目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的...目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达,并利用Ni NTA His Bind树脂纯化该重组蛋白质。用RT-PCR技术研究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果经PCR扩增成功获得1002bp的人EID3基因,测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为39000KD,纯化后的6xHisEID3纯度可达92%。通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性,阳性率为90.7%。在正常组织中,除睾丸组织不表达或有极低水平转录外,余均不表达。结论 EID3基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3m RNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答,可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子,其用于诊断大肠癌的可行性,有待进一步深入研究。展开更多
本文用溶血空斑试验玻片小室法和改良平皿法及溶血分光光度计测定法测定药用氢化可的松对小鼠 B 细胞功能的抑制效应。结果表明溶血分光光度计法最敏感、客观;溶血空斑试验改良平皿法较玻片小室法重复性好,标本可长期保存。是临床科研检...本文用溶血空斑试验玻片小室法和改良平皿法及溶血分光光度计测定法测定药用氢化可的松对小鼠 B 细胞功能的抑制效应。结果表明溶血分光光度计法最敏感、客观;溶血空斑试验改良平皿法较玻片小室法重复性好,标本可长期保存。是临床科研检测 B 细胞功能的可靠方法。展开更多
文摘目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达,并利用Ni NTA His Bind树脂纯化该重组蛋白质。用RT-PCR技术研究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果经PCR扩增成功获得1002bp的人EID3基因,测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为39000KD,纯化后的6xHisEID3纯度可达92%。通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性,阳性率为90.7%。在正常组织中,除睾丸组织不表达或有极低水平转录外,余均不表达。结论 EID3基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3m RNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答,可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子,其用于诊断大肠癌的可行性,有待进一步深入研究。
