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miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建
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作者 王辞岚 李劲频 +3 位作者 傅金凤 陈柳伶 谭舒婷 刘竞丽 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第5期838-842,共5页
目的:构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除... 目的:构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型,并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果:成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除(KO)小鼠,鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型(WT)小鼠,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育,获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比,miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低(P<0.05)。结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠,miR-125a-5p基因的缺失参与靶基因Foxp3的表达调控,为进一步研究miR-125a-5p在自身免疫性疾病中的发生机制提供前期基础。 展开更多
关键词 miR-125a-5p CRISPR/Cas9基因编辑 基因鉴定 FOXP3
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TERT沉默对OGD/R诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制
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作者 谢晓云 吴双 +4 位作者 黄海萍 梁程伟 傅金凤 王辞岚 刘竞丽 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第4期540-546,共7页
目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)沉默对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法:体外原代培养新生大鼠脑皮层星形胶质细胞,建立星形胶质细胞OGD/R损伤模型。将细胞分为正常对照(Control)组、糖氧剥夺... 目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)沉默对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的大鼠体外星形胶质细胞损伤的影响及机制。方法:体外原代培养新生大鼠脑皮层星形胶质细胞,建立星形胶质细胞OGD/R损伤模型。将细胞分为正常对照(Control)组、糖氧剥夺6 h/复糖复氧24 h(OGD/R)组、OGD/R+转染阴性对照(OGD/R+Si-Con)组及OGD/R+干扰TERT表达的SiRNA(OGD/R+Si-TERT)组。免疫荧光检测TERT及GFAP在星形胶质细胞的定位及表达变化。TERT-SiRNA转染后48 h收集细胞,通过Western blotting检测TERT的表达以验证转染效率。采用CCK-8法检测各组细胞的活力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况,Western blotting检测p53、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果:免疫荧光结果显示,TERT可表达于星形胶质细胞,以胞核为主,胞质表达较少。与OGD/R+Si-Con组比较,转染TERT-siRNA的星形胶质细胞中TERT表达降低(P<0.05),表明TERT-SiRNA转染星形胶质细胞成功;与Control组比较,OGD/R组、OGD/R+Si-Con组及OGD/R+Si-TERT组细胞活力及Bcl-2蛋白表达均降低,细胞凋亡率及TERT、P53和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05);与OGD/R+Si-Con组比较,OGD/R+Si-TERT组细胞凋亡率及P53、Bax蛋白表达升高,细胞活力及TERT、Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:TERT基因沉默促进OGD/R诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡,其机制可能与激活P53/Bcl-2/Bax信号通路有关。 展开更多
关键词 TERT 星形胶质细胞 OGD/R 凋亡
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卒中全面防控体系的构建需关注青年卒中的精准施策 被引量：3
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作者 刘竞丽 傅金凤 +1 位作者 王辞岚 梁程伟 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期245-249,共5页
青年是社会和经济发展的核心力量,青年卒中一旦发生将对社会和家庭造成极大的负担。然而我国卒中防控对象主要针对的是中老年患者,青年卒中是脑卒中防治中比较容易被忽略的部分。本文重点阐述了青年卒中的特点、研究进展及防控现状,指... 青年是社会和经济发展的核心力量,青年卒中一旦发生将对社会和家庭造成极大的负担。然而我国卒中防控对象主要针对的是中老年患者,青年卒中是脑卒中防治中比较容易被忽略的部分。本文重点阐述了青年卒中的特点、研究进展及防控现状,指出关注青年卒中的重要性,并且希望业界聚焦青年卒中的防治,未来能精准施策,制定出针对青年卒中病因及危险因素的二级预防指南以完善卒中的全面防控体系。在此基础上提高全民健康水平,延长居民预期寿命,从而推动“健康中国2030”战略目标的实现。 展开更多
关键词 卒中 青年 二级预防 精准
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