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毛白杨PtSEP3-1基因启动子的克隆分析及其表达载体构建 被引量：10
1
作者 王静澄 李昊 +4 位作者 崔东清 刘军梅 叶梅霞 张志毅 安新民 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期239-244,共6页
SEP(SEPALLATA)类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调... SEP(SEPALLATA)类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调控研究具有重要意义。本文根据毛白杨SEP3基因和毛果杨基因组序列设计引物,通过PCR获得了PtSEP3-1基因上游2000bp的序列。序列分析结果表明该序列具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box,还包含大量光响应元件ACE、Box I和Box4等,此外还有脱落酸响应元件ABRE,赤霉素响应元件GARE-motif以及胁迫响应元件HSE、TC-richrepeats等。进一步构建了一个以PtSEP3-1启动子驱动GUS基因的植物表达载体pPtSEP3-1protest,为该启动子的功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 毛白杨 SEP3基因 启动子 表达载体
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毛白杨PtLFY在花芽发育中的表达模式与花芽形态分化 被引量：7
2
作者 安新民 王冬梅 +4 位作者 王泽亮 王静澄 曹冠琳 薄文浩 张志毅 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期32-38,共7页
以毛白杨花芽为材料,采用RT-PCR技术分离克隆毛白杨PtLFYcDNA序列,测序结果表明该序列全长1314bp,包含1个开放阅读框,编码377个氨基酸。Alignment分析显示该基因与拟南芥等物种LFY/FLO同源基因所编码的氨基酸相似性达到68%～75%。蛋白... 以毛白杨花芽为材料,采用RT-PCR技术分离克隆毛白杨PtLFYcDNA序列,测序结果表明该序列全长1314bp,包含1个开放阅读框,编码377个氨基酸。Alignment分析显示该基因与拟南芥等物种LFY/FLO同源基因所编码的氨基酸相似性达到68%～75%。蛋白结构预测分析表明,在PtLFY蛋白N-端和C-端具有2个高度保守的区域,其中PtLFY-C端由7个α-helix组成Helix-turn-helix结构。采用Real-time qRT-PCR技术检测PtLFY在雌雄花芽发育过程中的表达模式,结果显示从9月13日到翌年1月25日,PtLFY在毛白杨雌雄花芽中持续稳定表达,到2月25日表达量少许下调,但该基因在雄花芽中的相对表达量明显高于雌花芽。解剖分析结果表明,雄花芽形态分化进程明显早于雌花芽,这种差异可能与PtLFY在雌雄花芽发育过程的差异表达存在密切联系。研究结果对于阐明PtLFY在毛白杨雌雄花芽发育和开花中的分子作用机制具有重要的理论意义,为进一步开展毛白杨开花调控研究奠定基础。 展开更多
关键词 毛白杨 PtLFY 表达模式 花芽 形态分化 QRT-PCR
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影响农杆菌介导的杨树遗传转化技术的因素 被引量：11
3
作者 陈仲 廖维华 +3 位作者 王静澄 高凯 孙吉 安新民 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1126-1134,共9页
杨属树种是农杆菌的天然寄主之一,但木本植物一般再生能力较差,如何提高杨树的遗传转化频率就成为目前研究者最为关心的问题。本文结合农杆菌介导杨树遗传转化研究的最新进展和我们的实际工作对农杆菌的遗传转化原理、转移方法、以及影... 杨属树种是农杆菌的天然寄主之一,但木本植物一般再生能力较差,如何提高杨树的遗传转化频率就成为目前研究者最为关心的问题。本文结合农杆菌介导杨树遗传转化研究的最新进展和我们的实际工作对农杆菌的遗传转化原理、转移方法、以及影响农杆菌转化的因素进行了全新而深入的论述,并针对如何提高木本植物的转化频率,提出了一些改良的措施和方法。 展开更多
关键词 农杆菌 遗传转化 杨树 选择标记 受体
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amiRNAi-实现高效稳定的特异基因沉默新方法 被引量：8
4
作者 叶梅霞 刘军梅 +4 位作者 李昊 崔东清 王静澄 张志毅 安新民 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期118-125,共8页
RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是实现基因沉默的有效工具。近年来,随着分子生物学与生物技术的快速发展,在RNAi基础上又发展出另一种特异性更高的基因沉默技术—amiRNAi(artificial microRNA interference)。amiRNAs是一类由内源m... RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是实现基因沉默的有效工具。近年来,随着分子生物学与生物技术的快速发展,在RNAi基础上又发展出另一种特异性更高的基因沉默技术—amiRNAi(artificial microRNA interference)。amiRNAs是一类由内源miRNA前体生成的长21个核苷酸的人工小RNA分子,它能在不影响其他基因表达的情况下特异地介导单个或多个靶基因高效稳定沉默。与普通的RNAi相比,amiRNAi具有特异性高、稳定性强和沉默效应可预见等优点。因而amiRNAi可能成为基因功能分析的最有效工具之一,同时amiRNAi对于基因负调控研究和应用而言前景广阔。着重介绍了amiRNAi技术的原理、优势及其潜在的应用价值。 展开更多
关键词 amiRNAi MIRNA siRNA基因沉默
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amiRNA分子设计及其离体合成策略 被引量：2
5
作者 叶梅霞 崔东清 +4 位作者 李昊 王静澄 刘军梅 张志毅 安新民 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期92-97,共6页
详细介绍了基于WMD3(Web MicroRNA Designer 3)软件平台的amiRNA(artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时,只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA,可得到4条含... 详细介绍了基于WMD3(Web MicroRNA Designer 3)软件平台的amiRNA(artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时,只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA,可得到4条含有amiRNA以及载体中miRNA两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸PCR合成策略可以以这4条序列以及根据质粒模板设计的A、B两段序列作为引物,扩增出目标amiRNA。同样尿嘧啶切除的策略也可合成amiRNA,但这些引物序列需做适当调整变动。此外,还介绍了基于特异引物退火的amiRNA合成策略,该策略可保证amiRNA分子能够一步PCR合成,合成后的amiRNA表达盒可通过合适的限制性位点被克隆至目的载体中的相应位点。可以预见,这种amiRNA分子设计的科学性与合成策略的精确性将会使amiRNAi技术在生物基因功能分析中发挥更加重要的作用,对生命科学研究产生深远的影响。 展开更多
关键词 WMD3 amiRNA 分子设计 合成策略
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外源突变基因AP1M2转化毛白杨的研究 被引量：2
6
作者 陈仲 王静澄 安新民 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期331-337,共7页
为探究毛白杨开花调控分子机制并获得不飞絮毛白杨株系,利用农杆菌介导法将显性负突变结构基因AP1M2转入毛白杨中,经PCR检测,共获得阳性转化植株7株。通过RT-qPCR检测转基因植株中外源基因AP1M2表达量,发现各株系间的表达水平差异显著,... 为探究毛白杨开花调控分子机制并获得不飞絮毛白杨株系,利用农杆菌介导法将显性负突变结构基因AP1M2转入毛白杨中,经PCR检测,共获得阳性转化植株7株。通过RT-qPCR检测转基因植株中外源基因AP1M2表达量,发现各株系间的表达水平差异显著,最高为内参的5.41倍,最低为1.89倍。对转基因毛白杨中内源PtAP1和其他开花关键基因的表达量进行检测,发现内源AP1的表达受到抑制,表达量明显下调;其他开花关键基因LFY、AP3、PI、SEP3和FT1等的表达量也有不同程度的降低,而FT2表达量并没有明显变化。这些研究结果表明转AP1M2毛白杨中AP1、LFY、AP3、PI、SEP3和FT1的表达受到明显抑制,对毛白杨花发育将有一定影响。 展开更多
关键词 毛白杨 AP1M2 遗传转化 开花
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