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N35肺癌相关蛋白的特性 被引量：5
1
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第9期859-863,共5页
目的：分析和确定N35肺癌相关蛋白的有关特性及其潜在的临床应用价值。方法：利用抗人肺癌单克隆抗体N35作为免疫探针，经免疫沉淀和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系GLC82、宫颈癌细胞系Hela、肝癌细胞系HepG2、乳腺癌细胞系PMC... 目的：分析和确定N35肺癌相关蛋白的有关特性及其潜在的临床应用价值。方法：利用抗人肺癌单克隆抗体N35作为免疫探针，经免疫沉淀和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系GLC82、宫颈癌细胞系Hela、肝癌细胞系HepG2、乳腺癌细胞系PMC、正常人心脏及肺组织中的存在及分布情况；用N聚糖酶酶解方法确定肿瘤相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系；采用差速离心技术分离出肺腺癌细胞系GLC82亚细胞结构中的胞膜、胞核及线粒体成分，分别取样经免疫印迹法测定肿瘤相关蛋白N35在亚细胞结构中的分布状况并与免疫组化结果相印证；用免疫荧光技术探测肿瘤相关蛋白N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的染色体结构定位；用多种免疫亲和层析技术尝试获得大量纯化肿瘤相关蛋白N35的有效方法。结果：肿瘤相关蛋白N35是一种糖蛋白分子，不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中，而以不同分子量形式分布于GLC82、Hela、HepG2和PMC细胞蛋白中；在亚细胞结构中主要分布于胞核，线粒体次之，胞膜上分布最少，似不以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在；在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2期时明确地定位于中心粒（centriole）结构上，强烈提示其功能可能与肿瘤细胞无限制增殖活动有关；麦芽凝集素亲和层析法是大量纯化肿瘤相关蛋白N35最有效的途径。结? 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤相关蛋白 糖蛋白分子 N35
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单克隆抗体N35对肺癌相关抗原的识别 被引量：5
2
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2000年第4期292-295,共4页
研究和确定肺癌相关抗原的有关特征及其意义。方法 :利用抗人肺癌单克隆抗体N 35作为免疫探针 ,经免疫沉淀和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系GLC 82、宫颈癌细胞系HeLa、肝癌细胞系HepG 2、乳腺癌细胞系PMC、正常人心脏及肺组织... 研究和确定肺癌相关抗原的有关特征及其意义。方法 :利用抗人肺癌单克隆抗体N 35作为免疫探针 ,经免疫沉淀和免疫印迹法测定其相关抗原在肺癌细胞系GLC 82、宫颈癌细胞系HeLa、肝癌细胞系HepG 2、乳腺癌细胞系PMC、正常人心脏及肺组织的存在及分布情况 ;用N 聚糖酶酶解方法确定肿瘤相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系 ;用差速离心技术分离肺腺癌细胞系GLC 82亚细胞结构中的胞膜 ,胞核及线粒体成分 ,分别取样经免疫印迹法测定肿瘤相关抗原N35在亚细胞结构中的分布状况 ;用免疫荧光技术探测肺腺癌相关抗原N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的染色体结构定位 ;用 2种免疫亲和层析技术尝试获得大量纯化肿瘤相关蛋白N35的有效方法。结果 :肺腺癌相关抗原N35是一种糖蛋白分子 ,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中 ,而以不同Mr形式分布于GLC 82 ,Hela,HepG 2和PMC细胞蛋白中 ;在亚细胞结构中主要分布于胞核 ,线粒体次之 ,胞膜上分布最少 ,主要不以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在 ;在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2 期时明确地定位于中心粒 (centriole)结构上。结论 :肿瘤相关蛋白N35可能是一种只存在于肿瘤细胞并与其增殖活动密切相关的重要的肿瘤细胞生长调节蛋白 。 展开更多
关键词 单克隆抗体 肺癌 相关抗原 亚细胞结构
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肺癌细胞相关蛋白分子N35的实验研究 被引量：2
3
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期152-155,共4页
目的分析肺癌相关蛋白N35的有关特性 ,探讨其潜在的临床应用价值。方法以抗人肺癌mAbN 35作为免疫探针 ,用免疫沉淀和免疫印迹法 ,测定其相关抗原在肺癌组织、肺癌细胞系GLC 82 ,宫颈癌细胞系HeLa ,肝癌细胞系HepG 2 ,乳腺癌细胞系PMC ... 目的分析肺癌相关蛋白N35的有关特性 ,探讨其潜在的临床应用价值。方法以抗人肺癌mAbN 35作为免疫探针 ,用免疫沉淀和免疫印迹法 ,测定其相关抗原在肺癌组织、肺癌细胞系GLC 82 ,宫颈癌细胞系HeLa ,肝癌细胞系HepG 2 ,乳腺癌细胞系PMC ,正常人心脏及肺组织的存在与分布情况 ;用N 聚糖酶酶解方法确定肺癌相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系 ;用差速离心技术分离出肺腺癌细胞系GLC 82亚细胞结构中的胞膜、胞核及线粒体成分 ,经免疫印迹法测定相关蛋白N35在亚细胞结构中的分布状况 ;用免疫荧光技术检测肺癌相关蛋白N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的功能结构定位。结果肺癌相关蛋白N35是一种糖蛋白分子 ,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中 ,而是以不同分子质量的形式分布于GLC 82 ,HeLa,HepG 2和PMC细胞蛋白中 ;在亚细胞结构中主要分布于胞核 ,线粒体次之 ,胞膜上分布最少 ,不支持其以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在 ;在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2 期时 ,明确地定位于中心粒(centriole)结构上 ,提示其功能可能与肿瘤细胞的无限制增殖有关。结论肺癌相关蛋白N35是一种只存在于肿瘤细胞并与其无限增殖密切相关的蛋白分子 ,有可能具有调节肿瘤细胞生长的作用。 展开更多
关键词 肺癌细胞 肺癌相关蛋白N35 中心粒
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云南个旧肺癌相关蛋白特性分析 被引量：1
4
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《海南医学》 CAS 1999年第6期158-161,共4页
目的分析和确定云南个旧肺腺癌细胞系CLC－82肿瘤相关蛋白的有关特性及其潜在的临床应用价值。方法利用抗人肺癌单克隆抗体N—35作为免疫探针，经免疫沉淀和免疫印迹法测定了其相关抗原在肺癌细胞系CLC－82，宫颈癌细胞系Hela．肝癌细胞... 目的分析和确定云南个旧肺腺癌细胞系CLC－82肿瘤相关蛋白的有关特性及其潜在的临床应用价值。方法利用抗人肺癌单克隆抗体N—35作为免疫探针，经免疫沉淀和免疫印迹法测定了其相关抗原在肺癌细胞系CLC－82，宫颈癌细胞系Hela．肝癌细胞系HepG－2，乳腺癌细胞系PMC、正常人心脏及肺组织的存在及分布情况；用N-聚糖酸酶解方法确定肿瘤相关蛋白N35与糖蛋白分子的关系；采用差速离心技术分离出肺腺癌细胞系CLC－82亚细胞结构中的胞膜，胞核及线粒体成分，分别取样经免疫印迹法测定肿瘤相关蛋白N35在亚细胞结构中的分布状况；用免疫荧光技术探测肿瘤相关蛋白N35在肿瘤细胞有丝分裂过程中的染色体结构定位；用多种免疫亲和层析技术尝试获得大量纯化肿瘤相关蛋白N35的有效方法。结果肿瘤相关蛋白N35是一种糖蛋白分子，不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中．而以不同分子量形式分布于CLC－82，Hela，HevG－2和PMC细胞蛋白中；在亚细胞结构中主要分布于胞核，线粒体次之，胞膜上分布最少，似不以胰蛋白或跨胰蛋白的形式存在；在肿瘤细胞有丝分裂进入S至G2期时明确地定位于中心粒（centrotriol）结构上，强烈提示其功能可能与肿瘤细胞无限制增殖活动有关； 展开更多
关键词 云南个旧肺癌 肿瘤相关蛋白 糖蛋白分子 中心粒结构
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抗人肺癌单克隆抗体研制 被引量：2
5
作者 王秦秦 郝平 +5 位作者 孟桦 姜平 董坚 张开信 陈新明 周克敏 《昆明医学院学报》 1991年第3期1-3,共3页
本文应用细胞杂交技术建立了分泌鼠抗人肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系F-19,N-35,SIA-2。经14-16个月体外传代培养抗体仍稳定分泌。经用免疫组化技术对305例人肺癌组织和其它人体正常和非正常组织进行了鉴定,并探讨了这些单克隆抗体进人... 本文应用细胞杂交技术建立了分泌鼠抗人肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系F-19,N-35,SIA-2。经14-16个月体外传代培养抗体仍稳定分泌。经用免疫组化技术对305例人肺癌组织和其它人体正常和非正常组织进行了鉴定,并探讨了这些单克隆抗体进人临床实用的潜力。 展开更多
关键词 肺肿瘤 单克隆抗体
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麦芽凝聚素层析柱纯化的肺癌相关抗原
6
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期87-91,共5页
目的纯化并分析肺癌相关抗原的有关特性。方法采用商品化麦芽凝聚素 Wheatgerm L ectin- Sepharose- 6 MB层析柱和自制抗人肺癌单克隆抗体 N- 35 - Sepharose- 4B层析柱纯化肿瘤相关抗原 ,比较纯化结果 ;用免疫印技术测定肺癌相关抗原... 目的纯化并分析肺癌相关抗原的有关特性。方法采用商品化麦芽凝聚素 Wheatgerm L ectin- Sepharose- 6 MB层析柱和自制抗人肺癌单克隆抗体 N- 35 - Sepharose- 4B层析柱纯化肿瘤相关抗原 ,比较纯化结果 ;用免疫印技术测定肺癌相关抗原在肺癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌细胞及正常人心脏及肺组织的存在及分布情况 ;用差速离心技术分析肺癌相关抗原在亚细胞结构的布状况 ;用免疫荧光技术探测肺癌相关抗原在肿瘤细胞有丝分裂过程中的染色体结构定位。结果经麦芽凝聚素纯化的肺癌相关抗原 N35以不同分子量形式存在于肺癌、肝癌、宫颈癌及乳腺癌细胞的蛋白组分中 ,在正常人心脏及肺组织中无表达 ;在亚细胞结构中主要分布于胞核 ,线粒体次之 ,胞膜上分布最少 ,主要不以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在 ,并定位于肿瘤细胞有丝分裂中期 (methaphase)的中心粒 (centriole)结构上。结论肺癌相关抗原 N35是一种重要的肿瘤相关抗原 ,其功能很可能与肿瘤细胞无限制增殖活动有关。麦芽凝集素亲和层析法是纯化肺癌相关蛋白 N35简便有效的途径。 展开更多
关键词 麦芽凝聚素 层析柱 肺癌相关抗原 肺肿瘤
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端粒重复扩增技术测定端粒酶在不同肿瘤细胞中的分布
7
作者 王秦秦 李继梅 唐睿珠 《云南医药》 CAS 2001年第2期79-80,共2页
目的　确定端粒酶在几种恶性肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布状态及其临床意义。方法　采用端粒重复扩增技术 (TelomereRepeatAmplificationProtocol,TRAP)测定人鼻咽癌细胞KB、新鲜乳癌组织细胞、乳癌转移淋巴结细胞、人宫颈癌细胞系Hela... 目的　确定端粒酶在几种恶性肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布状态及其临床意义。方法　采用端粒重复扩增技术 (TelomereRepeatAmplificationProtocol,TRAP)测定人鼻咽癌细胞KB、新鲜乳癌组织细胞、乳癌转移淋巴结细胞、人宫颈癌细胞系Hela、小鼠腹水癌细胞P388、人白血病细胞K6 5 2及人肺癌细胞A5 49中端粒酶的表达水平。结果　测试显示 ,新鲜乳癌组织细胞、人宫颈癌细胞Hela、小鼠淋巴细胞白血病细胞系P388及人肺癌细胞系A5 49均出现端粒酶的阳性表达 ,阳性率为 5 0 %。结论　证实了端粒酶在一些恶性肿瘤细胞组织中的存在 ,同时也反映了端粒酶与上述肿瘤细胞的恶性增殖行为的密切联系。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 端粒酶 端粒 重复扩增技术
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肺癌单抗识别的肿瘤相关抗原特性分析
8
作者 王秦秦 姜平 +2 位作者 李继梅 唐睿珠 陈新明 《昆明医学院学报》 2000年第4期1-7,共7页
用免疫沉淀和免疫印迹法测定肿瘤相关抗原N - 35在不同肿瘤细胞及正常人心脏和肺组织的存在和分布情况 ;用N -聚糖酶酶解方法确定与单克隆抗体N - 35相对应的相关蛋白为一糖蛋白分子 ,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中 ,而以不同... 用免疫沉淀和免疫印迹法测定肿瘤相关抗原N - 35在不同肿瘤细胞及正常人心脏和肺组织的存在和分布情况 ;用N -聚糖酶酶解方法确定与单克隆抗体N - 35相对应的相关蛋白为一糖蛋白分子 ,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中 ,而以不同分子量形式分布于不同肿瘤细胞的蛋白组分中 .采用差速离心技术分离出肺腺癌细胞系GLC - 82亚细胞结构中的胞膜、胞核及线粒体成分 ,确认N - 35相关蛋白主要分布于胞核 ,线粒体次之 ,胞膜上分布量少 ,主要不以膜蛋白或跨膜蛋白的形式存在 ;经免疫荧光检测发现肿瘤相关抗原N - 35定位于肿瘤细胞有丝分裂S期的中心粒 (centriole)结构上 ,其功能很可能与肿瘤细胞无限增殖活动有关 . 展开更多
关键词 肺癌 单克隆抗体 糖蛋白分子 亚细胞结构
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肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究 被引量：11
9
作者 闫凤彩 王秦秦 +3 位作者 阮永华 马丽菊 贾建桃 金克炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期21-25,共5页
背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在建立云南宣威女性肺腺癌细胞系,为肺癌高发区的防治研究提供理想的体外实验模型。方法:以手术切除的肺癌组织标本进行原代培养,通过光镜观察、电... 背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在建立云南宣威女性肺腺癌细胞系,为肺癌高发区的防治研究提供理想的体外实验模型。方法:以手术切除的肺癌组织标本进行原代培养,通过光镜观察、电镜观察、绘制生长曲线、计算倍增时间、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体及其显带分析、肿瘤标志物检测、异体移植实验及免疫组化检测等对其生物学特性进行分析鉴定,建立细胞系。结果:体外培养细胞生长稳定,细胞形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征,染色体数目分布在55～69之间,众数为60～63;小鼠接种成瘤率为100%,瘤细胞形态与原患者的病理切片相似,命名为XWLC-05(XuanweiLungCancer-05)。结论:该细胞系符合建系标准,是一株新建的人肺腺癌细胞系。 展开更多
关键词 肺肿瘤 腺癌 细胞系 细胞培养 G显带 免疫组化 异种移植
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免疫组化和PCR方法检测乳癌腋窝淋巴结微转移的比较 被引量：4
10
作者 李继梅 唐睿珠 +4 位作者 陆桂君 付红梅 郝萍 王秦秦 李春海 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2002年第1期16-19,共4页
目的 :探讨通过不同方法检测腋窝淋巴结MUC 1基因表达 ,以提高微转移灶诊断率。方法 :收集 10 8个常规组织学检查阴性的腋窝淋巴结 ,分别用免疫组化及RT -PCR法测定MUC 1蛋白及MUC 1mRNA的表达。结果 :MUC 1mRNA阳性检出率为 6 6 % ,明... 目的 :探讨通过不同方法检测腋窝淋巴结MUC 1基因表达 ,以提高微转移灶诊断率。方法 :收集 10 8个常规组织学检查阴性的腋窝淋巴结 ,分别用免疫组化及RT -PCR法测定MUC 1蛋白及MUC 1mRNA的表达。结果 :MUC 1mRNA阳性检出率为 6 6 % ,明显高于蛋白表达检出率 2 1%。 (P <0 0 5 )。结论 :建立起MUC 1基因的RT -PCR分析法 ,进一步提高微转移灶诊断率 。 展开更多
关键词 MUC1粘蛋白 免疫组化 RT-PCR法 诊断 淋巴结微转移 乳腺癌 腋窝
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RT-PCR测定乳癌及腋窝淋巴结微量组织MUC1及GST-π基因的表达 被引量：2
11
作者 李继梅 李春海 +4 位作者 王秦秦 唐睿珠 孙丽亚 郝萍 姜平 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2001年第5期351-353,共3页
目的　研究 MUC1及 GST-π m RNA在乳癌腋窝清扫淋巴结中表达与乳癌发生、发展、预后转归及临床耐药的相关性。方法　用 RT- PCR技术检测 2 0例乳腺癌病人的 1 0 8个 HE染色阴性淋巴结 MUC1及 GST-π m RNA的表达。结果　 MUC1及 GST-π... 目的　研究 MUC1及 GST-π m RNA在乳癌腋窝清扫淋巴结中表达与乳癌发生、发展、预后转归及临床耐药的相关性。方法　用 RT- PCR技术检测 2 0例乳腺癌病人的 1 0 8个 HE染色阴性淋巴结 MUC1及 GST-π m RNA的表达。结果　 MUC1及 GST-π m RNA在 HE染色阴性淋巴结中阳性检出率分别为 66%及 39% ,在乳癌组织、HE阳性淋巴结及正常乳腺组织中阳性率分别为 1 0 0 % /88%、1 0 0 % /71 %及 1 0 0 % /0。结论　HE阴性淋巴结中出现 MUC1阳性表达表明存在肿瘤微转移灶 ,MUC1 m RNA检测可提高淋巴结微转移诊断率 ;GST- π在肿瘤启动和促进阶段可表达 ,是一种重要的乳腺癌生物学标志物 ;乳癌组织中耐药性普遍存在 ;MUC1及 GST- π m R-NA在腋淋巴结的表达可能是预后不良的标志 ,二者联合检测对乳癌早期诊断及预后判断有重要意义。 展开更多
关键词 MUC1粘蛋白 人胎盘型谷胱甘肽转移酶 RT-PCR 乳腺肿瘤 乳癌 诊断
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PP2Ac突变型肺癌相关基因在染色体区域的定位 被引量：2
12
作者 梁芳 王秦秦 +1 位作者 马丽菊 倪亚萍 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第27期9-11,共3页
目的分析和确定磷蛋白磷酸酶2A型(PP2Ac)突变型肺癌相关基因在人肺癌细胞GLC-82和正常人淋巴细胞染色体区域的定位。方法制作人肺腺癌细胞GLC-82和正常人淋巴细胞的染色体中期分裂相,用生物素标记所克隆到的PP2Ac突变基因cDNA序列(长度... 目的分析和确定磷蛋白磷酸酶2A型(PP2Ac)突变型肺癌相关基因在人肺癌细胞GLC-82和正常人淋巴细胞染色体区域的定位。方法制作人肺腺癌细胞GLC-82和正常人淋巴细胞的染色体中期分裂相,用生物素标记所克隆到的PP2Ac突变基因cDNA序列(长度约为1.2 kb),以此作为探针进行染色体荧光原位杂交(FISH)。荧光显微镜下观察记录和分析杂交信号的特征。结果在正常人淋巴细胞的染色体5q23-31可见明显杂交信号,在GLC-82细胞的5号和7号染色体上出现较强信号。结论点突变引起PP2A活性改变,从而基因易位,导致肺肿瘤的产生。 展开更多
关键词 点突变 肺癌相关基因 原位杂交 荧光 染色体
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杂交瘤细胞P35染色体丢失与其分泌单克隆抗体的特性 被引量：4
13
作者 李海红 马丽菊 王秦秦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期181-182,共2页
关键词 杂交瘤细胞 染色体分析 单克隆抗体
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胎盘型谷胱甘肽转移酶基因在乳腺癌及腋窝淋巴结组织中的表达 被引量：1
14
作者 李继梅 付红梅 +4 位作者 陆桂君 唐睿珠 王秦秦 郝萍 李春海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期664-666,共3页
目的：研究胎盘型谷胱甘肽转移酶（GST-π）在乳腺癌及其腋窝淋巴结组织中的表达情况与乳癌发生和临床耐药的相关性。方法：采用免疫组化及RT－PCR法分析临床乳癌标本及肢窝清扫淋巴结组织GST-π蛋白和mRNA的表达。结果：在正常乳腺组... 目的：研究胎盘型谷胱甘肽转移酶（GST-π）在乳腺癌及其腋窝淋巴结组织中的表达情况与乳癌发生和临床耐药的相关性。方法：采用免疫组化及RT－PCR法分析临床乳癌标本及肢窝清扫淋巴结组织GST-π蛋白和mRNA的表达。结果：在正常乳腺组织、乳癌组织、HE阳性淋巴结、HE阴性淋巴结中GST-π蛋白阳性表达率分别为0，60%，77%，43%；GST-π mRNA阳性表达率分别为：0，88%，7l%，39% 。结论：在肿瘤启动和促进阶段GST-π表达增高，是一典型癌前病变标志酶；HE阴性淋巴结中出现GST-π阳性表达，提示预后不好，且在耐药反应性上淋巴结灵敏性强于乳癌组织；GST-π基因表达的调控可能主要发生在RNA和（或）转录前水平。 展开更多
关键词 胎盘型谷胱甘肽转移酶基因 乳腺癌 免疫组织化学 RT-PCR 腋窝淋巴结
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云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株cDNA文库构建和鉴定 被引量：2
15
作者 李海红 马丽菊 王秦秦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期465-468,共4页
目的 :构建云南个旧肺鳞癌YTMLC 90细胞株的cDNA文库。方法 :从培养的人肺鳞癌YTMLC 90细胞株中提取总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含SfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第1链。同时 ,根据真核生物mRNA 5′端帽子结构的特点 ,利用SMART核苷... 目的 :构建云南个旧肺鳞癌YTMLC 90细胞株的cDNA文库。方法 :从培养的人肺鳞癌YTMLC 90细胞株中提取总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含SfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第1链。同时 ,根据真核生物mRNA 5′端帽子结构的特点 ,利用SMART核苷酸 (含SfiⅠA酶切位点 )作为cDNA第 1链在mR NA 5′端延伸出去的模板。以此序列为引物 ,利用LD PCR(long distancePCR)合成双链cDNA。双链cDNA经SfiⅠ (ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经SfiⅠ酶切的载体λTripIE× 2 ,经体外包装即为cDNA文库。结果 :人肺癌细胞株YTMLC 90的cDNA文库中 ,含有 1.0 1× 10 9pfu/L个重组子 ,重组率为 93.2 %。将该文库扩增后 ,克隆数可达 5 .2 4× 10 12 pfu/L ,插入cDNA的长度为 75 0～ 30 0 0bp。结论 :所构建的cDNA文库具有较好的质量 ,为进一步筛选、克隆肺癌特异性表达基因奠定了基础。 展开更多
关键词 肺癌 CDNA文库 构建 鉴定
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治疗性单克隆抗体研究新进展 被引量：3
16
作者 贾建桃 马丽菊 王秦秦 《医学综述》 2007年第5期325-327,共3页
治疗性单克隆抗体的快速发展在人类以肿瘤为主的多种疾病的治疗方面发挥至关重要的作用。为了降低鼠源抗体引起的超敏反应,治疗性单克隆抗体已由改型抗体,人源化抗体发展到全人抗体。随着生物技术的不断发展,相信人源化单克隆抗体的前... 治疗性单克隆抗体的快速发展在人类以肿瘤为主的多种疾病的治疗方面发挥至关重要的作用。为了降低鼠源抗体引起的超敏反应,治疗性单克隆抗体已由改型抗体,人源化抗体发展到全人抗体。随着生物技术的不断发展,相信人源化单克隆抗体的前景会越来越广泛。 展开更多
关键词 单克隆抗体 人源化 人源化抗体 治疗
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cDNA文库的构建策略 被引量：8
17
作者 李海红 王秦秦 《昆明医学院学报》 2003年第4期22-25,34,共5页
cDNA文库在基因分离和克隆中具有重要作用 .近年来 ,随着分子生物学技术的发展 ,cDNA文库构建方法有了很大改进和提高 .
关键词 CDNA文库 基因文库 文库构建 抑制消减杂交技术 差示cDNA文库 快速扩增cDNA末端法
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融合蛋白在肿瘤研究中的应用 被引量：1
18
作者 马海智 王秦秦 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期383-386,共4页
关键词 融合蛋白 肿瘤研究 应用
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生长激素联合顺铂、丝裂霉素诱导前胃癌细胞凋亡的实验研究 被引量：1
19
作者 段体德 温先敏 +4 位作者 杨策尧 刘德权 王秦秦 郑南 包群 《昆明医学院学报》 2003年第3期34-38,共5页
目的 :研究重组人生长激素 (rhGH)联合顺铂、丝裂霉素诱导前胃癌细胞 (MFC)凋亡的作用及其可行性 .方法 :通过MTT法检测rhGH联合顺铂、丝裂霉素和单独使用顺铂、丝裂霉素对MFC的体外杀伤作用 ,以IC50 和杀伤率表示 ;采用流式细胞技术、... 目的 :研究重组人生长激素 (rhGH)联合顺铂、丝裂霉素诱导前胃癌细胞 (MFC)凋亡的作用及其可行性 .方法 :通过MTT法检测rhGH联合顺铂、丝裂霉素和单独使用顺铂、丝裂霉素对MFC的体外杀伤作用 ,以IC50 和杀伤率表示 ;采用流式细胞技术、DNA凝胶电泳、透射电镜等技术检测细胞凋亡情况 .结果 :体外杀伤实验结果显示 ,rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组抑制率分别为 86 6 5 % ,6 9 33% ;单独应用顺铂组和单独应用丝裂霉素组抑制率分别为 4 6 7% ,4 2 6 8% ;rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组IC50 分别为 10 0ng/mL ,12 5 μg/mL .rhGH联合顺铂比单独使用顺铂时 ,对前胃癌细胞具有更强的杀伤作用 ,P <0 0 1,有极显著差异 ;rhGH联合顺铂组、rhGH联合丝裂霉素组用流式细胞技术检测有明显凋亡峰 ;DNA凝胶电泳呈明显的凋亡梯形条带 ;电镜观察有细胞凋亡形态学特征性改变 .结论 :根据本实验结果可推测胃癌围手术期应用rhGH联合化疗药物顺铂、丝裂霉素治疗 ,有良好的协同作用 ,可有效地诱导胃癌细胞凋亡 。 展开更多
关键词 胃癌 生长激素 顺铂 丝裂霉素 细胞凋亡 实验研究 RHGH
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恶性血液病患者核仁组成区嗜银蛋白表达活性的研究 被引量：1
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作者 佟力 李继梅 +3 位作者 孔晋星 郝萍 唐睿珠 王秦秦 《云南医药》 CAS 2001年第6期439-441,共3页
目的　探讨恶性血液病患者T淋巴细胞核仁组成区相关蛋白 (Ag -NORs)表达特点及临床价值。方法 :利用KL型肿瘤免疫图象分析系统及其配套细胞培养银染试剂和方法 ,对 12 5例正常及恶性血液病患者外周血T淋巴细胞进行染色分析。结果 :恶性... 目的　探讨恶性血液病患者T淋巴细胞核仁组成区相关蛋白 (Ag -NORs)表达特点及临床价值。方法 :利用KL型肿瘤免疫图象分析系统及其配套细胞培养银染试剂和方法 ,对 12 5例正常及恶性血液病患者外周血T淋巴细胞进行染色分析。结果 :恶性血液病患者rDNA转录活性明显低于正常对照组 (P <0 0 1) ,分组观察慢性粒细胞白血病 (CML) ,急性非淋巴细胞白血病 (ANLL) ,非何杰金氏淋巴瘤 (NHL)及急性淋巴细胞白血病 (ALL)组明显低于正常对照组 (P <0 0 1)和 (P <0 0 5 )。多发性骨髓瘤 (MM)、再生障碍性贫血 (AA)组与正常对照组比较 ,无明显差异 (P >0 0 5 ) ,未完全缓解组与正常对照组比较有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :恶性血液病患者普遍存在T细胞免疫功能降低 ,T淋巴细胞Ag -NORs检测指标可以灵敏地反映各类恶性血液病患者病情进展程度和机体免疫状况的相互关系 。 展开更多
关键词 恶性血液病 T淋巴细胞 核仁组成区嗜银蛋白 AG-NORS
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