋白表达的调控作用;最后通过布鲁氏菌侵染已转染miR-145a-3p的巨噬细胞,进行菌落计数,验证miR-145a-3p对布鲁氏菌胞内生存的影响。【结果】miR-145a-3p mimics促进布鲁氏菌诱导的细胞自噬,miR-145a-3p inhibitor抑制布鲁氏菌诱导的细胞自噬;软件预测结果表明,miR-145a-3p靶基因为自噬相关蛋白ATG14-3′UTR;双酶切结果显示,重组质粒PmirGLO-ATG14-3′UTR和PmirGLO-ATG14-3′UTR-mutation构建成功;双荧光素酶报告基因系统验证miR-145a-3p mimics与ATG14-3′UTR互相作用时,与NC mimics组相比,miR-145a-3p mimics组荧光值极显著降低(P<0.01)。与NC mimics组相比,未感染布鲁氏菌时,miR-145a-3p mimics组ATG14 mRNA水平极显著降低(P<0.01)、ATG14蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),miR-145a-3p inhibitor组ATG14 mRNA水平极显著上调(P<0.01);布鲁氏菌感染后,miR-145a-3p mimics+Bru组ATG14 mRNA水平极显著提高(P<0.01),且miR-145a-3p mimics+Bru组ATG14 mRNA的水平显著高于NC mimics+Bru组(P<0.05)。miR-145a-3p mimics促进ATG14蛋白的表达水平。miR-145a-3p的过表达导致布鲁氏菌的胞内生存数量显著降低(P<0.05)。【结论】miR-145a-3p在布鲁氏菌感染细胞后高表达,miR-145a-3p通过靶向ATG14促进自噬,抑制布鲁氏菌复制。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 MIRNA 自噬 自噬相关蛋白ATG14 胞内生存
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心理干预对SARS、甲流等新发传染病病人及医护人员重要性的研究 被引量：12
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作者 王月丽 刘晓辉 《中国医学工程》 2012年第5期167-167,共1页
目的研究心理干预对SARS、甲流等新发传染病病人及医护人员的影响。方法对我院2003年、2009年收治的SARS、甲流观察、疑似及确诊病例进行心理干预。结果心理干预消除了病人的恐惧感、失落感、孤独感,使病人以平和、宁静的心态面对疾病... 目的研究心理干预对SARS、甲流等新发传染病病人及医护人员的影响。方法对我院2003年、2009年收治的SARS、甲流观察、疑似及确诊病例进行心理干预。结果心理干预消除了病人的恐惧感、失落感、孤独感,使病人以平和、宁静的心态面对疾病的发展及转归,同时很好的缓解医护人员的心理压力。结论和谐的人际关系,是提供心理支持的必要条件;心理干预介入越早越能帮助病人及医护人员消除或缓解心理压力,促进疾病的康复。 展开更多
关键词 心理干预 SARS 甲流 传染病人 医护人员
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护士长绩效考核在护理管理中的应用 被引量：14
19
作者 王月丽 宋玉琴 《护理实践与研究》 2006年第8期42-44,共3页
目的:探讨护士长绩效考核在护理管理中的作用。方法:根据护士长工作职责,按德、能、勤、绩四个方面制定考核标准,进行定期、不定期的系统考核,并及时反馈考核成绩。结果:实施护士长绩效考核后护理质量、病人满意率、护理人员业务水平均... 目的:探讨护士长绩效考核在护理管理中的作用。方法:根据护士长工作职责,按德、能、勤、绩四个方面制定考核标准,进行定期、不定期的系统考核,并及时反馈考核成绩。结果:实施护士长绩效考核后护理质量、病人满意率、护理人员业务水平均有不同程度的提高。结论:护士长绩效考核提高了病人对护理工作的满意度;保障了护理安全,提高了护理质量;调动了护士长工作的积极性和主动性。 展开更多
关键词 绩效考核 护理管理 应用
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